ANALISIS DE PRUEBAS BIOQUIMICAS

KIA

El medio de cultivo Agar Hierro Kliguer (KIA) es un medio solido y diferencial, el

cual se fundamenta basicamente en la capacidad de fermentacion de dos
azucares como son la glucosa (C6H12O6) y lactosa (C12H22O11),con la posible
produccion de sulfuro (H2S) y gas. En este medio se sembro Salmonella la cual es
una bacteria que pertenece a la familia enterobacteriaceae; la Salmonella es una
bacteria movil anaerobia facultativa es decir este tipo de bacterias pueden utilizar
el O2 cuando se encuentra presente, la Salmonella tambien produce sulfuro de
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hidrogeno, fermenta glucosa y no lactosa por poseer una enzima especializada.
Para el caso del medio KIA utilizado en el laboratorio dio como resultado negativo
para la prueba debido a que no se produjo ninguna fermentacion (Alc/Alc) lo cual
se pudo evidenciar por medio de las caracteristicas que se presentaron el el medio
sembrado, se observo una coloracion vino (pico de flauta)/ vino profundidad, lo
cual indica que no existio fermentacion tambien se presento enengrecimiento en
anaerobiosis y en anaerobiosis, lo cual arrojo un resultado Alc sulfuro /Alc sulfuro.

Basandonos en las revisones bibliograficas encontramos que la Salmonella no

fermanta lactosa pero si glucosa, entonces analizando el resultado que arrojo la
prueba en el laboratorio el cual es Alc/Alc, no se presento fermentacion, entonces
podemos decir que al no fermentarse la glucosa pudo haber un factor externo el
cual no permitio la fermentacion de la misma; factores como: deficiencias al
momento se la siembra por sobrecalentamiento de las asas o por un tiempo de
incubacion no optimo para llevar a cabo estos procesos.
 SIMMONS CITRATO

Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato

como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de
nitrógeno en su metabolismo, provocando una alcalinización del medio. Entre las
enterobacterias estas características se dan en los siguientes géneros:
Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Citrobacter y algunas especies de Salmonella.
Sin embargo, Escherichia, Shigella, Salmonella typhi y Salmonella paratyphi son
incapaces de crecer con esos nutrientes.

Se cultiva el microorganismo en el medio Simmons Citrato. Este medio contiene

citrato de sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono y de nitrógeno
respectivamente y azul de bromotimol como indicador de pH. Sólo las bacterias
capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este medio y liberarán
iones amonio lo que, junto con la eliminación del citrato (ácido), generará una
fuerte basificación del medio que será aparente por un cambio de color del
indicador de pH, de verde a azul.

En el tubo de ensayo que contenía el medio Simmons citrato se sembró

Salmonella, lo cual arroja un resultado negativo (observar fig #.....) debido a que
no se presento cambio de color en el medio (coloración verde) lo cual indico que
el microorganismo salmonella no utilizo el citrato como única fuente de carbono.[]

 http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/simmonscitagar.htm
INDOL
Para el caso de la prueba realizada en el laboratorio, en el tubo que contenia el
caldo peptona tripticasa CPT , se sembro Salmonella y luego de la incubacion se
pudo apreciar que el resultado de la prueba fue positiva debido a que la
salmonella desdoblo el Indol de la molecula de triptofano lo cual arrojo una nillo
rojo en la superficie afirmando el resultado de la teoria.

ROJO DE METILO
Según la prueba realizada en el laboratorio en el caldo MR-VP se pudo observar
una prueba con resultado negativo esto se puso constatar despues de haber
realizado el proceso de incubacion arrojando como resultado un color amarillo en
la superficie del tubo lo cual indica que la Salmonella no fue capaz de producir y
mantener estable los productos terminales acido de la fermentacion de la glucosa.

DESCARBOXILASA

Por ende cabe resaltar que hubo fermentacion de glucosa en anaerobiosis,

fermentacion de lactosa en aerobiosis y presencia de sulfuro lo cual se pudo
evidenciar con la coloracion negra en el medio.

PRUEBA DE VOGES- PROSKAUER

Esta prueba se basa en la detección de acetoina, un producto final neutro derivado

del metabolismo de la glucosa. La glucosa es metabolizada a acido piruvico, el
principal intermediario en la glucolisis. A partir del acido piruvico, las baterías
pueden seguir muchos caminos metabólicos; la producción de acetoina es una de
las vías metabólicas de la degradación de la glucosa en las bacterias. En este
caso se trabajo con salmonella, genero que se incluye en la familia
Enterobacteriaceae, integrada por bacilos Gram negativos anaerobios facultativos
y que poseen, por lo tanto, las características generales de las enterobacterias
que son fermentadores de la glucosa.

En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el

desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable.
La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a través de distintas
vías metabólicas. Según la vía utilizada, se originarán productos finales ácidos, o
productos finales neutros (acetilmetilcarbinol). Y por la adición de alfa naftol e
hidróxido de potasio se evidenciara la presencia de productos finales

Por consiguiente la prueba de VOGES- PROSKAUER dio un resultado positivo lo

cual se evidencio con la presencia de un anillo o coloración roja en la superficie
que apareció después de adicionar hidróxido de potasio a los cultivos de ciertos
microorganismos en medio con glucosa. Esta coloración se debe a la oxidación
del acetilmetil carbinol a diacetilo el cual reacciona con la peptona del medio para
dar una coloración roja.[]
 NITRATO

Luego de haber sembrado el microorganismo salmonella en el caldo nitrato fig #

(……) se observo al instante una coloración rosada que luego de haber realizado
el proceso de incubación a 37 0C por 24 horas se torno de color rojo lo cual nos
indica una prueba positiva y nos lleva a la conclusión que el microorganismo
Salmonella redujo el nitrato en nitrito y N2.

 http://books.google.com.co/books?
id=FYWSzy7EjR0C&pg=PA327&dq=prueba+bioquimica+del+nitrato&hl=es
&sa=X&ei=LjrKUMnTGtK90QGG64GgCA&ved=0CCwQ6AEwAA#v=onepag
e&q&f=false
 MOTILIDAD Y H2S

Basándonos en la prueba realizada en el laboratorio se puso comprobar que la

prueba no fue del todo positiva, ya que se observo producción de H 2S (coloración
negra), también se pudo observar que el microorganismo migro de la línea de
siembra es decir hubo Motilidad, pero no se pudo observar con certeza la
presencia del anillo rojo es decir no hubo Indol.

PRUEBA DE CATALASA

Las bacterias en la cadena respiratoria inducen a la producción de de dos

compuestos principales, los cuales son tóxicos, el peróxido de hidrogeno (H 2O2) y
el radical superoxido 02-; que son producto de la unión de las proteínas con azufre
y hierro reducidas con el oxigeno y las oxidasas.

El H2O2 es un producto final oxidativo de la degradación aerobia de los azucares.

La catalasa es un intermediario catalítico en la reducción del oxigeno, de mucha
importancia biológica para las bacterias ya que defienden contra la toxicidad del
oxigeno.

(En nuestro caso la bacteria utilizada fue la Salmonella)

Estructura de la catalasa

La reacción que esta hace es:

El gas que se forma en la reacción es oxígeno; la rápida aparición y producción
sostenida de burbujas de gas o efervescencia, indica una prueba positiva, es
[3]
decir, que hay presencia de la enzima.

UREASA

Este medio de cultivo, formulado por Rustigian y Stuart, presenta bajo contenido
de nutrientes y alta capacidad buffer.

El extracto de levadura es la única fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y

cofactores, y aporta los nutrientes esenciales para el desarrollo bacteriano. Las
sales de fosfatos constituyen el sistema buffer, el rojo de fenol es el indicador de
pH y la urea es el sustrato de la enzima ureasa.

Aquellas bacterias que poseen la enzima ureasa, pueden utilizar el nitrógeno

proveniente de la urea, la hidrolizan, liberando amoníaco y dióxido de carbono.
Estos productos metabólicos alcalinizan el medio, haciendo virar el indicador rojo
fenol del amarillo al rojo.

Su uso, se recomienda para diferenciar Proteus spp. de otros géneros.

Para organismos que hidrolizan la urea lentamente, es recomendable usar el
medio de Christensen.

[ http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/ureasamedprue.htm]

Teniendo encuenta los resultados que se obtuvieron en el laboratorio los cuales

fueron negativos para esta prueba ya que no hubo cambio de coloración en el
medio permaneció piel de ante es decir que la salmonella no fue capaz de
desdoblar la urea para formar dos moléculas de amoniaco (NH 3) por la acción
enzimática de la ureasa.
INVESTIGACION
MICROORGANISMO PRUEBA INDICADOR RESULTADO
salmonella KIA Rojo de fenol Alc sulfuro/ Alc
sulfuro
salmonella Citrato Azul de brom. -
salmonella Indol Reactivo de kovac +
´s
salmonella Rojo de metilo Rojo de metilo -
salmonella Descarboxilasa Púrpura de +
bromotimol
salmonella Voger proscauer α naftol-KOH +
salmonella Nitrato Reac. De Griess I. +
salmonella Motilidad y H2S Tiosulfato de +
sodio
salmonella Catalasa H2O2 +
Salmonella Ureasa Rojo de fenol -