Facultad deCiencias Farmacéuticas, Bioquímicas y Biotecnológicas

Escuela Profesional deFarmacia y Bioquímica

FARMACOGNOSIA I

PRÁCTICA N° 11 ANÁLISIS DE FLAVONOIDES

POR CROMATROGRAFÍA DE CAPA FINA (CCF)
Y CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA
PERFORMANCE (HPLC)
OBJETIVOS

➢ Señalar la importancia que ofrece los flavonoides como un recurso de

colorantes naturales.
➢ Familiarizar al estudiante con los diferentes métodos utilizados en extracción
y purificación de productos naturales y manejar adecuadamente con criterio
los materiales e instrumentos utilizados en el análisis.
➢ Adquirir destrezas preliminares en el manejo de un equipo de HPLC para la
cuantificación de quercetina y rutina.
GENERALIDADES
Los flavonoides son pigmentos naturales presentes en los
vegetales y que protegen al organismo del daño producido
por agentes oxidantes, como los rayos ultravioletas, la
polución ambiental, sustancias químicas presentes en los
alimentos, etc.

Estructura de quince carbonos, biogenéticamente

compuesta por dos unidades de acetato (C6), y una unidad
de fenilpropano (C6-C3).

• La estructura contiene benzo.gamma-pirona y un anillo

fenólico.

• Los flavonoides están estrechamente relacionados con

los taninos.
Una de las fuentes de flavonoides de origen natural son las flores de Caléndula
Officinalis Linne cuyo nombre común es Marigold que es ampliamente utilizada en
la cosmética, concentrados (alimento para aves), etc.
 HPLC
La Cromatografía líquida de alta resolución es la técnica cromatográfíca más avanzada
(HPLC) y que ha tenido la mayor aplicación en el mundo científico y en la investigación de
productos naturales. Un equipo de HPLC consta de las siguientes partes básicas:

1. Reservorios para la fase móvil: desde donde la fase móvil será succionada por la
bomba de impulsión.
2. Una bomba de impulsión: de pistones y programable, capaz de mezclar diferentes
solventes para realizar fases móviles isocráticas o en gradiente. La Bomba de impulsión
toma los solventes de la fase móvil y los lleva por todo el sistema de HPLC.
3. Inyector: es el sitio donde se puede introducir una muestra en el Sistema del HPLC. El
Inyector tiene la capacidad de introducir un volumen exacto de muestra o soluciones
estándares en el flujo de la fase móvil para poder efectuar el análisis correspondiente.
4. Fase estacionaria: material insoluble empaquetado en una columna, que permite las
interacciones con la muestra o los estándares a su paso por la columna e impulsados por la
fase móvil. La Columna recibe el flujo continuo de la fase móvil y también recibe las
muestras introducidas por el inyector.
5. Detector: es un espectrofotómetro de flujo que mide la absorbancia de la fase móvil al
salir de la columna de la fase estacionaria y por lo tanto puede detectar las sustancias
separadas que fueron introducidas por el inyector.
6. Integrador: es un equipo que imprime el cromatograma y calcula las áreas de los picos de
cada sustancia detectada, para realizar los cálculos correspondientes.

https://www.youtube.com/watch?v=hkKjfvd71n4
PROCEDIMIENTO
 EXTRACCIÓN
El extracto obtenido se evapora con
calentamiento no superior a los 50°C y se le
Evaporar a sequedad y suspender
hacenen particiones sucesivas
50 mL de agua destilada en con éter etílico,
forma homogénea
acetato de etilo y n-butanol
Caléndula
10 g. de pétalos Caléndula
desengrasada

150 mL de Hexano 150 mL de Etanol 96 °

2 vueltas 6 vueltas

Fase orgánica + cloroformo

acetato de etilo x 3 veces Filtrar el precipitado y el residuo re-

disolverlo en etanol para las pruebas
de identificación

1
3
ANÁLISIS CUALITATIVO
 IDENTIFICACIÓN
Acetato de etilo, ácido acético, ácido fórmico, agua destilada, (100:11: 11: 27)

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5
 IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN

RESULTADOS Y DISCUSIÓN
CUESTIONARIO
1. Escriba un método de obtención de los flavonoides a escala de
laboratorio diferente al usado.
2. Indique 2 métodos de análisis para determinar la capacidad
antioxidante de una planta.
3. Usando reacciones químicas indique la capacidad antioxidante de
los flavonoides.
4. Realice una búsqueda en artículos científicos sobre el resultado
obtenido en cuando a la identificación de flavonoides en plantas
medicinales por HPLC