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Aquí están algunas de las Pruebas Bioquímicas más frecuentes

:
· Fermentación de la lactosa (Mc Conkey) · Agar Hierro de Kliger (KIA) · Prueba del
Indol · Citrato de Simmons · Agar Hierro Lisina (LIA) · Agar Urea de Christiansens ·
Prueba de la Fenilalanina (PPA) · Reducción de los Nitratos · Movilidad · RM - VP ·
Oxidasa y Catalasa
Fermentación de la lactosa (Mc Conkey)
El agar Mc Conkey es un medio sólido, diferencial y selectivo. Se usa para la
discriminación de bacterias con capacidad de fermentar la lactosa (Lac + y -
).Composición g/l :
- Peptona 20.0 : fuente de nitrógeno y carbono para las Lac -.
- Lactosa 10.0 : fuente de carbono para las Lac +.
- Sales biliares 2.5 : le confiere carácter selectivo, inhibiendo el crecimiento de Gram +.
- Cloruro sódico 5.0 : para mantener la tonicidad del medio (evitar osmosis).
- Rojo neutro 0.05 : indicador que va hacer que el medio vire de coloración. Si las
bacterias son Lac +, producirán ácidos derivados de la fermentación que darán al medio
un aspecto rosáceo; si por el contrario son Lac -, el medio se basificará por el uso de la
peptona y se tornará amarillo.
- Cristal violeta 0.001 : interfiere junto con las sales biliares en la selectividad del
medio.
- Agar-agar 15.0: da consistencia al medio







Prueba del Indol
Pone de manifiesto la presencia de la encima Triptofanasa en nuestras bacterias, si esta
presente degradará el triptofano y liberará al medio Indol, para revelar su presencia usaremos
el reactivo de Kovac; si hay indol se formará un anillo rojo en la superficie, sino este será
amarillo. Para esto sembramos en caldo con triptofano.







Citrato de Simmons
Se usa para determinar si el organismo es capaz de utilizar el citrato como única
fuente de carbono y compuesto amoniacales como única fuente de nitrógeno. El
medio contiene citrato sódico, fosfato de amonio y azul de bromotimol como
indicador; este se tornará azul cuando el medio se basifica. Las bacterias que
metabolizan el citrato liberan iones amonio al medio (degradación del fosfato
amónico) lo que provoca que este se alcalinice y el indicador vire azul.

Agar Hierro Lisina LIA
Este medio pone de manifiesto:
- Si la bacteria posee la enzima descarboxilasa (LDC). el
medio contiene como indicador Purpura de Bromocresol,
cuando la lisina se descarboxila, el medio se acidifica y
el indicador vira amarillo en el fondo.
- Si es productora de ác. sulfhídrico, en cuyo caso el
precipitado negro nos impedirá ver si es LDC + o -.
- Si es productora de gas.
1. LDC -, NO H2S, PRODUCTORA GAS.
2. LDC + ó -, PRODUCTROA H2S Y GAS.
3. LDC - , NO H2S, PRODUCTORA DE GAS
Agar UREA
Pone de manifiesto la actividad de la enzima ureasa, para degradar la urea en dos moléculas
de amoniaco. El medio lleva como indicador Rojo fenol, que se torna amarillo cuando es
negativo y rosa cuando es positivo. Hay que tener precaución por que también puede ocurrir
que no se produzca cambio de coloración, en este caso es negativo. el medio posee un color
rosáceo (mucho menos intenso que los verdaderos positivos) lo
que puede llevarnos a error (considerar falsos positivos).
Prueba de la Fenilalanina Desaminasa (PPA)
Determina la capacidad e la bacteria para desaminar el aminoácido
fenilalanina en ácido fenilpirúvico por acción de la enzima
Fenilalanina desaminasa, esto va a producir una acidificación del
medio, que se va a poner de manifiesto mediante la aplicación de
0,2 - 0,3 mL de Cloruro férrico al 10 %, si hay en el medio ác.
fenilpirúvico aparece una coloración verde-azulada.





PPA - PPA +
Reducion de Nitratos
Va a poner de manifiesto la capacidad de transformar los Nitratos en Nitritos. Para esto
inoculamos tres tubos en el medio para dicha prueba y los incubamos 24, 49 y 72 horas
respectivamente. Tras 24 h. añadimos 2 o 3 gotas del reactivo "A-B", si aparece coloración rojo
cereza indica que es positivo, si no aparece coloración es un presunto negativo, para
confirmarlo basta con añadir una punta de espátula de Zinc y si realmente es negativo se
tornara rojo. Si el ultimo día (72 h.) la bacteria da negativo, entonces podemos decir con
seguridad que no tiene capacidad para reducir los nitratos.






Positivo Presunto negativo
Movilidad
Se realiza una siembra en picadura, y tras incubar 24 h. observamos si se ha producido
crecimiento entorno a la zona inoculada.







Rojo de Metilo - Voges Proskauer
Las enterobacterias son anaerobios facultativos que usan la glucosa en dos fases: 1º
Degradan la glucosa por la vía oxidativa hasta que consumen el oxigeno del medio. 2º
Metabolizan la glucosa por la vía fermentativa, que puede ser de dos tipos:
- Fermentación ácido mixta: los productos finales son ácidos orgánicos, que disminuyen
el pH del medio, lo que se manifiesta con el Rojo de metilo.
- Fermentación butilén-glicólica: los productos finales, como butanodiol y etanol, son
neutros y producen como intermediarios acetoina, que puede detectarse con el reactivo
de Voges Proskauer, el react. A que es KOH, y el B alfa-naftol, estos reaccionan con la
acetoina originando coloraciones violáceas.
Para realizar el ensayo, dividimos el medio inoculado y que ha incubado tres días en dos
tubos (la mitad en cada uno) y revelamos con los reactivos.
Rojo de metilo (posit. y negat.)






Voges Proskauer (negativo)



Prueba de la Oxidasa y la Catalasa
Ambas pruebas se caracterizan por poder realizarse de forma inmediata a partir de
nuestro cultivo problema.
La oxidasa, es una prueba que se usa para poner de manifiesto el sistema
citocromoxidasa, que se encuentra en organismos aerobios, anaerobios facultativos y
ocasionalmente en microaerófilos, careciendo los anaerobios estrictos de esta. El
método más frecuento es el indirecto, se realiza en un trocito de papel de filtro, de forma
que colocamos una gota del reactivo de Kovacs en el papel y posteriormente tomamos
parte de nuestra colonia con el asa de siembra, que frotaremos sobre el papel. El
resultado será positivo se se produce una reacción de color a los pocos segundos.
La catalasa, va a degradar el peroxido de oxigeno que se produce como consecuencia de
la acumulación de oxigeno. Para esto en un tubo de ensayo colocamos 2 o 3 ml de
peroxido de oxigeno, tomamos muestra con el asa de siembra y la introducimos en el
tubo, el resultado será positivo si se observa la producción de pequeñas burbujas.
http://perso.wanadoo.es/microdominguez/a.htm
http://perso.wanadoo.es/microdominguez/coprocultivo.htm
http://inmunologia.galeon.com/
http://www.ispch.cl/lab_amb/serv_lab/salmonella.html
http://wwwmesa4.blogspot.com/
http://microbiologiabioanalisis.blogspot.com/2012/06/bienvenidos-al-blog-de-
microbiologia.html
http://tamyvelasquezporta.blogspot.com/2013/07/consideraciones-generales-para-
lectura.html
http://quizlet.com/17046489/microbiology-lab-final-flash-cards/
http://miyospiral.blogspot.com/2013/12/practica-8-coprocultivo.html
http://ankirinaslaboratory.tumblr.com/post/85160317597/bateria-bioquimica-de-klebsiella-
pneumoniae
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