AÑO DE LA UNIDAD, LA PAZ Y EL DESARROLLO

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA PERUANA

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

TRABAJO DE INVESTIGACIÓN

CROMATOGRAFIA

ASIGNATURA:

ANÁLISIS INSTRUMENTAL PARA FARMACEÚTICOS

DOCENTE:

ING. DORA ENITH GARCIA DE SOTERO DRA.

INTEGRANTES:

CADENAS GARCIA, JIALIZ DEL PILAR

HESSE PEREA, ANGIE VIVIANA

HUAYCAMA SANGAMA, GRETY

MACEDO GARCIA, ANGELITA MERCEDES

MATUTE VILLACIS, RICARDO AGUSTIN

SUAREZ CORTEGANO, JHANETH STEFANY

NIVEL:

III

CICLO:

IQUITOS_PERÚ

2023
Contenido
INTRODUCCIÓN..................................................................................................................................3
I. OBJETIVOS.......................................................................................................................................3
II.DEFINICIÓN.....................................................................................................................................3
III.FUNCIÓN DE LA CROMATOGRAFIA................................................................................................3
IV. TIPOS DE CROMATOGRAFIA..........................................................................................................5
Cromatografía en papel..................................................................................................................5
Cromatografía en capa fina............................................................................................................5
Cromatografía en columna.............................................................................................................5
Cromatografía de partición............................................................................................................6
Cromatografía de Intercambio iónico:...........................................................................................6
Cromatografía de Exclusión:...........................................................................................................6
Cromatografía Líquido – Líquido:...................................................................................................6
Cromatografía de Afinidad.............................................................................................................6
Cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC de High Performance Liquid Chromatography):...6
Cromatografía de gases:.................................................................................................................7
V.CONCLUSIÓN..................................................................................................................................7
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.....................................................................................................8
INTRODUCCIÓN
La cromatografía es una técnica analítica fundamental en el campo de la química y la ciencia en
general. Se utiliza para separar y analizar componentes individuales de una mezcla, lo que permite
identificar, cuantificar y purificar sustancias. Esta técnica se basa en la diferencia en las tasas de
migración de los componentes de una muestra a través de un medio poroso o una fase
estacionaria, debido a sus interacciones con esta fase y un fluido móvil, como un solvente o un
portador de gas. La cromatografía se utiliza en una amplia variedad de aplicaciones, desde la
investigación científica y el desarrollo de nuevos medicamentos hasta la calidad del control de
alimentos y la detección de sustancias en pruebas forenses.

A lo largo de los años, se han desarrollado numerosas técnicas de cromatografía, cada una con sus
propias características y aplicaciones específicas. Algunas de las técnicas de cromatografía más
comunes incluyen la cromatografía de capa fina (TLC), la cromatografía de columna, la
cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) y la cromatografía de gases (GC), entre otras.

Asimismo, la cromatografía se utiliza en una amplia variedad de aplicaciones, como la

identificación de compuestos en una muestra desconocida, la cuantificación de componentes en
una mezcla, la purificación de sustancias químicas y bioquímicas, el control de calidad en la
industria farmacéutica y alimentaria, y la investigación científica en áreas como la química
orgánica, la bioquímica y la química analítica. Cada tipo de cromatografía tiene sus propias
características y aplicaciones específicas, lo que la convierte en una herramienta versátil y esencial
en el laboratorio.

I. OBJETIVOS
 Identificación y separación de los distintos componentes

II.DEFINICIÓN
La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas,
la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia. Es un conjunto de técnicas basadas en el
principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una
mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.

De esa manera, la cromatografía emplea diversas técnicas que aprovechan las diferencias en la
velocidad de retención de cada componente, y puede separarlos, identificarlos y cuantificarlos.

III.FUNCIÓN DE LA CROMATOGRAFIA
La separación se debe a la influencia de dos efectos contrapuestos:

a) Retención: Efecto producido sobre los componentes de la mezcla por una fase
estacionaria, que puede ser un sólido o un líquido anclado a un soporte sólido.
b) Desplazamiento: efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase móvil,
que puede ser un líquido, un gas o un fluido supercrítico.

El fenómeno de migración de los componentes de una muestra impulsados por la fase móvil, a lo
largo de la fase estacionaria, se denomina elución. La mezcla a separar se deposita sobre la fase
estacionaria, mientras que la móvil atraviesa el sistema arrastrando los componentes de la misma,
los cuales se desplazan a distintas velocidades dependiendo de la magnitud de las interacciones
relativas de dichos componentes con ambas fases.

La fase móvil y la estacionaria se eligen de manera que los componentes de la muestra se

distribuyan de manera diferente entre ambas. Aquellos componentes que son retenidos
fuertemente por la fase estacionaria, se mueven lentamente con el flujo de la fase móvil. Por el
contrario, los componentes que se unen débilmente a la fase estacionaria se mueven con rapidez
junto con la fase móvil.

Como consecuencia de esta movilidad diferente los componentes se separan en bandas o

manchas que pueden analizarse cualitativamente y/o cuantitativamente. Los fenómenos físicos
que influyen directamente sobre las constantes de equilibrio de distribución de los compuestos
entre fase estacionaria y fase móvil son, entre otros: absorción (o partición), adsorción,
intercambio iónico, bioafinidad, y diferencias del tamaño molecular.

En general, todos los tipos de cromatografía dependen de una serie de instrumentos, compuestos
químicos y determinada tecnología de las cuales se destacan por:

 Fase estacionaria. Es una sustancia que se mantiene inmóvil mientras se ejecuta la

cromatografía.
 Fase móvil. Es la sustancia que se mueve durante la cromatografía. Puede ser un líquido o
un gas. La muestra que contiene el analito se administra en la fase móvil.
 Analitos. Son las sustancias que se van a separar, cuantificar y/o identificar utilizando la
cromatografía, es decir, son las sustancias que se van a analizar.
 Muestra. Es la mezcla que se va a analizar. Puede estar constituida por uno o varios
analitos, y otros componentes que pueden no ser de interés, de los que serán separados
los analitos.
 Tiempo de retención. Es el tiempo que demora un analito en pasar desde la columna o
sistema por donde pase la fase móvil, hasta el detector (equipo que puede dar una señal
de detección utilizando alguna propiedad del analito).
 Selectividad. Es la capacidad de diferenciar cada componente en la mezcla.
 Eluyente. También se refiere a la fase móvil cuando sale de la columna cromatográfica.

El método cromatográfico consiste en inocular una muestra en una fase estacionaria o fase móvil
(dependiendo del tipo de técnica cromatográfica). Luego, si, por ejemplo, la fase móvil es la que
contiene la muestra, pasa a través de una fase estacionaria determinada.

La separación de los analitos dependerá de la afinidad de cada uno de los componentes tanto por
la fase estacionaria como por la fase móvil. Dependiendo de su naturaleza, algunas sustancias
tenderán a moverse con la fase móvil y otras a permanecer sobre la fase estacionaria.
IV. TIPOS DE CROMATOGRAFIA
Dependiendo de la tecnología utilizada, de la naturaleza del soporte (fase estacionaria) y de la
sustancia móvil (fase móvil), se pueden diferenciar los siguientes tipos de cromatografía:

Cromatografía en papel. La fase estacionaria está formada por una tira de papel de filtro. La
muestra a analizar se coloca en forma de gota sobre un extremo del papel. Luego se sumerge la
tira de papel en un recipiente donde se encuentra la fase móvil, teniendo en cuenta que el
extremo donde está colocada la muestra quede en la parte de abajo del papel. La fase móvil
asciende por capilaridad arrastrando consigo la muestra y separando cada componente según su
afinidad por la fase estacionaria. Este tipo de cromatografía se emplea principalmente cuando
cada componente de la muestra tiene un color diferente, entonces se puede ver el despliegue de
colores sobre el papel para identificarlos.

Cromatografía en capa fina. El funcionamiento de esta técnica es parecido al de la cromatografía

en papel, pero en este caso la fase estacionaria se construye depositando una resina polar (casi
siempre sílica gel), sobre una placa de vidrio o aluminio. Se coloca cierta cantidad de la muestra a
1cm del borde inferior de la placa. Luego se sumerge esta placa, teniendo en cuenta que el
extremo que contiene la muestra debe quedar hacia abajo, en un recipiente que contiene la fase
móvil. La fase móvil asciende por capilaridad separando los componentes de la muestra.

Cromatografía en columna. La fase estacionaria se coloca dentro de una columna que puede ser
de vidrio o acero inoxidable, entre otros materiales. La fase móvil puede ser líquida o gaseosa. La
muestra se coloca en el extremo superior de la columna y se deja descender con la fase móvil
utilizando la gravedad. De este modo, la cromatografía en columna se puede clasificar como:

 Cromatografía sólido-líquido. La fase estacionaria es sólida y la móvil es líquida.

 Cromatografía líquido-líquido. Ambas fases son líquidas.
 Cromatografía líquido-gas. La fase estacionaria es líquida y la móvil es gaseosa.
 Cromatografía sólido-gas. La fase estacionaria es un sólido y la móvil es gaseosa.

Por otro lado, atendiendo al tipo de interacción del analito entre las fases estacionarias y móviles,
tenemos los siguientes tipos de cromatografía:

Cromatografía de Adsorción: la fase estacionaria sólida retiene a los solutos, principalmente por
efecto de fuerzas físicas de superficie del tipo de fuerzas de Van der Waals. Se emplea en la
separación de compuestos orgánicos diversos, tanto líquidos como sólidos. Recordemos, en
primera instancia, la diferencia entre ADSORCIÓN y ABSORCIÓN, la cual se esquematiza en la
Figura 5:
Cromatografía de partición. Se da cuando la separación de los analitos de la mezcla se produce
por diferencias de sus solubilidades o polaridades entre la fase estacionaria y la fase móvil, siendo
ambas fases líquidas inmiscibles. La tecnología de las fases estacionarias ha avanzado y ya existen
variedades de líquidos embebidos en sólidos y resinas que se utilizan con este fin. En este sentido
existen dos tipos de cromatografía dependiendo de la polaridad de la fase estacionaria y la fase
móvil:

 En fase normal. La fase estacionaria es polar y la fase móvil es apolar.

 En fase reversa. La fase estacionaria es apolar y la fase móvil es polar.

Cromatografía de Intercambio iónico: el sólido retiene a los solutos gracias a atracciones

electrostáticas. Por lo tanto, se usa con sustancias que se ionicen. La fase estacionaria sólida lleva
en su superficie cargas electrostáticas fijas, que retienen contraiones móviles que pueden
intercambiarse por iones de la fase móvil.

 Cromatografía de intercambio catiónico. La fase estacionaria contiene grupos funcionales

cargados negativamente, por lo que retiene cationes (cargados positivamente).
 Cromatografía de intercambio aniónico. La fase estacionaria contiene grupos funcionales
cargados positivamente, por lo que retiene aniones (cargados negativamente).

Cromatografía de Exclusión: la fase estacionaria es un material poroso que retiene a los solutos
selectivamente en función de la geometría y tamaño molecular. Este método también se llama
cromatografía de permeación en gel, en la química de los polímeros, y de filtración en gel, en la
bioquímica. Es muy útil en la separación de proteínas. La Figura 8 esquematiza este principio de
separación.

Cromatografía Líquido – Líquido: en este caso la fase estacionaria es también un líquido,

inmovilizado sobre un material sólido inerte que actúa solo de soporte. Los mecanismos que rigen
la separación en este caso se deben a equilibrios de distribución de los solutos, controlados por la
diferente solubilidad de los mismos entre fase móvil y estacionaria.

Cromatografía de Afinidad: la fase estacionaria es generalmente un polímero líquido

inmovilizado sobre un sólido inerte, unido por enlaces covalentes. Se aplica mucho en la
separación de sustancias con importante actividad bioquímica: anticuerpos, cofactores,
inhibidores enzimáticos y proteínas.

Cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC de High Performance Liquid

Chromatography): Es un importante miembro dentro de las más modernas técnicas de
separación. Su empleo, y el conocimiento de sus condiciones de funcionamiento y operación son
considerados actualmente indispensables para los profesionales de los laboratorios químicos,
farmacéuticos y bioquímicos, entre otros. Este tipo de técnica utiliza instrumentos muy
sofisticados y totalmente automatizados. Es un tipo de cromatografía líquida que utiliza una
pequeña cantidad de muestra (del orden de los µl), la cual es eluida por la fase móvil a través de
pequeñas columnas, rellenas con materiales especialmente preparados, por el efecto de altas
presiones.

Si bien tiene algunas limitaciones, como ser el alto costo del equipamiento utilizado, alto costo de
operación, necesidad de personal capacitado especialmente en su manejo, difícil análisis
cualitativo y falta de un detector universal sensible, las mismas no impiden el aprovechamiento
adecuado de sus ventajas, a saber: necesita cantidades de muestra muy pequeñas, alta resolución,
resultados cuantitativos, buena sensibilidad, menor tiempo de análisis, versatilidad y
automatización (existen en el mercado equipos que realizan el análisis de manera totalmente
automática, desde la inyección de la muestra hasta la impresión de los resultados).

Los mecanismos involucrados en la separación de los solutos en la HPLC son los mismos que los
presentados hasta el momento: adsorción, partición, exclusión e intercambio iónico. En el
mercado existen columnas con rellenos (fase estacionaria) diversos, de acuerdo al tipo de
mecanismo de separación que sea necesario aplicar para lograr la separación deseada el cual, a su
vez, queda determinado por el tipo de compuestos a separar.

Cromatografía de gases: Los gases, o mezclas de sustancias volátiles, pueden ser separados por
esta técnica en la cual la fase móvil es un gas. De acuerdo al estado físico de la fase estacionaria
encontraremos:

cromatografía gas-líquido (GLC: Gas Liquid Chromatography), y cromatografía gas-sólido (GSC: Gas
- Solid Chromatography). La separación se basa, como siempre, en la diferente interacción de los
componentes de la muestra con las fases móvil y estacionaria, debido a alguno de los siguientes
fenómenos físicos:

Adsorción (en la Cromatografía Gas – Sólido): la fase estacionaria es un sólido finamente dividido
que retiene a los solutos por adsorción sobre su superficie.

Partición (en la Cromatografía Gas – Líquido): la fase estacionaria es un líquido, retenido por
impregnación o por enlaces covalentes sobre un sólido inerte. La separación queda determinada
por los diferentes comportamientos de solubilidad de los solutos con la fase estacionaria líquida.

Las columnas que se emplean en cromatografía de gases contienen la fase estacionaria y pueden
ser de cobre, acero inoxidable, aluminio, vidrio, sílica fundida, teflón, etc. Idealmente, el material
con el cual está confeccionada la columna no debe interactuar con el relleno ni con las sustancias
presentes en la muestra analizada.

Esta técnica puede aplicarse al análisis de sustancias volátiles y térmicamente estables. En caso
contrario es necesario formar un derivado con estas características, lo cual no siempre es posible.
La cromatografía gaseosa permite la separación de las sustancias presentes en una muestra,
pudiendo ser usada también para su identificación.

V.CONCLUSIÓN
La cromatografía es una técnica poderosa y versátil que desempeña un papel fundamental en la
separación, identificación y cuantificación de componentes en una variedad de aplicaciones
científicas e industriales. Su continua evolución y desarrollo tecnológico la mantienen como una
herramienta esencial en la investigación y el análisis químico y biológico.
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1.Álvarez DO. Cromatografía [Internet]. Concepto. [citado el 1 de septiembre de 2023]. Disponible
en: https://concepto.de/cromatografia/

2.Edu.ar. [citado el 1 de septiembre de 2023]. Disponible en:

https://fcf.unse.edu.ar/archivos/series-didacticas/SD-44-Cromatografia-CORZO.pdf

3.Operaciones B�sicas en el Laboratorio de Qu�mica. Cromatograf�a. Fundamento de la

T�cnica [Internet]. Www.ub.edu. [citado el 1 de septiembre de 2023]. Disponible en:
https://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_fonament.html