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Universidad Nacional de Agricultura

“Aprender Haciendo”

Facultad de Ciencias.

Laboratorio de Química.

Cromatografía en

Papel.

Catedrático:

Juan Carlos Flores.

Sección: B

Integrantes:
Claudio Villela 23A2386
Jose Salinas 23A4366
Oscar Nuñ ez 23A4211
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PRACTICA 6: CROMATOGRAFÍA EN PAPEL

Introducción.

En esta lección aprenderemos sobre la cromatografía. Es una técnica analítica que se usa para la

purificación y separación de sustancias orgánicas e inorgánicas.

Los sistemas cromatográficos consisten en tres componentes: un soluto (muestra), una fase móvil

(solvente) y una fase estacionaria.

En la cromatografía de papel la fase estacionaria es el papel filtro. La fase móvil es el solvente que

se mueve a través de la fase estacionaria debido a la acción capilar.

En esta técnica la separación de los componentes de una mezcla es el resultado de la diferente

movilidad específica de los solutos en un medio poroso (papel) bajo la influencia de un solvente móvil.

I. RESULTADOS DE APRENDIZAJE

 Definir el concepto de cromatografía y los diferentes tipos que hay. Aplicar correctamente la técnica de
cromatografía en papel.
 Explicar con detalle las diferentes fases de la técnica de cromatografía en papel.

 Calcular apropiadamente los factores de retención (Rf) para cada uno de los pigmentos

utilizados en la práctica.
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La cromatografía
Es un método muy utilizado en todas las ramas de la ciencia que permite la separación,
identificación y determinación de los componentes químicos en mezclas complejas. Ningún
otro método de separación es tan potente y de aplicación tan general.

Las cromatografías son procesos que abarcan varias técnicas separativas, basadas en
propiedades físicas de ciertos materiales, que, en interacción con sustancias o mezclas de
sustancias, la/s cual/es guarda/n relación con las propiedades químicas de éstas, permite
descomponer una mezcla y analizar sus constituyentes. Con el desarrollo de la tecnología, las
técnicas cromatográficas se diversificaron y mejoraron sensiblemente su capacidad para
resolver mezclas de distinta naturaleza. En este artículo se presentan conceptos
introductorios, un breve panorama de las diversas técnicas cromatográficas disponibles y sus
aplicaciones.

El término cromatografía fue introducido en 1906 por el botánico ruso Mikhalil Tswett, para

hacer referencia a la separación de los pigmentos contenidos en extractos vegetales, conforme

éstos se filtraban a través de una columna rellena con un sólido poroso (Chicharro, 2005).

Keulemans (1959) definió cromatografía como “Método físico de separación en el que los

componentes a separar se distribuyen en dos fases, una de las cuales constituye un lecho

estacionario de gran desarrollo superficial y la otra un fluido que pasa a través o a lo largo del

lecho estacionario (fase móvil)”. Por tanto, la cromatografía comprende procesos en los que

los componentes de una mezcla, disueltos en una fase móvil, se van desplazando con

diferente velocidad a través de una fase estacionaria. La adecuada elección de estas fases

puede permitir que tales diferencias se traduzcan en una separación efectiva de los solutos, a la

vez que éstos pueden identificarse atendiendo a su particular velocidad de avance.

En cuanto a la naturaleza del proceso cromatográfico, los componentes disueltos de una

mezcla se mueven continuamente entre las dos fases, se asocian

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momentáneamente con la fase estacionaria, no migran, mientras todos los componentes

momentáneamente presentes en la fase móvil migran a la misma velocidad que ésta.

Entonces, la separación no ocurre en ninguna de las dos fases, sino que es el resultado de

continuos movimientos de las moléculas entre ellas. Los componentes se separan cuando

uno de ellos pasa a una velocidad diferente en la fase estacionaria respecto del resto. El

tiempo empleado por cualquiera de los componentes en la fase estacionaria depende de su

afinidad por ésta en las condiciones ensayadas (García- Segura et al., 1996).

CLASIFICACIÓN
El estado físico de la fase móvil determina la primera gran división de los métodos
cromatográficos. En esencia, algún tipo de fluido puede ser usado como fase
móvil. Históricamente, los líquidos fueron los primeros en ser usados dando lugar a
un amplio rango de métodos clasificados como cromatografía líquida (CL). Los
gases también pueden ser usados como fase móvil, los métodos basados en este
principio se clasifican como cromatografía gaseosa (CG). En este tipo de
cromatografía no sólo la fase móvil debe ser un gas, sino que también debe serlo
la mezcla a separar, por ello la CG requiere un paso previo de volatilización, que
no siempre es factible, máxime si se considera la termolabilidad de ciertas
sustancias, como por ejemplo la mayoría de las proteínas de muestras biológicas.
Esta es una división más metodológica que conceptual, cuya razón de ser se
encuentra en los diferentes modos de operación e instrumentación necesarios
para el manejo de gases o de líquidos.
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El estado de la fase estacionaria puede ser sólido o líquido. Cuando la fase

estacionaria es sólida no se plantea ningún problema conceptual, pues se
entiende que una fase móvil puede moverse a través de una fase sólida más o menos
porosa. Sin embargo, cuando la fase estacionaria es líquida, la fase móvil aun siendo
inmiscible con ella, podría arrastrarla. Esto se resuelve inmovilizando el líquido que
constituye la fase estacionaria por medio de algún sólido que recibe el nombre de
soporte, el cual ejerce como matriz de retención frente al empuje mecánico de la
fase móvil.

Otra clasificación de métodos cromatográficos se basa en la forma física de la fase

estacionaria usada. En la mayoría de las separaciones cromatográficas la fase
estacionaria está confinada dentro de un tubo a través del cual se alimenta la fase
móvil. Este tubo se llama columna cromatográfica, y tales métodos se clasifican como
cromatografías en columna (Figura 2). Alternativamente, la fase estacionaria
puede distribuirse como una capa fina y homogénea sobre un soporte plano de
material inerte, los métodos que utilizan esta forma se denominan cromatografías en
capa fina (CCF). La CCF es el representante de un grupo más amplio en el cual la
fase estacionaria tiene forma plana, llamado cromatografías planares.

Detección
Los componentes separados por cromatografía deben poder ser visualizados de
alguna manera, hecho que no constituye un problema para sustancias coloreadas
como los pigmentos, pero cuando los componentes a separar no pueden ser
observados a simple vista es necesario recurrir a diversas herramientas de detección,
las cuales se denominan reveladores (Pasto y Johnson, 2008).
Los sistemas cromatográficos consisten en tres componentes: un soluto
(muestra), una fase móvil (solvente) y una fase estacionaria.

En la cromatografía de papel la fase estacionaria es el papel filtro. La fase móvil es el

solvente que se mueve a través de la fase estacionaria debido a la acción capilar.
En esta técnica la separación de los componentes de una mezcla es el resultado
de la diferente movilidad específica de los solutos en un medio poroso (papel) bajo
la influencia de un solvente móvil.

Rƒ es un valor (razón de frentes) que puede ser definido como la razón entre la
distancia recorrida por la sustancia y la distancia recorrida por el solvente.

Rƒ = Distancia de migración de la muestra (medida desde el punto de aplicación)

Distancia de migración de frente del solvente (medida desde el punto de
aplicación)

Si el valor de Rƒ de un soluto es cero, el soluto permanece en la fase estacionaria y

resulta por lo tanto inmóvil. Si el valor de R ƒ = 1 entonces el soluto no tiene afinidad
por la fase estacionaria y recorre con el frente de solvente.
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Solvent Front = Frente del solvente

Base Line (Point of Application) = Línea de base (Punto de aplicación)

Rƒ (A) = a/x = 2/6 = 0,333

Rƒ (B) = b/x = 4,5/6 =
0,75

III. PROCEDIMIENTO

PARTE I: CROMATOGRAFIA EN LIQUIDOS

En el software de laboratorio ejecutar la simulación titulada LABORATORIO DE

CROMATOGRAFIA EN PAPEL y llevará a cabo los siguientes pasos:

Paso 1: Añadir montaje de cromatografía de papel desde el menú de

equipamiento.

Paso 2: Seleccionar Montaje de Cromatografía de Papel y “Marca Papel con Lápiz”

mediante la utilización del menú Procedimiento de Cromatografía de Papel.

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Paso 3: Añadir Solutos al papel utilizando el menú de Procedimiento “Colocar

Soluto en Papel” para Cromatografía de Papel.

Paso 4: Añadir Solvente al depósito utilizando el menú de Procedimiento

“Añadir Solvente al Depósito” para Cromatografía de Papel.

Paso 5: Sumergir Papel en el Depósito con solvente, utilizando el menú de

Procedimiento “Sumergir Papel” para Cromatografía de Papel.

Paso 6: Esperar y observar el proceso de cómo el solvente y solutos se mueven en el

papel hacia arriba.

Paso 7: Una vez que los solutos y solventes dejan de subir, retirar el papel del

depósito utilizando el menú de Procedimiento para Cromatografía de Papel y

anotar las distancias.

Observaciones

Distancia de migración del frente del solvente: 5.6cm

Distancia de migración de los tintes conocidos: Azul 1 (B1): 5.6 cm

Verde 3 (G3): 5.6 cm Rojo 3

(R3):0.cm

Rojo 40 (R40): 0.3cm

Amarillo 5 (Y5): 3.1cm

valores Rf de tintes conocidos = Distancia de migración de la muestra / Distancia de migración del frente

de solvente
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Rf de Azul 1 (B1): B1/x= 5.6/6=0.93 Rf de Verde 3

(G3):G3/X= 5.6/6= 0.93 Rf de Rojo 3 (R3): R3/X=

0.4/6=0.066

Rf de Rojo 40 (R40):R40/X= 0.3/6= 0.05

Rf de Amarillo 5 (Y5): Y5/X= 3.1/6= 0.516

Tintes desconocidos: Hay que tener en cuenta que los tintes desconocidos son

combinación de colorantes o tintes conocidos.

¿Cuál es la composición de Desconocido 1 (U1)? R= Rojo y

Blanco

¿Cuál es la composición de Desconocido 2 (U2)? R= Rosado y

Amarillo

IV.INVESTIGACIÓN

1. ¿En qué se fundamenta la técnica de cromatografía en papel?

R= La técnica de cromatografía en papel se fundamenta en la capacidad de separar y analizar mezclas

de sustancias en función de sus diferentes velocidades de migración a través de un papel absorbente.

Se basa en el principio de la partición, donde la muestra se disuelve en un solvente y se aplica en una

línea cerca de un extremo del papel. A medida que el solvente se mueve a través del papel por

capilaridad, arrastra consigo los componentes de la muestra.

Los componentes de la muestra se separan debido a sus diferentes afinidades por el papel y el

solvente. Aquellos compuestos que tienen mayor afinidad por el papel se mueven más lentamente,

mientras que aquellos con mayor afinidad por el solvente se mueven más
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Rápidamente. Como resultado, se crea una separación de los componentes en la muestra a medida

que avanzan a diferentes distancias en el papel.

¿Qué variables intervienen en la cromatografía?

R= -Tipo de papel:

-Solvente

-Tamaño y posición de la mancha de muestra

-Temperatura y humedad

-Tiempo de migración

Mencione dos técnicas cromatográficas utilizadas en química.

R= 1. Cromatografía de capa fina (CCF): En esta técnica, una muestra se aplica como una mancha

estrecha en una capa delgada de adsorbente, como gel de sílice, que se encuentra en una placa de

vidrio o metal.

Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC): Esta técnica utiliza una columna cromatográfica de

alta resolución que contiene partículas estacionarias de pequeño tamaño y una fase móvil líquida. La

muestra se disuelve en un solvente y se inyecta en la columna, donde los componentes se separan en

función de sus interacciones con la fase estacionaria y la fase móvil.

V. Objetivos

Definir el concepto de cromatografía y los diferentes tipos que hay. Aplicar

correctamente la técnica de cromatografía en papel.

Explicar con detalle las diferentes fases de la técnica de cromatografía en papel.

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Calcular apropiadamente los factores de retención (Rf) para cada uno de los pigmentos utilizados en

la práctica.

V. BIBLIOGRAFÍA

 Raymond, CHANG. Química. 10a Edición, Editorial Mc. Graw Hill. México D.F 2010.

 9.2 "Fisico-Quí•mica." Fisico-Química: Destilación Fraccionada. N.p., n.d. Web. 06 Feb. 2013.
<http://fraymachete-fq.blogspot.mx/2008/11/destilacin- fraccionada.html>.

 9.3 "Cromatografí•a." Cromatografía. N.p., n.d. Web. 06 Feb. 2013.

<http://www.textoscientificos.com/quimica/cromatografia>.