UNIVERSIDAD ESTATL DEL

SUR DEL MANABI

FACULTAD CIENCIAS DE LA
SALUD
INTEGRANTES
Carvajal Sornoza Andrea Valentina
García Baque Kelsey Paulette
Jiménez Pezantez Paola Rosalía
Salazar Coellar Britney Andrea
Triviño Choez Jostin Bruno
LICENCIADO
Ing: Angel Leonardo Pin Pin
TEMA
Cromatografía
GRUPO
Numero 5
PERIODO ACADEMICO ORDINARIO
PII-2023
 Cromatografía
La cromatografía es un procedimiento químico utilizado en todas las ramas de la ciencia, que
permite la separación, identificación, cuantificación, cualificación y determinación de los
componentes químicos individuales de sustancias en mezclas complejas, de acuerdo con la
purificación de compuestos de una manera muy precisa. Estos procedimientos, abarcan varias
técnicas separativas basadas en propiedades físicas de ciertos materiales que, en interacción con
otras sustancias o mezclas de éstas, permite descomponer la mezcla y analizar sus constituyentes,
mediante una fase móvil que consta, según el procedimiento, de un líquido o gas que corre a
través de una superficie y de la fase estacionaria y una fase estacionaria de materia sólida o
líquida que se queda en la misma posición.
De esta manera, los componentes en una muestra a analizar se van distribuyendo en estas dos
fases, cuando la fase móvil atraviesa la fase estacionaria es lo que se denomina proceso de
elución. La separación de los distintos componentes de la muestra es resultado de repetidos
procesos de sorción – desorción de estos componentes, para finalmente lograr su separación y
visualizarlos en una gráfica que se conoce como cromatograma. Los procedimientos más
importantes en cromatografía son la cromatografía en papel, cromatografía en capa fina,
cromatografía en columna y la cromatografía de gases. Esta técnica es muy efectiva por lo que es
utilizada tanto en el área de la investigación como en el campo industrial. (1)

La cromatografía es un método muy utilizado en todas las ramas de la ciencia que permite la
separación, identificación y determinación de los componentes químicos en la mezclas
complejas. Ningún otro métodos de separación es tan potente y de aplicación tan general, las
cromatografía son procesos que abarca varias técnicas separativas, basadas en propiedades
físicas de ciertos materiales, que en interacción con sustancias o mezclas de sustancias, las cuales
guardan relación con las propiedades químicas de estas, permiten descomponer una mezcla y
analizar sus constituyentes. Con el desarrollo de la tecnología, las técnicas cromatográficas se
diversificaron y mejoraron sensiblemente su capacidad para resolver mezclas de distintas
naturalezas. (2)
Actualmente cromatografía es el nombre que se le da a un grupo de técnicas utilizadas en la
determinación de la identidad de sustancias, en la separación de componentes de las mezclas y en
la purificación de compuestos. Esta técnica es muy efectiva y por lo tanto se utiliza tanto a nivel
de investigación como a nivel industrial.

Aunque actualmente existen variaciones de la técnica dependiendo de las necesidades o el tipo

de sustancias a investigar, todos los sistemas contienen una fase estacionaria y una fase móvil; la
fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido que se queda fijo en la misma posición,
mientras que la fase móvil puede ser un líquido o un gas que corre a través de una superficie y de
la fase estacionaria.

Los componentes en una muestra a analizar se irán distribuyendo entre estas dos fases, a medida
que la fase móvil atraviesa la fase estacionaria en un proceso denominado elución, la separación
de los distintos componentes de la muestra se da como resultado de repetidos procesos de
sorción-desorción de estos componentes debido a su afinidad química por una u otra fase,
finalmente, la separación de estos componentes se puede visualizar mediante una gráfica
denominada cromatograma. (3)

Es un gráfico u otra representación de la respuesta del detector, de la concentración del analito en

el efluente o de otra magnitud utilizada para medir una propiedad del efluente frente al volumen
de efluente o tiempo. En cromatografía en plano, "cromatograma" puede ser el papel o capa con
las zonas separadas. (4)

Además de haber dado un vuelco a nuestro mundo en pocos meses, el coronavirus ha hecho que
nos familiaricemos con términos científicos de los que antes ni siquiera habíamos oído hablar. A
estas alturas, seguramente te habrás hecho más de un test COVID. Lo que quizás no sabes es que
funcionan gracias a una técnica conocida como cromatografía.

Si has tenido la oportunidad de ver estos test en el laboratorio, te habrás encontrado con una tira
de papel de filtro, impregnada con determinados compuestos químicos, en la que aparecerán
diferentes colores cuando reaccionan con la sustancia que se quiere estudiar. A modo de
resumen, así es cómo se lleva a cabo la cromatografía, pero, si quieres conocer todos los detalles,
te recomendamos qué sigas leyendo porque te explicaremos qué es la cromatografía y en qué
consiste, además de darte algunos ejemplos de tu día a día. (5)
 Fases de cromatografía
La cromatografía depende de una serie de instrumentos, compuestos químicos y
determinada tecnología. Debido a ello, es importante conocer algunos conceptos para poder
entender el funcionamiento de las técnicas cromatográficas:

 Fase estacionaria: Es una sustancia que se mantiene inmóvil mientras se ejecuta la

cromatografía.
 Fase móvil: Es la sustancia que se mueve durante la cromatografía. Puede ser un
líquido o un gas. La muestra que contiene el analito se administra en la fase móvil.
 Analitos: Son las sustancias que se van a separar, cuantificar y/o identificar
utilizando la cromatografía, es decir, son las sustancias que se van a analizar.
 Muestra: Es la mezcla que se va a analizar. Puede estar constituida por uno o varios
analitos, y otros componentes que pueden no ser de interés, de los que serán
separados los analitos.
 Tiempo de retención: Es el tiempo que demora un analito en pasar desde la columna
o sistema por donde pase la fase móvil, hasta el detector (equipo que puede dar una
señal de detección utilizando alguna propiedad del analito).
 Selectividad: Es la capacidad de diferenciar cada componente en la mezcla.
 Eluyente: También se refiere a la fase móvil cuando sale de la columna
cromatográfica.

El método cromatográfico consiste en inocular una muestra en una fase estacionaria o fase móvil
(dependiendo del tipo de técnica cromatográfica). Luego, si, por ejemplo, la fase móvil es la que
contiene la muestra, pasa a través de una fase estacionaria determinada.

La separación de los analitos dependerá de la afinidad de cada uno de los componentes tanto por
la fase estacionaria como por la fase móvil. Dependiendo de su naturaleza,
algunas sustancias tenderán a moverse con la fase móvil y otras a permanecer sobre la fase
estacionaria. (6)
Cromatografía de líquidos
Cromatografía de gases
Cromatografía de fluidos supercríticos
La cromatografía de gases es útil para gases o para compuestos relativamente volátiles, lo que
incluye a numerosos compuestos orgánicos. En el caso de compuestos no volátiles se recurre a
procesos denominados de "derivatización", a fin de convertirlos en otros compuestos que se
volatilicen en las condiciones de análisis.
Dentro de la cromatografía líquida destaca la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC,
del inglés High Performance Liquid Chromatography), que es la técnica cromatográfica más
empleada en la actualidad, normalmente en su modalidad de fase reversa, en la que la fase
estacionaria tiene carácter no polar, y la fase móvil posee carácter polar (generalmente agua o
mezclas con elevada proporción de la misma, o de otros disolvente polares, como por ejemplo
metanol). El nombre de "reversa" viene dado porque tradicionalmente la fase estacionaria estaba
compuesta de sílice o alúmina, de carácter polar, y por tanto la fase móvil era un disolvente
orgánico poco polar. Una serie eluotrópica, es un rango de sustancias de diferentes polaridades
que actúan como fase móvil y que permiten observar un mejor desplazamiento sobre una fase
estacionaria (7)

CLASIFICACION DE LOS METODOS CROMATOGRAFICOS

Son clasificados según el estado físico de la fase, el mecanismo de separación y el tipo de

soporte. La fase móvil puede ser un gas o un líquido, y la estacionaria u líquido o un sólido. Se
pueden establecer cuatro tipos de cromatografía: gas-líquido, líquido-líquido, gas-sólido, líquido-
sólido. Los mecanismos por los que los diferentes componentes son separados en los procesos
cromatográficos son variados. En algunos casos participan más de un mecanismo en un mismo
proceso de separación por lo que dificulta la 2 clasificación. Los principales mecanismos que
intervienen en la separación cromatográfica son: Adsorción: Gases o líquidos contenidos en la
fase móvil son retenidos por una adsorción selectiva en la superficie del sólido que constituye la
fase estacionaria. En la interfase sólido-fase móvil hay un aumento de concentración respecto a
la inicial.

Este mecanismo controla la cromatografía gas-sólido y líquido-sólido. Reparto: Los

componentes de la fase móvil son retenidos por la fase estacionaria liquida en función de su
solubilidad en ella. Si las dos son liquidas se tiene un proceso de extracción en continuo.
Intercambio Iónico: La fase estacionaria constituida por un sólido intercambiando iones con
iones contenidos en la fase móvil, liquida. El intercambio de iones sólido-solución está regulado
por la afinidad química de los iones con ambas fases y por sus respectivas concentraciones.
Tamaño Molecular: Especies neutras de alto peso molecular pueden ser separadas en virtud de su
tamaño donde la fase estacionaria es un gel hidrofílico altamente poroso que retiene las
moléculas de menor tamaño al de los poros.
Las moléculas de mayor tamaño son retardadas en su paso por pequeñas fuerzas de adsorción de
la superficie externa del gel que luego son excluidas de la fase estacionaria. Migración Eléctrica:
Los componentes iónicos de una muestra son separados por su diferente velocidad y sentido con
que se desplazan en un campo eléctrico. La fase estacionaria puede ser un papel saturado por un
electrolito. La aplicación de un campo provoca un movimiento diferencial de los iones
dependiendo de su carga y de su movilidad iónica. (8)

La cromatografía puede ser definida como cualquier método de separación que depende de una
absorción continua, partición o proceso de intercambio iónico; agrupa un conjunto importante y
diverso de métodos, que permite separar componentes estrechamente relacionados en mezclas
complejas, lo que en muchas ocasiones resulta imposible por otros medios.
Los métodos cromatográficos son hoy en día tan diversos que pocos de ellos muestran alguna
similaridad con la técnica original. (9)
Clasificación atendiendo al fundamento de la separación (naturaleza de las fases y tipo de
interacciones):

A. CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS (fase móvil líquida) Fase estacionaria sólida: se

trata de sólidos finamente divididos (con gran superficie específica)

- Cromatografía de adsorción: la fase estacionaria sólida retiene a los solutos por un doble efecto
de adsroción física y química. Las interacciones implicadas son del tipo de furezas de van der
Waals.

- Cromatografía de cambio iónico: el sólido retiene a los solutos gracias a atracciones

electrostáticas. La fase estacionaria sólida lleva en la superficie cargas electrostáticas fijas, que
retienen contraiones móviles que pueden intercambiarse por iones de la fase móvil.

- Cromatografía de exclusión: la fase estacionaria es un material poroso, que retiene a las

moléculas en función de su tamaño. en ocasiones se denomina también cromatografía de
filtración sobre geles o de permeabilidad en geles (GPC). Fase estacionaria líquida:
- Cromatografía de reparto: la fase estacionaria es un líquidos inmovilizados sobre un material
inerte sólido que sólo actúa de soporte.

- Cromatografía de afinidad o de fases enlazadas: la fase estacionaria es generalmente un

polímero de tipo líquido inmovilizado sobre un sólido inerte por enlaces covalentes.

En ambos casos la separación se debe a equilibrios de distribución de los solutos entre las fases
móvil y estacionaria controlados por la diferente solubilidad de los mismos en las distintas fases.

B. CROMATOGRAFÍA DE GASES (fase móvil gaseosa)

- cromatografía de adsorción (o cromatografía gas-sólido) la fase estacionaria es un sólido

finamente dividido, que retiene a los solutos por adsorción 3

- cromatografía de partición o reparto la fase estacionaria es un líquido retenido por

impregnación o por enlace sobre un sólido inerte. Se basa en equilibrios de distribución.

C. CROMATOGRAFÍA DE FLUIDOS SUPERCRÍTICOS (la fase móvil es un fluido

supercrítico)

Un fluido supercrítico es un fluido calentado a tª y P superiores a las críticas. Posee algunas

características propias de un gas y algunas propias de un líquido. la fase estacionaria puede ser
líquida o sólida.

Clasificación atendiendo al modo se lleva a cabo la separación (cómo se ponen en contacto las
fases): Cromatografía en columna: la fase estacionaria se introduce en un tobo estrecho a través
del cual se hace pasar la fase móvil. Esta se desplaza por capilaridad, gravedad o presión. Pueden
emplearse fases móviles líquidas, gaseosa o fluidos supercríticos.

Cromatografía plana: la fase estacionaria se coloca en un soporte plano. En cromatografía plana

el flujo de fase móvil se consigue por capilaridad o por capilaridad y gravedad. Sólo pueden
emplearse líquidos como fases móviles. Existen:

Cromatografía en papel: la fase estacionaria está constituida por el agua retenida en la celulosa.
también existen papeles cambiadores de iones.

Cromatografía en capa fina: la fase estacionaria es un sólido adsorbente finamente dividido o un

líquido inmovilizado sobre un sólido colocado sobre una placa plana.

En este tema nos centraremos en la cromatografía en columna y consideraremos únicamente

cromatografía de líquidos y de gases. (10)
 Tipos de cromatografía
Existen diferentes criterios de clasificación de la cromatografía:
Por la naturaleza de sus fases:  Cromatografía líquido - líquido  Cromatografía gas - líquido 
Cromatografía líquido -. sólido  Cromatografía gas - sólido
Atendiendo al proceso químico-físico que va a protagonizar el proceso de separación: siendo este
el criterio más coherente de clasificación:  Cromatografía de Adsorción (líquido - sólido o
cromatografía de fases normales).  Cromatografía de Reparto (o líquido - líquido), se basa en
las características de solubilidad relativa de los solutos entre la fase móvil y una fase estacionaria
de un líquido no polar. La fase líquida se impregna a un soporte inerte de sílice o, en el caso de
cromatografía de fase invertida, se une químicamente.  Cromatografía de Intercambio iónico. 
Cromatografía de Exclusión.
Con base en la naturaleza del soporte en el que se aloja la fase estacionaria:  Cromatografía
plana: Cromatografía en papel - Cromatografía en capa fina (TLC)  Cromatografía en columna:
Cromatografía de gases (GC) Cromatografía líquida (LC) - cromatografía líquido - líquido -
cromatografía sólido – líquido (11)
Dependiendo del proceso y la fase estacionaria utilizada para separar las partículas, existen
diferentes tipos de cromatografía que se pueden aplicar en diversos ámbitos. (12)
Cromatografía en papel
Es un proceso muy utilizado para el análisis cualitativo en los laboratorios. Se constituye
simplemente por una tira de papel filtro donde se depositan unas pocas gotas de la muestra y
se evapora disolvente. Una vez secado, las sustancias mostrarán las manchas de distinto color
separadas. Si los componentes no tienen color propio, se debe someter a procesos de revelado.
Este tipo de cromatografía se emplea para compuestos muy polares o polifuncionales. Permite
separar sólidos mezclados con líquidos, de manera que no es posible decantar la mezcla, por
lo que se pasa la mezcla a través de un material poroso.

Cromatografía en columna
Es el más usado de los diferentes tipos de cromatografías para la separación y la purificación
de diferentes compuestos orgánicos, bien estén en estado líquido o en estado sólido. La fase
estacionaria en este método se coloca dentro de una columna de cristal con una llave en su
extremo inferior para controlar el paso de las sustancias.
Por la parte superior se deposita la fase estacionaria para que la fase móvil pueda atravesar el
sistema. Así, la fase móvil contendrá los compuestos disueltos que, poco a poco, saldrán de la
columna cromatográfica y se recogerán en fracciones.
Este tipo de cromatografía es muy eficaz gracias a la disminución del tamaño de las partículas
del absorbente.

Cromatografía en placa fina

En la cromatografía en capa fina se utiliza una placa inmersa verticalmente en una fase móvil.
La fase estacionaria es una capa uniforme de un absorbente mantenido sobre la placa, que
puede ser de aluminio o de vidrio.
A la lámina se le coloca una cubeta cerrada que contiene uno o varios disolventes mezclados
y, a medida que la mezcla de disolventes asciende, se produce un reparto diferencial de los
componentes de la mezcla.

Cromatografía de partición
En la cromatografía de partición la separación de los componentes de la mezcla se produce
por diferencias de polaridades entre la fase estacionaria y la móvil, siendo las dos fases
líquidas inmiscibles.
Existen dos tipos de cromatografía por partición según la polaridad de la fase estacionaria y
móvil; la fase normal, en que la fase estacionaria es polar y la móvil es apolar, y la fase
reversa, donde la estacionaria es polar y la fase móvil es polar.

Cromatografía de adsorción

En este tipo, la fase estacionaria es un sólido y la móvil es líquido y puede estar formada por
un solvente o una mezcla de ellos. Algunos componentes de la mezcla se retendrán con mayor
fuerza que otros para proceder a separar los componentes de la muestra.

Cromatografía de intercambio iónico

Dentro de esta clase de cromatografía de intercambio iónico, podemos distinguir entre las
de intercambio catiónico y las de intercambio aniónico. En el primero, la fase estacionaria
contiene grupos funcionales con carga negativa, por eso retiene cationes. Por lo contrario, en
el intercambio aniónico los grupos funcionales de la fase estacionaria tienen carga positiva,
por lo que retiene aniones.
Cromatografía de exclusión molecular
La base de este tipo de cromatografía es la de separar los componentes según su tamaño
molecular en estado disuelto. Las moléculas más grandes son las primeras en eludirse. Esta
técnica también se usa para caracterizar la distribución del peso molecular de los polímeros.
 Ejemplos de cromatografía
Derramar vino sobre un mantel blanco: Al secarse el vino en contacto con el aire, las diversas
sustancias que lo componen teñirán de distinto color el blanco de la tela.
En los análisis de sangre: A menudo se realiza la cromatografía de muestras de sangre para
poder separar e identificar sustancias contenidas en ella, imperceptibles normalmente, a partir del
color que reflejan en un soporte o sometidas a una luz específica. Tal es el caso de algún fármaco
o alguna sustancia específica, como el alcohol.
En un examen de orina: La orina, incluso más que la sangre, es una mezcla de
diversos compuestos, cuya presencia o ausencia revela el funcionamiento del organismo. Por
ende, se puede realizar una separación cromatográfica para buscar residuos inusuales, como
sangre, sales, glucosa o drogas.
Para revisar escenas del crimen: Como en las películas, se toman telas, fibras, tejidos u otros
soportes para observar la separación por adherencia de distintas sustancias, como el semen o la
sangre, que a simple vista podrían pasar desapercibidas.
Para hacer comprobaciones sanitarias de alimentos: Dado que se conoce la reacción de
los alimentos al ser sometidos a un espectro cromatográfico, puede observarse si hay en ellos
algún tipo de sustancia indebida o producto de agentes microbianos a partir de una pequeña
muestra.
Para verificar niveles de contaminación: Ya sea en el aire o el agua, puede medirse a partir de
una muestra pequeña la reacción de las sustancias disueltas e imperceptibles, empleando un
soporte específico que permita distinguir entre los compuestos, dejando secar el agua, por
ejemplo.
Exámenes complejos de microbiología: Esta técnica es ampliamente usada para combatir
enfermedades como el ébola, por ejemplo, porque permite la distinción entre los anticuerpos más
y menos eficaces de cara a la enfermedad.
Para aplicaciones petroquímicas: La cromatografía es útil en el proceso de separación de
los hidrocarburos del petróleo y su transformación en diversos materiales refinados, que
presentan propiedades y adherencias sumamente disímiles y observables.
Para comprobación de incendios: Para determinar si fueron o no provocados, a menudo se
emplea una cromatografía de los residuos, para evidenciar la presencia de sustancias inesperadas
cuya reactividad sea distinta a las del resto, como ciertos combustibles fósiles.
Para separar tintas: Ya que las tintas están compuestas por diversos pigmentos en un medio
líquido, es posible separar estos pigmentos mediante cromatografía y evidenciar las diferencias
entre cada uno.

Por ejemplo, si se derrama un poco de vino tinto sobre un mantel blanco, al cabo de un tiempo se
observa que la mancha no es uniforme, sino que hay una zona con predominio de tonos azules y
otra en la que la tonalidad es roja. Esto se debe a que ha habido una separación cromatográfica
de los pigmentos en el vino. (13)

Para detectar radiactividad: Dado que los elementos radiactivos presentan actividades y
tiempos de vida distintos a los de la materia ordinaria, a menudo se pueden identificar empleando
esta técnica en laboratorio. (14)

Ventajas y desventajas de la Cromatografía:

· Permite separar mezclas en cualquier estado (sólido, líquido o gas)
· Permite el análisis de muestras muy pequeñas
· Alta resolución: permite el análisis de concentraciones muy bajas 
· Permite la separación de mezclas muy complejas
· Es automatizable, lo cual permite abaratar su coste
· Amplio espectro de aplicaciones
· Rapidez: se obtienen resultados más rápidos que con otras técnicas
· Es un método sencillo para identificar componentes de mezclas
Por otra parte, las desventajas de la cromatografía son la inversión en instrumentos
cromatográficos especiales que puede resultar muy costosa. En algunos casos también requiere
una formación especializada.

Etimológicamente proviene del griego "chroma" (color) y "grafía" (impresión) en referencia a las
primeras técnicas de separación sobre papel secante en las que los diferentes componentes lo
coloreaban.
Elementos de la Cromatografía: 
 Analito: es la mezcla que va a ser separada mediante la técnica cromatográfica elegida
 Fase Móvil: mezcla de Analito con un disolvente que desplaza los componentes a
diferente velocidad
 Fase Estacionaria: sustancias fijas sobre las que se mueve la Fase Móvil
 Cromatograma: resultado en el que se aprecian los diferentes componentes de la
mezcla separados.
En el ejemplo de la figura el analito sería la clorofila, la fase móvil la mezcla de clorofila con
alcohol, la fase estacionaria el papel secante y el cromatograma los diferentes componentes
separados. (15)
Referencias
x

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https://cientecinstrumentos.cl/que-es-cromatografia/.

2. Sgariglia MA, Soberon JR, Sampietro DA, Vattuone MA. 2010. [Online]; Cromatografía: conceptos y
aplicaciones. Acceso 26 de 01de 2023. Disponible en:
https://repositoriosdigitales.mincyt.gob.ar/vufind/Record/CONICETDig_f3a02d98947fd2d0a85d15cb
ddd55b73.
3. labomersa. ¿Qué es Cromatografía y para qué sirve? [Online]; 2022. Acceso 17 de 01de 2023.
Disponible en: https://labomersa.com/2020/12/15/que-es-cromatografia-y-para-que-sirve/.

4. SECyTA aRR. Definiciones básicas. [Online]; 2014. Acceso 26 de 01de 2023. Disponible en:
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%C3%A9todo,mueve%20en%20una%20direcci%C3%B3n%20determinada.

5. lifestyle Qy. QUÉ ES LA CROMATOGRAFÍA Y POR QUÉ LA HAS USADO AUNQUE NO SEAS CIENTÍFICO.
[Online]; 2022. Acceso 26 de 01de 2023. Disponible en:
https://www.zschimmer-schwarz.es/noticias/que-es-cromatografia/.

6. Álvarez DO. Cromatografía. [Online]; 2021. Acceso 17 de 01de 2023. Disponible en:
https://concepto.de/cromatografia/.

7. Laboratorio Ey. CROMATOGRAFÍA. [Online]; 2011. Acceso 26 de 01de 2023. Disponible en:
https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-ampliado/cromatografIa.

8. Feinberg ISyJ. La cromatografia y sus aplicaciones. [Online] Acceso 17 de 01de 2023. Disponible en:
https://exa.unne.edu.ar/quimica/quimica.analitica/qa_arch_matdid/arch_teoria/Temas
%20teoricos/Profesorado/Cromatografia.pdf.

9. QuimiNet. Clasificación de los métodos cromatográficos. [Online]; 2006. Acceso 26 de 01de 2023.
Disponible en: https://www.quiminet.com/articulos/clasificacion-de-los-metodos-cromatograficos-
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1 TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS. [Online] Acceso 26 de 01de 2023. Disponible en:

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1 net Q. Ejemplos de Cromatografía. [Online] Acceso 26 de 01de 2023. Disponible en:

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