UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Perú, Decana de América

FACULTAD DE QUÍMICA E INGENIERÍA QUÍMICA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERÍA

QUÍMICA

PRÁCTICA N°2 CROMATOGRAFÍA DE ALFA AMINOACIDOS EN

CAPA FINA DE SILICA GEL

Curso: Bioquímica

Profesora: Orihuela, Carmen

Integrantes

• Espinoza Gonzales, Luis Gustavo 20070019

• La Rosa Alvarez, Camila Angelica 20070136

• Llatas Pérez, Cristina Victoria 20070137

• Morales Levano, Janeli Olenka 20070017

• Núñez Limachi Angélica Esther 20070095

• Rios Herrera, Rosario 20070153

• Soto Mezarino, Diana Rosa 01113747

• Tapahuasco Dávila, Frank David 19070155

Lima – 2022
 ÍNDICE

I. RESUMEN ..................................................................................................... 4

II. INTRODUCCIÓN ...................................................................................... 5

III. PRINCIPIOS TEÓRICOS .......................................................................... 6

3.1 Cromatografía en capa fina: ........................................................................ 6

3.2 Factor de retención (Rf): ............................................................................. 7

IV. DETALLES EXPERIMENTALES ............................................................ 7

4.1. Materiales y reactivos ................................................................................ 7

4.2. Procedimiento experimental: ..................................................................... 9

V. TABLA DE DATOS Y RESULTADOS ................................................. 11

VI. REACCIONES QUÍMICAS Y EJEMPLOS DE CÁLCULO ................. 13

4.1. Reacciones Químicas ............................................................................... 13

4.2. Ejemplos de Cálculo ................................................................................ 13

VII. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS ................................. 14

VIII. CONCLUSIONES ................................................................................ 14

IX. RECOMENDACIONES .......................................................................... 14

X. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ..................................................... 18

XI. ANEXO .................................................................................................... 18

Anexo 1. Cuestionario .................................................................................... 18

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 I. RESUMEN

La cromatografía es una capa fina que tiene como reparto a los componentes de
una mezcla el cual se separa por solubilidad. Donde los elementos del sistema
cromatográfico están compuestos por el soporte, fase estacionaria (disolvente A), y fase
móvil o eluyente (disolvente B). Es una técnica simple (placa y tanque cromatográfico)
y de fácil desarrollo. Se utiliza en diversas aplicaciones como en el control de calidad.
Cabe resaltar el fundamento, sus componentes, qué absorbentes y eluyentes se utilizará
en esta técnica. En la presente práctica, se llevará a cabo la identificación del
aminoácido mediante la ninhidrina, el cual es muy general utilizar esta solución
reveladora, además qué materiales y reactivos se utilizaron en la experiencia indicando
su procedimiento en cada paso, sus resultados, cálculos y sus reacciones. Con ello, se
discutirá y analizará los resultados obtenidos de la experiencia. Finalmente, se resaltarán
las conclusiones, recomendaciones y el respectivo cuestionario en los anexos.

Palabras clave: disolvente, aminoácido

ABSTRACT

Chromatography is a thin layer chromatography that has as its partition the

components of a mixture which is separated by solubility. Where the elements of the
chromatographic system are composed of the support, stationary phase (solvent A), and
mobile phase or eluent (solvent B). It is a simple technique (chromatographic plate and
tank) and easy to develop. It is used in various applications such as quality control. It is
worth highlighting the rationale, its components, which absorbents and eluents will be
used in this technique. In the present practice, it will be carried out the identification of
the amino acid by means of ninhydrin, which is very general to use this developer
solution, in addition which materials and reagents were used in the experience
indicating its procedure in each step, its results, calculations and its reactions. With this,
the results obtained from the experience will be discussed and analyzed. Finally,
conclusions, recommendations and the respective questionnaire will be highlighted in
the annexes.

Keywords: solvent, amino acid

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 II. INTRODUCCIÓN
La cromatografía es un método de separación de mezclas complejas el cual
posee una gran variedad de utilizaciones en diferentes ramas de la ciencia. Se basa en
general en las propiedades físicas de algunos materiales que al interactuar con otras
sustancias permitirán la descomposición de una mezcla y de esta manera analizar sus
constituyentes. Este método es útil para poder identificar, cuantificar diferentes
componentes que posee una mezcla.
Existen tipos de cromatografía que depende de los instrumentos utilizados, de la
fase estacionario y la fase móvil, como, por ejemplo, la cromatografía en papel, en
columna, de intercambio iónico, en capa fina entre otras. En el desarrollo de la práctica
se utilizó la cromatografía de capa fina.
Esta técnica fue desarrollada por Michael Twest en 1906 quién logró separar
pigmentos de plantas dándole el nombre que posee actualmente ya que los compuestos
que separó estaban coloreados. Posteriormente en 1956, se presentó una técnica en la
que una capa de silice gel era diseminada sobre una placa de vidrio resultando un
análisis más rápido y más sensible para mezclas complejas.

Algunas aplicaciones de la cromatografía son:

• Determinación de la concentración de productos aditivos dados en productos

agroquímicos,
• Análisis de productos provenientes de la industria del petróleo.
• Control de calidad de materia prima, proteínas, colorantes en fábrica de
alimentos

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III. PRINCIPIOS TEÓRICOS

La cromatografía se engloba dentro de las llamadas técnicas de separación y

permite el análisis de mezclas complejas de compuestos muy estrechamente
relacionados químicamente. Son varias las modalidades usadas y se clasifican según la
fase móvil (de gases, líquida) y por el tipo de soporte (columna, capa fina, papel)
usados. La separación se lleva a cabo según la distinta interacción que presenta cada
uno de los componentes de una muestra respecto a dos fases: una estacionaria y otra
móvil que fluye sobre ella. Esta interacción puede ser de varios tipos que a su vez dan
lugar a distintas subclases de cromatografía: de absorción, de reparto, de cambio iónico,
de afinidad, etc. En esta práctica, vamos a usar una de las más simple de ellas, la
cromatografía de capa fina.

3.1 Cromatografía en capa fina:

En la cromatografía en capa fina (TLC) es un método de afinidad que se utiliza

para separar los compuestos de una mezcla. La TLC es un método de separación muy
versátil que se utiliza ampliamente para el análisis cualitativo y cuantitativo de las
muestras. La TLC puede utilizarse para analizar prácticamente cualquier clase de
sustancia: plaguicidas, esteroides, alcaloides, lípidos, nucleótidos, glucósidos,
carbohidratos y ácidos grasos.

En la TLC, la fase estacionaria es una fina capa de material adsorbente, normalmente

gel de sílice u óxido de aluminio, que recubre una superficie de placa inerte,
normalmente vidrio, plástico o aluminio. Se deposita una pequeña cantidad de la
muestra en un extremo de la placa de TLC, que se coloca verticalmente en una cámara
cerrada con un disolvente orgánico (fase móvil). La fase móvil se desplaza hacia arriba
por la placa por capilaridad y los componentes de la muestra migran distancias variables
en función de sus afinidades diferenciales por las fases estacionaria y móvil. Cuando el
disolvente llega a la parte superior de la placa, ésta se retira de la cámara de desarrollo y
se seca. Los componentes separados aparecen como puntos en la placa, y se evalúa el
factor de retención (RF) de cada componente.

Figura 3.1 componentes de la cromografía

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 3.2 Factor de retención (Rf):

El factor de retención (Rf) se utiliza para medir el movimiento de los

compuestos a lo largo de la placa de TLC. Rf se define como la distancia recorrida por
una componente dividida por la distancia total recorrida por el disolvente. Su valor se
encuentra siempre entre cero y uno.

distancia recorrida por el componente

𝑅𝑓 =
distancia recorrida por el disolvente

En general, cuanto más fuerte se une un compuesto a la fase estacionaria

adsorbente, más despacio migra hacia arriba en la placa de la TLC. Como los
adsorbentes de la TLC son normalmente polares, los compuestos no polares tienden a
subir más deprisa por la placa, lo que produce mayores valores de Rf, mientras que los
compuestos polares tienden a moverse más despacio e y tienen menores valores de R f.

IV. DETALLES EXPERIMENTALES

4.1. Materiales y reactivos

❖ Vasos de 250 ml
❖ Probeta
❖ Pipeta Pasteur
❖ Frascos colectores de mezcla a separar
❖ Cromato placas de alúmina, sobre placas de aluminio
❖ Rociador para revelador de alfa aminoácidos

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❖ Estufa de secado
❖ Ninhidrina, en solución al 1%
❖ Patrones de alfa- aminoácidos puros para verificar los componentes del
hidrolizado de anchoveta en estudio.
❖ Guantes de látex
❖ Tijeras
❖ Piseta con agua destilada

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 4.2. Procedimiento experimental:

Medir 2.5 x 6.5cm la placa de sílica gel y marcar 1 cm con un lápiz. Se debe
usar los guantes de látex para no contaminar la placa.

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 Después de preparar el eluyente (etanol e hidróxido amónico en una proporción
de 7:3), de este frasco se mide 10 ml de eluyente con una probeta para colocar en el
vaso de 250 mL. Luego, se da unos pequeños toques con la pipeta de isoleucina sobre la
placa.

Esta placa se coloca verticalmente dentro del frasco con el eluyente y se tapa con
la luna de reloj para luego rotularla. Después de varios minutos se observa la adsorción
sobre la placa. Cuando la placa esta casi totalmente mojada, se procede a coger la placa
para llevarlo a la estufa por 10 minutos a 50°C.

Transcurrido el tiempo, se procede a sacar la placa y rociarla con Ninhidrina

(solución reveladora) para llevarla nuevamente a la mufla por 10 minutos a 90°C.
Finalmente, se mide la distancia recorrida con la placa obtenida.

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V. TABLA DE DATOS Y RESULTADOS

Tabla 1. Factor de retención para el patrón

Distancia Distancia
recorrida por el recorrida por el Rf
compuesto (cm) eluyente (cm)

Isoleuc
4 4.5 0.89
ina 1%

Tabla 2. Cálculo de porcentaje de error

RF RF Err
Teórico Experimental or %

0.8 4.7
0.89
5 059

Figura 1. Medida de la placa

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12
VI. REACCIONES QUÍMICAS Y EJEMPLOS DE CÁLCULO

4.1. Reacciones Químicas

4.2. Ejemplos de Cálculo

Teniendo en cuenta que la para determinar el factor de retención se debe hallar

la relación entre la distancia recorrida por el compuesto y la distancia recorrida por el

eluyente.

𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜

𝑅𝑓 =
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑒𝑙𝑢𝑦𝑒𝑛𝑡𝑒

4
𝑅𝑓 = = 0.89
4.5

Para determinar el porcentaje de error se tiene en cuenta la fórmula a

continuación:

|𝑉𝑡𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑜 − 𝑉𝐸𝑥𝑝𝑒𝑟𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙 |
%𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = 𝑥100
𝑉𝑡𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑜

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 |0.85 − 0.89|
%𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = 𝑥100 = 4.7059%
0.85

VII. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

De los cálculos previos realizados, podemos observar que el valor experimental

obtenido del factor de retención de la isoleucina se encuentra muy cercano al valor
teórico arrojándonos un valor porcentual del 4.7059% lo cual confirmaría una correcta
ejecución de la práctica de laboratorio.

Teóricamente se tiene noción que la Isoleucina es no polar, y esto es

corroborable con el desplazamiento que se obtuvo a través de la placa pues debido a que
se desplazó 4 cm de los 4.5 cm totales. Asimismo, la muestra tuvo una tendencia a
viajar más lejos con el solvente, debido a que no se encontró atraído a la polaridad que
posee la fase estacionaria, que es lo que genera la poca movilidad de la muestra.

VIII. CONCLUSIONES

• La movilidad de los componentes que se desean separar dependerá de la afinidad

que tenga con la fase móvil y la fase estacionaria, así este será el factor crucial
para que pueda realizarse la técnica.

• La técnica cromatográfica posee diversas aplicaciones, ya sea para los productos

agroquímicos, en la industria petrolera o en control de calidad en la industria
alimentaria. Asimismo, esta técnica podrá ayudar a determinar el grado de
pureza de un compuesto; comparar muestras y realizar el seguimiento de una
reacción.

• Gracias a la experiencia, se observa que el método trae consigo la ventaja de ser

un método simple, rápido y didáctico.

IX. RECOMENDACIONES

• Al momento de tener contacto con las placas, es indispensable el uso de guantes

puesto que sin ellos puede traer un resultado errado.

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 Figura 2. Proceso de medir las placas haciendo uso de guantes

• Los recipientes usados deben estar correctamente rotulados para tener noción del

compuesto que es.

Figura 3. Rotulación efectuada en el laboratorio

• Para evitar cualquier tipo de contaminación por parte del ambiente, que pueda

alterar los resultados, ya sea en el caso que se pierda la fase móvil debido a su

evaporización o que se dañe la fase estacionaria, es necesario que se tape con la

luna de vidrio para mantenerla aislada.

Figura 4. Aislamiento de la fase estacionaria y móvil

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• Tener cuidado con los compuestos que se usan, teniendo en cuenta la seguridad

brindada por los pictogramas.

Figura 5. Pictogramas del n-propanol

Figura 6. Pictogramas del Hidróxido amónico

Figura 7. Pictogramas del Etanol

Figura 8. Pictograma de nihindrina

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 X. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Abbott D. Y Andews R. S., Introducción a la Cromatoqrafía, 3a ed., Alhambra, Madrid,

1970.

CROMATOGRAFÍA EN PLACA FINA Fundamento. (s.f.).

http://www.qfa.uam.es/qb/practicas/P6-guion.pdf

Laboratorio de química orgánica. (Visitado por última vez el 18 de mayo de 2020):

https://www.studocu.com/es-mx/document/universidad-nacional-autonoma-de-

mexico/quimica-organica-i/practicas/practica-no6-cromatografia-en-capa-

fina/685527/view

Luisot P (1982). “Bioquímica Estructural”, 2ª Ed. Editorial AC.

Sgariglia, M. (2010). CROMATOGRAFÍA: CONCEPTOS Y APLICACIONES.

Universidad Nacional de Tucumán. España.

https://ri.conicet.gov.ar/bitstream/handle/11336/75465/CONICET_Digital_Nro.3

655a360-b03b-44c8-8519-bc747d073f7c_A.pdf?Sequence=2&isallowed=y

XI. ANEXO

Anexo 1. Cuestionario

1. Indique el procedimiento para obtener las soluciones patrón de alfa

aminoácidos empleados en esta técnica.

En la técnica empleada se utilizó el alfa aminoácido empleado en esta técnica es

la isoleucina se pesó 1 g de isoleucina luego se mezcló con agua destilada hasta 100 ml.

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 2. Explique la acción separadora de los componentes del ELUYENTE que se

emplea En este caso :(Etanol/ hidróxido de amonio) proporción (7: 3)

La polaridad del eluyente afecta las velocidades relativas con la que los

diferentes componentes de la mezcla o el aminoácido en este caso se mueve sobre la

placa cromatográfica. Los disolventes polares compiten más eficientemente con las

moléculas polares de una mezcla por los lugares polares del absorbente.

El orden de elución de un compuesto se incrementa al aumentar la polaridad de

la fase móvil o eluyente. El eluyente puede ser un disolvente único o dos miscibles de

distinta polaridad como es en el caso de usar etanol/ hidróxido de amonio en una

proporción (7: 3), raramente se emplea un disolvente más polar que el metanol.

Usualmente se emplea una mezcla de dos disolventes en proporción variable; la

polaridad de la mezcla será el valor promediado en función de la cantidad de cada

disolvente empleado.

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