UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

​FACULTAD DE CIENCIAS. DEPARTAMENTO DE QUÍMICA

CURSO: QUÍMICA ORGÁNICA- LABORATORIO

TÍTULO DE LA PRÁCTICA: CRISTALIZACIÓN

INTEGRANTES: (Grupo 4)
1. Jimenez Valencia, Siryl Nicole 20200503
2. Rodriguez Ñahui, Maritza Rosmery 20191478
3. Rodriguez Palma, Karina Kasandra 20200092
4. Zavala Chipa, Flor Adely 20200277

HORARIO DE LA PRÁCTICA:​ 2:00 - 4:00 p.m.

GRUPO DE PRÁCTICA: G*

PROFESOR DE LA PRÁCTICA: ​Dioses Morales, Jacqueline Jannet

FECHA DE LA PRÁCTICA: ​19 de febrero

FECHA DE ENTREGA DEL INFORME: ​24 de febrero

​2021
 1. INTRODUCCIÓN

La​ ​cromatografía​ ​es​ ​un​ ​proceso​ ​que​ ​contiene​ ​una​ ​fase​ ​estacionaria​ ​y​ ​una​ ​móvil​ ​, este​ ​proceso​ ​nos​
​permite​ ​la​ ​distinción​ ​de​ ​sustancias​ ​mediante​ ​una​ ​técnica​ ​sencilla​ ​y​ ​llamativa, ​ ​la​ ​palabra​
cromatografía proviene de las palabras griegas χρῶμα chrōma y γράφω gráphō, escribir en
​colores​ ​y​ ​registro​ ​de​ ​color, ​ ​como​ ​su​ ​nombre​ ​mismo​ ​nos​ ​da​ ​a​ ​entender​ ​se​ ​trata​ ​de​ ​una​ ​técnica​
​basada​ ​en​ ​la​ ​identificación​ ​por​ ​colores, ​ ​pero​ ​a​ ​esta​ ​en​ ​el​ ​caso​ ​de​ ​la​ ​cromatografía​ ​en​ ​capa​ ​fina​ ​se​
​le​ ​adiciona​ ​la​ ​aplicación​ ​del​ ​Rf​ ​para​ ​la​ ​determinación​ ​de​ ​la​ ​sustancia​ ​en​ ​base​ ​a​ ​la​ ​distancia​
​recorrida​ ​por​ ​la​ ​sustancia​ ​con​ ​respecto​ ​a​ ​la​ ​distancia​ ​recorrida​ ​del​ ​solvente​ ​empleada. “La​
​cromatografía​ ​es​ ​una​ ​técnica​ ​o​ ​método​ ​físico​ ​de​ ​separación​ ​excepcionalmente​ ​versátil​ ​que, ​ ​en​

una​ ​o​ ​varias​ ​de​ ​sus​ ​formas, ​ ​es​ ​usada​ ​por​ ​casi​ ​todos​ ​los​ ​químicos​ ​en​ ​investigación. ​ ​Entre​ ​los​
​métodos​ ​de​ ​análisis​ ​modernos​ ​ocupa​ ​un​ ​lugar​ ​destacado​ ​debido​ ​a​ ​su​ ​facilidad​ ​para​ ​la​ ​separación, ​
​identificación​ ​y​ ​cuantificación​ ​de​ ​diversas​ ​especies​ ​químicas, ​ ​ya​ ​sea​ ​por​ ​sí​ ​sola​ ​o​ ​asociada​ ​a​
​otras​ ​técnicas​ ​instrumentales​ ​de​ ​análisis​ ​como, ​ ​por​ ​ejemplo, ​ ​la​ ​espectrofotometría​ ​o​ ​la​
​espectrometría​ ​de​ ​masas”. (Corzo​ ​Adriana.2019) ​ ​

Mikhael​ ​Semenovich​ ​Tswett​ ​fue​ ​quien​ ​en​ ​1906​ ​estableció​ ​la​ ​terminología, ventajas​ ​y​ ​definió​ ​el​
​proceso​ ​básico​ ​de​ ​la​ ​cromatografía, por​ ​ello​ ​se​ ​le​ ​considera​ ​el​ ​padre​ ​de​ ​la​ ​cromatografía. “En
1906, el botánico Ruso M. Tswett realizó un experimento que condujo al descubrimiento de lo que
hoy conocemos como cromatografía. Colocó un extracto de pigmentos vegetales en la parte
superior de una columna de vidrio rellena de carbonato de calcio (CaCO3). Al agregar éter,
observó que la mezcla original se separaba en diversas bandas coloridas que descendían a través
de la columna a diferentes velocidades”. (UNAM,2019)

En este laboratorio se vio la cromatografía de capa fina y de columna, mediante la evaluación de

una sustancia a la que se le agregó adicionalmente en un solvente para cada caso ya que la
cromatografía en columna o en capa fina.

2. OBJETIVOS
Objetivo general:
-Conocer la cromatografía como técnica de separación de las mezclas en sus componentes,
características, y diversos aspectos que intervienen en ella. La aplicación de la cromatografía en
este informe es en columna y capa fina.
Objetivos específicos:
-Aplicar la técnica de la cromatografía en columna para analizar, separar o purificar las sustancias
o mezclas.
- Realizar análisis cuantitativos con pequeños componentes con la cromatografía en capa fina.
- Reconocer y diferenciar la fase estacionaria y la fase móvil.
- Reconocer los disolventes y elegir los disolventes a usar en la cromatografía de capa fina.
- Calcular la distancia recorrida de cada componente.

3. MARCO TEÓRICO
3.1 CROMATOGRAFÍA
La cromatografía es un método de separación de mezclas complejas que se basa en diferentes
características de los componentes de la misma. Esta separación puede encontrarse en una fase
líquida o gas que es el resultado de las diferentes interacciones de los solutos que se desplazan
alrededor o sobre una sustancia líquida o sólida ( la fase estacionaria). Esto es posible debido a la
diversidad de afinidades de las sustancias por un medio móvil gas o líquido y un medio
absorbente estacionario (papel, gelatina, alúmina o sílice).

La clave de esta separación es la relación de la velocidad con la que se mueve cada sustancia
depende de la afinidad relativa por ambas fases (equilibrio de distribución). En forma general, los
componentes más afines a la fase estacionaria avanzan de manera lenta son retenidos entre tanto
los que son más afines a la fase móvil son menos retenidos y se mueven con mayor rapidez.

Separación de la cromatografía presenta fases importantes como :

Fase estacionaria​: ​Inicia cuando se aplica la mezcla a su soporte específico y se prepara para la
aplicación del móvil.

Fase móvi​l: ​Se procede a mover otra sustancia sobre el soporte, permitiendo así su reacción con
los componentes de la mezcla, para que la diferencia en la velocidad de reacción sirve como
criterio de separación

De acuerdo con el mecanismo de retención, la cromatografía se puede clasificar en los siguientes

tipos: adsorción (normal, de fase reversa) ,partición líquido-líquido, intercambio iónico,
permeación sobre gel y de afinidad. UNAM (2007)

3.1.1. Cromatografía en capa fina (CCF​)

Es una técnica analitica que tiene como objetivo el análisis de los componentes.
Este proceso es muy similar a la cromatografía en papel pero con unas ventajas que su desarrollo
es más rápido y da como resultado mejores separaciones. Para llevarlo a cabo se necesita un
adsorbente, placas de vidrio, un dispositivo que mantenga las placas durante su extensión y otro
para la aplicación de la capa absorbente, y una cámara en la que se desarrollen las placas
cubiertas.La fase móvil es líquida y la fase estacionaria consiste en un sólido. La fase estacionaria
será un componente polar y el eluyente será por lo general menos polar que la fase estacionaria,
de forma que los componentes que se desplacen con mayor velocidad serán los menos polares.
En la elección del eluyente influyen varios factores:
● Precio.
● Pureza.
● No utilizar mezclas de eluyentes (reproducibilidad).
● No utilizar compuestos muy volátiles.
● Evitar que contengan trazas de metales (catalizadores).

La elección del eluyente se realiza de forma empírica. Hay que estudiar la polaridad del
componente y probar con eluyentes cada vez menos polares.UNAM (2007)
 Figura 1. Cromatografía en capa fina (TLC)

3.2.2. Cromatografía en columna

Esta técnica se utiliza para la purificación de biomoléculas. Sobre una columna (fase estacionaria)
primero se aplica la muestra a separar, luego se aplica el tampón de lavado (fase móvil).
La mezcla a separar (muestra) se deposita sobre la superficie superior de la fase estacionaria
quedando absorbida en ella. A continuación, se vierte la fase móvil (eluyente) en la parte superior
de la columna y se permite su paso a través de la fase estacionaria. Durante el proceso
cromatográfico los componentes de la muestra son arrastrados por la fase móvil a distintas
velocidades efectuándose la separación. La velocidad de arrastre de cada componente depende
de su grado de adsorción en la fase estacionaria y de su afinidad por la fase móvil. ​UNAM (2007)

Figura 2. Cromatografía en columna (CC)

3.2.3. Cromatografía de intercambio de iones

La cromatografía de intercambio iónico se basa en interacciones electrostáticas entre grupos de

proteínas cargados y material de soporte sólido (matriz). La matriz tiene una carga iónica opuesta
a la de la proteína a separar, y la afinidad de la proteína a la columna se logra con enlaces
iónicos. Las proteínas se separan de la columna cambiando el pH, la concentración de sales
iónicas o la fuerza iónica de la solución tampón.[ 1 ]

3.2.4. Cromatografía de permeación en gel (tamiz molecular)

El principio básico de este método es utilizar materiales que contienen dextrano para separar
macromoléculas en función de sus diferencias de tamaño molecular. Este procedimiento se utiliza
básicamente para determinar los pesos moleculares de las proteínas y para disminuir las
concentraciones de sal de las soluciones de proteínas.[ 2 ]

3.2.5. Cromatografía de afinidad

Esta técnica de cromatografía se utiliza para la purificación de enzimas, hormonas, anticuerpos,

ácidos nucleicos y proteínas específicas [ 3 ]. Un ligando que puede formar un complejo con una
proteína específica (dextrano, poliacrilamida, celulosa, etc.) se une al material de relleno de la
columna. La proteína específica que forma un complejo con el ligando se une al soporte sólido
(matriz) y se retiene en la columna, mientras que las proteínas libres abandonan la columna.
Luego, la proteína unida abandona la columna mediante el cambio de su fuerza iónica mediante la
alteración del pH o la adición de una solución salina).[ 4 ]

3.2.6. Cromatografía en papel

En el papel, el material de soporte de la cromatografía consiste en una capa de celulosa altamente

saturada con agua. En este método, un papel de filtro grueso comprendía el soporte y las gotas de
agua asentadas en sus poros constituían la "fase líquida" estacionaria. La fase móvil consiste en
un fluido apropiado colocado en un tanque de revelado. La cromatografía en papel es una
cromatografía "líquido-líquido".[5 ]

3.2.7. Cromatografía de gases

En este método, la fase estacionaria es una columna que se coloca en el dispositivo y contiene
una fase estacionaria líquida que se absorbe sobre la superficie de un sólido inerte. La
cromatografía de gases es una cromatografía "gas-líquido". Su fase portadora consta de gases
como He o N 2 . La fase móvil que es un gas inerte se pasa a través de una columna a alta
presión. La muestra a analizar se vaporiza y entra en una fase de fase móvil gaseosa. Los
componentes contenidos en la muestra se encuentran dispersos entre la fase móvil y la fase
estacionaria sobre el soporte sólido. La cromatografía de gases es una técnica simple,
multifacética, altamente sensible y de aplicación rápida para la separación extremadamente
excelente de moléculas muy diminutas. Se utiliza en la separación de cantidades muy pequeñas
de analitos. ​Coskun O. (2016)

4. METODOLOGÍA
Materiales y métodos.

4.1.Cromatografía en columna

4.1.1.Materiales:

Columna de Bagueta Vaso de Soporte Algodón

vidrio precipitado Universal con
abrazadera
 Figura 4 .
Figura 7 ​ .
Figura 3 . Bagueta.Recupe Figura 5 .Vaso Figura 6 .
Algodón.Recupe
Columna de rado de: precipitado de Soporte
rado de:
vidrio.Recupera bagueta-o-c 100ml.Recupera universal con
-curacion-
do de: do de: gancho
columna-cromat aliexpress.com acoplado.Recup
ografia erado de:
eqtecnology.co

4.1.2.Reactivos:

Agua Etanol Anaranjado de Azul de Silica gel

acidulada metilo metileno

Figura 8 .​ Agua Figura 9 . Figura 10 Figura 11. Figura 12 .Silica

acidulada Frasco con .Anaranjado Azul de gel.Recuperado
.Recuperado etanol de metileno de:
de: .Recuperado metilo.Recuper .Recuperado silice
agua-acidulad de: ado de: de:
a dreamstime.co productos-qui -Azul-De-Metile
m micos no

4.1.3.Procedimiento:
 Fuente:Elaboración propia

4.2.Cromatografía en capa fina

4.2.1.Materiales:

Cámara de Placa Regla Lápiz

cromatografía cromatográfica

Figura 13.
Cámara de Figura 16. .
Figura 15
cromatografía.R Figura 14. . Lápiz
.Regla
ecuperado de: Placa .Recuperado de:
.Recuperado
www.fishersci.es cromatográfica Fdiseno-lapiz-
de:
.Recuperado de: www.google.co
cromatograf m

4.2.2.Reactivos:
 Solvente de Anaranjado de Azul de Silica gel
propanol-aceto metilo metileno
na y agua

Figura 17 Figura 18 Figura 19. Figura 20 .Silica

.Mezcla de .Anaranjado Azul de gel.Recuperado
propanol-aceto de metileno de:
na y agua metilo.Recuper .Recuperado silice
.Recuperado ado de: de:
de: productos-qui -Azul-De-Metile
Moodle micos no

4.2.3.Procedimiento:

Fuente:Elaboración propia
 5. RESULTADOS

Tabla Nº1 Cromatografía en capa fina

Recorrido (cm)
Relación con el frente (Rf):
Muestras Solvente
Compuesto (Rc) Rf =Rc/Rs
(Rs)

5,4 5,9 0,915

1. Anaranjado de metilo

Anaranjado de Azul de
2. Mezcla (1 +2) metilo metileno 5,9 0,915 0,186
(Rm1 o Rm2) 5,4 1,1

Tabla Nº2 Características de Cromatografía en capa fina

Fase fija o Fenómeno físico

Fase móvil o solvente de desarrollo
estacionaria predominante
Azul de metileno: Se
quedó atrapado
(Adsorción)
Propanol- Acetona-Agua (4:1:1) Silica de gel Anaranjado de metilo :
Fluye más y se va a la
parte superior
(Desorción)

Tabla N°3. Cromatografía en Columna: Separación de 2 colorantes.

Solvente 2º
Fase fija o estacionaria Muestra Solvente 1º Eluyente
Eluyente
Naranja de metilo Etanol -
Silica de gel diluida en etanol
Azul de metileno - Agua acidulada

6. DISCUSIONES
La cromatografía se compone de dos fases una estacionaria y una móvil. (UNAM,2007). En la
tabla Nº1 se muestra los datos obtenidos de la cromatografía en capa fina, en esta cromatografía
como se muestra en la ​tabla Nº2 se utilizó como fase estacionaria un absorbente y un soporte, el
absorbente utilizado fue silica en gel y el soporte una placa de aluminio, en la fase móvil se utilizó
un solvente que fue una mezcla de propanol, acetona y agua en una proporción de (4-1-1)
respectivamente, este solvente es menos polar que el absorbente pues así se logró una correcta
separación de la muestra que contenía anaranjado de metilo y azul de metileno, el solvente al ser
menos polar y la sílica gel al ser más polar , hace que el compuesto más polar que fue el azul de
metileno presente el fenómeno de adsorción pegándose así a la silica en gel y de esta manera se
desplazó con menos velocidad y por lo tanto una menor distancia. (Jiménez , 2017). Estas
distancias que se mencionan se encuentran en la ​tabla Nº1​,para calcular la distancia recorrida del
azul de metileno se midió desde la línea de muestra, y se obtuvo un resultado de 1,1 cm, por otro
lado el solvente logra arrasar con el anaranjado de metilo con mayor facilidad, presentándose así
el fenómeno de desadsorción, esto se debe a que el anaranjado de metilo presenta mayor
afinidad con el solvente, y presenta menos polaridad que el azul de metileno haciéndolo recorrer
una distancia mayor la cual se midió de igual manera desde la línea de muestra, obteniéndose un
resultado de 5,4 cm, una vez hallada la distancia recorrida de ambos compuestos se halló la
relación de frente(R​f),​para esto también se midió la distancia recorrida del solvente desde la línea
de muestra al igual que las demás obteniéndose 5,9 cm. La relación de frente del anaranjado de
metilo fue 0,915 y la del azul de metileno 0,186,esto nos indica que a un mayor valor de frente el
compuesto presenta menor polaridad. También se colocó una muestra sola de anaranjado de
metilo y se obtuvo el mismo resultado de relación de frente que uno de los componentes de la
muestra, concluyendo así que ambos eran el mismo compuesto.

En la ​tabla Nº3​ se muestra los resultados obtenidos en la cromatografía por columna, el primer
componente que cayó al agregar la fase móvil que fue etanol, fue el naranja de metilo el cual
presenta mayor afinidad por este solvente que por la silica de gel, de tal manera que cayó de una
manera rápida, para poder sacar el segundo colorante que contenía la muestra se agregó agua
acidulada, el colorante(azul de metileno) demoró más en caer, pues presentaba menos afinidad
con el solvente utilizado, dificultando así que se desprende con mayor dificultad de la silica en gel.
( UNAM ,2007)

7. CONCLUSIONES
- En la cromatografía en capa fina, la fase móvil fue nuestro disolvente (eluyente) y la fase
estacionaria fue un papel recubierto por sílica gel y en la parte posterior por una tira de aluminio
para el soporte, luego se delimitó una línea base. Luego se añadió pequeños puntos de la muestra
a analizar y el analito.La placa luego de dejarse secar, al comparar la muestra (azul de metileno y
naranja de metilo) con el analito (naranja de metilo), se determinó los componentes de la muestra,
el colorante presente era naranja de metilo ya que la distancia recorrida por éste desde la línea de
origen resultó ser igual a la del analito. En la muestra el azul de metileno alcanzó una menor
distancia recorrida ya que predominó la adsorción (adhesión a la superficie) impidiendo su
desplazamiento.
Para la cromatografía en capa fina, el disolvente elegido fue una mezcla entre propanol, acetona
y agua, cuya medida fue de 0,5 (inferior a la línea de siembra de la cámara cromatográfica) para
facilitar la descomposición de la mezcla por el ascenso de este por capilaridad. El proceso se
cerró con ayuda de una tapa para que el solvente ascienda de manera uniforme. El fenómeno
físico que predominó fue la desorción.
- En la cromatografía en columna, la fase estacionaria fue la sílica de gel diluida en etanol y la
muestra estuvo conformada por naranja de metilo y azul de metileno. Para la preparación de la
columna se tomó un pedazo de algodón hasta el fondo de la columna. Luego se añadió la sílica y
10 gotas de la muestra problema en la columna. Como parte de la fase móvil se agregó el primer
eluyente “etanol” donde se obtuvo como primer colorante extraído al anaranjado de metilo ya que
fue afín a este diluyente. Luego se agregó el segundo solvente “el agua acidulada” ya que el
etanol demoró en extraer al azul de metileno, la extracción de este tomó mayor tiempo.
 8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

- Adriana Corzo. (2019) Técnicas análisis en química orgánica cromatografía .Universidad

Nacional de Santiago del Estero-U.N.S.E.Cátedra​ de química organica y
biologica​,1-2.[Fecha de Consulta 22 de Febrero de 2021]. ISBN:
978-987-1676-86-6.Disponible en​ ​: ​https://fcf.unse.edu.-Cromatografia-CORZO.pdf
- Coskun O. (2016). Técnicas de separación: Cromatografía. ​Clínicas del norte de Estambul
, ​3​ (2), 156–160. ​https://doi.org/10.14744/nci.2016.32757
- Elución eficiente de proteínas funcionales en cromatografía de afinidad.
Firer MAMétodos de J Biochem Biophys. 30 de octubre de 2001; 49 (1-3): 433-42. [​ 4 ]
- Facultad de Química Química Analítica Instrumental II, UNAM. (2007, diciembre). ​Técnicas
cromatográficas.​ Recuperado de
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.pdf
- Karlsson E, Ryden L, Brewer J Protein purification. Principios, métodos de alta resolución y
aplicaciones. ​Cromatografía de intercambio de iones. ​2ª ed. Nueva York: Wiley; 1998.​[ 1 ]
- Jiménez , C. (26 de junio de 2017). ​Cromatografía.​ Obtenido de SlideShare:
https://es.slideshare.net/CarloosxDeduardo/cromatografa-77251113#:~:text=fen%C3%B3m
eno%20de%20adsorci%C3%B3n%20Adsorci%C3%B3n%3A%20La,superficie%20interfaci
al%20entre%20dos%20fases.
- Mayolo-Deloisa, K., y Martínez, LM, y Rito-Palomares, M. (2012). TÉCNICAS
CROMATOGRÁFICAS Y SU APLICACIÓN A ESTUDIOS DE CAMBIOS
CONFORMACIONALES, ESTABILIDAD Y REPLEGAMIENTO DE PROTEÍNAS. ​Revista
Mexicana de Ingeniería Química, 11​ (3), 415-429. [Fecha de Consulta 22 de Febrero de
2021]. ISSN: 1665-2738. Disponible en:
https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=620/62026894006
- Paredes D, Loughran ST. ​Cromatografía de proteínas: métodos y protocolos, métodos en
biología molecular. 2 ​ 011; 681 ​[ 2 ]
- Placas de TLC como una plataforma conveniente para reacciones sin solventes.
Stoddard JM, Nguyen L, Mata-Chávez H, Nguyen K
Chem Commun (Camb). 28 de marzo de 2007; (12): 1240-1. [​ 5 ]
- Wilchek M, Chaiken I. Una descripción general de la cromatografía de afinidad en la
cromatografía de afinidad: métodos y protocolos. ​Prensa Humana. ​2000: 1–6. ​[ 3 ]
- Universidad Nacional de México, UNAM (2007). Técnicas Cromatográficas. ​Introducción a
los métodos de separación​,2-3. [Fecha de Consulta 22 de febrero de 2021]. Disponible en:
http://depa.fquim.unam. M.Cromatogrficos_6700.pdf

CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es el concepto de Rf? y para qué nos sirve determinarlo?

El Rf es un mecanismo por el cual podemos medir el desplazamiento que tiene cierta sustancia
durante la fase móvil de la cromatografía en capa fina. El Rf al medir el desplazamiento durante la
fase móvil nos permite reconocer de qué elemento se trata ya que estos Rf son referenciales de
cada sustancia,ya que nos determina la movilidad de cada sustancia con respecto a la distancia
recorrida del solvente empleado durante la aplicación de cromatografía en capa fina.
 2. ¿Cuáles son las características de los métodos cromatográficos evaluados?

Cromatografía en columna: Las moléculas van a viajar a través de la columna a diferentes, este
movimiento va a depender de las propiedades químicas de este y su afinidad a la fase
estacionaria. Cada componente será extraído en diferentes tiempos dependiendo de la polaridad
de la muestra con el solvente.

Cromatografía en capa fina: En la fase estacionaria, el sólido es muy poroso para la adsorción y
polar. En la fase móvil, los componentes que se desplazan con mayor velocidad serán los menos
polares, el eluyente al ser polar va a retener a los componentes afines a él.

3. ¿En qué otro tipo de muestras se puede aplicar los métodos estudiados?

Para la cromatografía en capa fina, se puede aplicar teniendo como muestras a la celulosa,
almidón, azúcares, carbón activo. Para la cromatografía en columna se aplica para la limpieza de
preparados.

4. Desarrolle un cuadro comparativo entre las diferencias de la cromatografía en capa fina,

cromatografía de papel y cromatografía en columna?

CROMATOGRAFÍA EN CROMATOGRAFÍA DE CROMATOGRAFÍA EN

CAPA FINA PAPEL COLUMNA

Es utilizada en el análisis Es una técnica para análisis No se obtiene de manera

químico de materias cualitativos que no quieres cuantitativa la sustancia, su
orgánicas complejas, de equipamientos. utilidad es para la
separación e identificación. identificación de sus
componentes.

Fase estacionaria: Fase estacionaria: tira de Fase estacionaria:

 placa papel filtro sílica gel
Fase móvil: solvente Fase móvil: disolvente Fase móvil: eluyente
(etanol)

El disolvente asciende por El disolvente empleado Los componentes extraídos

capilaridad separando los como fase móvil se hace eluidos con etanol van a
componentes de la asciende por capilaridad descender por la columna
muestra. de cromatografía.

5. Interprete los valores de Rf 0.05; 0.60 y 0.98.

Teniendo en cuenta un recorrido por el eluyente de 10 cm y los datos 0,05 a una sustancia A, 0,60
a una sustancia B y el 0,98 a una sustancia C. Podemos decir que la sustancia A, B y C recorren
0.5 cm ,6 cm y 9,8 cm respectivamente, con estos datos podemos decir que la sustancia C tiene
una mayor afinidad con el eluyente por ello se desplazó casi junto a él , y tiene una repulsión a el
absorbente ya que no se vio significativamente adherido a este, por ello podemos decir que se
trata de una sustancia de carácter apolar, en el caso de la sustancia B se puede dar una especie
de punto medio que tira más para el carácter apolar de cierta manera, en el caso de la sustancia A
se ve una marcada afinidad al adsorbente por ello no logra desplazarse mucho, decimos que la
sustancia A tiene un carácter polar por su no afinidad a el eluyente ya que se deduce una mayor
absorción que una desorción.

6. ¿Qué entiende por cromatografía? y ¿Qué utilidad tiene la cromatografía en capa fina
(ccf)?

La cromatografía es un método empleado para la determinación de mezclas complejas, empleado

en diversos campos de la ciencia. Agrupa diversas técnicas basadas en el principio de retención
selectiva, que tiene como objetivo separar los diferentes componentes de una mezcla, y así poder
determinar, identificar, reconocer y cuantificar dichos componentes.

La cromatografía en capa fina es utilizada en el análisis químico de materias orgánicas complejas,

separación e identificación de compuestos o mezclas, una ventaja es que el tiempo empleado en
la separación es menor y con resultados óptimos.

7. Mencione y explique brevemente 3 clases de cromatografía.

-Cromatografía de líquidos de alta resolución: Es una técnica analítica de separación más usada.
Es de fácil adaptación a determinaciones cuantitativas por su exactitud, ideal para separar
muestras no volátiles. Algunos ejemplos son: proteínas, esteroides, fármacos antibióticos,
carbohidratos, esteroides entre otras sustancias orgánicas. La fase móvil es un líquido y la fase
estacionaria es una columna que puede ser de acero inoxidable.

-Cromatografía de exclusión de iones: Se obtienen separaciones dependiendo de factores como el

tamaño de partícula de la resina, forma iónica e incluso distribución de isómeros. También es útil
para separar especies que eluirían al mismo tiempo. Las separaciones se llevan a cabo en resinas
de intercambio con base en poliestireno de alta capacidad como eluyentes, ácidos minerales
diluidos. En la industria de los alimentos y bebidas como la elaboración de vino, cervezas, jugo de
frutas, donde están presentes los ácidos del ciclo de Krebs es útil el uso de una columna de
exclusión aniónica. Se usa el agua como eluyente a temperatura de 90°C.

- Cromatografía de permeación en gel: Consiste en una columna cromatográfica empacada de tal

manera que las partículas de dicho empacamiento tienen diferentes tamaños de poros o de redes
de poros con el fin de que las moléculas de soluto sean retenidas o excluidas basándose en su
forma y tamaño y no en el peso molecular. Por ende las moléculas de mayor tamaño no caben
dentro de los poros y son arrastrados alrededor de la fase estacionaria, por lo que son excluidas y
eluyen en el volumen de “cama de vacío” de la fase móvil. Por el contrario, las partículas de menor
tamaño eluyen hasta el final porque tiene más espacio de columna que recorrer debido a un
fenómeno de difusión hacia los poros que tienen accesibles. Las moléculas de tamaños
intermedios tardan diferentes tiempos en eluir, debido a la cantidad de poros por los que puedan
pasar.

Fuente: ​http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.pdf

8. ¿Qué es un eluyente y revelador en una ccf?

El eluyente forma parte de la fase móvil, está conformado por un solvente o una mezcla de
solventes que tiene como finalidad extraer los componentes a través de la muestra.

El revelador en la cromatografía en capa fina, es empleado en métodos químicos. Consiste en

hacer reaccionar el revelador con los componentes separados, para ello se aplica un nebulizado
sobre la placa con los reactivos reveladores (como lo indica la figura). Generalmente se utiliza
como reactivo revelador: yodo, ya que forma complejos coloreados, con los componentes
orgánicos (de tonos amarillo-marrón). Otro reactivo revelador es el ácido sulfúrico, que reacciona
con los componentes orgánicos, produciendo manchas negras. El permanganato potásico es otro
otro ejemplo de revelador, produce manchas amarillas. El tamaño de las manchas resultantes es
independiente de de la cantidad del componente a separar.
 ​ elevador de analitos. Fuente:
Figura .R

http://sgpwe.izt.uam.mx/files/users/uami/jaislocr/QUIMICA_ANALTICA_AVANZADA/CAPA_FINA.p
df

9. ¿Qué importancia tiene la polaridad en una ccf?

El gel de sílice y la tira de aluminio (alúmina), son los absorbentes utilizados en la fase
estacionaria, ambas poseen un carácter polar. La alúmina va a retener con mayor fuerza a los
compuestos, reteniendo a los que son afines a él y dejando pasar a los compuestos apolares, es
decir, se usa para separar a los compuestos apolares. En cambio la gel de sílice va a separar las
sustancias polares. Esto es posible gracias al proceso de adsorción, producido por las
interacciones intermoleculares de tipo dipolo-dipolo entre el soluto y el adsorbente, este último no
debe reaccionar con las sustancias a analizar, ya que puede descomponerlas.