Bioquímica Aplicada 2023-II. UNMSM – Fac.

Odontología
Sofia Espinoza E - César A. Bonilla F- Jorge Colchado.
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PRACTICA 1
DETERMINACION DE PERFIL LIPÍDICO

I.- ASPECTOS GENERALES:

Los triglicéridos son ésteres de ácidos grasos y glicerol.
Muchos tejidos de nuestro organismo pueden
convertir los ácidos grasos en triacilgliceroles,
mediante una secuencia común de reacciones,
pero el hígado y tejido adiposo realizan este
proceso en mayor cantidad.
El tejido adiposo está especialmente diseñado
para la síntesis, almacenamiento e hidrólisis
de triglicéridos. Siendo este el mecanismo
principal que tiene el cuerpo para el
almacenamiento de energía a largo plazo,
también se puede almacenar en el músculo esquelético y cardíaco, sólo para consumo local.
La síntesis de triacilgliceroles en el hígado se utiliza principalmente para la producción de lipoproteínas
sanguíneas, siendo los ácidos grasos provistos de la dieta o la biosíntesis local, mientras que el Acetil
CoA para la síntesis de estos proviene principalmente del catabolismo de la glucosa.
Los triglicéridos para la producción de energía se hidrolizan por una serie de lipasas sensibles a
hormonas celulares y forman ácidos grasos libres y glicerol, siendo liberados a la sangre donde se une a
la albúmina sérica y son transportados a los tejidos y el glicerol vuelve al hígado.

LIPOPROTEÍNAS. Son compuestos complejos formados por diversos tipos de lípidos y proteínas
(apoproteínas), son sintetizados por el hígado, son componentes normales del plasma y tejidos. Se han
determinado 4 categorías de lipoproteínas del plasma humano considerados funcionalmente importantes
en el diagnóstico clínico, estos se han clasificado según su tamaño y densidad como lipoproteínas de
muy baja densidad (VLDL), lipoproteínas de baja densidad (LDL) y lipoproteínas de alta densidad (HDL),
también se clasifican según su movilidad electroforética en:

Pre – beta β– lipoproteínas – lipoproteínas

VLDL LDL HDL

Tamaño de Densidad Flotación

Lipoproteína Lípido principal
Partícula (nM) (límites) (sf)
Quilomicrón 100 – 1.000 0,95 400 Triglicéridos (intestino)
VLDL 30 – 75 0,95 – 1,006 12 – 400 Triglicéridos (hígado)
LDL 20 – 25 1,019 – 1,063 0 – 12 Esteres del colesterol
HDL 10 - 15 1,063 – 1,210 0–2 Colesterol

Las variaciones en los niveles de lipoproteínas plasmáticas del humano han despertado creciente interés
en los últimos años. Mediante estudios electroforéticos se ha hallado que varían ampliamente en diversas
condiciones fisiológicas y patológicas, por ejemplo, el nivel de HDL tiende a aumentar con el trote y la
carrera, con la edad, con el uso de estrógenos y alcohol en cantidades moderadas.
En cambio, los niveles de HDL disminuyen por el uso de anticonceptivos tipo progesterona, andrógenos,
tabaquismo, obesidad y carbohidratos en la dieta (sacarosa o glucosa).
Algunas propiedades físicas de las principales categorías de lipoproteínas plasmáticas humanas son:
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COLESTEROL. Compuesto importante del tipo de los esteroles, es un mono alcohol que cristaliza en
placas; se encuentra en la parte insaponificable de todas las grasas y aceites animales, en la bilis,
sangre, tejido cerebral, leche, yema de huevo, vainas mielínicas de las fibras nerviosas, hígado, riñones y
glándulas suprarrenales.
El colesterol es precursor de ácidos biliares de hormonas esteroides y vitamina D, el colesterol no es
esencial en la dieta ya que el organismo lo sintetiza. También se encuentra formando ateromas de las
arterias, en diversos quistes y en tejido carcinomatoso.
Es uno de los esteroles más abundantes del organismo es un componente estructural de las membranas
de las células animales, es el precursor de las sales biliares y de las hormonas esteroideas. La síntesis
del colesterol se realiza en todas las células, se forma a partir del acetil CoA.
El colesterol no es esencial en la dieta ya que el organismo lo sintetiza. También se encuentran formando
ateromas en las arterias, en diversos quistes y en tejido carcinomatoso.
TIPOS: Colesterol Total, Colesterol Libre, Colesterol esterificado o ésteres de colesterol
El 30% del colesterol circulante se encuentra como colesterol libre y aproximadamente el 70% del
colesterol de las lipoproteínas están esterificadas.

REACCION DE ESTERIFICACION DEL COLESTEROL LIBRE. En la reacción de esterificación participa

el colesterol libre, Fosfatidilcolina (Lecitina); esta reacción está catalizada por una enzima: la Lecitina
Colesterol Aciltransferasa (L.C.A.T.). Para esta reacción se requiere de Apoproteína A1 para formar
Colesterol Esterificado más la Lisofosfatidilcolina (Lisolecitina).
L.C.A.T
Colesterol libre + LECITINA COLEST. ESTRF. + LISOLECITINA
Apo A1
Colesterolemia. - Tasa de Colesterol en la sangre; se le denomina también Colesteremia, Colesterinemia,
se refieren al colesterol Total.
Colesterinuria. - Presencia de Colesterol en la orina.
Colesterodermia. - Coloración amarillenta de la piel, aparece en casos de xantoma tuberosos múltiples.

IMPORTANCIA CLÍNICA DE LOS LÍPIDOS SÉRICOS. Los triglicéridos son los principales lípidos que se
transportan en la sangre. Diariamente entran y salen del plasma entre 70 y 150 g. de triglicéridos en
comparación con 1 ó 2 gramos de colesterol.
Junto con otras sustancias: Lipoproteínas, colesterol y triglicéridos, constituyen hoy en día exámenes
auxiliares de laboratorio para el establecimiento del diagnóstico de las enfermedades cardiovasculares.
Como la Odontoestomatología es parte de la medicina, los alumnos están en la necesidad de conocer los
valores considerados dentro de los límites normales o elevados, con el fin de colaborar con el médico
especialista de las enfermedades cardiovasculares y otras, y convertirse así en elementos dinámicos
dentro del grupo humano en la solución de problemas cardíacos y otros.
Así tenemos los estados de:

HIPERTRIGLICERIDEMIA. El aumento de grasa neutra en el plasma puede ser primaria o secundaria, lo

que constituye un factor de riesgo en las enfermedades vasculares, la secundaria aparece en la
obesidad, en la diabetes sacarina, en el síndrome nefrótico, en las nefropatías crónicas con insuficiencia
renal, en el alcoholismo que constituye una causa muy frecuente y en las pancreatitis agudas y crónicas.

II.-OBJETIVOS DE LA PRACTICA:
1. Determinación de triglicéridos en suero
2. Determinación de Colesterol total, LDL y HDL – Colesterol en suero.
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3. Discusión e interpretación de resultados obtenidos.

III.-MATERIALES Y METODO:
-Tubos de ensayo - Micropipeta - Pipetas - Termómetro - Espectrofotómetro
-Baño maría - Suero - Kit para triglicéridos - Kit para colesterol y HDL-colesterol

DETERMINACIÓN DE TRIGLICERIDOS:

FUNDAMENTO DEL METODO:

Lipoprotein lipasa
Treigliceridos Glicerol + Acidos grasos
(suero) Glicerolquinasa
Glicerol + ATP Glicerol – 1 – P + ADP
GPO
Glicerol – 1 fosfato + O2 H2O2 + dehidroxiacetonafosfato

H2O2 + 4-AF + clorofenol POD Quinonimina roja

(505 nm)
PROCEDIMIENTO:
Preparar los siguientes tubos:
Reactivo / Tubo Blco Std M
Standard -- 10 uL --
Muestra (suero) -- -- 10 uL
Reactivo de trabajo TG 1 mL 1 mL 1 mL
Mezclar e incubar por 5 minutos. Leer a 505 nm., llevando a cero con el blanco de reactivo.

DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL:

FUNDAMENTO DEL METODO:

Colesterol Esterasa
Esteres de Colesterol Colesterol + Ácidos Grasos
(Suero)
Colesterol Oxidasa
Colesterol + O2 Colesten – 3 – ONA + H2O2
(Suero)
Peroxidasa
2 H2O2 + 4-NH-Antipirina-P-HBS Quinoneimina + 2 H2O
La absorbancia del colorante formado es directamente proporcional a la concentración del colesterol.

Reactivo / Tubo Blco Std. M

Standard -- -- 10 uL
Muestra -- 10 uL --
Reactivo de Trabajo Colesterol 1 mL 1 mL 1 mL

Mezclar e incubar a 37ºC por 15 minutos. Leer la absorbancia a 550 nm. Contra el blanco de reactivo.

DETERMINACIÓN DE HDL-COLESTEROL:
FUNDAMENTO DEL METODO. Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) se separan precipitando
selectivamente las lipoproteínas de baja y muy baja densidad (LDL y VLDL) mediante el agregado de
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ácido fosfotúngstico en presencia de iones magnesio. Las HDL son separadas por centrifugación
quedando en el sobrenadante el cual es empleado para determinar el colesterol ligado a las mismas
mediante el método para colesterol total.
PROCEDIMIENTO. Precipitación: Preparar un tubo por cada muestra, como se indica a continuación
Reactivos MUESTRA
Suero 0 .5 mL
Reactivo precipitante 50 uL

Mezclar bien y refrigerar por 10 minutos.

Luego centrifugar a 5, 000 rpm por 5 minutos y separar el sobrenadante.

Preparar tres tubos y agregar a ellos lo siguiente:

Reactivo / Tubo Blco Std M
Standard -- 20uL --
Sobrenadante -- -- 50uL
Reactivo de trabajo Colesterol 2 mL 2 mL 2 mL
Mezclar e incubar por 10 minutos a 37º C, leer la absorbancia a 505 nm contra el blanco de reactivo.

V.-CALCULO DE RESULTADOS:
TRIGLICÉRIDOS
TG g/L = Abs. Muestra x f factor = [Std. 2 g / L]
Std (Abs)
COLESTEROL TOTAL
Colesterol (g/L) = Abs. M x f donde f = [Std. 2.00 g/L]
Std (Abs)
HDL-COLESTEROL
HDL – COLESTEROL (mg/dL) = Abs. M x 45,7
Std (Abs)
LDL-COLESTEROL
LDL-Colesterol (mg/dL) = Colesterol total - (TG/5 + HDL- colesterol)

VI.- VALORES NORMALES: Triglicéridos: 35 – 165 mg/dL

Colesterol total: -Hombres de 35 a 62 años de 172 a 248 mg/dL

-Mujeres de 30 a 60 años de 175 a 240 mg/dL

HDL-Colesterol: -Hombres 30-74mg/dL -Mujeres 30-85 mg/dL

LDL-Colesterol: -Bajo riesgo: Hasta 140 mg/dL
-Sospechoso: 140 – 190 mg/dL
-Alto riesgo 190 a más mg/dL