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MÓDULO:
“TÉCNICAS EN MICROBIOLOGÍA CLÍNICA"

Expositor:
Mblgo. Arturo Alvarado Aldana; Mg
UROCULTIVO

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 UROCULTIVO

El urocultivo nos ayuda a diagnosticar una

posible Infección del Tracto Urinario. Junto
con el antibiograma, se puede comprobar
la susceptibilidad frente a antibióticos.

- Uretritis
- Cistitis
- Pielonefritis
 UROCULTIVO
MUESTRA ORINA

Ex. Directo: Coloración Gram: BGN

AISLAMIENTO Agar Mc Conkey 24-48 hrs.

Agar Sangre

> 100,000 UFC/mL

IDENTIFICACIÓN

Cit. Simmons, TSI, LIA, SIM,

otros.

PRUEBA DE
SUSCEPTIBILIDAD
ANTIBIOGRAMA: Mét. Kirby Bauer
 PARÁMETROS A EVALUAR
ASPECTO MACROSCÓPICO ASPECTO MICROSCÓPICO
• Proteínas
• Color • Leucocitos
• Glucosa
• Olor • Hematíes
• Cetonas
• Aspecto • Cilindros
• Nitritos
• Densidad • Cristales
• Esterasa Leucocitaria
• pH • Células
• Bilirrubina/Urobilinógeno
• Bacterias
• Sangre
• Hongos

FÍSICO QUÍMICA MICROSCÓPICA

“Pueden ser alteradas por “Pueden “Pueden

medicamentos y alimentos” indicar indicar
patologías patologías
importantes” importantes”
MEDIO DE AISLAMIENTO DE
SELECTIVIDAD MEDIA

AGAR MAC CONKEY

Selectivo, diferencial
INH: cristal violeta, sales biliares
IND pH: Rojo neutro CHO: Lactosa Peptonas
AENOR CHILE - Cristiàn Vargas M 8
 Recuento de colonias
• Asa de 1 ul: Se contabilizó 155 UFC
– Multiplicar por 1000 y expresar en UFC/ML

• Asa de 10 ul: Se contabilizó 455 UFC

– Multiplicar por 100 y expresar en UFC/ml

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Identificación bioquímica

AENOR CHILE - Cristiàn Vargas M 10

TSI : TRIPLE SUGAR IRON (Agar hierro 3
azúcares
Inoculación por puntura (asa en punta, hilo)
A partir de una colonia aislada en SS Agar
o Mc
Conkey
Composici
Pico de Flauta
ón:
Slant
Glucosa 0.1%
Z. AEROBICA
Lactosa 1.0 %
Sacarosa 1.0 %

Rojo de Fenol (indicador pH)

Fondo Peptonas
Bottom
Z. ANAERÓBICA Tiosulfato de sodio
Citrato Férrico
 K/A-,+++
Proteus
K/K-,-
No fermentador

K/A-,- Shigella

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LIA: LISIN IRON AGAR (Agar Lisina Hierro)

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AGAR CITRATO DE SIMMONS

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MEDIO
SIM
(H2S,
Indol,
Motilidad
)
PRUEBA DE INDOL: KOVAC´S

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 Movilidad

Producción de acido sulfhídrico

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COPROCULTIVO

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 COPROCULTIVO (Aislamiento de Salmonella y/o Shigella)

MUESTRAS: HECES

Enriquecimiento Selectivo
Pruebas de susceptibilidad Caldo selenito, Caldo tetrationato (6 – 12hrs.)
Alternativa: Pruebas
en Analizadores
microbiológicos
automatizados
(MicroScan, Vitek 2
Compact, etc.)
Bioquímica presuntiva Aislamiento selectivo diferencial
(Medios diferenciales: TSI, LIA, SS Agar
Citrato de Simons, SIM, etc. (Medios alternativos: DC, XLD, Agar entérico
de Hektoen, A. Mc Conkey, etc)
 Debe ser recolectada durante el periodo
agudo de la enfermedad, antes de iniciar
cualquier tratamiento antimicrobiano.
Debe ser representativa (Tamaño de una
nuez) 5-10 g si tienen consistencia
pastosa, 5 a 10 ml de heces si son
Obtenció líquidas.
enEnrecipiente limpio, que
adultos, asegurar cuidando que la
la persona
n De muestra no se mezcle con orina.
defeque
El N° de muestras pueden ser 2 o3
La Colocar la(s) muestra(s) en un

Muestra recipiente de boca ancha y tapa rosca

evitar que se derrame o mezcle con
etapa pre- otras muestras

analítica Una vez echosiesto

laboratorio
posible
llevar
esto no lofuera
antes posible,
al 4°C hasta el momento del
, refrigerar
a análisis
 Procedimiento para la tomade heces de casos sospechosos de
diarreaen menores de un año

Obtenció
n De
La
Muestra
etapa pre-
analítica
 ♦ leucocitos fecales

♦ Color

macroscópico

microscópico
♦ olor
Exame ♦ Consistenc ♦ Hematíes
n ia ♦Tinción
directo ♦ pH azul de
Etapa ♦ Moco metileno
analítica ♦ Sangre ♦Gram
♦ Pus ♦Azúcares
♦ Alimentos reductores
sin degerir ♦Sangre
ENRIQUECIMIENTO
SELECTIVO PREVIO
EN CALDO
SELENITO POR 6 A
12 HORAS, LUEGO
SE SIEMBRA EN SS
AGAR
MEDIO DE AILAMIENTO DE GRAN
SELECTIVIDAD
SS AGAR

Selectivo, diferencial
INH: verde brillante, sales biliares, citrato de sodio
IND pH: Rojo neutro CHO: Lactosa Peptonas
Tiosulfato de sodio, citrato férrico
 Lac (-)
H2S (+)

FeS
TioSulfato de sodio

Citrato Ferrico
HEMOCULTIVO

AENOR CHILE - Cristiàn Vargas M 28

 HEMOCULTIVO
SANGRE
MUESTRA
Incubar a 35°C
Evaluar enturbiamiento. Gram
Inocular (sembrar)

Agar Sangre-A.chocolate
AISLAMIENTO
A. Mc Conkey 24-48-72 hrs…7d/14d

IDENTIFICACIÓN
Alternativa:
Pruebas en
Analizadores TSI, LIA, otros.
microbiológicos
automatizados
(MicroScan, Vitek
2 Compact, etc.) PRUEBA DE
SUSCEPTIBILIDAD ANTIBIOGRAMA
 HEMOCULTIVO
Es un cultivo microbiológico de la sangre.
Es un método diagnóstico usado para detectar
infecciones en el torrente sanguíneo.
Toma de Muestra para Hemocultivo

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32
Procedimiento Microbiológico Hemocultivo Automatizado

Incubar la botella inoculada con sangre a 35°C

Procesar las botellas que el aparato
automatiz
ado detecte como positivas
Sembrar dos gotas de sangre en cada uno de
los agares correspondientes:
agar sangre
agar chocolate
agar MacCokey
Realizar una tinción de Gram

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Cuántos Hemocultivos por paciente?
2 hemocultivos tomados de lugares
diferentes o con 15 minutos de
diferencia

Ideal: 3, el tercero una hora o más

después de los primeros
Cuánta sangre para los
hemocultivos?
Hemocultivo Automatizado
Botella BACTEC
◦ Niños 0.5-3 ml
◦ Adultos 3-10 ml
Cuánta sangre para los hemocultivos?
Hemocultivo Automatizado
Botella BACTEC
◦ Niños 0.5-3 ml
◦ Adultos 3-10 ml
INFECCIONES por diplcocos gram
negativos (ITS)

Arturo Alvarado Aldana

 Infecciones gonocócicas
Gonorrea

El agente etiológico es Neisseria

gonorrhoeae, dipolococo Gram
negativo de ubicación intracelular.
Infección bacteriana de transmisión
sexual. Ataca epitelio cilíndrico y
de transición.
Período de incubación de 02 – 07
días.

24/08/2022
 Infecciones gonocócicas
 Hombres Secreción purulenta de uretra anterior, disuria.
 Puede haber estado de portador crónico.
 Mujer Uretritis o cervicitis leves, a menudo pasan inadvertidas.
 En casi 20 % de mujeres la invasión puede ser uterina originando
endometritis, salpingitis, riesgo de infertilidad y otros.
 Homosexuales y mujeres Puede ocurrir infecciones faríngeas y
anorrectales (proctitis).
 Infección rectal puede ocasionar prurito, tenesmo y secreción.
 Neonatos: Conjuntivitis, puede ocasionar ceguera si el tto. no se realiza
rápido.

24/08/2022
 Infecciones gonocócicas
• Dx. Laboratorio:
– Tomar muestra de secreción uretral (varón) y /o
secreción vaginal (mujer)

– Cultivo de secreciones en medios específicos (Medio

de Thayer Martin modificado).

– Coloración Gram de secreciones, buscando diplococos

Gram negativos de ubicación intracelular.

24/08/2022
24/08/2022
24/08/2022
 Vaginosis Bacteriana (VB)
• Etiología
– Gardnerella vaginalis I Prevotella
– Mobiluncus
– Bacteroides
– Peptococcus
– Otros microorganismos relacionados:
• Neisseria gonohrroeae, Candida albicans (levadura), Trichomonas vaginalis (protozoario),
Chlamydia trchomatis
• Características
– Secreciones escasas a abundantes, de aspecto grumoso, olor a pescado (en
algunos casos), blanquecinas, verdosas, escozor
• Kkkk
 Diagnóstico de VB
Propuesto originalmente por Amsel y col.

La condición es confirmada por la presencia

de al menos tres de los cuatro criterios clínicos siguientes:
• pH vaginal por encima de 4,5,
• Producción de un olor a ‘pescado’ al adicionar KOH al 10% a una
muestra de secreción vaginal (prueba de aminas positiva).
• Presencia de células ‘clave’.
• Incremento en el flujo vaginal el cual es de tipo lechoso
homogéneo y adherente a la vagina.
 Diagnóstico de VB

Nugent y col asignó a cada morfotipo un puntaje.

Si la suma de los puntajes era:

• 7 o más, esto era igual a VB;
• 4 a 6 fue denominado ‘intermedio’ y
• 0 a 3, normal.

• Un análisis detallado ha demostrado que este método es sensible para el

diagnóstico de la VB; pero, con frecuencia se ha dicho que es un poco complejo y
consumidor de tiempo para la rutina clásica.
Lactobacilos Bacilos Gram positivos
Gardnerella/Prevotella Cocobacilos Gram negativos, Gram var.
Mobiluncus Bacilos Gram negativos, Gram var. curvos
 Secreción Vaginal

Aspecto de la muestra:

Observación en fresco:

Con SSF: Búsqueda de Trichomonas vaginalis, leucocitos, otros

Observación con KOH q0%:

Búsqueda de estructuras fúngicas: Células levaduriformes, pseudohifas.

Reacción de aminas:

Investigación de Gardnerella vaginalis. Olor a pescado

Coloración Gram:

Observar y reportar PMN x campo

Buscar células guía

Buscar lactobacillus, Gardnella, Mobiluncus, ….

"Puntaje de Nugent"

Resultado: Vaginosis bacteriana

Flora intermedia
Flora normal
Toma de muestra
 Observación en fresco de Trichomonas vaginalis

Trichomonas vaginalis
24/08/2022 22:25 49
Observación de Levaduras
Muestra con KOH 10%
 Reacción de aminas

• Agregar a la muestra gotas de KOH 10%, mezclar y pericibir el olor a

pescado……Positivo
Observación de Sec. Vaginal: Col. Gram
 Observación de
Secreciones vaginales
Col. Gram
Mobiluncus
 Secreción Vaginal

Aspecto de la muestra:

Muestra de color blanquecina, de aspecto grumoso.

Observación en fresco:

Con SSF: No se observan formas parasitarias.

Observación con KOH q0%:

Se observan regular cantidad de células levaduriformes.

Reacción de aminas:

Positivo.

Coloración Gram:

Se observan PMN 15 - 20 x c

"Puntaje de Nugent"

Resultado: Vaginosis bacteriana

MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCIÓN

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