Identificación de una bacteria

desconocida
Phoenix
 Planificación del trabajo.
1. Investigación bibliográfica.

2. Identificación de la muestra: origen, tipo,

información.

3. Método de muestreo estadísticamente

significativo.
4. Condiciones de muestreo.

5. Selección de una clave de identificación

apropiada y recursos al alcance.
6. Seguir ruta pre-
establecida de cultivos
según clave bibliográfica.
NO IMPROVISAR.
Clave de identificación tradicional: ejemplo

Cocos Gram positivos

 Clave de identificación
Bacilos Gram negativos

100x
 Clave a seguir: ejemplo
Bacilo Gram positivo:
Ejecución del trabajo

Etapas:
1. Toma de la muestra:
• Recipientes estériles,
• Tiempos limitados hasta su análisis en el laboratorio
• Bajo condiciones controladas
• Almacenamiento y Conservación
• Marcación y Codificación
• Manipulación y Transporte
• Desviaciones y rechazo de muestras
2. Siembra en medios de cultivo de
enriquecimiento:
• para obtener suficiente número de las
bacterias buscadas
• y así contar con la seguridad de encontrar o
no lo que se busca.
3. Aislamiento de colonias: separación de la
mezcla.

Colonia aislada
Medio diferencial

MacConkey
E. coli: lactosa positiva
S. enterica: lactosa negativa
4. Obtención de cultivos puros. Preparación de
cultivos de trabajo y de reserva de un solo tipo
bacteriano a partir de una colonia individual.
5. Caracterización morfológica y de tinción: forma,
agrupación, tipo según tinciones diferenciales.
Gram

100X

levaduras fluorescencia
endosporas
7. Determinación de características de cultivo:
descripción de la apariencia macroscópica del
crecimiento bacteriano sobre los medios de cultivo:
forma de colonias, color, elevación, entre otras.
.
8. Determinación de
características fisiológicas
dependiente de cultivo:
reacciones enzimáticas de las
bacterias:
• bio-oxidativas,
fermentativas,
• hidrolíticas y
• exclusivas de cada grupo
bacteriano.

“Bioquímica de bacterias”

Clave de identificación
 Medios selectivos y diferenciales

Sistemas miniaturizados API y similares

9. Identificación serológica: mediante reacciones antígeno
– anticuerpo.

ELISA
10.
Identificación
molecular:
análisis de DNA
o RNA
específicas para
cada tipo
bacteriano.
PCR 16 r
Árbol
filogenético
 PRECAUCIÓN!
Advertencia!

Problema más importante: CONTAMINACIÓN.

Un contaminante es un microorganismo ajeno a la muestra original que se introduce a partir del medio
ambiente por descuido o por accidente en los procedimientos.

• Bacterias y hongos está en todas partes, SON UBICUOS:

en el asa bacteriológica (si no la esteriliza),
en sus manos,
en las mesas,
en los lápices,
EN EL AIRE,
EN SU BOCA y otros.

• De nada le sirve identificar un contaminante;

• debe tomar todas las precauciones necesarias.
Al identificar se hacen dos cultivos madres:

1. De reserva: solo para mantener una copia del

cultivo, no se lo usa para resiembras o tinciones.
Se lo mantiene sin contaminación.
2. De trabajo: para hacer resiembras en medios de
cultivo con el fin de identificar la bacteria y
realizar tinciones.
Al agotarse, volverse viejo o
contaminarse, se hace uno nuevo a partir del
cultivo de reserva.
 CEPARIO DE MICROORGANISMOS
Colección de cepas o cultivos puros de microorganismos,
conservados a largo plazo.

Banco de cepas
 PROCEDIMIENTO 1: cepario.
1. Establecimiento de cultivos madre en un
cepario o colección de cepas.
(stock culture).
2. Cultivo puro
3. preservarlo
4. mantenerlo

Asegura la disponibilidad del cultivo para

comprobación y/o estudios futuros.
 Colección comercial de cultivos
American Type Culture Collection ATCC
Maryland, USA.

• Nuevos microorganismos o genéticamente

modificados.
• Disponibles para más estudios y por otros
científicos e instituciones.
• Referencia estándar a nivel mundial.
Factores para mantener cultivos madres en
ceparios:
1. Cultivo puro, NO CONTAMINADO.
2. Transferencia rutinaria aséptica a medio de
cultivo fresco para prevenir su muerte.
3. Prevenir y controlar rutinariamente cambio
fisiológicos o genéticos del cultivo.
4. Aseguramiento del mayor número de
células a sobrevivir por el método de
mantenimiento seleccionado.
 Métodos de mantenimiento de cultivos
madre en el cepario.
• Refrigeración: bajas
temperaturas que inhiben la
reproducción: 4ºC.
• Congelamiento: bajas
temperaturas que congelan los
cultivos: -196ºC, -80ºC, -20ºC.
Glicerol: previene la formación
de cristales de hielo que perforan
la célula y la matan. Tiempos
prolongados.
2. Liofilización. Congelamiento rápido de los
cultivos y deshidratación del citoplasma al vacío.

Sin agua:
• Las actividades metabólicas no pueden realizarse.
• Cambios fisiológicos o mutaciones no ocurren.
• Largos periodos de tiempo.
• Fácilmente activados con agua y medio de
cultivo fresco.
• Almacenamiento con aceite mineral.
Se agrega una capa de aceite mineral
por encima al cultivo.

Se lo mantiene al ambiente o en
refrigeración.

El aceite impide la llegada de oxígeno a

las células y limita su actividad
metabólica.