Medios Cultivo 2016 5 Oct

MEDIOS DE
CULTIVO
REQUERIMIENTOS DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO
Requerimientos energéticos y no energéticos
Salvo excepciones, las bacterias son cultivables en medios
artificiales de laboratorio de tal forma que el medio de cultivo le
proporciona los elementos necesarios para su crecimiento y
multiplicación. De acuerdo con esto, siempre se requerirá una
fuente de energía y una fuente no energética como son las sales,
factores de crecimiento, etc., que sin proporcionar energía son
necesarias para su desarrollo.
Los requerimientos energéticos son los nutrientes de ese medio
de cultivo, que va a ser utilizado por la bacteria para su
crecimiento. Van a ser fuentes de energía en un medio de cultivo,
al menos, una fuente de carbono y una fuente de nitrógeno, y
fuentes no energéticas pueden ser una fuente de fósforo,
determinados iones como el hierro, el potasio, el sodio, el zinc, el
magnesio, etc.
REQUERIMIENTOS ENERGETICOS
Entre los requerimientos energéticos de los medios

de cultivo tenemos:
 1. Fuente de Carbono
 2. Fuente de Nitrógeno
1. Fuentes de carbono
Existen muchos tipos de fuentes de carbono, ya que esto está ligado al
metabolismo energético de la especie microbial; por ejemplo:
Algunas bacterias son capaces de utilizar sustancias muy sencillas como
ácido acético, alcohol, citrato sódico, etc.
En otras ocasiones, la mayor parte de los casos, la fuente de carbono
corresponde a azúcares en forma de mono o disacáridos, como glucosa,
lactosa, maltosa, etc.,
Incluso hay microorganismos que pueden utilizar azúcares más complejos
para obtener energía, como es el caso del almidón.
1. Fuentes de carbono
Existen también bacterias capaces de utilizar el
gas carbónico CO2 hecho que es característico de
las bacterias fotosintetizantes y quimiolitótrofas.
Otros microorganismos pueden crecer a expensas
del metano, benceno e, incluso, hidrocarburos
como fuente de energía: Ejemplo: Cladosporium.
Por último, existen especies como Pseudomonas,
que pueden utilizar como fuente de energía un
gran número de componentes hidrocarbonados
diferentes.
En general, conocer el tipo de azúcar utilizado por
cada bacteria es muy útil para su identificación
bioquímica y consiguiente clasificación taxonómica.
2. Fuente de nitrógeno
Es una fuente bastante menos energética que la fuente de carbono pero es
necesaria para el metabolismo microbiano, produciendo también energía.
Esta fuente de nitrógeno la van a formar las proteínas, péptidos o
aminoácidos. Pueden presentarse como proteínas completas, que sería el
caso de la gelatina cuya presencia sirve para determinar la actividad
proteolítica o gelatinasa del microorganismo problema, o incluso proteínas
aún más complejas, como es el caso de los extractos de carne, sales de
amonio, etc.
Es frecuente encontrar peptonas como fuente de nitrógeno que
corresponden a péptidos o polipéptidos dependiendo de su complejidad
pero en cualquier caso son también proteínas que están parcialmente
hidrolizadas, aunque no se las deba considerar como tal.
2. Fuente de nitrogeno
Existen muchos tipos de peptonas y son
excelentes fuentes de nitrógeno.
Entre las más frecuentes y conocidas se
encuentran los extractos de levadura que
son extractos hidrosolubles preparados a
partir de un lisado de levadura que se utiliza
en muchos medios de cultivo.
El bio-Thione, es una denominación
comercial correspondiente a una peptona
pépsica de carne empleada para la
preparación, por ejemplo, del medio líquido
Sabouraud.
Tiene una alto contenido de azufre y de ahí
que en los medios de cultivo que la
contengan se pueda utilizar para investigar
la producción de sulfuro de hidrógeno (SH2)
por parte de la bacteria problema.
REQUERIMIENTOS
ENERGETICOS
2. Fuente de nitrogeno
La caseina corresponde a una peptona
sometida al proceso de digestión ácida muy
utilizada en muchos medios de cultivo, sobre
todo, en forma de peptona tripsica de caseina;
por ejemplo: para estudiar la formación de
indol por parte de la bacteria debido al alto
contenido de triptófano que posee este tipo de
peptona.
También es utilizada para estudiar la reducción
de los nitratos e incluso para el cultivo de
algunos protozoos.
La peptona papaínica de soja, es una fuente de
nitrógeno especialmente para hongos y ciertos
gérmenes exigentes como en el caso de las
Neisserias.
Otra fuente de nitrógeno sería la utilización de
nitratos, nitrógeno orgánico, amoniaco, sales
de amonio, aminoácidos, etc.
REQUERIMIENTOS NO ENERGETICOS
Entre los requerimientos no energéticos de los

medios de cultivo tenemos:
 1. Fuente de azufre
 2. Fuente de fósforo
 3. Iones metálicos
 4. Factores de crecimiento
 5. Factores de arranque
 6. Factores inhibidores
1. Fuente de azufre
Todos los microrganismos que utilizan en su metabolismo azufre lo
hacen mayoritariamente en forma de sulfatos, a veces en forma de
tiosulfatos y en otras ocasiones lo pueden obtener a partir de algún
aminoácido, ejemplo: metionina, cisteina, tiamina, etc.
Agar SIM
Agar TSI
Agar XLD
Agar TSI o KIA SIM XLD

2. Fuente de fósforo
En general, las bacterias que utilizan el fósforo lo suelen hacer en
forma de fosfatos.
3. Iones metálicos
Son utilizados por las bacterias bajo la forma de
iones a concentraciones muy bajas. Por ej: el Sodio,
el Potasio, Magnesio, Hierro,etc.
También se encuentra otro tipo de iones metálicos a
Cobalto, Molibdeno.
Estos iones son esenciales para el crecimiento
microbiano y dependiendo de su concentración
pueden inhibir el crecimiento de otros, como el
caso del sodio que a concentraciones altas inhibe el
crecimiento de un tipo de microorganismo y facilita
el crecimiento de otros.
Agar Manitol Salado contienen 7.5% ClNa permite
el crecimiento de Staphylococous.
Agar Streptococus KF contiene 6.5% ClNa permite
el crecimiento del Enterococus.
DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
4. Factores de Crecimiento
No todas las bacterias son capaces de crecer sobre medios donde se
encuentran cubiertas las necesidades elementales.
Existen bacterias que aún así no crecen en tales medios o, si lo hacen, es
muy lentamente. A este tipo de bacterias les hace falta además una serie de
componentes definidos que muchas bacterias no son capaces de fabricar por
sí solas para su crecimiento.
A este tipo de componentes se denomina factores de crecimiento y van a
corresponder a algún tipo de aminoácido de bacterias muy exigentes o
incluso vitaminas, bases púricas o pirimidinicas, etc.
Agar sangre enriquecido con metionina, ácido glutámico y ácido nicotínico
para el crecimiento de Xanthomonas.
AGAR CHOCOLATE
HAEMOPHYLLUS
El Agar Chocolate permite el desarrollo
de colonias húmedas, lisas y grises del
Haemophylus influenzae.
Este medio contiene hematina (factor
X) y está enriquecido con otros
cofactores, como el NAD (factor V),
que permite el desarrollo de este
microorganismo.
AGAR SANGRE
BORDETELLA
Agar Sangre enriquecido con
Glicerol - papa (Bordet Gengou)
para crecimiento de Bordetella
pertusis.
Se observa colonias en “gotas de
mercurio” brillantes es fácil de
apreciar.
AGAR SANGRE
FLAVOBACTERIUM
Agar sangre enriquecido con
nitrógeno suplementario y vitaminas
del complejo B para el crecimiento
del Flavobacterium.
5. Factores de Arranque
Son sustancias que van a permitir
a la bacteria en estudio, salir de su
fase de latencia y comenzar su
fase de crecimiento exponencial.
Son fundamentalmente fuentes de
energía ”glucosa” que es utilizado
por las bacterias.
Un factor de arranque puede ser
una fuente no energética como
algún ión que estimule el
crecimiento.
6. Factores Inhibidores
Son componentes que van a impedir el crecimiento de algún tipo de
microorganismo por bloqueo de sus procesos metabólicos.
Los antibióticos son agentes inhibidores o destructores de la propia bacteria.
La azida sódica inhibe el crecimiento de los Gramnegativos.
Algunos colorantes : Eosina Azul de metileno impide el crecimiento
bacteriano de los Grampositivos.
Cristal Violeta impide el crecimiento de los Grampositivos.
Las sustancias inhibidoras son muy útiles para la identificación y tipificación
de pruebas bioquímicas de las bacterias.
Agar Mac Conkey :
Agar Eosina Azul de Metileno
Agar Salmonella Shigella
Agar Verde brillante
AGAR MAC CONKEY
TIPO DE COLONIAS
Superficie de agar Mac Conkey con desarrollo de colonias a las 24 horas.
Se observa colonia rojas fermentadoras de lactosa, el color rojo se debe a
que el microorganismo produce grandes cantidades de ácido mixtos.
Se observa colonias no fermentadoras de lactosa, son colonias pequeñas y
transparentes.
AGAR EOSINA AZUL DE METILENO
El medio EMB contiene Eosina y azul de

metileno que son colorantes de anilina y
van a inhibir el crecimiento de los
microorganismos Grampositivos,
permitiendo el crecimiento de todas las
Enterobacterias.
Las colonias que fermentan la lactosa y/o
sacarosa se observan de un color púrpura.
Las que no fermentan lactosa ni sacarosa
se observan incoloras.
La Escherichia coli se observa de color
púrpura y con brillo metálico.
CONDICIONES FISICO
QUIMICAS DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO
CONDICIONES FISICO QUIMICAS
APROPIADAS DE UN MEDIO DE CULTIVO
Entre las condiciones Físico-químicas apropiadas de un medio

de cultivo tenemos:
1.Temperatura
2. Grado de humedad
3. pH
4. Presión Osmótica
TEMPERATURA
Existe una temperatura para cada tipo de bacteria donde su proliferación es

la ideal y fuera de esta; o sencillamente no crecen o lo hacen mucho más
despacio, hecho que va a depender del rango de temperatura a la que puede
vivir y crecer esta bacteria.
Siempre se deberá mantener la temperatura apropiada según la especie
microbiana.
Las bacterias psicrófilas crecen a temperaturas menores de 20ºC.
Las bacterias mesofilas crecen entre 18 a 45ºC.
Las bacterias termófilas crecen por encima de los 45ºC.
Las bacterias patógenas para el hombre suelen crecer a una temperatura
óptima de 37ºC.
Los microorganismos termofilos se diferencian de los mesófilos por poseer
muchas más enzimas termoestables y sistemas de proteínas capaces de
actuar a temperaturas altas. Los lípidos de su membrana son también más
saturados que los de los mesófilos, con un punto de fusión más alto.
TEMPERATURA
Debido a estos efectos opuestos de

la temperatura, el crecimiento
microbiano tiene una dependencia
bastante característica de la
temperatura, existiendo
temperaturas cardinales distintivas:
temperatura mínima, óptima y
máxima de crecimiento.
Aunque la forma de dependencia
de la temperatura puede variar, la
óptima está siempre más próxima a
la máxima que a la mínima.
Las temperaturas cardinales de una especie en particular no son invariables,
sino que dependen hasta cierto punto de otros factores ambientales, como el
pH y los nutrientes disponibles.
TEMPERATURA
Los microorganismos, pueden clasificarse en una de las cinco

categorías siguientes en función de los rangos de temperatura
de crecimiento.
Los psicrófilos crecen bien a
0ºC y tienen una temperatura
óptima o inferior, la máxima
es de 20ºC. Se aislan del
Ártico y Antartico.
Los psicrótofos pueden crecer
a 0ºC, aunque su temperatura
óptima sea 20 a 30ºC y la
máxima de casi 35ºC. Las
bacterias y los hongos
responsables de la
putrefacción de alimentos
refrigerados.
TEMPERATURA
Los Mesófilos, crecen a una

temperatura óptima de 20 a 45ºC,
siendo la mínima de 15 a 20ºC y
la máxima de casi 45ºC. La
mayoría de los microorganismos
pertenecen a esta categoría. Los
agentes patógenos humanos.
Los termófilos, pueden crecer a
una temperatura de 55ºC o
superiores. La temperatura
mínima es normalmente de 45ºC
y la óptima es de 55 a 65ºC.
Microorganismos que crecen en
fardos de heno, tuberías de agua
caliente, aguas termales.
TEMPERATURA
Los Hipertermófilos, temperatura óptima de entre 80ºC y casi 113ºC, no

crecen por debajo de 55ºC. Microorganismos aislados en zonas calientes del
suelo marino.
Rangos de temperatura para el
crecimiento microbiano
Temperaturas cardinales (ºC)
Microorganismo Mínima Óptima Máxima
Bacillus psichrophilus -10 23-24 28-30
Microcococcus cryophilus -4 10 24
Pseudomona fluorescens 4 25-30 40
Staphylococcus aureus 6.5 30-37 46
Enterococcus faecalis 0 37 44
Escherichia coli 10 37 45
Neisseria gonorrhoeae 30 35-36 38
Thermoplasma acidophilum 45 59 62
Bacillus stearthermophilus 30 60-65 75
Sulfolobus acidocaldarius 60 80 85
Pyrococcus abyssi 67 96 102
Pyrodictium occultum 82 105 110
Pyrolobus fumarii 90 106 113
Candida scotti 0 4-15 15
Saccharomyces cerevisiae 1-3 28 40
Mucor pusillus 21-23 45-50 50-58
GRADO DE HUMEDAD
Va a corresponder a la cantidad de agua que va a necesitar la bacteria para su

crecimiento. En general, cualquier medio sólido o líquido requiere cierta
proporción de agua.
En medios sin agua es muy difícil el crecimiento bacteriano: de ahí que la
liofilización y cualquier método de deshidratación, sea un buen medio de
conservación.
pH
Cada especie tiene un rango definido de pH para su crecimiento y un pH

óptimo de crecimiento.
1. Los acidófilos tienen un valor de pH óptimo de crecimiento entre 0y 5.5.
2. Los neutrófilos, entre 5.5 y 8.0
3. Los alcalófilos prefieren un rango de pH entre 8.5 y 11.5
La mayoría de las bacterias y protozoos son neutrófilos.
La mayor parte de los hongos prefieren medios ligeramente ácidos, con
valores de pH de 4 a 6.
Variaciones intensas en el pH pueden dañar a los microorganismos alterando
la membrana plasmática o inhibiendo la actividad de las enzimas y las
proteínas transportadoras.
pH
Existen sustancias que van a estabilizar el pH del medio; este tipo de

sustancias reciben el nombre de buffers o tampones, proporcionando al
medio un pH adecuado y estable que facilite el crecimiento bacteriano.
El pH óptimo en la mayoría de los casos es cercano a la neutralidad.
Los tiobacilos pueden crecer mejor a pH muy ácido, a pH próximo a 0.
Los bacilos ureasa positivo tal como Proteus crece a pH cercano a 8.
El Vibrio Cholerae crece bien a pH 9.
En un medio de cultivo pueden aparecer variaciones de pH como
consecuencia de los metabolitos que se producen por la degradación de los
nutrientes por parte de las bacterias.
Es típico que en la fermentación glucídica se produzca acidificación del
medio o en la degradación proteica utilizando la bacteria sales amónicos
como fuente de energía se alcalinice el medio.
Siempre es necesario tamponar el medio de cultivo, al menos al comienzo
para mantener el pH dentro de los límites fisiológicos.
Efectos del pH en el crecimiento
microbiano
Microorganismo Límite inferior pH óptimo Límite superior

Picrophilus oshimae 0 0.7 SD
Thiobacillus thiooxidans 0.5 2.0-3.5 6.0
Sulfolobus acidocaldarius 1.0 2.5 4.0
Lactobacillus acidophilus 4.0-4.6 5.8-6.6 6.8
Staphylococcus aureus 4.2 7.0-7.5 9.3
Proteus vulgaris 4.4 6.0-7.0 8.4
Escherichia coli 4.4 6.0-7.0 9.0
Clostridium sporogenes 5.5-5.8 6.0-7.6 8.5-9.0
Pseudomonas aeuriginosa 5.6 6.6-7.0 8.0
Nitrosomonas 7.0-7.6 8.0-8.8 9.4
Bacillus pasteurii 8.5 SD SD
Bacillus alcalophilus 8.5 10.6 11.5
PROTEUS
Urea (+) Urea (-)
Los bacilos ureasa positivo tal como Proteus crece a pH

cercano a 8.
VIBRIO CHOLERAE
AGAR TCBS (pH del medio 8.6 +/- 0.1)

El pH alcalino inhibe notablemente a las enterobacterias.
PRESION OSMOTICA
Se suele trabajar en condiciones de isotonia (300 miliosmoles) aunque

existen muchas bacterias que puede crecer a concentraciones algo
superiores.
Las bacterias pueden mantenerse vivas y crecer en medios muy acuosos e
hipotónicos; este hecho es debido a su pared rígida que permite que el agua
no penetre en la bacteria y ésta se rompa.
En las bacterias halófilas, su crecimiento se produce especialmente a
concentraciones muy altas de cloruro sódico; Ej: Staphylococus.
Salvo excepciones, las bacterias no suelen tolerar grandes concentraciones
salinas, de ahí que los salazones sean buenos método de conservación.
Staphylococus
Streptococus Enterococus.
PRESION OSMOTICA
La membrana plasmática selectivamente permeable separa a los

microorganismos de su ambiente: por ello, éstos pueden verse afectados por
cambios en la concentración osmótica del medio.
Si se coloca un microorganismo en una solución hipotónica, entrara agua en
la célula, causando su estallido salvo que se evite su entrada. La mayoría de
las bacterias, algas y hongos poseen una pared celular rígida que mantiene la
forma e integridad celular. La mayoría de las bacterias eleva su
concentración osmótica interna mediante la síntesis o captación de colina,
betaína, prolina, ácido glutámico y otros aminoácidos.
PRESION OSMOTICA
Los microorganismos se colocan en un medio hipertónico, disminuye el

nivel de agua y la membrana plasmática se contrae, separándose de la pared
celular. “PLASMOLISIS” esta situación deshidrata la célula y puede dañar
la membrana plasmática; la célula se inactiva metabolicamente y deja de
crecer.
Como la concentración osmótica de un hábitat tiene efectos tan marcados
sobre los microorganismos, es de gran utilidad expresar cuantitativamente el
grado de disponibilidad del agua. Se emplea la actividad de agua (aw).
PRESION OSMOTICA
Actividad del agua Ambiente Microorganismo

1.00 agua pura Sangre Mayoría de Gramnegativos
no halófilos
0.95 Pan Bacilos Grampositivos
Basidiomycetes
0.90 Jamón Mayoría de cocos, Bacillus
Fusarium, Mucor, Rhizopus
0.85 Salami Staphylococus
Saccharomyces
0.80 Conservas Penicillum
0.75 Lagos salados Halobacterium, Aspergillus
Pescado salado Actinospora
0.70 Cereales, dulces Aspergillus
0.60 Chocolate Saccharomyces
Leche deshidratada Xeromyces
PRESENCIA O AUSENCIA DE
OXIGENO
 Un organismo que puede crecer en presencia de oxígeno
atmosférico es AEROBIO, mientras que otro puede crecer en su
ausencia, es ANAEROBIO.
 Casi la mayoría de los organismos superiores dependen
totalmente del oxígeno atmosférico para su crecimiento, es
decir son AEROBIOS OBLIGADOS.
 El oxígeno actúa como aceptor terminal de electrones en la
cadena transportadora de electrones, durante la respiración
aerobia. Además los eucariotas aerobias utilizan oxígeno para
sintetizar esteroles y ácidos grasos insaturados.
OXIGENO
 Los ANAEROBIOS FACULTATIVOS no precisan de
Oxígeno para crecer, pero lo hacen mejor en su
presencia.
 Los ANAEROBIOS AEROTOLERANTES, como
Enterococcus faecalis pueden crecer bien tanto en
su presencia como en su ausencia.
 Por el contrario los ANAEROBIOS ESTRICTOS U
OBLIGADOS, ejemplo: Bacteroides,
Fusobacterium, Clostridium, no toleran en absoluto
el oxígeno y mueren en su presencia.
 Los anaerobios tolerantes y los estrictos no
pueden producir energía mediante la respiración
aerobia y deben utilizar vías de fermentación o
respiración anaerobia para este objetivo.
OXIGENO
 Finalmente existen unos pocos microorganismos
como el Campylobacter, que son
MICROAEROFILOS, que son dañados por el
nivel de oxígeno atmosférico 20%, precisando
para su crecimiento niveles del 2 al 10% de
Oxígeno.
 La naturaleza de las respuestas bacterianas al
oxígeno puede estudiarse fácilmente cultivando
las bacterias en tubos de ensayo que contengan
un medio sólido, o bien, un medio especial,
similar al caldo de tioglicolato, que posee un
agente reductor para disminuir los niveles de
oxígeno.
CLASIFICACION DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO
PRINCIPALES TIPOS DE MEDIOS
DE CULTIVO
Existen muchos tipos distintos de medios de cultivo, así como

diferentes clasificaciones. De acuerdo a esto y según criterios se
podrían dividir:
1. SEGÚN SU PROPORCION EN AGUA
2. SEGÚN SU USO O UTILIZACIÓN
3. SEGÚN LA COMPOSICIÓN QUE PRESENTEN
4. SEGÚN SU PRESENTACIÓN
MEDIOS DE CULTIVO
SEGÚN SU CONSISTENCIA
1. Medios sólidos.
2. Medios líquidos.
3. Medios semisólidos
POR SU CONSISTENCIA
1. MEDIOS SOLIDOS.
Corresponden a aquellos medios donde la proporción en agar está
siempre por encima del 1.5% (12 a 20 g/litro medio) . Koch utilizó,
en 1881, por primera vez la gelatina para obtener un medio sólido;
posteriormente un alumno suyo, Hesse, utilizaría en su lugar agar.
En la actualidad, para la solidificación de los medios es el agar el
utilizado, ya que la gelatina presenta el inconveniente de fundir a
unos 24ºC, además existen en bacteriología numerosas bacterias
gelatinasa positiva que destruirían tal medio.
La importancia, pues, de los medios sólidos es muy grande, ya que
nos permite el aislamiento, purificación y visualización de su
crecimiento en colonias, así como su posible identificación a través
de medios específicos y diferenciales de caracteres sólidos,
elaboración de antibiogramas, etc.
 LOWENSTEIN JENSSEN
MYCOBACTERIUM
 15 G 1000 ML
 1.5 100 ML 1.5%
POR SU CONSISTENCIA
1. MEDIOS SOLIDOS.
Agar Sangre, observar la morfología de las colonias y el tipo de
hemolisis.
Agar Mac Conkey, los diferentes tipo de colonias de acuerdo al
consumo de lactosa.
Agar Mueller Hinton, prueba de susceptibilidad a los
antimicrobianos.
AGAR SANGRE
HEMOLISIS
Los Streptococus se clasifican en
base a su propiedades hemoliticas en
agar sangre.
La hemolisis parcial de los eritrocitos
da como un resultado un color
verdoso del medio sólido que rodea
las colonias (alfa-hemolisis).
Los que producen hemolisinas que
lisan los eritrocitos, produce un
aclaramiento del medio que rodea las
colonias (beta-hemolisis).
AGAR SANGRE
Cultivo mixto que demuestra la

presencia de dos tipos de
microorganismos:
Un morfotipo de colonias grandes
blancas, brillantes y con bordes
irregulares pertenecientes a
bacilos gramnegativos.
El otro morfotipo presenta
colonias blancas, pequeñas,
enteras, tipicas de un
microorganismo grampositivo.
AGAR SANGRE
Cultivo mixto que demuestra la

presencia de dos tipos de
microorganismos:
Un tipo de colonias grandes,
blancas pertenecientes a
Staphyloccous.
El otro tipo de colonias
puntiforme pertenecientes a
Streptococus.
AGAR MUELLER HINTON
ANTIBIOGRAMA
Se basa en la difusión del
antibiótico sobre el agar, y
determinar la sensibilidad
(formación de halo alrededor
del antibiótico) y/o
resistencia (crecimiento
alrededor del antibiótico).
POR SU CONSISTENCIA
2. MEDIOS LIQUIDOS.
Corresponden a los que también se denominan caldos, no contienen
agar y su composición, además de agua suele contener al menos
una fuente de carbono, sales minerales, y, en algunas ocasiones
según las características del medio, factores de crecimiento,
vitaminas, peptonas, ciertos aminoácidos, etc. Son de gran utilidad
para la realización de recuentos bacteriológicos por turbidimetría,
especialmente útil en levaduras, para la realización de inóculos, para
obtener productos metabolitos primarios o secundarios, creados por
los propios microorganismos como, por ejemplo, antibióticos, ácidos
lácticos, etc.
Caldo MRVP, para investigar la ruta utilizada en la degradación de
glucosa
Caldo Peptona, para investigar la producción de Indol.
Caldo Lactosado, para investigar la formación de ácido y gas
INDOL
La formación de indol a partir

del triptofano se indica por un
color rojo despues del agregado
del reactivo de Kovac.
El tubo del la izquierda es
negativo.
El tubo de la derecha demuestra
un halo de color rojo lo que
indica la presencia de Indol.
POR SU CONSISTENCIA
3. MEDIOS SEMISÓLIDOS.
Son medios intermedios entre los medios líquidos y los sólidos
donde su proporción en agar suele ser inferior al 0.5% pero siempre
suelen presentar una cierta cantidad que le proporcione una
consistencia semisólida.
Son útiles para ciertas pruebas bioquímicas como por ejemplo, la
prueba de oxidación- fermentación, que permiter conocer el tipo de
metabolismo oxidativo o fermentativo de la bacteria problema.
Agar O-F Hugh Leiffson
Agar SIM, estudiar movilidad, Producción de H2S, Indol.
Agar MIO, estudiar movilidad, Producción de Indol y Ornitina.
SIM
Tubo con medio para motilidad

y producción de ácido
sulfihidrico.
Los microorganismos móviles
muestran desarrollo difuso hacia
fuera de la línea de siembra.
Los microorganismos inmóviles
crecen solamente a lo largo de la
linea de siembra por punción
exterior.
Se observa un color Negro
debido a la producción de H2S
O-F (Hugh Leifson)
Utilización oxidativa de la glucosa.

Dos tubos con el medio O-F.
El tubo de la derecha se encuentra
abierto a la atmósfera, mientras que el
de la izquierda se encuentra cubierto
con aceite mineral para evitar la
exposiicón con el oxígeno atmosférico.
Solo se ve ácido (amarillo) en la porción
superior del tubo abierto, indicando que
el microorganismo es capaz de oxidar la
glucosa, pero no de fermentarla.
MEDIOS DE CULTIVO
SEGÚN SU PRESENTACION
1. Medios deshidratados o liofilizados.
2. Medios ya preparados:
A. Sólidos en placa petri.
B. Sólidos en tubo.
B.1. Inclinado
B.2. Semi-inclinado (pico de flauta)
C. Líquidos en tubo.
D. Semisólidos en tubo.
E. De doble fase en frasco o tubo.
POR SU PRESENTACION
1. MEDIOS DESHIDRATADOS
Son medios que se comercializan tal
cual y una vez en el laboratorio deben
ser preparados adicionando la cantidad
de agua correspondiente en condiciones
totalmente asépticas o una vez
preparados en estas condiciones lo
esterilizaríamos en el autoclave. Su
composición es muy variable y puede
ser de tipo básico o más complejo.
POR SU PRESENTACION
2. MEDIOS YA PREPARADOS
Son medios que han sido elaborados por las casas comerciales
presentando un determinado control de calidad y características
específicas adecuadas a cada tipo de cultivo. Este tipo de medios
pueden presentarse en forma de placas, en tubo, como formas
sólidas, en frascos, como medios semisólidos o líquidos, en sistemas
de doble fase, etc.
POR SU PRESENTACION
A. Medios sólidos en Placa Petri

Son medios sólidos que ocupan una
superficie lo suficientemente grande
como para poder visualizar
perfectamente las colonias
microbianas (mucho mejor que en
tubo).
Estos medios se utilizan mucho para
obtener cultivos puros partiendo de
una colonia previamente aislada.
El sistema en placa es uno de los
medios que permite mejor el
aislamiento del microorganismos que
pueden crecer en él.
POR SU PRESENTACION
B. Medios sólidos en tubo

Los medios sólidos en tubo corresponden a tubos:
B.1. Con agar inclinado

Este medio solidficado tiene por finalidad aumentar la
superficie donde se va a producir el crecimiento
microbiano una vez sembrado.
Las siembras se realizarán por estría.
Agar Citrato de Simmons
Agar Urea
Agar Manitol rojo fenol.
POR SU PRESENTACION
B.2. Con agar semi-inclinado o Pico
de flauta
Estos tipos de medios son útiles para
observar el crecimiento aerobio
microbiano si se ha sembrado por estría,
el crecimiento anaerobio microbiano si se
ha sembrado por picadura (anaerobiosis
facultativa).
Agar KIA
Agar LIA
También es útil para la conservación de
cepas, porque la desecación es menor en
medios sólidos en tubo que en las placas
petri.
POR SU PRESENTACION
C. Medios líquidos en tubo
Estos medios no permiten visualizar
colonis pero tienen muchas
aplicaciones como, por ejemplo,
pruebas bioquímicas que permiten:
La determinación del Indol.
La reducción de nitratos a nitritos
La fermentación de la glucosa,
lactosa u otro azúcar, etc.
Pueden servir para aumentar la
concentración del microorganismo
inoculado, es decir, realizar un
inóculo, y otras aplicaciones.
Estos medios no contienen en
ningún caso agar.
POR SU PRESENTACION
D. Medios semisólidos en tubo
Se siembran por picadura y corresponden a un término medio entre
los líquidos y los sólidos. Se utilizan en ciertas pruebas bioquímicas
como:
La prueba de la movilidad
La prueba de oxidación-fermentación o de Hugh-Leiffson.
POR SU PRESENTACION
E. Medios de doble fase en frasco
Son frascos constituidos por una fase sólida y otra
líquida, por ejemplo, para la determinación rápida de
microorganismos en sangre. Ambas fases crecen en el
mismo medio y pueden tener un carácter aerobio o
anaerobio. Suelen contener obturadores de caucho
manteniendo completamente aislado el medio.
Medio de Ruiz Castañeda para el aislamiento de
Brucella.
Medio para Hemocultivo
MEDIOS DE CULTIVO
SEGÚN SU USO O UTILIZACION
1. Medios para aislamiento.

A. Enriquecidos
B. Selectivos
C. Diferenciales
2. Medios para crecimiento general.
3. Medios para identificación.
4. Medios para mantenimiento de cepas.

POR SU USO O UTILIZACIÓN
1. MEDIOS PARA AISLAMIENTO
Son medios muy diversos pero con la particularidad común de poder
obtener a partir de ellos colonias aisladas. Estos, según sea su
composición, se pueden a su vez dividir en:
A. Medios enriquecidos
Son medios a los cuales, como su nombre indica, se les añade
ademas de los componentes básicos, uno o varios elementos, como
por ejemplo caseína soja, triptófano, etc., que facilitan el
crecimiento de algún tipo de microorganismo generalmente
exigentes, lo que nos permite aislar el microorganismo que
buscamos.
B. Medios selectivos
Son medios en cuya composición presentan algún componente o
componentes que van a impedir el crecimiento de algún tipo
bacteriano, estableciendo con ello una selección en el tipo de
microorganismo que sí puede crecer; por ejemplo, el medio Rothe
se caracteriza porque en su composición aparece azida sódica
confiriendo al medio propiedades selectivas ya que tal componente
va impedir el crecimiento de todas las bacterias Gramnegativas,
permitiendo el crecimiento de algunas Grampositivas como
Streptococus faecalis.
Medio Salmonella Shigella, contiene en su composición sales
biliares, citrato de sodio y el verde brillante que inhibe a la flora
Grampositiva y los hacen con el grupo coliforme.
C. Medios diferenciales
Corresponden a aquellos medios que presentan las mismas
propiedades que los medios selectivos, es decir, tienen
componentes que inhiben el crecimiento de algunas bacterias y, lo
que es más característico de este medio, presentan sustancias que
al ser utilizadas, o no, por las bacterias que van a crecer en dicho
medio, dan una información suplementaria y específica, es decir,
diferencial; por ejemplo:
El medio Levine (EMB) es te medio presenta en su composición
eosina y azul de metileno que inhibe el crecimiento de los
Grampositivos y algunas Gramnegativas, facilitando el crecimineto
de la enterobacterias, que según utilicen o no la lactosa darán lugar
a una coloración característica para cada tipo de microorganismo.
Los medios diferenciales suelen ser también selectivos y se usan con
fines de aislamiento e identificación.
2. MEDIOS PARA CRECIMIENTO EN GENERAL
Son medios ya sea en forma liquida o sólida que sirven para el
cultivo de la mayor parte de las bacterias. Su composición va a
corresponder a una fuente de carbono, una fuente de nitrógeno,
sales y agua. Dentro de los medios generales más empleados
tendríamos el caldo común, que está compuesto por extracto de
carne, peptona, glucosa, cloruro de sódico y agua.
3. MEDIOS PARA IDENTIFICACIÓN
Son medios que pueden tener las mismas características que los
diferenciales tanto, nos van a servir para identificar el crecimineto y
características de algún tipo de microorganismo.
También podría corresponder a medios generales más o menos
enriquecidos conalgún componente como, por ejemplo, peptona,
urea, glucosa, etc., hecho que nos va a servir para visualizar el tipo
de metabolismo microbiano, por ejemplo:
El caldo peptonado para saber si el microorganismo es indol +.
El medio urea para la ureasa +.
El caldo glucosado para saber la fermentación de la glucosa.
Este tipo de pruebas permite clasificar taxonomicamente el
microorganismo.
MRVP (CALDO GLUCOSADO)
Permite investigar que ruta metabólica ha

utilizado el microorganismo para consumir la
glucosa.
Si utiliza la vía de fermentación de los ácidos el
pH resultante es menor de 4.4, y el
microorganismo será Rojo de metilo (+) el cual
se va a evidenciar por el agregado del indicador
rojo de metilo y dará un color rojo (+) y
amarillo anaranjado (-).
Los microorganismos que utilizan la vía de la
acetoina serán Voges Proskauer (+) y se
evidencian por un color rojo al cabo de los 10
minutos después de agregar el KOH y el alfa-
naftol.
INDOL
La formación de indol a partir

del triptofano se indica por un
color rojo después del agregado
del reactivo de Kovac.
El tubo del la izquierda es
negativo.
un halo de color rojo lo que
indica la presencia de Indol.
UTILIZACION DE LA GLUCOSA
Tres tubos con caldo y con

tubos de Durham.
El tubo de la izquierda muestra
formación de ácido a partir de
glucosa (amarillo) y formación
de gas..
El tubo del centro muestra
formación de ácido a partir de
glucosa (amarillo).
El tubo de la derecha es
negativo (rojo).
AGAR UREA
un color rojo, lo que indica una
reacción positiva.
El tubo de la izquierda no
presenta viraje de color
AGAR CITRATO DE SIMMONS
El tubo de arriba demuestra un

color verde y ausencia de
crecimiento.
El tubo de abajo muestra un
color azul, lo que indica una
reacción positiva.
AGAR KIA (KLIGER)
Muestra una serie de reacciones.

Pico de color amarillo indica
fermentación de lactosa.
Fondo de color amarillo indica
fermentación de glucosa.
Ruptura del agar y/o burbuja, indica
formación de CO2.
Presencia de un color negro indica
producción de H2S.
El pico rojo indica que no hay
fermentación de lactosa.
El Pico rojo y fondo rojo indica que no
hay fermentación de glucosa ni lactosa.
4. MEDIOS PARA MANTENIMIENTO DE CEPAS.

Son medios que suelen tener los nutrientes necesarios para
mantener a las cepas vivas durante períodos de tiempo
relativamente largos manteniéndose tales medios generalmente a
temperaturas lo suficientemente bajas en cada caso como para
impedir su crecimiento. Ejemplo, Leche descremada que congelada
se utiliza a menudo para mantener cepas durante meses.
MEDIOS DE CULTIVO SEGÚN
LA COMPOSICION QUE PRESENTEN
1. Medios naturales.
2. Medios semisintéticos.
3. Medios sintéticos.
4. Medios complejos.
POR SU COMPOSICIÓN QUE
PRESENTAN
1. MEDIOS NATURALES
Son aquellos cuyos componentes orgánicos e inorgánicos se
encuentran en la naturaleza, se suelen preparar
artesanalmente y, en general, pueden estar constituidos por
ciertos tejidos, líquidos orgánicos, etc., por ejemplo: la leche,
que constituye un medio natural de conservación y cultivo
favorable para numerosas bacterias. Se suele utilizar en forma
de leche simple descremada, leche tornasolada y leche con
azul de metileno. Otros medios naturales son el huevo entero,
clara o la yema, o incluso la patata, que es ampliamente
utilizada en bacteriología para el aislamiento de muchos
hongos.
PRESENTAN
2. MEDIOS SEMISINTETICOS
Son medios donde parte de su composición
corresponde a extractos naturales como levadura,
malta, patata, sangre, leche, etc., a los que se
añaden constituyentes sintéticos o químicamente
definidos para el crecimiento bacteriano.
PRESENTAN
3. MEDIOS SINTETICOS
Corresponden a estructuras sintéticas más o menos puras y
químicamente definidas, que están o pueden estar disueltas en agua
destilada en proporciones determinadas de forma que se obtenga
una solución adecuada para permitir el crecimiento de
microorganismo que se desee.
Son los más utilizados en bacteriología. Se Usa para aislamiento,
identificación, crecimiento, mantenimiento, etc. Siempre deberán
contener en su composición los siguientes elementos:
 Una fuente de Carbono o azúcar.
 Una fuente de nitrógeno en forma inorgánica como iones NO-3, NH+4,
o en forma orgánica, como peptona, aminoácidos, aminas, etc.
 Compuestos minerales, y entre ellos, oligoelementos.
 Factores de crecimiento.
Todo medio sintético puede presentar una complejidad muy variable
de elementos según el germen que se pretenda cultivar y estudiar.
PRESENTAN
4. MEDIOS COMPLEJOS
Son los primeros que se utilizaron en bacteriología, aunque en la
actualidad su uso está más restringido. Sin embargo, en
parasitología y virología se utilizan habitualmente. Se preparan de
forma compleja a partir de tejidos animales y más raramente de
vegetales. Su composición no está exactamente definida como
sucede en los medios sintéticos, es decir, no es rigurosamente
constante, y sus materias primas suelen ser carne de músculo, de
hígado, de corazón, clara o yema de huevo, azúcares, peptonas,
etc.
Medio de Lowenstein Jenssen.
Infusión cerebro corazón (BHI)
MEDIO LOWENSTEIN JENSSEN
1. COMPOSICION
Fosfato monopotásico 4.0 g
Sulfato de magnesio 0.4 g
Citrato de magnesio 1.0 g
Asparragina 6.0 g
Glicerol 20.0 g
Agua destilada 1000 ml
2. PREPARACION
Disolver los ingredientes y hervir durante 2 horas.
Luego añadir 50 g de almidón de papa.
Cascar 5 huevos en condiciones asépticas en un
matraz y con ayuda de perlas de vidrio.
Agregar 50 ml de verde malaquita en solución al 2%
Distribuir en condiciones asépticas en tubos con tapa
de rosca y dejar solidificar.
3. FINALIDAD
Permitir el crecimiento del Mycobacterium.
INFUSION CEREBRO CORAZON
1. COMPOSICION
Infusión cerebro de ternera 20.0 g
Infusión corazón de res 25.0 g
Peptonas 10.0 g
Fosfato disódico 2.5 g
Glucosa 2.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
2. FINALIDAD
Permite el crecimiento de microorganismos considerados muy dificiles
de cultivar, en él los gérmenes mantienen su virulencia , antigenicidad
y otras características serológicas.
TAREA
Complementar las fichas de cada medio
de cultivo
AGAR NUTRITIVO
1. COMPOSICION
Peptona 17.0 g
Extracto de carne 3.0 g
Agar - Agar 12.5 g
2. DESCRIPCION DEL MEDIO

A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en agua
D. Según su uso o utilización
E. Según la composición que presenta
F. Según su presentación
AGAR SANGRE
1. COMPOSICION
Infusión de musculo de corazón 37 g
Peptona 10 g
Cloruro de sodio 5g
Agar Agar 15 g
g. POSIBLES REACCIONES
h. Ejemplo de microorganismo con cada reaccion
AGAR
SANGRE
AGAR CHOCOLATE
1. COMPOSICION
Infusión de musculo de corazón 370 g
Peptona 10 g
Cloruro de sodio 5g
Agar Agar 15 g
AGAR MAC CONKEY
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 17.0 g Rojo neutro 0.03 g
Peptona de carne 3.0 g Cristal violeta 0.001 g
Lactosa 10.0 g Agar - Agar 12.5 g
Sales biliares 1.5 g Agua destilada 1000 ml

AGAR MAC CONKEY
TIPO DE COLONIAS
Superficie de agar Mac Conkey con desarrollo de colonias a las 24 horas.
Se observa colonia rojas fermentadoras de lactosa, el color rojo se debe a
que el microorganismo produce grandes cantidades de ácido mixtos.
Se observa colonias no fermentadoras de lactosa, son colonias pequeñas y
transparentes.
AGAR MAC CONKEY
AGAR EOSINA AZUL DE METILENO
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 10.0g Eosina amarilla 0.3 g
Lactosa 5 Azul de metileno 0.065
Sacarosa 5 Agar-agar 13.5
Fosfato dipotásico 2 Agua destilada 1000 ml

Agar Eosina Azul de
Metileno (EMB) de Levine
 Los colorantes de Eosina y azul de
metileno inhiben a las bacterias
Grampositivas y a las Gramnegativas
exigentes. También se combinan
precipitando a pH ácido, actuando como
indicadores de producción de ácidos.
 Los fermentadores fuertes de lactosa:
Escherichia coli, producen colonias color
negro verdoso con brillo metálico. El
brillo metálico indica una fuerte
producción de ácido con una caída de pH
a 4.5 o menos.
 Los productores débiles de ácidos,
producen colonias violeta, Klebsiella,
Enterobacter, Serratia, Hafnia.
 Los no fermentadores de lactosa, forman
colonias incoloras. Salmonella,
Shigella, Proteus..
Agar Eosina Azul de
Metileno (EMB) de Levine
AGAR SALMONELLA SHIGELLA
1. COMPOSICION
Extracto de carne 5.0 g Citrato de fierro amoniacal 1.0 g
Proteosa peptona 5 Verde brillante 0.0003
Lactosa 10 Rojo neutro 0.025
Bilis de buey 8.5 Agar-agar 13
Citrato de sodio 8.5 Agua destilada 1000 ml
Tiosulfato de sodio 8.5

El agar SS es un medio altamente selectivo, que inhibe el desarrollo de la mayoría de los coliformes y
permite el crecimiento de Salmonella y Shigella.
La alta concentración de sales biliares y citrato de sodio inhibe a todas las bacterias Grampositivas y
muchas Gramnegativas, incluyendo a los coliformes.
La lactosa es el único carbohidrato y el rojo neutro detecta la producción de ácido.
El tiosulfato de sodio es una fuente de S, permitiendo la detección del H2S por el precipitado negro
formado con el citrato férrico.
Colonias incoloras, son no fermentadores de lactosa y H2S (-), Salmonella y Shigella.
Las Colonias fermentadoras de lactosa se colorean de rojo, Escherichia coli.
Colonias incoloras con centro negro, son no fermentadores de lactosa y H2S (+), Proteus, Salmonella.
AGAR VERDE BRILLANTE
1. COMPOSICION
Extracto de levadura 3.0 g Rojo fenol 0.08 g
Peptona o polipeptona 10.0 g Verde brillante 0.0125 g
Lactosa 10.0 g Agar - Agar 20.0 g
Sacarosa 10.0 g Agua destilada 1000 ml

AGAR VERDE BRILLANTE
 Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella
spp., excepto S. typhi y S. paratyphi, a partir de muestras clínicas, alimentos, y
otros materiales de importancia sanitaria.
 No se recomienda para el aislamiento de Shigella spp.
Es de un valor excepcional cuando se investiga un gran número de muestras de
heces o alimentos, por su alta capacidad de diferenciación de las colonias
sospechosas.
 Fundamento
La pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrógeno.
 Vitaminas y minerales.
 La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables,
 El rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando hay producción
de ácido a partir de la fermentación de azúcares
 El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico
 El verde brillante actúa como agente selectivo.
Agar Hektoen Enterico
Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones
Proteosa peptona 12.0
Extracto de levadura 3.0
Sales biliares 9.0
Lactosa 12.0 Suspender 76 g del medio deshidratado en
Sacarosa 12.0 un litro de agua destilada. Dejar reposar
Salicina 2.0 de 10 a 15 minutos. Calentar y hervir
Cloruro de sodio 5.0 hasta lograr una disolución completa. NO
Tiosulfato de sodio 5.0 ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a
Citrato de hierro y amonio 1.5 45°C y distribuir en cajas de Petri.
Agar 14.0
Azul de bromotimol 0.065
Fucsina ácida 0.1
pH final: 7.5 ± 0.2
Fundamento
El medio de cultivo contiene
Sales biliares que inhiben el desarrollo de la flora acompañante
2 sistemas indicadores: (i) azul de bromotimol y fucsina ácida como indicadores de
la fermentación de carbohidratos,
Citrato de hierro como un indicador de la formación de SH2 a partir del tiosulfato.
El desarrollo de Shigella spp. es adecuado debido a que la inhibición de estos

microorganismos por las sales biliares está disminuida por la adición de cantidades
relativamente elevadas de peptona y carbohidratos.
El medio de cultivo, permite una buena diferenciación de las colonias e inhibe el
desarrollo de algunos coliformes y otras bacterias no fermentadoras de lactosa,
facilitando así la identificación de Salmonella y Shigella a partir de la muestra.
Microorganismos Colonias
Shigella Verdes, elevadas, húmedas
Salmonella Verde-azuladas, con o sin centro negro
Proteus Verde-azuladas, con o sin centro negro
Escherichia coli Rosa salmón rodeadas

Agar Xilosa Lisina
Desoxicolato XLD
 Xilosa 3,75 g
 L- Lisina 5,0 g
 Lactosa 7,5 g
 Sacarosa 7,5 g
 Cloruro de Sodio 5,0 g
 Extracto de Levadura 3,0 g
 Rojo Fenol 0,08 g
 Desoxicolato de Sodio 2,5 g
 Tiosulfato de Sodio 6,8 g
 Citrato Férrico de Amonio 0,8 g
 Agar 15,0 g
 Agua destilada c.s.p. 1000 mL
 pH final 7,4 ± 0,2
 Suspender 57 g de medio en un litro de agua destilada.}
 NO se autoclava
AGAR XLD
 El agar XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato) es un medio selectivo
diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de
patógenos entéricos Gram negativos, especialmente del género
Shigella.
 FUNDAMENTO
 La degradación de los carbohidratos (xilosa, lactosa y sacarosa) produce
ácido, haciendo virar el indicador (rojo fenol) de rojo a amarillo.
 La xilosa es fermentada por todas las enterobacterias con excepción de la
Shigella
 La lisina se incluye para aumentar la diferenciación de la Salmonella, sin la
lisina la Salmonella fermentaria la xilosa produciendo la acidificación del
medio y no se pueden diferenciar de otras especies no patógenas.
 Como la cantidad de este carbohidrato es limitada, una vez que lo
consumen, comienzan a utilizar la lisina produciendo la alcalinización del
medio; se evidencia porque el rojo fenol nuevamente vira a un color rojo.
 En el caso de los coliformes lisina positiva, para prevenir la alcalización del
medio por la utilización de la lisina, se incorpora en el medio un exceso de
lactosa y sacarosa.
AGAR XLD
 El medio detectar la producción de H2S, a través del sistema indicador tiosufalto de sodio y citrato férrico
amonio. Cuando el microorganismo produce H2S se observan colonias con el centro negro.
 El desoxicolato de sodio es utilizado como un inhibidor de los microorganismos Gram positivos
 Las colonias típicas de la Salmonella son de color rojo con el centro negro debido a la producción de H2S.
Mientras que las de E. coli son grandes, amarillas con o sin precipitado de bilis.
 Las colonias sospechosas de Shigella sobre el agar XLD son transparentes y parecen rojas por el color del
medio. Este género bacteriano al no fermentar la xilosa, la lactosa, ni la sacarosa, no da lugar a que el rojo
fenol vire a amarillo. Como estos microorganismos tampoco tienen la capacidad de alcalinizar el medio por
la descarboxilación de la lisina, no se produce color rojo púrpura alrededor de las colonias.
Agar Cetrimide
Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones
Peptona de gelatina 20.0 Suspender 45,3 g del polvo por litro de

agua destilada. Agregar 10 ml de
Cloruro de magnesio 1.4 glicerina. Dejar reposar 5 minutos.
Calentar agitando frecuentemente y hervir
Sulfato de potasio 10.0
durante 1 minuto. Distribuir en tubos o
Agar 13.6 frascos y esterilizar en autoclave 15
Cetrimida 0.3 minutos a 121°C.
pH final: 7.2 ± 0.2
Agar Cetrimide
 Medio utilizado para el aislamiento selectivo de Pseudomonas aeruginosa y de otras especies del
género.
 Fundamento
Este MEDIO favorece la selección de P. aeruginosa y estimular la formación de pigmentos.
 Medio muy semejante al King A, en el cual el cloruro de magnesio y el sulfato de potasio
promueven la formación de piocianina, pioverdina y piomelanina de P. aeruginosa.
 La cetrimida es un detergente catiónico que actúa como agente inhibidor, libera el nitrógeno y el
fósforo de las células de casi toda la flora acompañante
AGAR TCBS
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 5.0 g Citrato de sodio 10.0 g
Peptona de carne 5.0 Tiosulfato de sodio 10.0 g
Bilis de buey desecada 5.0 Colato de sodio 3.0
Sacarosa 20.0 Citrato hierro (III) 1.0
Cloruro de sodio 10.0 Azul de timol 0.04
Agar-agar 14.0 Azul de Bromotimol 0.04

AGAR TCBS
Las colonias amarillas, se
deben a la utilización del citrato
y a la formación de ácido por la
utilización de la sacarosa del
medio.
Vibrio Cholerae.
V. Algynolyticus
V. Cincinatiensis
V.fluvialis
V. Furnisii
V. metsnichnikovii
AGAR TCBS (pH del medio 8.6 +/- 0.1)

El pH alcalino inhibe notablemente a las enterobacterias.
AGAR TCBS
Las colonias gris verdosa
semitranslúcida indica que el
microorganismos no utiliza la
sacarosa.
Vibrio parahaemolyticus
V. Mimicus.
V. Damsela
V. hollisae
AGAR
TCBS
Las colonias gris verdosa
semitranslúcida indica que el
microorganismos no utiliza la
sacarosa.
Vibrio parahaemolyticus
V. Mimicus.
V. Damsela
V. hollisae
AGAR MANITOL SALADO ROJO FENOL
1. COMPOSICION
Extracto de carne 1.0 g Agua destilada 1000 ml
D-Manitol 10 g Agar agar 15 g
Peptona 10.0 Rojo fenol 0.025 g
Cloruro de sodio 75 g
CALDO PEPTONA
1. COMPOSICION
Peptona 10.0 g
Cloruro de sodio 9 g

INTRODUCCION:
INDOL
El indol, un bencilpirrol, es uno de los productos de degradación
metabólica del aminoácido triptofáno. Las bacterias que poseen la
enzima triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el
triptofáno con producción de indol, ácido pirúvico y amoniaco.
La prueba de indol esta basada en la formación de un complejo rojo
cuando el indol reacciona con el grupo del p-
dimetilaminobenzaldehido. Este es el principio activo del reactivo de
Kovac y Erlich. Debe emplearse un medio rico en triptofáno.
COMPOSICION:
REACTIVO DE KOVAC
Alcohol amílico o isoamílico puro 150 ml
p-dimetilaminobenzaldehido 10 g
HCl concentrado 50 ml
TECNICA:
Inocular el caldo peptonado e incubar a 37ºC por 24 horas. Luego
añadir 5 gotas del reactivo por la pared del tubo.
INTERPRETACION:
Positivo: El desarrollo de un color rojo fucsia en la interfase del
reactivo y el caldo, indica la presencia del indol.
AGAR CITRATO SIMMONS
1. COMPOSICION
Citrato de sodio 2.0 g Azul de bromotimol 0.08 g
Fosfato monoamónico 1.0 g Fosfato dipotásico 1.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g Agar - Agar 12.5 g
Sulfato de magnesio 0.2 g Agua destilada 1000 ml

Citrato de Simmons C.S.
INTRODUCCION
 El citrato de sodio es una sal del ácido cítrico, un
compuesto simple que constituye uno de los
metabolitos del ciclo de Krebs . Algunas bacterias
pueden obtener energía por vía distinta de la de
fermentación de hidratos de carbono, utilizando
citrato como única fuente de carbono. La
determinación de esta característica importante para
la identificación de muchas enterobacterias.
TECNICA
 Tomar una colonia bien aislada de la superficie de un
medio e inocular en una sola ,estría en el pico del
agro citrato e incubar a 37ºC por 24 - 48 horas.
INTERPRETACION
 El desarrollo de un color azul intenso en 24 a 48
horas indica una prueba positiva y revela que el
organismo en estudio ha sido capaz de utilizar el
citrato contenido en el medio, con la formación de
productos alcalinos.
AGAR SIM
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 20.0 g
Peptona de carne 6.6 g
Tiosulfato de sodio 0.2 g
Citrato hierro(III) amonio 0.2 g
Agar - agar 3.0 g

Agar S.I.M.
Este medio de cultivo permite comprobar la formación de sulfuro, la producción de
indol y observar la movilidad.
PRODUCCION DE H2S
Se evidencia la formación de ácido sulfihidrico por la formación de un precipitado negro.
Esto se logra mediante las siguientes etapas:
Liberación de sulfuro a partir del tiosulfato por acción enzimática de la bacteria.
Acoplamiento del sulfuro (S-2) con el ion hidrogeno (H+) para formar gas H2S.
Detección del gas H2S mediante sales de metales pesados como hierro, logrando la forma
de sulfuro del hierro, que es un precipitado negro.
Agar S.I.M.
MOVILIDAD
Los medios para detectar movilidad contienen concentraciones de agar de
0.4% o menos. A mayor concentración del gel es demasiado firme como para
permitir la diseminación de los organismos.
La Motilidad se pone de manifiesto por la turbidez difusa del medio de cultivo
alrededor del canal de la picadura.
 La no motilidad se caracteriza por el crecimiento producido exclusivamente a
lo largo de dicho canal.
Agar S.I.M.
INDOL
Después de agregar unas gotas del reactivo
de kovacs, si aparece un color rojo-cereza
dela capa del reactivo indica la presencia de
Indol.
Agar S.I.M.
Este medio de cultivo permite comprobar la formación de sulfuro, la producción de
indol y observar la movilidad.
PRODUCCION DE H2S
Se evidencia la formación de ácido
sulfihidrico por la formación de un
precipitado negro. Esto se logra mediante
las siguientes etapas:
Liberación de sulfuro a partir del tiosulfato
por acción enzimática de la bacteria.
Acoplamiento del sulfuro (S-2) con el ion
hidrogeno (H+) para formar gas H2S.
Detección del gas H2S mediante sales de
metales pesados como hierro, logrando la
forma de sulfuro del hierro, que es un
precipitado negro.
AGAR UREA
1. FUNDAMENTO
En el medio de cultivo, la tripteína y la glucosa,

aportan los nutrientes para el desarrollo de
microorganismos.
El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el
rojo de fenol es el indicador de pH.
Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio de la
enzima ureasa liberando amoníaco y dióxido de
carbono.
Estos productos alcalinizan el medio haciendo virar el
rojo de fenol del amarillo al rojo.
En este medio, la fermentación de la glucosa activa la
enzima ureasa, acelerando la velocidad del
metabolismo en aquellos organismos que hidrolizan
lentamente la urea, como especies de Enterobacter o
Klebsiella.
AGAR UREA O CALDO UREA
CALDO MRVP
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 7.0 g
Dextrosa 5.0 g
Fosfato dipotásico 5.0 g

Rojo de Metilo R.M.
INTRODUCCION
El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo entre 6.0 (amarillo)
y 4.4. (rojo). El pH al cual el rojo de metilo detecta ácido es
considerablemente menor que el de otros indicadore. A fin de provocar un
cambio de color, el organismo en estudio debe producir grandes cantidades
de ácido a partir del sustrato hidrocarbonado que emplea.
La prueba del R.M. detecta la producción de ácido y requiere de organismos
positivos que produzcan ácidos fuertes (láctico, fórmico, acético) a partir de
glucosa, por la vía de la fermentación ácida mixta.
COMPOSICION
CALDO MRVP: ROJO DE METILO (Indicador)
Rojo de metilo 0.1 g
Etanol al 95% 300 ml
Agua destilada 200 ml.
TECNICA
Inocular el caldo MRVP e Incubar a 37ºC por 24 horas, agregar 5 gotas del
reactivo rojo de metilo.
INTERPRETACION
Positivo: El desarrollo de un color rojo en el medio indica que la producción
de ácido es suficiente como para bajar el pH a 4.4.
Voges Proskauer V.P.
INTRODUCCION
El ácido pirúvico, componente formado en la degradación
fermentativa de la glucosa, es metabolizado a través de varias vías,
de acuerdo con los sistemas enzimáticos que poseen las diferentes
bacterias. Una vía produce acetoína (acetilmetilcarbinol), un
subproducto de reacción neutra de la vía Butilenglicol. Los organismos
que producen acetoína como principal subproducto del metabolismo
de la glucosa y forman cantidades menores de ácidos mixtos. En
presencia de oxígeno atmosférico e KOH al 40% , la acetoina se
convierte en diacetilo y el alfa naftol actúa como catalizador para
revelar un complejo de color rojo.
COMPOSICION
ALFA-NAFTOL KOH
Alfa naftol 5g KOH 40 g
Alcohol etílico absoluto 100 ml Agua 100 ml
TECNICA
Inocular caldo MRVP incubar 37ºC / 24 horas. Luego añadir alfa naftol
e KOH al 40%. agitar el tubo y dejarlo en reposo por l0 minutos.
INTERPRETACION
Positivo: desarrollo de un color rojo a los l0 minutos, revelando la
presencia de diacetilo, producto de oxidación de la acetoína.
TRIPLE AZUCAR HIERRO
T.S.I.
 A. INTRODUCCION
 La configuración del medio en pico de flauta (Pico y Fondo)
determina la existencia de 2 compartimientos La porción
inclinada, expuesta al oxígeno atmosférico es aerobia.
 - La porción inferior llamada fondo esta protegida del aire y
es relativamente anaerobia.
 La porción expuesta al oxigeno (INCLINADA), tiende a
tornarse alcalina por la descarboxilación oxidativa de
proteínas, y se desarrolla un pH alcalino y se vuelve rojo.
 En el fondo del tubo donde no hay oxígeno , la degradación
proteica es mínima y se pueden detectar incluso pequeñas
cantidades de ácido por la aparición de un color amarillo.
La producción de H2S se manifiesta por la producción de un color negro.

La presencia de gas se manifiesta por el resquebrajamiento del medio.
La acidez del medio se pone de manifiesto por un color amarillo y se representa por la letra A.
La alcalinidad del medio se pone de manifiesto por un color rojo y se representa por la letra K
T.S.I.
INTERPRETACION
 K/K: Microorganismo no fermentador
 Son incapaces de producir ácido por fermentación de la
glucosa o lactosa, no hay cambio en el medio.
T.S.I.
INTERPRETACION
 K/K: Microorganismo no fermentador
 Son incapaces de producir ácido por fermentación de la
glucosa o lactosa, no hay cambio en el medio.
 K/A Microorganismo no fermentador de lactosa

 El microorganismo es capaz de utilizar la glucosa pero
no a lactosa, por lo cual produce una pequeña cantidad
de ácido, ya que la concentración del medio es de 0.1%
de glucosa, por lo cual al comenzar a degradarse las
proteínas del pico se comienza a liberar aminas lo que
da un color rojo en el pico. En el fondo del tubo la
degradación proteica es insuficiente para contrarrestar el
ácido formado y se mantiene de color rojo.
T.S.I.
A/A Microorganismo fermentador de lactosa y glucosa
Estos microorganismos que degradan lactosa y glucosa producen
cantidades grandes ácido por que la concentración de lactosa es de
10/1 con respecto a la glucosa. Esta cantidad de ácido es suficiente
para contrarrestar la reacción alcalina producida por la degradación
de las proteínas. Dando un color amarillo en todo el medio.
CO2: Se observa resquebrajamiento del medio.
H2S: Se evidencia la producción de H2S por un precipitado de color
negro.
T.S.I.
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
 Lactosa:
 Glucosa:
 CO2 ó Gas:
 H2S:
T.S.I.
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
 Lactosa:
 Glucosa:
 CO2 ó Gas:
 H2S:
T.S.I.
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
 Lactosa:
 Glucosa:
 CO2 ó Gas:
 H2S:
T.S.I.
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
 Lactosa:
 Glucosa:
 CO2 ó Gas:
 H2S:
AGAR LIA
1. COMPOSICION
Peptona 3.0 g Tiosulfato de sodio 0.04 g
Extracto de levadura 3.0 g Púrpura de bromocresol 0.02g
Dextrosa 1.0 g Agar - Agar 15.0 g
Lisina 10.0 g Agua destilada 1000 ml
Citrato amonio férrico 0.5g

LISINA HIERRO AGAR
LIA
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
 DESCARBOXILACION
DESAMINACION
 LISINA
 H2S
LISINA HIERRO AGAR
LIA
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
DESAMINACION
 LISINA
 H2S
AGAR LIA
1. COMPOSICION
Peptona 3.0 g Tiosulfato de sodio 0.04 g
Extracto de levadura 3.0 g Púrpura de bromocresol 0.02g
Dextrosa 1.0 g Agar - Agar 15.0 g
Lisina 10.0 g Agua destilada 1000 ml
Citrato amonio férrico 0.5g

LISINA HIERRO AGAR
LIA
k/k
Microorganismo:
Lisina (+)
Descarboxilacion (+)
Desaminacion (-)
LISINA HIERRO AGAR
LIA
R/A
Microorganismo:
Lisina (-)
Descarboxilacion (-)
Desaminacion (+)
LISINA HIERRO AGAR
LIA
k/A
Microorganismo:
Lisina (-)
Descarboxilacion (-)
Desaminacion (-)
LISINA HIERRO AGAR
LIA
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
DESAMINACION
 LISINA
 H2S
LISINA HIERRO AGAR
LIA
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
DESAMINACION
 LISINA
 H2S
Medio OF Hugh-Leiffson
 FÓRMULA (en gramos por litro)
 Tripteína............................................2.0 .
 Cloruro de sodio.........5.0.
 Fosfato dipotásico..........0.30.
 Azul de bromotimol..................0.03.
 Agar..................................2.50.
 pH final: 7.1 ± 0.2
 Interpretación de los resultados
 El uso del hidrato de carbono, ya sea por
fermentación u oxidación, produce acidez
en el medio, con el consecuente viraje del
color verde al amarillo.
 Microorganismos oxidativos del hidrato de
carbono en estudio: producen una
reacción ácida solo en el tubo “abierto”.
Presentan poco o nulo desarrollo y
ausencia de producción de ácido en el
tubo “cerrado”.
 Se debe informar: producción de ácido
(A), ácido con gas (AG), alcalino (K) o sin
cambio (-).
 Microorganismos fermentadores
del hidrato de carbono en
estudio: producen una reacción
ácida en ambos tipos de tubos.
 Microorganismos que no utilizan el
hidrato de carbono en estudio: no
producen cambios ninguno de los 2
tubos, los cuales permanecen verdes.
I.M.V.I.C.
INDOL
ROJO DE METILO
VOGES PROSKAUER
CITRATO DE SIMMONS
I.M.V.I.C.
 Cuando se realizan estas cuatro pruebas simultáneamente, constituyen las
clasicas reacciones IMVIC.
 Indol: la formación de Indol a partir del triptófano se indica por un color
rojo después del agregado del reactivo Kovacs.
 Rojo de Metilo: la aparición de un color rojo en el tuno con caldo MRVP,
después de agregar unas gotas del reactivo rojo de metilo indica un
descenso del pH a 4.4 o menos, indicativo de la presencia de fuertes
fermentadores productores de ácidos mixtos.
 Voges Proskauer: la aparición de un color rojo en el tubo con caldo
MRVP, después de agregar alfa-naftol e KOH al 40%, indica la presencia de
acetoína producida a partir del piruvato por la vía del butilenglicol.
 Citrato de Simmons: el viraje del indicador azul de bromotimol a un color
azul alcalino indican que el microorganismo puede utilizar el citrato de sodio
como única fuente de carbono.
I.M.V.I.C.
Indol:
Rojo de Metilo:
Voges Proskauer:
Citrato de Simmons:
Microorganismo:
I.M.V.I.C.
Indol:
Rojo de Metilo:
Voges Proskauer:
Citrato de Simmons:
Microorganismo
INFUSION CEREBRO CORAZON (BHI)
1. COMPOSICION
Infusión cerebro de ternera 20.0 g Fosfato disódico 2.5 g
Infusión corazón de res 25.0 g Glucosa 2.0 g
Peptonas 10.0 g Agua destilada 1000 ml

AGAR SABAURAUD
1. COMPOSICION
Peptona 10.0 g
Dextrosa 40.0 g
Agar - Agar 12.5 g


Medios Cultivo 2016 5 Oct

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1. Medios para aislamiento.

2. Medios para crecimiento general.

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4. Medios para mantenimiento de cepas.

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Muestra una serie de reacciones.

4. MEDIOS PARA MANTENIMIENTO DE CEPAS.

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta