UNIVERSIDAD CÉSAR VALLEJO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA
INFORME ACADEMICO
“TECNICAS DE COLORACION EN OBSERVACION DE
CÉLULAS PROCARIOTAS”

Autor:

GOICOCHEA GARCIA PABLO

FRANCISCO

Asesor:

HECTOR FILAMIR YAIPEN

GONZALES
GUADALUPE - PERU 2021
 INTRODUCION

La finalidad de este trabajo es dar a conocer la observación de la célula

procariota gracias a un instrumento de precisión que permite observar,
identificar y describir la estructura de microorganismos a través del uso del
microscopio.
La célula es la unidad estructural y funcional de los seres vivos, es totalmente
autónoma y desarrolla funciones como las de cualquier ser vivo, para hacer
una comprobación de que todos los organismos vivos están formados por
células. Determinamos las diferencias morfológicas fundamentales entre
células procariotas y eucariotas.
Utilizando diferentes muestras de tipo biológicos y con la utilización de
reactivos se puede observar la célula, su forma y tamaño desde un
microscopio. Se observan las diferencias de la célula procariota y eucariota
de las muestras biológicas montadas en un laboratorio. Se comprobó la
presencia de las células en todos los organismos vivos, determinando sus
diferencias morfológicas fundamentales entre estas dos células.
Bueno por este momento solo les hablare de la coloración de la célula
procariota.
TECNICAS DE COLORACION Y PREPARACION DE MUESTRAS
I. FUNDAMENTO:
La coloración implica la penetración del colorante por fenómeno osmótico y su
fijación se debe a fenómenos de absorción de partículas o iones. Químicamente la
coloración es la unión de las moléculas del colorante con los elementos constituyentes
de la célula. Algunas regiones celulares tienen pH alcalino y se tiñen con los
colorantes ácidos; otros tienen pH ácido y se tiñen con colorantes básicos. Es
necesario señalar que tanto el núcleo como el citoplasma tienen características
anfóteras. Ya que para la preparación de la muestra para el microscopio tiene que
llevarse a cabo para una observación exitosa.
El mecanismo de coloración de las muestras biológicas puede ser afectados por:
❖ Pureza del colorante
❖ Concentración del colorante
❖ pH de la solución del colorante
❖ Temperatura del medio ambiente
❖ Sustancias adicionales (mordientes)
❖ Tiempo de coloración.
Los preparados microscópicos, constituyen una serie de preparados rutinarios de
laboratorios que tienen por objeto identificar en forma rápida el contenido de un
determinado tipo de muestra, con la finalidad de resolver algún problema de interés
particular. Los preparados microscópicos más frecuentes en Biología son:
❖ Preparados “en fresco”
❖ Preparados “en seco”
Los preparados “en fresco” son preparaciones microscópicas acuosas, que se
caracterizan por que la sustancia examen, no está adherida de un modo fijo a la
superficie de la lámina portaobjeto, por lo tanto, al ser manipulada ésta en diferentes
posiciones se corre el riesgo de perder u estropear el preparado.
Los preparados “en seco” son aquellos que sufren un procesamiento previo
(extensión, fijación y coloración), y se caracterizan porque la sustancia examen se
halla adherida a la superficie de la lámina portaobjeto y por lo tanto, al ser
manipulada ésta en diferentes posiciones no se estropea o pierde la muestra.
Es importante ejercitar al estudiante en el manejo y aplicación de estos factores que
inciden básicamente en la complementación del aprendizaje del estudio de
estructuras celulares, identificación de tejidos y microorganismo.

II. OBJETIVOS:
1. Diferenciar y explicar el fundamento de las distintas
coloraciones.
2. Realizar coloraciones con muestras biológicas.
3. Realizar preparados de muestras en fresco y en seco.
III. METODOLOGIA:

MATERIALES:
Encontrarás en el laboratorio:
-Microscopio óptico - Safranina
-Pipetas Pasteur - Eosina
-Goteros - Violeta de genciana
-Agua destilada - Cubeta de tinción
-Mechero y fósforo - Soporte para tinción
-Azul de metileno
-Pinzas de madera

Material de estudio:
❖ Agua estancada
❖ Hisopos
PROCEDIMIENTO:
PREPARADOS EN FRESCO:
1. Colocar una gota de agua estancada o agua de florero en una lámina
2. Colocar una laminilla cubreobjetos
3. Observar organismos unicelulares de vida libre (protozoarios, etc)
PREPARADOS EN SECO:
1. Colocar la muestra de epitelio bucal en la lámina.
2. Secar al medio ambiente o en mechero.
3. Realizar la coloración respectiva con azul de metileno.
4. Lavar con agua destilada y secar al medio ambiente.
5. Observa al microscopio.

IV. RESULTADOS Y CONCLUSIONES:

Dibuje lo observado en las muestras preparadas en la práctica. Diferencie entre el
preparado en Fresco y de un preparado en seco

Muestra: seco Muestra: fresca

Coloracion: simple Coloracion: simple

Aumento: x40 Aumento: x40

CUESTIONARIO:
1. ¿Cuáles son los pasos de la preparacion de muestra seca?
La preparación en seco es ideal para muestras que no necesitan hidratación. Esto
incluye, por ejemplo, un cabello, granos de polen, esporas, muestras de plantas,
insectos, etc.

❖ Si la muestra es totalmente opaca el primer paso consistirá en cortar

primero una sección muy fina de la muestra. Esto permitirá observarla en
el microscopio mediante luz transmitida.
❖ Colocamos la sección que hemos cortado en el centro del portaobjetos
con la ayuda de una pinzas. Si la muestra tiene un cierto volumen es
recomendable utilizar un portaobjetos con una cavidad cóncava.
❖ Para mantener la muestra fija en su sitio la cubrimos con un
cubreobjetos. Esto evita también que el objetivo llegue a tocar la muestra
en caso de cometer algún error durante la manipulación del microscopio.

La ventaja de las muestras en seco es que no tienen problemas de deshidratación

y pueden mantenerse preparadas para una observación posterior.

2. ¿Cuál es la característica de la preparación de la muestra fresca?

❖ La preparación en fresco es ideal para la observación de
microorganismos o de tejidos biológicos que requieren ser hidratados.
❖ Si la muestra es líquida colocamos unas gotas de la muestra en el centro
del portaobjetos con la ayuda de una pipeta.

3. ¿Por qué es importante conocer las técnicas de coloración?

La tinción de Gram es de gran utilidad para realizar el examen directo de
muestras clínicas, porque permite determinar la calidad de ellas, la respuesta
inflamatoria, la naturaleza y cantidad de microorganismos presentes y el germen
predominante en una infección mixta o con muestras contaminadas con biota
normal.
 OBSERVACIÓN Y RECONOCIMIENTO DE CÉLULAS
PROCARIOTES
I. FUNDAMENTO:
La principal característica de la célula
procariota es que carece de núcleo celular.
Las bacterias, los organismos procariotes
más representativos, comprenden, por una
parte, especies de importancia médica
puesto que producen una serie de
infecciones y padecimientos en el hombre
y en los animales, pero, por otra parte, una
gran mayoría representa beneficios para la
agricultura, la industria y la salud humana
y animal.
Para observar este tipo de células se utiliza
la Tinción Gram, técnica diseñada por el
médico danés Hans Christian Gram. Esta
consiste en poner en contacto las células
bacterianas con colorantes básicos como
violeta de genciana, utilizando la solución
de lugol como mordiente. Esto forma un
compuesto yodado que se fija fuertemente
en determinadas bacterias. Según la
coloración que adquieran, las bacterias se
clasifican en:

GRAM POSITIVAS: Se tiñen fuertemente con violeta de genciana y adquieren

una coloración violeta.
GRAM NEGATIVAS: Se tiñen muy superficialmente por lo que fácilmente se
decoloran con solventes orgánicos. Se utiliza adicionalmente la safranina o
fucsina, que se emplea como colorante de contraste, adquiriendo una coloración
rosada.
 La diferente tinción de bacterias se debe a la composición diferencial de sus
paredes bacterianas. Las bacterias Gram positivas poseen una pared celular con
mureina y ácido teitoico. En cambio, las Gram negativas tienen una pared mucho
más compleja que contiene, además del peptidoglucano, una asociación de
proteínas lípidos y lipopolisacáridos.

Además de la coloración esta técnica nos permite distinguir en las bacterias:

a) Morfología: cocos, bacilos, espirilos, cocobacilos, vibrios, etc.
b) Agrupación: pares, cadenas tétradas, racimos, sarcina:

A: forma de caña o bacilos

B: Redondos en líneas: estreptococos
C: redondos en cúmulos: estafilococos
D: Redondos en pares: diplococos
E: Forma de espirales: espirilos
F: En forma de coma: vibrios

II. OBJETIVOS:
❖ Observar y reconocer células procariotas.
❖ Reconocer los distintos tipos de bacterias según se tiñan o no con la
Tinción Gram.
❖ Comprender la importancia de la tinción Gram en la clasificación de
especies bacterianas en Gram positivas y Gram negativas.

III. METODOLOGÍA:
MATERIALES:
Encontrarás en el laboratorio:
• Microscopio óptico
• Alcohol acetona
Soluciones para la tinción:
• Fucsina o safranina
• Violeta de genciana
• Aceitedeinmersión
• Lugol
• Mechero de alcohol, fósforo
Material de estudio:
• Yogurt
• Vinagre de manzana
• Sarro dentario
 • Mondadientes

IV. PROCEDIMIENTO:
La tinción Gram se realizará sobre las muestras de yogur, sarro dentario y
vinagre (no industrial) que los alumnos traerán.

Bacterias del yogurt:

El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la
leche. A escala industrial se realiza la fermentación añadiendo a la leche
dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas bacterianas: el Streptococcus
termophilus, poco productor de ácido, pero muy aromático, y el
Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta preparación se podrán,
por tanto, observar dos morfologías bacterianas distintas (cocos y bacilos) y
un tipo de agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas).
Además, el tamaño del lactobacilo (unos 30µm de longitud) facilita la
observación, aunque no se tenga mucha práctica con el enfoque del
microscopio.

Bacterias del vinagre:

El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de la
fermentación espontánea del vino o de bebidas alcohólicas de baja
graduación. La acetificación del vino es producida por bacterias aeróbicas
del ácido acético, principalmente Acetobacter aceti, aunque también
Gluconobacter. Se trata de bacilos rectos con flagelos polares.
 Bacterias del sarro dental:
El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el
esmalte de los dientes. Está constituido principalmente por restos proteicos,
sales minerales y bacterias junto con sus productos metabólicos. La flora
bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las
condiciones que se den en el momento de hacer la preparación, pero suelen
abundar bacterias saprófitas, pudiéndose observar gran variedad de
morfologías: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.

Realizar los siguientes pasos para la tinción Gram de cada una de las 3
muestras indicadas.
1. Realizar una extensión de la muestra de cultivo bacteriano sobre un
portaobjetos
2. Secar ante un mechero.
3. Cubrir el preparado con violeta de genciana por 1 minuto.
4. Enjuagar la lámina con agua destilada
5. Añadir lugol por 1 minuto.
6. Lavar con agua destilada y decolorar con alcohol acetona.
7. Añadir fucsina o safranina y dejar que actúe por 1 minuto.
8. Lavar con agua corriente, secar
9. Coloque una gota de aceite de inmersión y observar al microscopio
con el objetivo de inmersión.

V. RESULTADO Y CONCLUCIONES:
Resultado:

Muestra: fresca
Coloración: compuesta
Aumento: x100
Muestra: seco
Coloración: compuesta
Aumento: x100

Muestra: Gram +
Coloración: simple
Aumento: x40

Muestra: Gram -
Coloración: simple
Aumento: x10
CUESTIONARIO:

1. Completar el Grafico:

2. Mencionar las características de las células procariotas.

3. ¿Cuál es la composición de la pared celular de las bacterias Gram

positivas?
La pared externa de la envoltura celular de una bacteria grampositiva
tiene como base química fundamental el peptidoglicano, que es un
polímero de N-acetilglucosamina, unido en orientación ß-1,4 con ácido
 N-acetilmurámico, a este se agregan por el grupo lactilo cuatro o más
aminoácidos.

4. ¿Cuál es la composición de la pared celular de las bacterias Gram

negativas?
La mayoría de las bacterias tienen una pared celular que es
químicamente Gram negativa. Este tipo de pared celular Gram-negativa,
consta de tres estructuras: una membrana interna, una capa de
peptidoglicano, y una membrana externa.

5. ¿Cuál es la importancia de la coloración Gram?

La tinción de Gram es de gran utilidad para realizar el examen directo de
muestras clínicas, porque permite determinar la calidad de ellas, la
respuesta inflamatoria, la naturaleza y cantidad de microorganismos
presentes y el germen predominante en una infección mixta o con
muestras contaminadas con biota normal.

VI. Conclusiones:
Las tinciones son herramientas que se utilizan en el laboratorio para el
diagnóstico y análisis microbiológico, la investigación biomédica y la
enseñanza de las ciencias médico-biológicas; la tinción tricrómica propuesta
 tiñe al núcleo de fucsia, al citoplasma de amarillo y tanta pared celular como
membrana plasmática de anaranjado, lo cual permite la identificación de las
principales estructuras celulares con gran claridad de manera sencilla. Esta
tinción novedosa podría implementarse como una práctica obligatoria en la
materia de biología molecular y celular, en la cual el estudio de las partes
fundamentales de la célula es un tema muy importante. Por su simplicidad
cualquier estudiante podría realizar esta tinción tricrómica y así aprender a
establecer rigurosos procesos metodológicos en el proceso formativo de
futuros ingenieros. Con base en la experimentación realizada, se determinó
que el tamaño de la muestra, la cantidad de colorante y el tiempo que se deja
actuar el colorante sobre la muestra son variables muy importantes para
proponer y estandarizar una tinción. Finalmente, la tinción se consideró
estandarizada después de obtener los resultados esperados cinco veces
seguidas.

VII. REFERENCIAS:
(Anonimo, 2013) (Uriarte, Célula Procariota, 2020)

Bibliografía
Anonimo. (15 de marzo de 2013). La coloración. Artículo de revisión. La coloración de gram y su
importancia en el diagnóstico microbiológico, pág. 2.

Uriarte, J. M. (21 de abril de 2020). Célula Procariota. Obtenido de Caracteristicas.co.:

https://www.caracteristicas.co/celula-
procariota/#:~:text=Se%20llama%20procariota%20a%20un,m%C3%A1s%20voluminos
as%20y%20m%C3%A1s%20complejas.