UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
“Dr. Wilfredo Erwin Gardini Tuesta”

ACREDITADA POR SINEACE

RE ACREDITADA INTERNACIONALMENTE POR RIEV

BASES MOLECULARES Y CELULARES DE LA

MEDICINA II
SEMESTRE ACADÉMICO: 2022-I

DOCENTES RESPONSABLES DE LA ASIGNATURA

SEDE LIMA : NÉLIDA MARÍN HUACHACA
ROMA NORIEGA CORRALES
FILIAL ICA : CESAR PACCO CARRIÓN
FILIAL CHINCHA : MIRIAM LEGUA BARRIOS
JUAN LÉVANO ÁVALOS
 Semana 11

EXTRACCIÓN DEL ADN

Es una biomolécula que almacena la información genética de la mayor parte de los
organismos vivos (una excepción son los retrovirus, que utilizan el ARN para guardar su
información genética).

Nucleótido
 Los nucleótidos se unen mediante enlace fosfodiéster.
 Los grupos fosfato están cargados negativamente y son polares, lo que le confiere al ADN una carga neta
negativa y lo hace altamente polar, características que son aprovechadas para su extracción.
 Tienen una fuerte tendencia a repelerse, debido a su carga negativa, lo que permite disolver al ADN en
soluciones acuosas y formar una capa hidratante alrededor de la molécula.
Funciones del material genético
1. Almacenamiento de información genética. El DNA debe contener un
registro grabado de instrucciones que determina todas las
características heredables de un organismo. El DNA debe contener la
información para el orden específico de aminoácidos de todas las
proteínas que sintetiza el organismo.

2. Replicación y herencia. El DNA debe contener la información para la

síntesis de nuevas cadenas de DNA (replicación).

3. Expresión del mensaje genético. El DNA también funge como director

de la actividad celular. La información codificada en el DNA tiene que
expresarse de alguna forma que participe en los sucesos internos de
la célula. La información del DNA debe usarse para dirigir el orden por
medio del cual los aminoácidos específicos se incorporan a una
cadena polipeptídica.
1. En un mortero colocar la muestra (3 fresas sin hojas y/o un trozo de plátano de 3 cm) e
incorporar 2 mL de NaCl 0.9% triturando por 1 min.
NaCl neutraliza la carga negativa de los grupos fosfato.

2. Añadir 10 mL de la solución de lisis y seguir triturando (~5 min) hasta obtener una
masa homogénea y semilíquida.
Componentes de solución de lisis: dodecil sulfato de sodio (SDS), EDTA, NaCl.
El SDS es un detergente que rompe las membranas y desnaturaliza proteínas.
SDS
El detergente ayuda a romper la bicapa de fosfolípidos de las membranas plasmáticas y la envoltura nuclear.
Cuando el detergente se pone en contacto con los lípidos éstos se separan de la membrana rompiéndola.
La estructura de los lípidos es similar a la del detergente y eso hace que se combinen, formando micelas.
EDTA: Se emplean para proteger el ADN de la acción de enzimas nucleasas; ellos capturan los Mg2+ y no
permiten que actúen como cofactores de las nucleasas.

Las altas concentraciones (5 M) de NaCl se emplean para prevenir la contaminación de la muestra con
polisacáridos que afectan la pureza del ADN, pudiendo inhibir la actividad de algunas enzimas como
polimerasas, ligasas y endonucleasas de restricción; la base para la separación de los polisacáridos de los
ácidos nucleicos, es su solubilidad diferencial en presencia de las altas concentraciones de NaCl los
polisacáridos precipitan bajo la acción de fuerzas centrifugas.
3. Agregar 2mL de acetato de sodio a la preparación, mezclar, para luego dejar reposar por
5 min. El acetato renaturaliza las cadenas de ADN.

4. Filtrar la preparación en un tubo de 16x150mm con la ayuda de un embudo cubierto

con gasa.

La solución salina ayuda a la precipitación en el alcohol.

La sal también ayuda a separar el DNA de las histonas.
5. Trasvasar 5-8mL del filtrado a un beaker pequeño e incorporar por las paredes 2
volúmenes de etanol frio e introducir rápidamente una bagueta delgada y girar sobre su
mismo eje a fin de recuperar el ADN bajo la forma de fibras.

El DNA es una molécula polar, pero la reacción con el etanol

a muy baja temperatura hace que se vuelva apolar e
insoluble en el etanol formándose un precipitado.
El etanol formará una capa en la superficie por ser menos
denso que la solución acuosa.
En presencia de etanol, se rompe la capa hidratante del ADN
y quedan expuestos los grupos fosfato.
Bajo estas condiciones se favorece la unión con cationes
como Na+ que reducen las fuerzas repulsivas entre las
cadenas de nucleótidos y permiten que el ADN precipite.
Por otro lado, la carga neta negativa del ADN le permite
unirse a moléculas y matrices inorgánicas cargadas
positivamente.
6. Colocar la bagueta con el ADN extraído en un tubo 16x150mm conteniendo 1 mL de
solución salina citratada para resuspenderlo y reservarlo para su uso en el siguiente
experimento.

7. Obtener más fibra de ADN para reconocer su carácter ácido. Para ello dejar caer en las
hebras un colorante básico como el azul de metileno.
Las pentosas se deshidratan en una solución ácida dando furfural que al reaccionar con
el orcinol del reactivo de Bial y en presencia de FeCl3, dan un producto de condensación
de color verde-azulado.
1. En un tubo 16x150 mm colocar 1 mL de ADN extraído en el experimento anterior y en
otro tubo colocar 1 mL agua destilada.

2. Agregar a cada tubo 3 mL de Reactivo de Bial.

3. Calentar cuidadosamente cada tubo en la llama de un mechero hasta que la solución

comience a hervir.

4. Observar y anotar el color que aparece en cada tubo de ensayo determinando si la

reacción es positiva o negativa.