UNIVERSIDAD DEL VALLE DE MÉXICO

LICENCIATURA EN ODONTOLOGIA
PROCESOS BIOLOGICOS

PRACTICA 2B
EXTRACCION DE ADN

ALUMNO: Quetzally Valdivia Gerardo

DOCENTE: L.Q.C. ELCE GUERRERO CANO

CD. VICTORIA, TAMAULIPAS, MÉXICO A ENERO DE 2023

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EXTRACCION DE ADN

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 INDICE

1.1 Práctica 4…………………………………………………………………………… 4

1.2 Objetivo ……………………………………………………………………………….4
1.3 Introducción ………………………………………………………............................4
1.4 Material y equipo ………….................................................................................5
1.5 Procedimiento …………………………………………………………………………6
1.6 Resultados y Observaciones ………………………………………………………. 7
1.7 Conclusiones …………………………………………………………………………. 8
1.8 Bibliografía ……………………………………………………………………………. 8
1.9 Cuestionario……………………………………………………………………………8

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 PRACTICA 4

1.1 NOMBRE DE LA PRACTICA:

EXTRACCION DE ADN

1.2 OBJETIVO

a) Demostrar que puede extraerse el ADN de un plátano con instrumental de

cocina.

1.3 INTRODUCCION

El ADN es una molécula que almacena las “instrucciones” que dirigen el desarrollo
de cualquier ser vivo y que es portadora a su vez de la información hereditaria. Se
trata de una molécula de proporciones gigantescas comparada con el tamaño
celular y a su vez está formado por dos cadenas antiparalelas y complementarias
formadas por la sucesión de desoxirribonucleótidos.

Estos nucleótidos a su vez están compuestos cada uno por un monosacárido

(pentosa: desoxirribosa), una molécula de ácido fosfórico, y una basa nitrogenada
que puede ser: Guanina, citosina, adenina o timina. Las moléculas de ácido
fosfórico y desoxirribosa se unen y quedan hacia fuera formando el “esqueleto
externo” de azúcar fosfato, mientras que las bases quedaran enfrentadas
internamente con las de la cadena complementaria apareando A-T y C-G, lo que
constituye realmente la información genética; la sucesión o secuencia de bases
nitrogenadas de una cadena.

La extracción de ADN desde una célula requiere una serie de etapas básicas. En
primer lugar, se debe romper la pared celular (en caso de que la presenten), luego
la membrana plasmática, para finalmente acceder al núcleo celular. A
continuación, también se debe fragmentar la membrana nuclear para liberar al
ADN, protegerlo de enzimas que puedan degradarlo, y aislarlo por precipitación en
alcohol.

En nuestro trabajo práctico de laboratorio, la extracción de ADN comenzará por

lisar mecánicamente la pared de las células vegetales mediante el uso de un
mortero, posteriormente se agregará un detergente que romperá a la membrana
celular y nuclear, liberando el contenido molecular hacia el agua, en ese momento,

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el agua tendrá disuelto ADN y todo un surtido de restos moleculares tales como:
ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción.

El agregado de los iones salinos (NaCl) será atraído por las cargas negativas del
ADN, permitiendo una mejor disolución de esta macromolécula. Las proteínas
asociadas al ADN, como también aquellas que puedan degradarlo serán
destruidas por proteasas presentes en el jugo. Sólo queda extraer el ADN de esa
mezcla acuosa para lo cual se utilizará alcohol.

La extracción consiste en el aislamiento y purificación de moléculas de ADN y se

basa en las características fisicoquímicas de la molécula. El ADN está constituido
por dos cadenas de nucleótidos unidas entre sí formando una doble hélice.

Los nucleótidos están integrados por un azúcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y

una base nitrogenada (adenina, guanina, timina o citosina). La unión de los
nucleótidos ocurre entre el grupo fosfato y el azúcar, mediante enlaces
fosfodiéster, dando lugar al esqueleto de la molécula. Las bases de cadenas
opuestas se unen mediante puentes de hidrógeno y mantienen estable la
estructura helicoidal.

Los grupos fosfato están cargados negativamente y son polares, lo que le

confiere al ADN una carga neta negativa y lo hace altamente polar, características
que son aprovechadas para su extracción. Los grupos fosfato tienen una fuerte
tendencia a repelerse, debido a su carga negativa, lo que permite disolver al ADN
en soluciones acuosas y formar una capa hidratante alrededor de la molécula.

Pero, en presencia de etanol, se rompe la capa hidratante y quedan expuestos los

grupos fosfato. Bajo estas condiciones se favorece la unión con cationes como
Na+ que reducen las fuerzas repulsivas entre las cadenas de nucleótidos y
permiten que el ADN precipite. Por otro lado, la carga neta negativa del ADN le
permite unirse a moléculas y matrices inorgánicas cargadas positivamente.

Durante el proceso de lisis las interacciones entre las moléculas que conforman la
pared, la membrana celular y nuclear se modifican o destruyen permitiendo que
los ácidos nucleicos se liberen. Se utilizan soluciones básicas, detergentes o
agentes caotrópicos que permiten disolver la membrana celular, así como
inhibidores para inactivar las enzimas que degradan el ADN. Muchas soluciones
de lisis contienen también EDTA, que forma un complejo con los iones de Mg2+ e
impide el funcionamiento de las DNasas. Los componentes celulares no solubles
como el material fibroso y proteínas que permanecen en solución se separan del
ADN por centrifugación

1.4 MATERIAL Y EQUIPO

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MATERIAL
➢ 2 Vaso de precipitado
➢ 2 Embudo
➢ 2 Papel filtro
➢ 2 Tubo
➢ 2 Mortero
➢ Probetas de 100 ml

Sustancias:
➢ Shampoo Pantene Pro-V
➢ Jabón líquido para trastes
➢ Alcohol frio 96
➢ Plátano
➢ Tomate
➢ Sal
➢ Agua destilada
➢ Bicarbonato de sodio

1.4 PROCEDIMIENTO

A. Procedimiento Casero
1. Cogemos la mitad de un plátano y lo depositamos en un mortero.
2. aplastamos el plátano facilitando la labor con algo de agua destilada
En un vaso de precipitado mezclamos una 10ml lavavajillas y dos pizcas de sal de
cocina, todo ello evitando hacer espuma
4. A la disolución anterior le añadimos una cucharada del plátano aplastado y se
mezcla unos 5 minutos sin producir espuma.
5. Filtramos la mezcla obtenida a través de un filtro o gasa situado sobre un
embudo. Deberemos obtener al menos 5 mL de disolución. Se pasa a otra taza.
6. Colocamos la disolución filtrada en un tubo de ensayo ocupando una cuarta
parte de éste. Después introducimos alcohol cubriendo la mitad de éste.
7. Se observa al poco tiempo que una sustancia blanquecina (ADN) comienza a
subir.
8. Con la ayuda de unas pinzas o de un palillo extraemos el ADN de la mezcla.

B. Protocolo de Extracción de DNA vegetal

1. Preparar 100 mL de buffer de lisis casero.
2. Colocar el fruto en una bolsa tipo ziploc, cerrarla muy bien y triturar el tejido
hasta homogenizar la muestra.
3. Agregar 10 mL del buffer de lisis a la bolsa.
4. Continuar triturando por 2 minutos más.

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5. Pasar el contenido de la bolsa al filtro de café para separar el tejido triturado y
obtener la fase líquida en un recipiente de 200 mL. Filtre la muestra por lo menos
10 minutos.
6. Colocar 25 mL de la fase líquida filtrada en un tubo tipo Falcón de 50 mL, y
agregar 25 mL de etanol al 95% frio.
7. Esperar unos minutos a que precipite el DNA.
8. Recuperar la madeja de DNA con ayuda de una varilla de vidrio. Colocar la
madeja de DNA en un tubo tipo eppendorf de 1.5 mL que contenga 50-100 µL de
agua destilada.

1.7 Resultados y observaciones

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1.6 CONCLUSIONES
En esta práctica estuvimos extrayendo el ADN de un Tomate, al igual que todos
los seres vivos, las plantas, incluidas las que nos sirven de alimento como el
tomate, están formadas por células. Las células son unidades muy pequeñas, sólo
visibles al microscopio.
En su interior las células albergan el ADN, la molécula que contiene la información
para que los seres vivos se desarrollen y lleven a cabo sus funciones.

1.7 BIBLIOGRAFIA

1.8 CUESTIONARIO

1.- ¿Para qué sirve la disolución salina que ponemos en la mezcla?

Separa proteínas unidas ADN y neutraliza cargas negativas de los grupos fosfato

2.- ¿Para qué utilizamos el lavavajillas?

Rompe membranas y ataca los lípidos

3.- ¿Para qué se utiliza el alcohol?

Disminuye la constante solución acuosa y el frio separa y precipita el ADN
agrupándolo-plagando y lo hace visible.