SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

CABALLERO VILLAMIZAR, Diego Andrés; BARRERA TORRES, Diana

Patricia; LIZARAZO GARCIA, Eliana; VILLAMIZAR RAMIREZ, Silvia
Fernanda
1
Universidad de Pamplona, Facultad de Ingenierías y arquitectura

Departamento de Alimentos, Microbiología general, Colombia, mayo de

2023

RESUMEN
La siembra y aislamiento de microorganismos es un proceso utilizado en microbiología
para obtener un cultivo puro de un microorganismo a partir de una muestra mixta o
compleja. La siembra implica la transferencia de una pequeña cantidad de la muestra
original a un medio de cultivo estéril, donde el microorganismo crecerá y se multiplicará.
El aislamiento se realiza para separar los diferentes tipos de microorganismos presentes en
la muestra y obtener un cultivo puro de un solo tipo de microorganismo, por lo tanto, en
esta práctica de laboratorio se aplicaron diferentes tipos de siembras ejecutadas en medios
de cultivo sólidos y líquidos para finalmente distinguir los métodos de siembra y como es el
crecimiento de los microorganismos como tal.
Palabras clave: cajas de Petri, asas, medios de cultivo, tubos de ensayo

ABSTRACT
Seeding and isolation of microorganisms is a process used in microbiology to obtain a pure
culture of a microorganism from a mixed or complex sample. Seeding involves the transfer
of a small amount of the original sample to a sterile culture medium, where the
microorganism will grow and multiply. The isolation is carried out to separate the different
types of microorganisms present in the sample and obtain a pure culture of a single type of
microorganism, therefore, in this laboratory practice, different types of sowings were
applied, carried out in solid and liquid culture media. to finally distinguish the sowing
methods and how is the growth of microorganisms as such.
Keywords: Petri dishes, loops, culture media, test tubes
muestra (inóculo) en un medio adecuado,
con el fin de iniciar
Introducción
Siembra un cultivo microbiano, para su desarrollo
y multiplicación.
Sembrar o inocular es introducir Una vez sembrado, el medio de cultivo se
artificialmente una porción de incuba a una
temperatura adecuada para el crecimiento.
Tipos de siembra
Siembra por inmersión: se coloca el
inóculo en una placa o caja de Petri y
sobre el mismo se vierte el medio de
cultivo previamente fundido. Este método
se utiliza para microorganismos aerobios.
Siembra en doble capa: se procede de la
misma manera que por inmersión. Una
vez solidificado el medio se vierte una
cantidad extra de medio necesaria para
cubrir la capa anterior (generalmente 10
ml. aprox.). Este método se utiliza para
microorganismos anaerobios facultativos
y microaerofílicos.
Siembra en superficie: se vierte sobre
una placa de Petri el medio de cultivo
fundido, se deja solidificar y se coloca
sobre la superficie el inóculo. Con ayuda
de una espátula de Drigalsky se extiende
el inóculo hasta su absorción total por el
medio de cultivo. Este tipo de siembra se
recomienda para microorganismos
aerobios estrictos.
Siembra volumétrica: Este método de
siembra consiste en sembrar una muestra
liquida cuyo volumen no puede ser
predeterminado, en medio de cultivo
sólidos o líquidos. Por ejemplo: En las
muestras de exudado vaginal tomadas con
pipetas de Pasteur, no puede determinarse
el volumen, ya que este tipo de pipeta
carece de escala de graduación, sin
embargo, la orina empleada en el
urocultivo o la sangre para el hemocultivo
se puede determinar con pipeta o
jeringuilla respectivamente el volumen
que será sembrado.
Siembra masiva: Cuando se desea
realizar una siembra masiva se puede
utilizar la espátula de Driglaski. En este
caso la gota de muestra liquida se esparce
con la espátula por toda la superficie del
medio de cultivo sólido imprimiéndo un
movimiento en espiral. La siembra
masiva también se puede realizar con un
hisopo grueso embebido de un cultivo
líquido, procediendo a su deslizamiento
sobre toda la superficie de una placa de
agar.
Siembra en estría: se vierte sobre una
placa de Petri el medio de cultivo fundido
y se deja solidificar. (Técnicas y tipos
de sembrado, s/f)
Aislamiento
Es la separación de un determinado
microorganismo del resto de
microorganismos que le acompañan. El
método más usual es la siembra por estría
sobre un medio de cultivo sólido
adecuado dispuesto en una placa de petri.
Para ello se toma una pequeña cantidad
de muestra con un asa de platino y se
reparte sobre la superficie del medio de
cultivo. Sobre el medio quedan separadas
e inmovilizadas las células bacterianas.
Tras la incubación en condiciones
adecuadas, cada célula viable origina una
colonia visible resultado de sucesivas
divisiones celulares. Cada colonia
bacteriana tiene unas características
determinadas en cuanto a su forma,
borde, elevación, tamaño, consistencia,
etc. Los tipos de bacterias presentes en la
muestra original es visible como tipos
diferentes de colonias. A partir de
colonias separadas suficientemente es
posible obtener un cultivo puro de cada
uno de los tipos de bacterias presentes en
la muestra original. (Soto, 2007)
 Los tubos contenían el cultivo liquido y
Materiales con ayuda del mechero se flameo el asa
redonda y posteriormente se tomo el
4 cajas de Petri con agar nutritivo, 2 tubos
microorganismo S. Aureus con el asa y se
de ensayo, 1 asa redonda, caldos BHI
introdujo en el tubo y se agito el asa,
sólidos y líquido, mechero.
rápidamente se tapo el tubo de ensayo.
Metodología
Resultados
Preparación de medios de cultivo caldo
Una vez se sembraron los
BHI liquido
microorganismos se obtuvieron los
Una vez se tiene la cantidad de muestra siguientes resultados.
del medio líquido, se agrego en los tubos
de ensayo 20 mL de agua destilada y
seguidamente se agrego el cultivo líquido,
se agito hasta disolverse y se flameo en el
mechero por unos segundos,
posteriormente se llevo a refrigeración.
Preparación de medios de cultivo caldo
BHI solido
Una vez se tiene la cantidad de muestra
del medio sólido, seguidamente en un
Erlenmeyer se agregó el medio con 80
mL de agua destilada y se mezcló hasta
disolverse completamente, finalmente en
un fogón se calentó el medio hasta Figura 1. Siembra masiva No.2 en caja de petri
ebullición y se retiró inmediatamente.
Siembra de microorganismos en caja
de Petri
Se flameo el Erlenmeyer con ayuda del
mechero, el Erlenmeyer contiene el
cultivo sólido, una vez el cultivo esta
liquido se distribuyó en 4 cajas de Petri y
se dejo enfriar, seguidamente se flameo el
asa redonda y se extrajo S. Aureus y se
paso el asa redonda inmediatamente por
la caja de Petri donde esta el medio de
cultivo y sembró por medio masiva y
agotamiento.
Siembra de microorganismos en tubos Figura 2. Siembra masiva No.2 en caja de petri
de ensayo

Figura 3. Siembra por agotamiento No. 1 en caja
de petri
Figura 4. Siembra por agotamiento No. 2 caja de
petri.
Figura 5. Siembra por tubos (medio liquido)
Analisis de los resultados
En la siembra masiva No.1 y No.2 se
obtuvo que la forma del cultivo era
irregular, elevacion plana y borde
ondulado, ademas esta presento un color
crema.
En la siembra por agotamiento No. 1 y
No.2 se presentaron colonias circulares y
elevadas, bordes entero continuos
Por otro lado en las siembras en tubos los
cuales contenian el medio liquido se
observo que el crecimiento del
microorganismo fue de turbidez fina
uniforme ya que, el crecimiento fue fino y
totalmente disperso.
Conclusiones
La siembra y el aislamiento de
microorganismos son técnicas
fundamentales en el estudio y la
investigación de la microbiología. La
siembra es el proceso de transferir
microorganismos a un medio de cultivo
para permitir su crecimiento y
reproducción en un ambiente controlado,
mientras que el aislamiento es el proceso
de separar microorganismos individuales
en colonias puras para su estudio
individual.
La bacteria S.Aureus es un coco inmóvil,
su crecimiento se desarrolla entre los 7°C
hasta los 47,8°C, teniendo su óptimo de
crecimiento en 35°C.
El Agar (BHI) es un medio de uso general
adecuado para el cultivo de una amplia
variedad de tipos de organismos,
incluidos las bacterias, levaduras y
hongos filamentosos.
Bibliografía
Técnicas y tipos de sembrado. (s/f).
scientist-site. Recuperado el 2 de
mayo de 2023, de
https://labdemicrobiologia.wixsite.com
/scientist-site/t-cnicas-y-tipos-de-
sembrado
Soto, J. (2007). Introducción.
PharmacoEconomics Spanish
Research Articles, 4(S1), 1–2.
https://doi.org/10.1007/bf03320921