PRÁCTICA 7. ELECTROFORESIS DE ACIDOS NUCLEICOS EN GELES DE AGAROSA.

E QFB Janeth Rodríguez López 190029

Universidad Autónoma de Ciudad Juárez, Instituto de Ciencias Biomédicas, Departamento de
Ciencias Químico-Biológicas, Laboratorio de Biología Molecular, Grupo B-L1

Palabras clave: electroforesis, cátodo, ánodo, ácidos nucleicos, geles de agarosa.

Introducción. En un entorno de laboratorio, la electroforesis se desarrolló a principios de la década de 1930

para separar moléculas según su tamaño y carga. Este método se basa en cómo las moléculas cargadas
eléctricamente se mueven de diferentes maneras a través de la superficie hidratada de un medio sólido. Cuando
una corriente atraviesa el medio, las moléculas con cargas negativas gravitan hacia el ánodo (+) y las moléculas
con cargas positivas son atraídas hacia el cátodo (-) (González, 2022).

Imagen 1. Diferentes maneras en que las moléculas cargadas eléctricamente se pueden mover.

Además, la electroforesis se utiliza para separar moléculas según su tamaño. En este proceso se utiliza un
medio sólido poroso, como geles de poliacrilamida o geles de agarosa, que lo hace posible. Para un tamaño de
poro determinado, cuanto más grande sea la molécula, más difícil le resultará migrar hacia el cátodo o el ánodo
(González, 2022).

Tipos de electroforesis

Dependiendo de cómo se haga, existen varios tipos de electroforesis:

• La electroforesis de acetato de celulosa: es un tipo de electroforesis donde el soporte es papel que

se coloca horizontalmente en un medio hidratado. Su uso permite separar rápidamente las proteínas.
• Electroforesis en gel de agarosa: en este procedimiento se emplea un gel de agarosa como soporte
sólido. Las moléculas grandes como los ácidos nucleicos se separan con frecuencia mediante esta
técnica.
• Electroforesis en gel de poliacrilamida: El gel de poliacrilamida se utiliza como soporte en este tipo
de electroforesis. Este gel está considerado como uno de los mejores soportes de electroforesis, pero
tiene un inconveniente: es neurotóxico, por lo que debe usarse con precaución.
• Electroforesis capilar: en este procedimiento, un tubo delgado de sílice fundida sirve como soporte. La
electroforesis capilar, a diferencia de los otros tipos, necesita un dispositivo que pueda detectar la
migración de las moléculas en el soporte y que pueda enviar la información a una computadora. En
comparación con otras formas de electroforesis, este método es bastante efectivo y utiliza menos
muestra y reactivo.
• El enfoque isoeléctrico: es un método que utiliza un campo eléctrico y un gradiente de pH para separar
moléculas. Esta particularidad mejora la resolución de la técnica, mejorando la capacidad de separación
de las moléculas.
 • La electroforesis en gel de poliacrilamida y el enfoque isoeléctrico se combinan para crear una
electroforesis bidimensional. Hace posible separar de manera más efectiva soluciones que contienen
una variedad de proteínas (González, 2022).

Metodología. En este experimento se utilizaron muestras de DNA plasmídico, DNA de microalgas y ARN total
de levaduras, ya hechas en clases pasadas, en las cuales se les agregó a las muestras de DNA 50 μl de agua
estéril y a las muestras de ARN se les agregó 50 μl de agua PBS. Después en un papel se puso 5 μl de buffer
de carga (colorante con glicerol) y luego se agregó 10 μl de ADN, se resuspendio ahí mismo. Luego se transfirió
10 μl en el pozo de la cámara de electroforesis rompiendo la tensión superficial del buffer TAE 1X con la punta
de la micropipeta en la primera fila. Repitiendo este paso con el ARN, pero en la segunda fila y se dejo 40
minutos en la cámara de electroforesis con 70 voltios.

Resultados y discusión. Los fragmentos de ADN y ARN se pueden dividirse por tamaño y carga mediante la
técnica de electroforesis en gel, la cual al aplicarse una corriente eléctrica se moverán las moléculas a través
del gel en varias direcciones o a varias velocidades, separándose unas de otras, dependiendo de su tamaño y
carga. La matriz de gel actúa como un tamiz dejando que las moléculas más cortas pasen por los poros del gel
más deprisa que las moléculas más largas (Qué es la electroforesis y tipos de electroforesis, 2022).

(-)
1 2 3 4
Muestras de ADN

1 2 3 4

Muestras de ARN

(+)
Imagen 2. Resultados de la electroforesis de ADN y ARN.

Como resultado vemos que las muestra de ADN 1 recorrió 3,000 pb y la muestra 2 se recorrió a 15,000 bp, esto
quiere decir que pueden ser fragmentos de ADN largos o grandes y por lo general estos se mantienen muy
cercas del pozo, ya que son atrapados y viajan más lentamente en la muestra 3 y 4 no se puede apreciar nada.
Esto se puede deberse ya que las muestras pequeñas no se pueden visualizar en la electroforesis.

En las muestras de ARN también se puede observar que la muestra 1 se desplazo a 15, 000 bp y la muestra 2
recorrió 1,000 bp, por lo cual son ARN con fragmentos largos. En muestra 3 y 4 recorrieron mucho y a lo mejor
podrían ser fragmentos pequeños ya que están mas cercas del ánodo.

El equipo de electroforesis se conecta a una fuente de corriente continua directa y se somete a tensión. Las
moléculas cargadas contenidas en las muestras penetran en los capilares del gel. Las moléculas de carga neta
negativa migran hacia el electrodo positivo del aparato de electroforesis (ánodo), mientras que las moléculas
de carga neta positiva migran hacia el electrodo negativo (cátodo). Dentro de ciertos márgenes, cuanto más
fuerte sea el campo eléctrico, más rápido migran las moléculas. El tampón sirve a la vez para conducir la
electricidad y para controlar el pH. Efectivamente, el pH tiene una influencia sobre la carga y la estabilidad de
las moléculas biológicas (Qué es la electroforesis y tipos de electroforesis, 2022).
Conclusión. Podemos concluir que se pudo cumplir con el objetivo de separas los ácidos nucleicos extraídos
y se interpreto los diferentes patrones de bandas en las muestras de ADN y ARN. Por lo general se vio que
las muestras se desplazaron bastante y que la mayoría resultaron fragmentos simples o largos.

Detectar la presencia de fragmentos de DNA en una muestra, es una necesidad básica en muchos experimentos
de biología molecular.

Bibliografía

1. González, R. M. (2022, 21 septiembre). Electroforesis: ¿Qué es y para qué sirve? Genotipia.

https://genotipia.com/electroforesis/
2. Qué es la electroforesis y tipos de electroforesis. (2022, 25 marzo). Kapital Inteligente.
https://www.kapitalinteligente.es/que-es-la-electroforesis/