PRÁCTICA NÚMERO 5

CITOMETRÍA HEMÁTICA

DETERMINACIONES INCLUÍDAS:
1. HEMOGLOBINA.
2. HEMATOCRITO.
3. VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN ERITROCITARIA.
4. ÍNDICES ERITROCITARIOS:
- NÚMERO DE GLÓBULOS ROJOS.
- VOLUMEN GLOBULAR MEDIO (VGM).
- HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (HCM).
- CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA
(CHCM).

INTRODUCCIÓN:
La sangre es un tejido que circula dentro del sistema virtualmente cerrado de los
vasos sanguíneos. Está compuesta por elementos figurados (eritrocitos, leucocitos
y plaquetas) y por el plasma (que es el líquido que mantiene a las células en
suspensión). La sangre es un líquido viscoso formado por eritrocitos (glóbulos rojos,
hematíes), leucocitos (glóbulos blancos) y plaquetas (trombocitos). Es opaca a
causa del gran número de células en suspensión, y de color rojo por la hemoglobina
de los eritrocitos. La sangre en adultos sanos constituye alrededor del 6 al 8 % del
peso del cuerpo. El volumen de sangre normal en la mujer se ha estimado en unos
65 mL por Kg de peso corporal y en el hombre en 79 mL por Kg de peso corporal.
En base a esta estimación, un hombre de 70 Kg de peso contendrá alrededor de
5,500 mL de sangre. El volumen de sangre varía en general de 2,000 - 2,900 mL/m2
de superficie corporal. El volumen de sangre, es más proporcional al área que al
peso del cuerpo. El plasma la porción líquida de la sangre, es una solución acuosa
que contiene un gran número de iones, moléculas inorgánicas y moléculas
orgánicas. El plasma es de color pajizo, el volumen normal del plasma es cercano
al 5 % del peso corporal, o aproximadamente 3,500 mL en un hombre de 70 Kg. El
contenido de sólidos del plasma es de 8 - 9 %, su densidad es de 1.026 y su pH es
alrededor de 7.4.

HEMOGLOBINA. Es la proteína altamente especializada del eritrocito ocupa

alrededor del 33% del volumen del eritrocito. La hemoglobina está constituida de
cuatro subunidades cada una de las cuales tiene una cadena de globina
rodeando a un grupo hemo. Hay cuatro cadenas polipeptídicas que constituyen a
la globina, estas son , β,  y  que se representan en pares, así el tipo de
hemoglobina está determinado por las cadenas que contiene la globina. Se
encuentran tres tipos de Hb dependiendo de la combinación de los pares de
cadenas, normalmente un par de cadenas  se combinan con un par de cadenas
β,  o  generando: hemoglobina A, constituida por 4 cadenas o subunidades
proteínicas, 2 se designan como  y 2 como β y se representa como ()2(β)2, siendo
la principal en el adulto con una concentración del 97%. La hemoglobina A2 ()2()2
y la hemoglobina fetal ()2()2 están en proporción mínima 2.5 % y menos del 1 %
respectivamente. La cantidad de hemoglobina F o hemoglobina fetal es
normalmente alta, en la infancia desciende a medida que aparece la
hemoglobina A. Las cadenas , contienen 141 aminoácidos y las cadenas β 146
aminoácidos. Considerando el hecho de que hay dos cadenas  y dos cadenas β
en toda la molécula de globina, se puede concluir que contiene un total de 574
aminoácidos, con 4 grupos hem (uno por cada cadena). El hierro contenido en
cada grupo hemo está unido coordinadamente a los 2 residuos de histidina,
probablemente en las posiciones 58 y 87 de las cadenas  y en las posiciones 63 y
92 de las cadenas β. Posiblemente la histidina 58 en la cadena  y la histidina 63 en
la cadena β, son desplazadas reversiblemente por el oxígeno cuando la
hemoglobina es oxigenada. Las cuatro cadenas de globina se unen por enlaces
no covalentes en un ordenamiento tetraédrico que da a la molécula de
hemoglobina una forma casi esférica. Si el orden de los aminoácidos de la cadena
peptídica difiere de las variedades  o β habituales o si se produce una
recombinación anómala, se producen hemoglobinas anormales, causantes de
hemoglobinopatías. Las funciones principales de la hemoglobina son:
1. Transporte de oxígeno de los pulmones a los tejidos y del bióxido de carbono
de los tejidos a los pulmones. Cada g de hemoglobina puede transportar
1.34 mL de oxígeno.
2. La hemoglobina participa en la regulación ácido-básico, eliminando bióxido
de carbono a los pulmones y amortiguando los cambios de pH (HbO2/HHb).

HEMATOCRITO. Representa la proporción de glóbulos rojos a plasma, en la sangre

circulante y se expresa en volúmenes por ciento. Este ha sido llamado valor de
hematocrito, volumen de eritrocitos empaquetados o packed cell volume (Hto,
VEE, PCV). Resulta útil conocer el valor de hematocrito para el diagnóstico
inespecífico de anemias. Normalmente, en el adulto las cifras oscilan entre 36 y 50
%. En el niño, los valores normales son más altos, al nacer y durante el primer mes se
van reduciendo progresivamente hasta el primer año, para reascender
paulatinamente durante la infancia y adolescencia. El valor de hematocrito
depende, en primer lugar, del número de eritrocitos circulantes, pero también de
la forma y tamaño de los mismos, de ahí su limitado interés clínico.
Aproximadamente la cifra del volumen de hematocrito nos indica el número de
eritrocitos por milímetro cúbico con sólo multiplicarla por 100,000 y sumarle a esta
cifra 400,000 en hombres y 300,000 en mujeres. Así, un volumen de hematocrito de
47% corresponde a 5,100,000 eritrocitos/mm3 (hombre) y un volumen de
hematocrito de 42% corresponde a 4,500,000 eritrocitos/mm3 (mujer). En un
examen hematológico además de determinar la concentración de hemoglobina,
el número de eritrocitos y el valor de hematocrito, se puede establecer una relación
entre estas cifras para determinar tres índices hematológicos útiles en el diagnóstico
diferencial de las anemias, siendo los siguientes:
1. Volumen corpuscular medio (VCM) permite conocer el volumen medio de
cada eritrocito, relacionando el volumen de hematocrito con el número de
glóbulos rojos.
2. Hemoglobina corpuscular media (HCM), nos indica el promedio de Hb
contenida por eritrocito, relacionando el valor de la concentración de
hemoglobina con el número de glóbulos rojos.
3. Concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM), compara la
concentración promedio de hemoglobina dentro de cada eritrocito, con el
 volumen promedio de cada eritrocito, relacionando el valor de la
concentración de hemoglobina con el volumen de hematocrito.

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN ERITROCITARIA. La velocidad de sedimentación

eritrocitaria (VSE) o velocidad de sedimentación globular (VSG), se usa
clínicamente como una prueba inespecífica para descubrir la presencia de una
probable infección o proceso inflamatorio. Tiene amplio uso como medio de vigilar
el estado de las enfermedades inflamatorias crónicas como la artritis reumatoide.
La velocidad de sedimentación eritrocitaria depende de la concentración de
macromoléculas asimétricas (fibrinógeno y γ-globulinas) y la concentración de
eritrocitos. La superficie del eritocito normalmente tiene carga eléctrica negativa
que se conoce como el “potencial zeta”. Las fuerzas repelentes de estas cargas
negativas de los eritrocitos ayudan a mantenerlos separados y suspendidos en el
plasma. Las macromoléculas asimétricas del plasma tienen el efecto de hacer
decrecer las fuerzas repelentes del potencial zeta de los eritrocitos. Cuando hay un
incremento en la concentración plasmática de macromoléculas, como en diversos
padecimientos inflamatorios, los eritrocitos se agregan y sedimentan más
rápidamente, acelerando así la velocidad de sedimentación eritrocitaria. Por lo
tanto, VSE se modifica siempre que existe un desequilibrio humoral que afecta a las
proteínas plasmáticas, acelerándose cuando aumentan la proporción de γ-
globulinas.

OBJETIVOS:
1. Determinar la concentración de hemoglobina y el valor de hematocrito.
2. Conocer la utilidad clínica de las determinaciones de hemoglobina y
hematocrito en el diagnóstico de anemias.
3. Determinar los índices eritrocitarios VGM, HCM y CHCM, útiles para
clasificación de las anemias.
4. Determinar la VSE como una prueba inespecífica en el diagnóstico de
enfermedades infecciosas o inflamatorias.

MATERIAL:
Tubo Vacutainer (tapón lila con EDTA-K2).
Tubo Wintrobe.
Pipeta Pasteur de punta larga.

MATERIAL BIOLÓGICO:
Sangre (EDTA-K2).

APARATOS:
Centrífuga clínica.

OBTENCIÓN DE SANGRE:
1. En condiciones antisépticas extraer la muestra de sangre con el tubo
vacutainer (tapón lila con EDTA-K2) y homogeneice por inversión de 8 a 10
veces.
 2. La determinación se realizará según el método proporcionado, donde se
determinarán: la concentración de hemoglobina, el valor de hematocrito y
los índices eritrocitarios.

MÉTODO:
1. El tubo de Wintrobe lleva una doble escala en centrímetros y en milímetros,
que se lee de arriba hacia abajo por la izquierda, para observar la velocidad
de sedimentación eritrocitaria (VSE).
2. Llenar el tubo de Wintrobe hasta la marca de 10 utilizando una pipeta
Pasteur de punta larga.
3. Colocar el tubo de Wintrobe en posición vertical y dejarlo reposar durante 1
hora, al final tomar la lectura y anotar la velocidad de sedimentación
eritrocitaria.

RESULTADO: __________ mm/hora.

VALORES DE REFERENCIA : Hombre: 0 - 6 mm/hora.

Mujer: 0 - 15 mm/hora.
Promedio: 0 - 10 mm/hora.

ÍNDICES ERITROCITARIOS

1. NÚMERO DE GLÓBULOS ROJOS.

HOMBRE:
Número de glóbulos rojos = (hematocrito) 100,000 + 400,000

Número de glóbulos rojos = ( ) 100,000 + 400,000 = /mm3.

MUJER:
Número de glóbulos rojos = (hematocrito) 100,000 + 300,000

Número de glóbulos rojos = ( ) 100,000 + 300,000 = /mm3.

Valores de referencia : Hombre: 4,500,000 a 6,200,000/mm3.

Mujer: 4,000,000 a 5,500,000/mm3.

2. VOLUMEN GLOBULAR MEDIO (VGM). Es el volumen promedio de cada

eritrocito y se expresa en femtolitros (fL).

hematocrito
VGM = —————————————— × 100 =
las dos primeras cifras del
número de eritrocitos
VGM = —————————— × 100 = fL.

Valor de referencia = 92 ± 9 fL.

3. HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (HCM). Es la cantidad media de

hemoglobina contenida en cada eritrocito y se expresa en picogramos (pg).

hemoglobina
HCM = —————————————— × 100 =
las dos primeras cifras del
número de eritrocitos

HCM = —————————— × 100 = pg.

Valores de referencia = 30 ± 2 pg.

4. CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (CHCM). Este

índice compara la concentración promedio de Hb dentro de cada
eritrocito, con el volumen promedio de cada eritrocito y se expresa en g/dL.

hemoglobina
CHCM = ————————————— × 100 =
hematocrito

CHCM = —————————— × 100 = g/dL.

Valores de referencia = 32 – 34 g/100 dL.

NOTA: LOS PARÁMETRO DE LA CITOMETRÍA HEMÁTICA VARIARÁN DEPENDIENDO

DEL GÉNERO, EDAD Y ALTITUD (LUGAR DE RESIDENCIA).
 BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE MEDICINA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

BIOMETRÍA HEMÁTICA

FECHA: NÚMERO DE MATRÍCULA:

SERIE ROJA RESULTADO VALORES DE REFERENCIA

G. R., millones / mm3 4.5 – 6.2 (hombre)

4.0 – 5.5 (mujer)

HEMOGLOBINA, g/dL 15.5 – 19.2 (hombre)

12.5 – 16.6 (mujer)

HEMATOCRITO, % 42 – 52 (hombre)
37 – 47 (mujer)

VGM, fL 83 – 101

HCM, pg 28 – 32

CHCM, g/dL 32 - 34

VSE, mm/hora 0 – 6 (hombre)

0 – 15 (mujer)
0 – 10 (promedio)

ANÁLISIS DE RESULTADOS:

RESPONSABLE:
CUESTIONARIO:

1. ¿Cuáles son los signos y síntomas de un estado anémico?

2. ¿Qué causas pueden hacer variar el valor del hematocrito?

3. ¿Qué ocurre cuando hay un déficit de hierro por aporte insuficiente, déficit de
absorción intestinal o aumento de la pérdida (por sangrado a distintos niveles)?