UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA Y TECNOLÓGICA DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE CIENCIAS QUÍMICAS
QUÍMICA ANALÍTICA III

PRÁCTICA No. 6: DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE 5-HMF USANDO

EL MÉTODO DE CALIBRACIÓN POR PATRÓN EXTERNO

Presentado por:
Laura Karina Camargo Suárez Cód:201722623
Eliana Yasmin Mesa Castro Cód:201814204
Juan Esteban Rojas Álvarez Cód:201811838

INTRODUCCIÓN
Cuando se lleva a cabo un análisis en un cromatógrafo líquido o de gases, el detector responde a la
presencia de los distintos analitos que salen separados de la columna. La representación de la señal
del detector frente al tiempo da una serie de picos que corresponden a cada uno de los analitos. Al
gráfico resultante se le conoce como cromatograma y se emplea para llevar a cabo el análisis
cualitativo y el cuantitativo
Los equipos cromatográficos que se emplean en la actualidad disponen de integradores electrónicos,
los cuales integran los picos de los cromatogramas, pudiéndose obtener la altura y el área de cada
pico. Ambos parámetros se pueden utilizar para cuantificar los distintos compuestos
Cuando se quiere cuantificar un compuesto presente en una muestra por el método del patrón
externo, los pasos a seguir son los siguientes:
1. Preparar una serie de disoluciones de concentraciones crecientes, del patrón correspondiente al
compuesto a cuantificar. El intervalo de concentraciones ha de ser similar a la concentración del
analito en la muestra problema.
2. Inyectar el mismo volumen de cada una de las disoluciones patrón en el cromatógrafo, así como
del extracto de la muestra. De esta forma tendremos los distintos cromatogramas de los patrones (un
cromatograma para cada disolución patrón) y el cromatograma de la muestra.
En el cromatograma de cada disolución patrón y en el cromatograma de la muestra saldrá el pico
correspondiente al analito. El tiempo de retención del pico del analito será el mismo en todos los
cromatogramas; sin embargo, el área será diferente dependiendo de la concentración de analito.
Límite de cuantificación (LOQ): Corresponde al punto de la curva de calibración de menor
concentración.
Linealidad: El criterio de aceptación con un valor de coeficiente de correlación.
Exactitud: Para evaluar la exactitud se usó el porcentaje de recuperación.
DIAGRAMAS DE FLUJO

 Construcción de la curva de calibración por el método del patrón externo

INICIO Analizar Resutados FIN

Preparar seis soluciones de

calibración utilizando como
Construir la curva de
patrón 5-HMF disuelto en
calibración
diclorometano (0,25; 0,50;
1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 ppm)

Inyectar cada una de las

Registrar todos los
muestras anteriores
parámetros cromatográficos
utilizando el método
del método
cromatográfico establecido

 Determinación de la concentración de 5-HMF en una muestra problema

INICIO FIN

Tomar una cantidad

de la muestra Analizar resultados
problema (5 uL)

Inyectar la muestra Determinar la

anterior utilizando concentración de 5-
el mismo método HMF en la muestra
cromatográfico problema
DATOS PARA REALIZAR CURVA DE CALIBRACIÓN Y ÁREA DE LA MUESTRA
PROBLEMA
Concentración Curva 5-HMF (áreas) Área de la solución
(ppm) problema

0,25 1
0,50 2 29,4
1,0 3,9
1,5 5,8
2,0 8
2,5 10

Tabla 1. Áreas de los picos del analito obtenidas en los cromatogramas de los patrones y en
el de la muestra.

Curva de Calibración
12

10
f(x) = 3.99671232876712 x − 0.0457534246575353
R² = 0.999424718398679
8

6
Área

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3
Concentración (ppm)

Figura 1. Recta de calibrado obtenida con los datos de la Tabla.

Para calcular la concentración en el extracto de la muestra, en la ecuación de la recta de calibrado se
sustituye “y” por el área obtenida en el cromatograma de la muestra (29,4) y se despeja “x” que es
la concentración del analito en el extracto de la muestra: x = (3,9967-0,0458) / 29,4 = 0,134384
Concentración de analito en el extracto de la muestra = 0,134ppm
CUESTIONARIO
1. ¿De qué manera influyen las condiciones instrumentales en el cromatograma?
Para elegir una columna puede utilizarse la siguiente norma: la polaridad de la fase
estacionaria debe ser bastante similar a la de los analitos, y para la elución se utiliza
entonces una fase móvil con una polaridad considerablemente distinta. Esta norma tiene el
inconveniente de que, si la diferencia de polaridades es muy grande, los tiempos de
retención pueden ser excesivamente largos. También podría utilizarse una fase estacionaria
cuya polaridad fuese muy diferente a las de la fase móvil y los componentes de la muestra,
si bien, en este caso, los tiempos de retención podrían ser demasiado cortos.
En cuanto a la resolución, lo normal es operar con columnas que tienen entre 40000 y
60000 platos teóricos por metro.
La introducción de las muestras en la columna cromatográfica es frecuentemente el factor
controlante de la reproducibilidad de las medidas. Los volúmenes a inyectar deberán ser
pequeños, para evitar la sobrecarga de la columna y se ha de introducir la muestra sin
despresurizar el sistema, este sistema está limitado a una presión máxima de operación de
1500 psi.
2. ¿Qué condiciones debe reunir un componente para ser utilizado como patrón
externo?
Tanto para la medición de la muestra como de los patrones, es conveniente estudiar la
reproducibilidad de la señal analítica y la de los tiempos de retención del/los analitos. Para
ello se deben realizar varias inyecciones (n) de cada muestra y cada uno de los patrones y
utilizar los valores medios.
3. Discutir las ventajas y desventajas de cada uno de los métodos de calibración.
La ventaja del método estándar externo es que al preparar las muestras de patrones de
concentración conocida se analizan y nos permiten construir una curva de calibración para
cada componente a cuantificar. Con este método es necesario medir exactamente los
volúmenes inyectados tanto de los patrones como de la muestra incógnita.
La desventaja del método estándar interno es que la curva de calibración se construye
graficando el cociente entre la señal del analito incógnita y el estándar interno en función
de la concentración del analito incógnita. En este caso se agrega a la muestra una cantidad
conocida de un compuesto que no está presente originalmente, la ventaja es que la
calibración se realiza analizando patrones de concentración conocida para cada componente
a cuantificar, a los cuales se le agrega la misma cantidad del estándar interno que a la
muestra incógnita.
Otra de las ventajas del método estándar interno es que elimina el error cometido por la
irreproducibilidad en el volumen inyectado.
La Ventaja del método de normalización de áreas es que es simple, emplea en forma directa
los reportes de área cromatográfico. Pero este método exige que el tamaño de muestra a
inyectar sea constante y que no existe cambio de voltaje durante el análisis.
4. Discutir la conveniencia de considerar como “señal” la altura o el área del pico
obtenido como respuesta de la muestra.
En el cromatograma de cada disolución patrón y en el cromatograma de la muestra saldrá el
pico correspondiente al analito y el pico correspondiente al patrón interno, además del pico
del analito y del pico del p.i se observarán una serie de picos que corresponderían a otros
compuestos presentes en la muestra distintos del analito que estamos cuantificando.

Figura2. Ejemplo de señales de cromatografía de gases.

El Tr del pico del analito será el mismo en todos los cromatogramas; el Tr del pico del
patrón interno será distinto del Tr del analito y se mantendrá constante en todos los
cromatogramas.
El área de los picos será diferente dependiendo de la concentración de analito, el área del
pico de analito irá aumentando conforme aumenta la concentración en los patrones (área
del patrón 1 < área patrón 2< área patrón 3 < área patrón 4) que la concentración de patrón
interno se mantiene constante en todas l disoluciones patrón y en la muestra
cromatogramas.
5. Consulte que interés presenta el 5-HMF.
El ácido 5-hidroximetil-2-furancarboxílico (HMFCA) es importante como monómero en la síntesis
de diversos poliésteres y tiene posible actividad antitumoral. Se obtiene por la oxidación selectiva
del grupo formilo del 5-hidroximetilfurfural (5-HMF). Sin embargo, la obtención de HMFCA por
métodos químicos convencionales presenta varias desventajas, como la gran cantidad de hidróxido
de sodio usado y las altas temperaturas, lo cual, a nivel industrial, representa una importante
cantidad de contaminantes y altos costos en su producción. Además, la utilización de catalizadores
sólidos con metales de alto valor, hace que el proceso de síntesis de HMFCA sea costoso.
CONCLUSIONES
 A lo largo de este informe hemos visto cómo preparar una serie de patrones para
cuantificar un compuesto por cromatografía de gases, utilizando el método del
patrón externo. Asimismo, se ha detallado qué parámetro del cromatograma se
utiliza para cuantificar y cuáles son los pasos a seguir en la determinación de la
concentración de analito en una muestra.
 Para realizar el estudio cromatógrafo de gases con patrón externo se lleva a cabo la
comparación de señal de analito en la muestra con las obtenidas al medir una serie
de patrones preparados.
 El área de los picos será diferente dependiendo de la concentración de analito, el
área del pico de analito irá aumentando conforme aumenta la concentración en los
patrones

BILIOGRAFÍA O INFOGRAFIA
[1] Nielsen, S.S: “Food Analysis”, Ed. Kluwer Academic / Plenum Publishers, New York,
2003, pág. 437–460.
[2] Skoog, D.A.; Leary, J.J: “Análisis Instrumental”, Ed. McGraw Hill / Interamericana de
España, Madrid, 1994, pág. 674–703.
[3] Valcárcel, M.; Gómez, A: “Técnicas Analíticas de Separación”, Ed. Reverté, Barcelona,
1994, pág. 655–676.
[4] Análisis Instrumental - Tema 12 Subido por Mario Alberto Lopez Mendoza /Obtenido
en: https://studylib.es/doc/8819606/an%C3%A1lisis-instrumental---tema-12