¿El método de adición estándar permite determinar el contenido de analito a partir de cantidades conocidas del mismo?

Teoría Aserciones

Método de adición estándar para el análisis cuantitativo de REFERENCIAS

colorante.  ¿cómo se logra evidenciar el efecto matriz
experimentalmente?
[ 1 ]D. C. Harris, “Análisis químico cuantitativo”, 6ta Edición, Reverte, España 2007.
Hipótesis  ¿Cómo se podría completar un
análisis cuantitativo que sufre un
1. La adición de estándar es especialmente apropiada en matriz?
efecto de
momentos en los cuales la composición de la muestra es
Transformaciones
desconocida.
2. El efecto matriz afecta la señal analítica de una muestra
A=εlC al analito.
debido a todo lo que hay en ella con excepción

Conceptos

 Estandarización externa
 Curva de calibración
 Efecto de matriz
 Matiz Procedimiento
 Adición estándar
Colocar 5.00 mL del estándar de calibración en cada de
cinco matraces volumétricos de 10 ml. Agregar picos de 0,
0.1, 0.2, 0.3 y 0.4 mL del estándar añadido nominal de 100
μg / ml a los matraces separados, diluyéndolos. Ajuste el
espectrofotómetro a la longitud de onda determinada en el
experimento anterior. Mida la absorbancia para cada
solución.
 TEORÍA

Se produce un efecto de matriz cuando una diferencia entre las matrices de los estándares
externos y las muestras conduce a un error determinado en un análisis. ¿Por qué una diferencia
en matrices puede causar un problema? Considere, por ejemplo, un análisis
espectrofotométrico para un indicador ácido-base que obedezca la ley de Beer

A = abC

Donde A es la absorbancia de la muestra, a es la absortividad del indicador (en μg / ml-1 cm-1), b

la longitud de ruta (en cm) y C es la concentración del indicador (en μg / ml). Un indicador
ácido-base existe en dos formas

• una forma ácida, HIn, que predomina a niveles de pH más ácidos

• una forma base, In-, que predomina a niveles de pH más básicos

Debido a que las dos formas del indicador difieren en color, las soluciones que contienen la
misma concentración de indicador, pero a diferentes niveles de pH, tendrán diferentes
absorbancias; claramente esto significa que
a
HIn • aIn

Por lo tanto, un valor determinado experimentalmente para a estará dentro de los límites de a HIn
y aIn, y el valor real dependerá del pH de la solución. Ahora podemos apreciar la fuente de un
posible efecto de matriz al analizar soluciones que contienen indicadores ácido-base. Cuando
realizamos una estandarización externa, la pendiente de la curva de calibración, que es
equivalente a ab, proporciona una estimación experimental de la absortividad del indicador. Si,
por ejemplo, los estándares externos tienen un pH más ácido que la muestra, entonces el a
determinado experimentalmente puede ser significativamente diferente al de las muestras. El
resultado es un error determinado debido a la matriz, o un "efecto matriz".

Generalmente, hay dos enfoques para completar un análisis cuantitativo que sufre un efecto de
matriz. El primero es hacer coincidir cuidadosamente la matriz de los estándares con la de las
muestras. Por ejemplo, si estamos analizando muestras para la concentración de un indicador
ácido-base y sabemos que las muestras están tamponadas a un pH de 6.47, entonces
podemos preparar estándares con el mismo pH. Cuando no es posible (o deseable) hacer
coincidir las matrices de los estándares y las muestras, entonces podemos usar el método de
adición estándar. Una recuperación de pico es el ejemplo más simple de una adición estándar.
Recuerde que hay dos medidas de absorbancia en una recuperación de pico: una para la
muestra antes de agregarla, para la cual
Y uno después de agregar el pico, para el cual

donde Vsample, Vspike y Vtotal son, respectivamente, el volumen de muestra, el volumen de solución
estándar tomada como una espiga y el volumen final al que se diluyen ambas soluciones, y
Csample y Cstandard son la concentración del analito en la muestra y el solución estándar
utilizada para los picos. Si Vspike<< Vsample, entonces la adición del añadido generalmente no
altera significativamente la matriz de la muestra y podemos suponer que a es la misma para
ambas soluciones; así

Que se resuelve para Csample. Una recuperación de pico, por lo tanto, es una adición estándar de
1 punto. Para minimizar las contribuciones de errores indeterminados, una adición estándar
generalmente implica la preparación de varios añadidos utilizando volúmenes cada vez
mayores de la solución estándar. Las absorbancias para estas soluciones son:
 HIPÓTESIS

La adición de estándar es especialmente apropiada en momentos en los cuales la composición

de la muestra es desconocida es verdadera debido a que el método de adición de estándar
consiste en añadir cantidades conocidas de analito al problema, cuyo contenido en analito se
quiere determinar

El efecto matriz afecta la señal analítica de una muestra debido a todo lo que hay en ella con
excepción al analito, es verdadera pues en ocasiones se toman las señales de la matriz y no de
la muestra esto cuando el blanco no se prepara correctamente

CONCEPTOS

 Matriz:Todos los componentes de la muestra que no son analitos

 Adiciones estándar: El método alternativo consiste en añadir sobre la muestra

problema cantidades crecientes conocidas de analito. De esta manera, todas las
medidas se realizan sobre la misma matriz. Al representar la señal experimental frente a
la concentración de analito añadida resulta una recta a partir de cuya pendiente y
ordenada en el origen se obtiene la concentración de la muestra problema

 El efecto matriz: El efecto matriz en Química Analítica se define, de acuerdo con la

IUPAC, como el efecto de todos los componentes de la muestra distintos al analito en la
medida de una cantidad (de analito). A la hora de aplicar un método analítico, el efecto
matriz se traduce en una diferencia de sensibilidad del mismo cuando se prepara un
calibrado en un disolvente frente a uno preparado en el mismo entorno de la muestra. La
sensibilidad debe entenderse como la variación de la señal analítica frente a la
concentración de la especie a determinar. Por lo tanto, la diferencia entre las pendientes
de calibrado en un disolvente determinado (calibrado externo) y en la matriz de la
muestra (ya sea simulada o mediante el método de adición patrón), indica la presencia
de efecto matriz, como se apuntaba en un post anterior. Cabe destacar que el efecto
matriz es un efecto indeterminado de las especies que rodean a la muestra que afectan
a la sensibilidad, cuando el efecto de una especie es determinado (y aditivo) se habla de
interferencia. 

 Estándar externo: Un estándar o patrón externo se prepara por separado de la

muestra. En cambio, un estándar interno se añade a la muestra. Los estándares
externos se usan para calibrar instrumentos y procedimientos cuando no hay efectos de
interferencia de la matriz de componentes sobre la disolución del analito. Se prepara una
serie de tales estándares externos que contienen el analito en concentraciones
conocidas. Lo ideal es usar tres o más de las disoluciones en el proceso de calibración.

No obstante, se puede confiar en calibraciones de dos puntos en algunos análisis de

rutina. La calibración se consigue al obtener la señal de respuesta (absorbancia, altura
 del pico, área del pico) en función de la concentración conocida del analito. Una curva
de calibración se prepara con una gráfica de los datos o ajustándoles una ecuación
matemática aceptable, como la ecuación de la recta dada por la pendiente y la ordenada
al origen que se usa en el método de los mínimos cuadrados lineales. El paso siguiente
es la etapa de predicción, en la que se obtiene la señal de respuesta para la muestra y
se usa para predecir la concentración desconocida del analito, cx, a partir de la curva de
calibración o de la ecuación de mejor ajuste. La concentración delanalito en la muestra
original se calcula luego mediante cx aplicando los factores de dilución convenientes
tomados de los pasos que se siguieron para preparar la muestra.

Un estándar o patrón externo se prepara por separado de la muestra. Los estándares

externos se usan para calibrar instrumentos y procedimientos cuando no hay efectos de
interferencia de la matriz de componentes sobre la disolución del analito. Se prepara una
serie de tales estándares externos que contienen el analito en concentraciones
conocidas

 Curva de calibración : Se trata de una curva de referencia construida con cantidades

conocidas de una sustancia que se utiliza para determinar la cantidad de esta sustancia
presente en una muestra incógnita. En muchas determinaciones se cumple una relación
proporcional entre la magnitud o intensidad de color que da una reacción y la cantidad
del reactivo que la provoca.

CUESTIONARIO

1. Suponga que la solución utilizada para poner a cero el espectrómetro no corrige la

absorbancia de una especie en la muestra que no sea el analito. ¿Cómo podría esto afectar
tus resultados?
R/ los resultados sin el ajuste adecuado del espectrofotómetro serian inválidos ya que nos
darían resultados erróneos en cuanto a absorbancia y transmitancia y no nos permitiría así
realizar el análisis correcto.

2. Discuta brevemente las ventajas y desventajas de usar una estandarización externa y

compare las ventajas y desventajas de usar una adición estándar.

R/ estandarización externa:

 Este método de análisis se aplica en la determinación de un analito, en el cual los

componentes de la matriz de la muestra como también los reactivos usados en la
preparación de la misma no interfieren en el análisis, es decir no se tiene un efecto de la
matriz en la señal medida.

 También se puede emplear en condiciones tales que la contribución de los interferentes,

sobre las medidas se mantiene constante, con lo cual se puede realizar la
oportunacorrección del error determinado por el interferente.
 Los estándares de calibrado seleccionados deben aproximarse tanto en la concentración
del analito como en su composición de los diferentes componentes químicos, presentes en
lamatriz de la muestra. Este requerimiento es aplicado en todos los métodos de
calibraciónpropuestos.

Adición estándar

 La preparación de estándares que reproduzcan la composición de la muestra es muy

complicada cuando se trata del análisis de muestras complejas (suelos, minerales, sangre
completa, orina, etc.) ya que en este tipo de muestras, usualmente, los componentes de la
matriz afectan las medidas de la señal analítica ya sea por exceso o por defecto. Por ello,
es imposible compensar un blanco distinto de cero.
 Con el objetivo de minimizar los efectos de la matriz, se utiliza el método de adición de
estándar el cual consiste en la adición de un volumen fijo de la muestra, a las soluciones
estándares diluyendo a un volumen final constante. Posteriormente, se procede a
determinar la señal de los estándares así como de una muestra preparada de la misma
forma, en ausencia de estándar añadido. En cada solución, las señales son afectadas de
manera similar por los interferentes de la matriz.
 En general, con este método se obtienen intervalos lineales de concentración de trabajo
muy estrechos (menos de un orden de magnitud) originados por los complicados efectos
químicos de los componentes de la matriz. Este método no elimina las interferencias, solo
las compensa ya que se obtienen todas las señales analíticas bajo las mismas condiciones.
 El procedimiento que se lleva a cabo para la aplicación de este método, consiste en la
selección de alícuotas de un volumen fijo de muestra (VM) a las cuales se les añaden
volúmenes variables de un estándar (VS) de concentración conocida (CS) diluyendo a un
volumen final fijo (VT)

3. Suponga que necesita desarrollar un método espectrofotométrico cuantitativo para PNP.

¿Cómo diseñaría una estandarización externa para que los efectos de la matriz se
minimicen y la sensibilidad se maximice? Proporcione su respuesta como un conjunto de
instrucciones escritas adecuadas para un material de laboratorio.

R/
 Se prepara una solución madre de colorante de baja concentración en un balón aforado de
10 ml, a partir de ella se preparan estándares externos diluyendo a diferentes cantidades
de forma creciente y lineal en tubos de ensayo, cada tubo con 6 ml de estándar el primero
de una concentración 0.2 mg/L, el segundo tubo el estándar 0,4 mg/L, el tercer tubo 0,5
mg/L, el cuarto tubo de 0,6 mg/L, el quinto tubo con 0,7 mg/L y el sexo tubo con
concentración de 0,8 mg/L Se hace la observación por medio del espectrofotómetro de la
absorción de la muestra, luego se añade la matriz de muestra a cada tubo de ensayo la
misma cantidad y se realiza el análisis por espectroscopia UV-vis y se observa como
incluyo la matriz en el cambio de absorción si es alto se realiza de nuevo el proceso
añadiendo menor cantidad de la matriz de muestra a los estándares externos preparados a
partir de la solución madre.
4. ¿Cómo se logra evidenciar el efecto matriz experimentalmente?
R/
 este se logra evidenciar debido a que se produce una diferencia entre las matrices de
los estándares externos y las muestras las cuales conduce a un error determinado en un
análisis.
5. ¿Cómo se podría completar un análisis cuantitativo que sufre un efecto de matriz?
R/
 Generalmente, hay dos enfoques para completar un análisis cuantitativo que sufre un
efecto de matriz. El primero es hacer coincidir cuidadosamente la matriz de los
estándares con la de las muestras, cuando no es posible (o deseable) hacer coincidir las
matrices de los estándares y las muestras, entonces podemos usar el método de adición
estándar.
TRANSFORMACIONES

Tubo V estándar (mL) V muestra (mL) V disolvente (mL)

1 0 1,5 3,5
2 0,5 1,5 3,0
3 1,0 1,5 2,5
4 1,5 1,5 2,0
5 2,0 1,5 1,5
Concentración 8,12*10-4
estándar
Tabla 1. Resultados para tratar las muestras.

0.6

0.5 f(x) = 0.1 x + 0.03

R² = 0.99
0.4
Absorbancia

0.3

0.2

0.1

0
1 2 3 4 5
Tubos
Grafica 1: Tratamiento grafico de la absorbancia de cada tubo.

Para hallar las concentraciones de colorante rosado en las muestras se realiza con la ley de
lamber beer.
A=εlC

De donde se despeja el coeficiente de absortividad molar con los datos obtenidos del patrón
estándar, ya que el analito de l muestra es igual al analito del patrón estándar.
 A
ε=
lC

Tubo
Concentració Absorbanci
n (M) a
1 2,47*10-4 0,146
2 4,42*10-4 0,202
3 5.59*10-4 0,330
4 7,49*10-4 0,442
-4
5 8,71*10 0,514
Tabla21. Resultados concentraciones en cada tubo.

0.6

0.5 f(x) = 0.1 x + 0.03

R² = 0.99
0.4
Absorbancia

0.3

0.2

0.1

0
2.47E-04 4.42E-04 5.59E-04 7.49E-04 8.71E-04
Concentracion (M)

Grafica 2 Tratamiento grafico de la absorbancia Vrs Concentración.

ANÁLISIS Y DISCUSIÓN

Analizando la gráfica 1 respecto al aumento de la absorbancia la cual depende de las

concentraciones de la muestras se esperaría que la absorbancia menor sea la menor
concentración lo cual se corrobora luego de realizar los respectivos cálculos reflejados en la
tabla y grafica 2

La dispersión entre los datos es muy pequeña debido a que el R 2 es muy cercano a 1, debido a
que las concentraciones de las muestras realizadas son muy cercanas.
En la grafica 1 , se pudo determinar la concentración del analito por la extrapolación de la
grafica y la pendiente. Dando como resultado 0.35M

CONCLUSIONES:

Las hipótesis descritas fueron afirmativas ya que en el grafica se puede observar las minimas
dispersiones de los datos, lo que indica que la matriz si afecta la señal y esto también indica los
errores al momento de preparar las muestras y el analito.

Se puedo determinar la concentración del analito, lo que se puede decir que la adicion estándar
es indicada para analizar muestras con concetraciones desconocidas.