INSTITUTO SUPERIOR DE CAPACITACION Y FORMACION N° 8165

DR. RAMON CARRILLO

CARRERA: TECNICO SUPERIOR EN LABORATORIO BIOQUIMICO

ENZIMOLOGIA
AÑO 2023

PROF: LIC. RICARDO M. MONTENEGRO

 ¿QUE ES LA ENZIMOLOGÍA?

• Enzimología es una rama especial dentro de la bioquímica clínica, centrada en el estudio y

caracterización de las enzimas (biomoléculas proteicas o ribonucleicas que catalizan
reacciones químicas en los sistemas biológicos) y en su aplicación al diagnóstico y
tratamiento de enfermedades, siendo uno de los campos más importantes de la química
clínica contemporánea.

• La enzimología diagnóstica, por ejemplo, se caracteriza en la búsqueda de métodos de

mayor sensibilidad clínica y analítica para aquellas enzimas cuyas variaciones de actividad
sean específicas de alguna enfermedad u órgano en particular.

• Actualmente, en la mayoría de los hospitales, los ensayos enzimáticos superan el 20-25%

del total del trabajo, entre 12 y 15 enzimas son evaluadas rutinariamente.
 IMPORTANCIA BIOMÉDICA DE LAS ENZIMAS

• La capacidad para detectar y cuantificar la actividad de enzimas específicas en la sangre, otros

líquidos tisulares, o extractos de células proporciona información que complementa la
capacidad del médico para diagnosticar muchas enfermedades y predecir su pronóstico.

• Otras aplicaciones médicas comprenden cambios de la cantidad o de la actividad catalítica de

enzimas clave que puede ser el resultado de defectos genéticos, déficits nutricionales, daño de
tejido, toxinas o infección por virus o bacterias patógenas (p. ej., Vibrio cholerae).

• Los científicos médicos abordan desequilibrios de la actividad enzimática al usar fármacos para
inhibir enzimas específicas y están investigando la terapia génica como un medio para remediar
déficit de la concentración de enzimas o la función de las mismas.

• Además de servir como los catalizadores para todos los procesos metabólicos, su gran actividad
catalítica, especificidad para sustrato y estereoespecificidad, permiten a las enzimas
desempeñar funciones clave en otros procesos relacionados con la salud y el bienestar de las
personas, como por ejemplo en la biosíntesis de fármacos o antibióticos complejos.
 ¿QUE ES UNA ENZIMA?
• En todo ser vivo se producen constantemente innumerables reacciones químicas. Muchas de ellas
tienden a transformar las sustancias introducidas con los alimentos a fin de obtener energía y materia
prima para la síntesis de nuevas estructuras moleculares. Dicha síntesis, así como la degradación de los
componentes celulares una vez cumplida su vida útil, son también resultado de múltiples reacciones.

• La velocidad y eficiencia con las cuales se realizan las transformaciones bioquímicas son notables. Si se
pretendiese repetirlas en el laboratorio, se comprobaría que sólo ocurren si se suministra calor, o pH
extremos, o grandes presiones. etc., recursos todos incompatibles con la subsistencia de las células.

• En las condiciones reinantes en el organismo: temperatura de alrededor de 37°C, pH próximo a la

neutralidad y presión constante, la mayor parte de las reacciones bioquímicas transcurriría muy
lentamente o no se produciría en absoluto. Sin embargo, estas reacciones suceden a gran velocidad
gracias a la existencia de enzimas o catalizadores biológicos.

• Por ejemplo, una reacción química espontánea ocurre sin la necesidad de energía externa, pero puede
ocurrir tan lentamente que resulte imperceptible. Tal es el caso de la hidrólisis de sacarosa (el azúcar de
mesa) a glucosa y fructosa, que aunque sea exergónica -puesto que ocurre espontáneamente con
liberación de energía libre- una solución de sacarosa disuelta en agua estéril permanecerá años a
temperatura ambiente sin que se produzca hidrólisis apreciable.
• Sin embargo, si añadimos una pequeña cantidad de un catalizador como la enzima sacarasa a
la solución, toda la sacarosa se hidrolizará en un lapso de segundos.

Sacarasa

Sacarosa Glucosa Fructosa

• Podemos definir a las enzimas como biomoléculas de naturaleza proteica o ribonucleica,

que actúan como catalizadores biológicos acelerando las reacciones químicas al disminuir la
energía de activación (EA), sin formar parte de los productos ni desgastarse en el proceso.

• Casi todas las enzimas son proteínas. Las excepciones notables son los RNA ribosomales y un
puñado de moléculas de RNA conocidas en conjunto como ribozimas.
 PROTEINAS
• Debido a que la mayoría de las enzimas son proteínas, es importante recordar las características
mas importantes de éstas.

• Las proteínas son moléculas (polímeros) compuestas por una o más cadenas de aminoácidos
unidas por enlaces peptídicos.

• Todos los aminoácidos tienen la misma estructura, que consiste en un carbono central unido a
tres grupos funcionales: un grupo amino nitrogenado (—NH2), un grupo de ácido carboxílico
(—COOH) y un grupo que varía llamado “R”.

• En las proteínas de los organismos se encuentran 20 aminoácidos con propiedades

características que dependen del grupo R.
 • Ejemplos de aminoácidos:

• Como los polisacáridos y los lípidos, las proteínas se forman mediante reacciones de síntesis por deshidratación: el
nitrógeno del grupo amino (—NH2) de un aminoácido se une al carbono del grupo del ácido carboxílico (—COOH) de
otro aminoácido mediante un enlace covalente simple y se libera agua. Esta unión se llama enlace peptídico y la
cadena que se forma se denomina péptido. Se agregan más aminoácidos, uno por uno, hasta que se completa la
cadena de proteínas.

• Las cadenas de aminoácidos de las células vivas varían en longitud, de tres a cientos. En general, los términos
proteína y polipéptido se reservan para las cadenas largas de más de 50 aminoácidos, mientras que el término
péptido se refiere a las cadenas más cortas.
• Las proteínas -entre ellas las enzimas- se forman dentro de las células en un proceso denominado traducción o
síntesis de proteínas. Durante la traducción los aminoácidos que se encuentran libres en el citoplasma, son
ensamblados en el interior de los ribosomas en un orden especifico gracias a las instrucciones contenidas en una
molécula de ARN, la cual fue obtenida previamente durante la transcripción (proceso en el que la información
genética contenida en el ADN se copia a una molécula de ARN).
FUNCIONES
DE LAS
PROTEINAS
 NIVELES DE ORGANIZACIÓN
ESTRUCTURAL DE LAS PROTEÍNAS

• Las proteínas tienen muchas formas y hasta cuatro niveles de estructura, cada uno construido
sobre el anterior. La estructura primaria se refiere a la secuencia de aminoácidos que conforma la
proteína. Los genes de las moléculas de ADN especifican esta secuencia; diferentes proteínas
tienen secuencias distintas de aminoácidos.

• La secuencia de aminoácidos hace que cada cadena de polipéptidos asuma una de dos estructuras
secundarias simples y repetitivas (hélice o lámina plegada). Las estructuras secundarias se
mantienen por enlaces de hidrógeno entre las partes polares de los aminoácidos.

• Además de sus estructuras secundarias, las proteínas asumen estructuras terciarias que consisten
en pliegues determinados por interacciones de los grupos funcionales de aminoácidos entre ellos
y con su entorno.

• El cuarto nivel de organización de las proteínas es la estructura cuaternaria, que se da en ciertas

proteínas que contienen polipéptidos unidos por enlaces de hidrógeno, disulfuro o por atracciones
entre partes con cargas opuestas de distintos aminoácidos.
 ORGANIZACIÓN ESTRUCTURAL DE ALGUNAS ENZIMAS

HEXOCINASA
DESHIDROGENASA

HIDROLASA
 CARACTERÍSTICAS CLAVES DE LAS ENZIMAS
• Las enzimas poseen varias propiedades. En primer lugar, las velocidades de las reacciones catalizadas por
enzimas a menudo son espectacularmente elevadas. En segundo lugar, en marcado contraste con los
catalizadores inorgánicos, las enzimas son sumamente específicas para las reacciones que catalizan, y rara
vez forman productos secundarios. Por último, debido a sus estructuras relativamente grandes y
complejas, las enzimas pueden regularse.

• Las enzimas que catalizan la conversión de uno o más compuestos (sustratos) hacia uno o más
compuestos diferentes (productos) aumentan los índices de la reacción no catalizada correspondiente por
factores de al menos 106 .

• Al igual que todos los catalizadores, las enzimas no se consumen ni se alteran de manera permanente
como consecuencia de su participación en una reacción.

• Además de ser muy eficientes, las enzimas también son catalizadores en extremo selectivos. Al contrario
de casi todos los catalizadores usados en química sintética, las enzimas son específicas tanto para el tipo
de reacción catalizada como para un sustrato único o un pequeño conjunto de sustratos estrechamente
relacionados.

• Las enzimas también son catalizadores estereoespecíficos y de manera típica catalizan reacciones de sólo
un estereoisómero de un compuesto dado (p. ej., azúcares D, pero no L; aminoácidos de L pero no D).
 LA BARRERA DE LA ENERGÍA DE ACTIVACIÓN (EA)

• Cada reacción química que ocurre entre las moléculas implica tanto la ruptura de enlaces como la
formación de ellos. Por ejemplo, la hidrólisis de la sacarosa implica la ruptura del enlace entre la glucosa y
la fructosa y uno de los enlaces de una molécula de agua, y luego la formación de dos enlaces nuevos.

Sacarasa

• El cambio de una molécula a otra generalmente implica el paso de la molécula inicial a un estado
altamente inestable (estado de transición) antes de que pueda ocurrir la reacción.

• Para llegar a este estado de contorsión molecular en el que los enlaces pueden cambiar, las moléculas
reactivas deben absorber energía de su entorno (energía de activación). Cuando se forman los nuevos
enlaces de las moléculas producidas, la energía se libera en forma de calor y las moléculas vuelven a sus
formas estables con energías más bajas.
PERFILES ENERGETICOS DE UNA REACCION QUIMICA
 PERFIL ENERGETICO DE UNA REACCION EXERGONICA

• Desde el punto de vista termodinámico,

ésta es una reacción exergónica y ocurre
Energía libre

de forma espontánea. Sin embargo, la

energía de activación (EA) genera una
barrera que determina la velocidad de la
reacción.
• La inversión inicial de energía para que una reacción
inicie, es decir, la energía necesaria para contorsionar
las moléculas de reactivo de modo que puedan
modificarse los enlaces, se conoce como energía libre
de activación o energía de activación (EA).
EA
• Por definición, un catalizador aumenta la velocidad de
una reacción química, pero no se altera de forma
permanente por la reacción. Las enzimas o
catalizadores biológicos realizan esta hazaña debido a EA
que disminuyen la energía de activación que se
requiere para una reacción química. En otras palabras,
ofrecen una vía de reacción alterna que requiere
menos energía, y en el ápice de ambas vías de
reacción se produce un estado de transición.
 EFECTO DE LAS ENZIMAS EN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN

Estado de transición
Energía libre

• Una enzima acelera una reacción

química, al reducir su energía de
activación (EA).
• Para que ocurran a una velocidad útil, la mayoría de las reacciones químicas requiere de un aporte
inicial de energía.

• Si consideramos la siguiente reacción espontánea: A + B → C, conforme aumenta la temperatura,

las moléculas (A y B) vibran y tienen mayor probabilidad de chocar. Como ya se mencionó antes,
una reacción química ocurre cuando las moléculas que chocan poseen una cantidad mínima de
energía denominada energía de activación. Sin embargo, no todas las colisiones producen
reacciones químicas, debido a que sólo una fracción de las moléculas posee la energía suficiente o
la orientación correcta para reaccionar (p. ej., para romper los enlaces o para reagrupar los átomos
en moléculas de producto).

• Estas colisiones se pueden incrementar aumentando la temperatura de la reacción o la

concentración de los reactivos para aumentar las velocidades de formación de productos. Sin
embargo, elevar la temperatura en los sistemas vivos es poco realista por el daño estructural a las
biomoléculas; y la concentración de la mayoría de los reactivos es relativamente baja.

• Para eludir estas restricciones, los seres vivos utilizan las enzimas. Cada tipo de enzima contiene
una superficie de unión única e intrincada, que se denomina sitio activo. Cada sitio activo es una
hendidura o grieta en una gran molécula de proteína en la que se pueden unir moléculas de
sustrato en una orientación que favorece la catálisis. Sin embargo, el sitio activo es más que un
sitio de unión: varias de las cadenas laterales de los aminoácidos que recubren este sitio participan
de forma activa en el proceso catalítico.
• La forma y la distribución de las cargas del sitio activo de una enzima limitan los movimientos y las
conformaciones permitidas del sustrato, haciendo que éste se asemeje más al estado de transición.
En otras palabras, la estructura del sitio activo se utiliza para orientar de forma óptima al sustrato.

• Como resultado, el complejo enzima-sustrato se convierte en producto y enzima libre sin el

requerimiento de alta energía del estado de transición. Como consecuencia, la velocidad de
reacción se incrementa en grado significativo respecto de la reacción no catalizada. Las enzimas,
como todos los catalizadores, no alteran el equilibrio de la reacción, sino que aumentan la
velocidad hacia el equilibrio.

Enzima
S: Sustrato; E: Enzima; ES: Complejo Enzima-Sustrato;
EP: Complejo Enzima-Producto; P: Producto.
 ESPECIFICIDAD DE SUSTRATO DE LAS ENZIMAS

• El reactivo sobre el cual actúa una enzima se conoce como el sustrato de la enzima. La enzima se une
a su sustrato (o sustratos, cuando hay dos o más reactivos) para formar un complejo enzima-sustrato.
Mientras que la enzima y el sustrato se mantienen unidos, la acción catalítica de la enzima convierte
el sustrato en producto (o productos) de la reacción. El proceso completo puede resumirse del
siguiente modo:

• Por ejemplo, la enzima sacarasa (la mayoría de los nombres de las enzimas terminan en -asa) cataliza
la hidrólisis del disacárido sacarosa a sus dos monosacáridos, glucosa y fructosa
• La reacción catalizada por cada enzima es muy específica; una enzima puede reconocer su sustrato
especifico aun entre compuestos íntimamente relacionados como los isómeros. Por ejemplo, la sacarasa
únicamente actuará sobre la sacarosa y no se unirá a otros disacáridos como la maltosa.

• ¿Qué explica este reconocimiento molecular? Las enzimas son proteínas, macromoléculas con
conformaciones tridimensionales únicas. La especificidad de una enzima resulta de su forma, que es
consecuencia de su secuencia de aminoácidos.

• La especificidad enzimática es una propiedad de las enzimas que fue explicada en un primer momento por
el modelo de llave y cerradura. En este modelo cada enzima se une a un solo tipo de sustrato debido a
que el sitio activo y el sustrato poseen estructuras complementarias. La forma global del sustrato y su
distribución de carga le permiten entrar e interactuar con el sitio activo de la enzima.

 El modelo llave-cerradura supone que la estructura del sustrato y la del centro activo
son complementarias, de la misma forma que una llave encaja en una cerradura.
• Sin embargo, si bien el modelo de llave-cerradura explicaba la especificidad entre la enzima y el
sustrato, no permitía explicar como se producía la reacción de forma eficiente, ya que según
este modelo el centro activo de la enzima es complementario al sustrato y durante la reacción se
forma un complejo E-S muy estable que no favorece que el sustrato se transforme a producto
en el estado de transición, porque se perderían interacciones y sería energéticamente
desfavorable.

• Es por eso que se propone el modelo de ajuste inducido, una variante moderna al modelo de
llave-cerradura, que toma en cuenta la estructura flexible de las proteínas.
• Según el modelo de ajuste inducido, el sustrato no se ajusta con precisión a un sitio activo rígido.
En vez de ello, las interacciones no covalentes entre la enzima y el sustrato modifican la
estructura tridimensional del sitio activo, adecuando la forma de éste a la del sustrato en su
conformación de estado de transición.

• La enzima es complementaria al estado de transición, se forma un primer complejo E-S con unas
interacciones leves que se verán mejoradas cuando el sustrato se transforme al estado de
transición. Entonces, la reacción se ve favorecida y en el estado de transición el sustrato se
convierte en producto
 AJUSTE INDUCIDO ENTRE UNA ENZIMA Y SU SUSTRATO

Sustrato

Sitio activo

Enzima Complejo Enzima-Sustrato

En este modelo gráfico realizado por computadora, el sitio activo de la enzima (hexocinasa), que se muestra en
azul, forma un surco en su superficie. Cuando el sustrato (glucosa), que se muestra en rojo, entra al sitio activo,
induce un cambio en la forma de la proteína. Este cambio permite que se formen más enlaces débiles, lo que
determina que el sitio activo abrace al sustrato y lo mantenga en su lugar mientras alcanza el estado de transición.
 SITIO ACTIVO Y ESPECIFICIDAD DEL SUSTRATO

• El sitio activo de las enzimas obtiene sus propiedades de los aminoácidos que lo conforman. Estos
aminoácidos pueden tener cadenas laterales grandes o pequeñas, ácidas o básicas, hidrofílicas o
hidrofóbicas.

• El grupo de aminoácidos que se encuentra en el sitio activo, así como la posición que estos tienen
en el espacio tridimensional, le dan al sitio activo un tamaño, forma y comportamiento químico
muy específicos. Gracias a estos aminoácidos, el sitio activo de una enzima es apto de modo
exclusivo para unirse con una molécula objetivo en particular -el sustrato o sustratos de la enzima-
y le ayudan a experimentar la reacción química.

• Diferentes tipos de enzimas tienen distintos grados de especificidad o "preferencia" sobre las
moléculas que pueden usar como sustratos. Algunas enzimas solo aceptan un sustrato en
particular y no catalizarán una reacción incluso para moléculas muy parecidas. Otras enzimas
pueden actuar sobre un rango de moléculas objetivo, siempre y cuando esas moléculas
contengan el tipo de enlace o grupo químico a los que se dirigen.
 Los sustratos entran al sitio activo; la Los sustratos son mantenidos en el sitio
enzima cambia de forma de modo que activo por interacciones débiles como
su sitio activo abraza al sustrato (ajuste puentes de hidrógeno y enlaces iónicos.
inducido)

Sustrato CICLO CATALITICO

Complejo
Enzima-Sustrato
DE UNA ENZIMA

El sitio activo queda

disponible para dos
nuevas moléculas
de sustrato El sitio activo (y los grupos R de sus
aminoácidos) pueden bajar la EA y acelerar
la reacción al:
Enzima .actuar como molde para la orientación del
sustrato,
. tensar los sustratos y estabilizar el estado
de transición
Se liberan los . suministrar un microambiente favorable,
productos .participando directamente en la reacción
catalítica.
Productos