UNIVERSIDAD NACIONAL “SIGLO XX”

BIOQUÍMICA FARMACIA
INMUNOLOGIA

2º PARCIAL

EXTENSION

DOCENTE: DR. GROVER LOPEZ SABALA

TRABAJO REALIZADO POR:

UNIVERSITARIA: GARCIA GARCIA BERTHA

PARALELO: 4to año

FECHA: 14 – 09 - 22

POTOSI – LLALLAGUA – CATAVI

BOLIVIA

2022
 PRUEBAS INMUNOLOGICAS EN LA
DETERMINACION DE VIH
1. ELISA

1.1 FUNDAMENTO
Enzimoinmunoanálisis de adsorción (ELISA, por sus siglas en inglés). Por lo
general, esta prueba es la primera en usarse para detectar una infección por el
VIH. Si los anticuerpos contra el VIH están presentes (positivo), la prueba
suele repetirse para confirmar el diagnóstico.
ELISA es el acrónimo en inglés para enzimoinmunoanálisis de adsorción. Se
trata de un examen de laboratorio comúnmente usado para detectar
anticuerpos en la sangre. Un anticuerpo es una proteína que el sistema
inmunitario del cuerpo produce cuando detecta subtancias dañinas, llamadas
antígenos.

1.2 PROCEDIMIENTO
Es necesaria una muestra de sangre. La mayoría de las veces, la sangre se
extrae de una vena que se encuentra en el interior del codo o del dorso de la
mano. La muestra se envía a un laboratorio donde el anticuerpo o antígeno
objeto de estudio se vincula a una enzima específica.

1.3 INTERPRETACION DE RESULTADOS

Positivo: Indica que la persona posee el virus del VIH pero debe realizarse
el examen de sangre ELISA para confirmar el resultado; Negativo: Indica que
la persona no está contagiada con el virus del VIH.

1.4 VALORES NORMALES O DE REFERENCIA

Entre 100,000 y 1 millón de copias: indica un resultado alto, habiendo riesgo de
contagiar el virus; Debajo de 10,000 copias: se consideran valores estables y
menor riesgo para desarrollar SIDA; Debajo de 50 copias: se considera
"indetectable", pudiendo variar de acuerdo al laboratorio.

1.5 LIMITACIONES
 Ver Sustancias Interferentes conocidas en MUESTRA.
 No se debe utilizar pool de muestras.
  No se deben utilizar otros fluidos corporales como la saliva, líquido
cefalorraquídeo u orina.
 El método colorimétrico de verificación del cargado de la muestra no
permite verificar la exactitud de los volúmenes distribuidos sino
solamente validar la presencia de la muestra.
 Ocasionalmente, al efectuar lecturas bicromáticas, pueden obtenerse
absorbancias negativas que no invalidan la determinación. Esto se debe a
que algunas muestras dan lecturas inferiores al Blanco de Reactivos.

1.6 MUESTRA A UTILIZAR

Suero o plasma no diluido

1.7 MATERIALES Y/O EQUIPOS SE UTILIZAN

El equipo habitual incluye pipetas, un dispositivo para lavar placas, un lector de
ELISA (fotómetro) y una computadora con software de evaluación. Algunos
kits de prueba requieren equipo adicional, como una incubadora para mantener
constante la temperatura durante la realización de la prueba.

2. INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA (IFI)

2.1 FUNDAMENTO
Es un conjunto de técnicas diagnósticas que recurren al uso de sustancias
fluorescentes, fluorocromos, que permiten detectar la presencia de un
antígeno o anticuerpo en células o tejidos. Se recurre a esta técnica, sobre
todo, para el diagnóstico de enfermedades autoinmunes.

2.2 PROCEDIMIENTO
Los anticuerpos contra HTLV-1 se unen al antígeno viral que está en las células
adheridas al portaobjeto. Este complejo es detectado mediante la adición de
anti-IgG humana conjugada con isotiocianato de fluoresceina.
La inmunofluorescencia indirecta actúa siguiendo 4 pasos claves:
 Fijación. Se preserva la localización, composición y estructura del
material biológico.
 Permeabilización. Se produce poros en las membranas celulares
permitiendo el ingreso de los anticuerpos a la célula.
 Bloqueo.
 Inmunodetección.
2.3 INTERPRETACION DE RESULTADOS
Los posibles resultados son: Reactivo: Significa que la persona estuvo en
contacto y se contagió con el virus del VIH; No Reactivo: Significa que la
persona no está contagiada con el virus del VIH; Indeterminado: Es necesario
repetir la prueba porque la muestra no fue lo suficientemente clara.

2.4 VALORES NORMALES O DE REFERENCIA

Los valores predictivo positivo y negativo fueron 98,2% y 100%
respectivamente. Estos resultados permiten incorporar a la técnica de IFI
como una prueba alternativa para la confirmación del diagnóstico de infección
por VIH.

2.5 LIMITACIONES
Una de las limitaciones del WB es el diferente valor predictivo diagnóstico que
tiene la presencia de cada una de las bandas, así los anticuerpos contra las
proteínas de la envoltura del VIH son mucho más específicos, aunque también
se han descrito falsos positivos.

2.6 MUESTRA A UTILIZAR

La muestra que se utiliza para la detección de anticuerpos es de suero o
plasma, aunque se dispone de pruebas que utilizan hisopado de mucosa gingival
o yugal (saliva), orina o secreciones vaginales.

2.7 MATERIALES Y/O EQUIPOS SE UTILIZAN

Las primeras pruebas diseñadas con esta técnica permiten la detección,
mediante microscopio de fluorescencia, de antígenos de microorganismos a los
que se han fijado anticuerpos específicos marcados con fluoresceína. Es una
técnica que precisa instrumental de laboratorio, por lo que se escapa del
concepto point of care.
En la actualidad, hay nuevas técnicas de IFA, de alta
sensibilidad/especificidad, diseñadas para ser valoradas sin microscopio, y en
consecuencia accesibles para la utilización en Atención primaria como test de
diagnóstico rápido (TDR). La IFA es un método de inmunodetección “en
sandwich”: el anticuerpo (Ac) de detección en el tampón se une al antígeno (Ag)
en la muestra, lo que forma complejos Ag-Ac, y se transfiere a la matriz de
nitrocelulosa para ser capturado por el otro Ac inmovilizado en la tira de
prueba. Cuanto más Ag hay en la muestra, mayor es el complejo Ag-Ac que se
 forma, dando lugar a una mayor intensidad de la señal de fluorescencia en el Ac
de detección. 

3. PRUEBA DE AGLUTINACION

3.1 FUNDAMENTO
Prueba de aglutinación de partículas para detección de anticuerpos.
Son pruebas que se basan en la unión de los anticuerpos del VIH presentes en
el suero del paciente, con pequeñas partículas que contienen antígeno del virus
en la superficie, bajo el principio tipo sándwich de las pruebas de tercera
generación. Estas pruebas tienen una alta sensibilidad y, relativamente, buena
especificidad, por lo que son muy útiles como pruebas de tamizaje en áreas de
limitados recursos, ya que son rápidas, simples y no requieren equipos

3.2 PROCEDIMIENTO
La muestra se envía a un laboratorio donde se mezcla con gotas de látex
cubiertas con un anticuerpo o un antígeno específico. Si la sustancia
sospechosa está presente, las gotas de látex se agruparán (aglutinarse). Los
resultados de la aglutinación en látex demoran aproximadamente de 15 minutos
a una hora.

3.3 INTERPRETACION DE RESULTADOS

Los posibles resultados son: Reactivo: Significa que la persona estuvo en
contacto y se contagió con el virus del VIH; No Reactivo: Significa que la
persona no está contagiada con el virus del VIH; Indeterminado: Es necesario
repetir la prueba porque la muestra no fue lo suficientemente clara.

3.4 VALORES NORMALES O DE REFERENCIA

Se basan en la aglutinación de partículas sensibilizadas de látex, o eritrocitos,
técnicas de Dot-inmunoensayo y de inmunocromatografia capilar7. La
sensibilidad oscila entre el 85-99%8,9, y la especificidad entre el 93-99%.

3.5 LIMITACIONES
La prueba de aglutinación en látex se hace en un laboratorio para examinar
ciertos anticuerpos o antígenos en fluidos corporales, como la saliva, la orina,
el líquido cefalorraquídeo o la sangre, se debe tener en cuenta que el reactivo
de latex no debe ser contaminado ya que por ello podría ocasionar errores y
además presentar un falso positivo o un falso negativo.
 3.6 MUESTRA A UTILIZAR
El cribado de anticuerpos en muestras de suero es el método más comúnmente
empleado para el diagnóstico de laboratorio de la infección por VIH.

3.7 MATERIALES Y/O EQUIPOS SE UTILIZAN

No se utiliza ningún equipo más que aplicadores y placas, la muestra y el
reactivo además de pro pipetas.

4. IMMUNOBLOT CON ANTÍGENOS RECOMBINANTES (LIA)

4.1 FUNDAMENTO
El ensayo INNO-LIA HIV permite la confirmación y diferenciación de
anticuerpos generados por infecciones con HIV-1, HIV-1 grupo O y HIV-2,
presenta un 100% de sensibilidad contra los subtipos más prevalentes de HIV-
1 y HIV-2 y muestra un 96.7% de especificidad.

4.2 PROCEDIMIENTO
El western blot, inmunoblot o inmunoelectrotransferencia es una prueba útil en
la identificación de anticuerpos contra el VIH; consiste en la separación de los
antígenos virales por electroforesis en geles de poliacrilamida, luego
transferidos a una membrana de nitrocelulosa, que será expuesto
posteriormente con los anticuerpos del suero o plasma problema y al entrar en
contacto con una antiinmunoglobulina marcada con una enzima, reaccionarán
inmunológicamente dando lugar a un patrón de bandas, las cuales serán
interpretadas bajo alguno de los criterios descritos por los organismos
internacionales

4.3 INTERPRETACION DE RESULTADOS

Los posibles resultados son:
Reactivo: Significa que la persona estuvo en contacto y se contagió con el virus
del VIH;
No Reactivo: Significa que la persona no está contagiada con el virus del VIH;
Indeterminado: Es necesario repetir la prueba porque la muestra no fue lo
suficientemente clara.

4.4 VALORES NORMALES O DE REFERENCIA

 Valor de referencia: Valor discriminatorio: Menor que 0,90: NEGATIVO /
Entre 0,90 y 1: LIMÍTROFE / Mayor que 1: POSITIVO.

4.5 LIMITACIONES
Las limitaciones de la técnica son la necesidad de cultivo viral y manejo de
radioisótopos, es demorada, requiere personal experto y es costosa.

4.6 MUESTRA A UTILIZAR

Las pruebas de VIH se pueden realizar con:
 Sangre extraída de una vena.
 Una muestra de sangre obtenida pinchando un dedo.
 Una muestra de orina.

4.7 MATERIALES Y/O EQUIPOS SE UTILIZAN

El IB comercial de la marca Fujirebio INNO-LIA HIV I/II Score
(Inmunoensayo en Línea: sensibilidad 100,0% y especificidad 96.7%) es el kit
más usado como prueba de segunda opinión a las muestras que no resolvió la
IFI, siendo a la vez aplicada en numerosos estudios como estándar de oro, pero
su principal desventaja radica en que sus costos son elevados,
aproximadamente 800 dólares para 20 determinaciones.

5. PRUEBA DE ANTICUERPOS O INMUNOANALISIS

5.1 FUNDAMENTO
En general, después de la infección, las pruebas de anticuerpos que se hacen
con la sangre extraída de una vena pueden detectar el VIH antes que las que
se hacen con la sangre de una punción del dedo o con secreciones bucales.

5.2 PROCEDIMIENTO
 Tomando un poco de fluido de tus encías o una gota de sangre de uno de
tus dedos, colocándolos en un dispositivo para su análisis y obtención del
resultado.
 En caso de un resultado positivo es necesario hacer otra prueba que
confirme ese resultado.
 Conoces tu resultado en unos minutos en lugar de esperar días.
 Son voluntarias, anónimas y confidenciales como todas las pruebas de
VIH.
  En las pruebas de laboratorio los resultados tardan días y se hacen
extrayendo sangre de una vena de un brazo, así son las confirmatorias.

5.3 INTERPRETACION DE RESULTADOS

 Negativo - Significa que la persona no tiene el VIH en su organismo y
para continuar así debe ejercer su sexualidad con responsabilidad,
evitando las prácticas de riesgo y con el uso del condón.
 Positivo - Indica que hay la posibilidad de que tengas el VIH, por lo que
debes realizarte una prueba confirmatoria.

5.4 VALORES NORMALES O DE REFERENCIA

El ensayo de detección del antígeno p24 detecta un nivel de antígeno que
corresponde aproximadamente a un nivel de ARN del VIH de 30.000 a 50.000
copias/ mL y se convierte en positivo, aproximadamente, de cinco a siete días
después de la detección del ARN viral.

5.5 LIMITACIONES
Un resultado positivo falso puede ocurrir si la persona se hace la prueba justo
después de haber tenido una estimulación temporal del sistema inmunológico,
debido a una infección viral o a una vacunación.

5.6 MUESTRA A UTILIZAR

Con las pruebas rápidas de anticuerpos, que generalmente se hacen con la
sangre de una punción del dedo o con secreciones bucales, los resultados están
listos en 30 minutos o menos. Las pruebas rápidas de antígenos y anticuerpos
se hacen mediante una punción del dedo y toman 30 minutos o menos.

5.7 MATERIALES Y/O EQUIPOS SE UTILIZAN

Dispositivo de prueba, Cuentagotas, Buffer, Prospecto, Recipientes de
recogida de muestras, Lancetas (sólo para sangre entera por punción dactilar) ,
Centrífuga, Cronómetro Tubos capilares heparinizados y bulbo dispensador
(sólo para sangre entera por punción dactilar).

6. PRUEBAS DE ANTÍGENOS Y ANTICUERPOS

6.1 FUNDAMENTO
La prueba de antígeno analiza su sangre en busca de un antígeno del VIH
llamado p24. Cuando usted es infectado originalmente con el VIH y antes de
 que su cuerpo tenga la oportunidad de producir anticuerpos para el virus, su
sangre tiene un alto nivel de p24.

6.2 PROCEDIMIENTO
Tomando un poco de fluido de tus encías o una gota de sangre de uno de tus
dedos, colocándolos en un dispositivo para su análisis y obtención del resultado.
Un único antígeno se combinará con su anticuerpo homólogo para formar una
única línea de precipitación. Cuando dos antígenos están presentes, cada uno se
comporta independientemente el uno del otro.

6.3 INTERPRETACION DE RESULTADOS

Una prueba sanguínea de antígeno-anticuerpo busca niveles tanto de
anticuerpos para el VIH como del antígeno p24. Este examen puede detectar
el virus tan solo 3 semanas después de ser infectado. El análisis de seguimiento
también se conoce como prueba confirmatoria.
El resultado positivo confirma definitivamente la infección por el VIH; el
negativo la descarta, excepto cuando existe evidencia de exposición reciente y
reiterada a esta infección. En tales circunstancias se debe repetir el ensayo
luego de tres y seis meses respectivamente.

6.4 VALORES NORMALES O DE REFERENCIA

El rango normal para una persona VIH negativa es de 0.9-6.0, lo que significa 1-
6 células CD4 por cada célula CD8. En las personas con VIH generalmente esta
figura es al revés, ya que tienen más células CD8, más comúnmente 2 CD8 por
cada 1 CD4. Es normal ver números por debajo de 1.0 para la relación
CD4/CD8.

6.5 LIMITACIONES
Debe tenerse en cuenta que son pruebas de tamizaje y que tienen las mismas
limitaciones de período de ventana y que toda prueba reactiva debe
confirmarse, máxime que su resultado es de tipo cualitativo

6.6 MUESTRA A UTILIZAR

Por lo general, las pruebas del VIH se hacen con muestras de sangre o de
secreción bucal. También se pueden hacer con muestras de orina.

6.7 MATERIALES Y/O EQUIPOS SE UTILIZAN

Tarjeta de ensayo, tubo capilar EDTA, lanceta y tampón de arrastre.
7. PRUEBA DE ÁCIDO NUCLEICO

7.1 FUNDAMENTO
Con una prueba de ácido nucleico, el proveedor de atención médica le sacará
sangre de una vena y enviará la muestra a un laboratorio para su análisis. La
prueba puede indicar si la persona tiene el VIH o la cantidad de virus presente
en la sangre (prueba de carga viral de VIH).
Esta prueba mide la cantidad de virus en la sangre. Después de comenzar el
tratamiento para el VIH, el objetivo es tener una carga viral indetectable.
Esto reduce significativamente las posibilidades de infecciones oportunistas y
otras complicaciones relacionadas con el VIH.

7.2 PROCEDIMIENTO
Estas pruebas buscan el virus que realmente está presente en la sangre (carga
viral). También consisten en la extracción de sangre de una vena. Si estuviste
expuesto al VIH en las últimas semanas, es posible que el proveedor de
atención médica te recomiende una prueba de ácido nucleico. La prueba de
ácido nucleico será la primera prueba en dar positivo después de la exposición
al VIH.

7.3 INTERPRETACION DE RESULTADOS

Un resultado positivo indica la detección de ARN viral de VIH o ácidos
nucleicos en el espécimen respiratorio sometido a prueba, que confirma la
infección por el virus de VIH, pero no necesariamente significa que el virus
infeccioso está presente o que el paciente puede contagiar.

7.4 VALORES NORMALES O DE REFERENCIA

El ensayo de detección del antígeno p24 detecta un nivel de antígeno que
corresponde aproximadamente a un nivel de ARN del VIH de 30.000 a 50.000
copias/ mL y se convierte en positivo, aproximadamente, de cinco a siete días
después de la detección del ARN viral.

7.5 LIMITACIONES
En general los ensayos genotípicos basados en la secuenciación poblacional
presentan limitaciones técnicas a distintos niveles (proceso de
retrotranscripción, región estudiada, bases de datos del algoritmo de
interpretación) pero especialmente destaca su baja sensibilidad para detectar
 variantes minoritarias presentes por debajo del 20% de la población viral que
marca la diferencia con los métodos fenotípicos.

7.6 MUESTRA A UTILIZAR

Por lo general, las pruebas del VIH se hacen con muestras de sangre o de
secreción bucal. También se pueden hacer con muestras de orina.

7.7 MATERIALES Y/O EQUIPOS SE UTILIZAN

Con una prueba de ácido nucleico, el proveedor de atención médica le sacará
sangre de una vena y enviará la muestra a un laboratorio para su análisis.
La prueba puede indicar si la persona tiene el VIH o la cantidad de virus
presente en la sangre (prueba de carga viral de VIH).

BIBLIOGRAFIAS

o https://www.mayoclinic.org/es-es/diseases-conditions/hiv-aids/diagnosis-
treatment/drc-20373531
o https://seimc.org/contenidos/documentoscientificos/
procedimientosmicrobiologia/seimc-procedimientomicrobiologia6b.pdf
o https://share.wiener-lab.com/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/
hiv_ag_ac_elisa_4_generacion_sp.pdf
o http://www.revistabioanalisis.com/images/flippingbook/rev%2090n/nota
%202.pdf
o https://sepeap.org/test-de-diagnostico-rapido-por-inmunofluorescencia-ifa/
o http://www.scielo.org.pe/scielo.php?pid=S2308-
05312021000400696&script=sci_arttext#:~:text=El%20western%20blot%2C
%20inmunoblot%20o,ser%C3%A1%20expuesto%20posteriormente%20con%20los