Determinación de metales pesados por espectrofotometría en

LABORATORIOS “MSV”
PROCEDIMIENTO PE/MSV/FQ/___
PARA LA DETERMINACION DE METALES PESADOS POR
ESPECTROFOTOMETRIA
Edición N. ª: 01
Fecha de emisión: ____ de ___ de 2023
COPIA CONTROLADA Nº: Fecha:

ASIGNADA A:
Elaborado por: Paola Espinoza. Revisado por: Sandra Guaraca Aprobado por: Sandra Guaraca
Cargo: Pasante Cargo: Gerente Técnico Cargo: Gerente de laboratorio
Firma: Firma Firma

Fecha: 17/04/2023 Fecha: 17/04/2023 Fecha: 17/04/2023
FPG0101-01
PE/MSV/FQ/
Procedimiento para la determinación de metales pesados por
espectrofotometría.
HISTÓRICO DE MODIFICACIONES
EDICIÓN
FECHA HOJAS AFECTADAS CAUSA DEL CAMBIO
NO
FPG0102-01 Edición 01: diciembre 2022

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PE/MSV/FQ/
Contenido
OBJETO........................................................................................................................................................5
ALCANCE......................................................................................................................................................5
REFERENCIAS...............................................................................................................................................5
Documentos de Referencia.....................................................................................................................5
Documentos Asociados...........................................................................................................................6
GENERAL......................................................................................................................................................6
Introducción............................................................................................................................................6
Principio del método...............................................................................................................................6
Interferencias..........................................................................................................................................7
DESCRIPCION...............................................................................................................................................8
Materiales, Equipos y Reactivos..............................................................................................................8
Materiales...............................................................................................................................................8
Equipos....................................................................................................................................................8
Reactivos.................................................................................................................................................8
Patrones de referencia............................................................................................................................9
Preparación.................................................................................................................................................9
Acondicionamiento de muestra y equipo................................................................................................9
Ajustes y calibraciones antes del análisis...............................................................................................10
Preparación de reactivos.......................................................................................................................10
a) Arsénico.....................................................................................................................................10
b) Cadmio......................................................................................................................................11
c) Cobre.........................................................................................................................................12
d) Plomo........................................................................................................................................12
e) Mercurio....................................................................................................................................13
Condiciones ambientales.......................................................................................................................14
Realización.................................................................................................................................................14
Identificación de las muestras...............................................................................................................14
Toma de muestras, conservación y almacenamiento............................................................................14

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Transporte de muestras........................................................................................................................14
Preparación de la muestra.....................................................................................................................14
a) Arsénico.....................................................................................................................................14
b) Cadmio......................................................................................................................................14
c) Cobre.........................................................................................................................................14
d) Plomo........................................................................................................................................15
e) Mercurio....................................................................................................................................15
Medición................................................................................................................................................15
a) Arsénico.....................................................................................................................................15
b) Cadmio......................................................................................................................................16
c) Cobre.........................................................................................................................................17
d) Plomo........................................................................................................................................17
e) Mercurio....................................................................................................................................19
Tratamiento de Resultados.......................................................................................................................20
Cálculos.................................................................................................................................................20
a) Arsénico.....................................................................................................................................20
b) Cadmio......................................................................................................................................20
c) Mercurio....................................................................................................................................21
Cálculo de Incertidumbre......................................................................................................................21
Informe de resultados...........................................................................................................................21
Medidas de seguridad...............................................................................................................................21
Control de calidad.....................................................................................................................................21
Inter comparaciones..............................................................................................................................21
Control Interno......................................................................................................................................21
Criterios de aceptación y rechazo..........................................................................................................22
Anexos:......................................................................................................................................................22

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OBJETO
El presente documento tiene por objeto describir los pasos a seguir para la determinación
de metales pesados en alimentos por espectrofotometría.
ALCANCE
Este procedimiento es aplicable para todo tipo de alimento no importa su naturaleza
siempre y cuando se someta al proceso de digestión descrito.
REFERENCIAS
Documentos de Referencia
Manual Methods of Analysis for Adulterants and Contaminants in Foods I.C.M.R 1990 Page 144
/AOAC 15th edn, Official Method 942.17 Arsenic in Food Molybdenum Blue Method)
NORMA TÉCNICA ECUATORIANA. INEN 980. AGUA POTABLE. DETERMINACIÓN DE
ARSENICO. METODO DEL DIETILDITIOCARBAMATO DE PLATA.
https://www.normalizacion.gob.ec/buzon/normas/980.pdf
AOAC 15th edn Official Method 945.58 Cadmium in Food, Dithiozone Method/Manual Methods
of Analysis for Adulterants and Contaminants in Foods I.C.M.R, 1990 Page 148.
Normativa Venezolana. COVENIN 2137-84. AGUA POTABLE. DETERMINACIÓN DE CADMIO
METODO DE LA DITIZONA POR ESPECTROFOTOMETRIA.
http://www.sencamer.gob.ve/sencamer/normas/2137-84.pdf
Manual Methods of Analysis for Adulterants and Contaminants in Foods I.C.M.R 1990 Page 150
/ AOAC 15th edn, Official Method 960.40 Copper in Food.
NORMA Oficial Mexicana NOM-AA-64-1978 Análisis de agua. Determinación de mercurio.-
Método colorimétrico de la ditizona. https://dof.gob.mx/nota_detalle.php?
codigo=4775842&fecha=24/01/1979&print=true#:~:text=Este%20m%C3%A9todo%20se
%20basa%20en,de%20onda%20de%20490%20mm.
Manual Methods of Analysis for Adulterants and Contaminants in Foods, I.C. M.R 1990,
Page156.
FSSAI. (2016). Manual de Métodos de Análisis de Metales Pesados en Alimentos.
AUTORIDAD DE NORMAS Y SEGURIDAD ALIMENTARIA DE LA INDIA.

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Documentos Asociados
MSDS (Hojas de seguridad de productos químicos)

Procedimiento PC/MSV/03 Calibración y/o verificación de material volumétrico
GENERAL
Introducción
La espectrofotometría es una técnica ampliamente utilizada para la determinación de

metales pesados en diversas matrices, incluidos alimentos, agua, suelo y muestras
biológicas. El principio de la espectrofotometría se basa en la absorción de luz por una
especie química en una longitud de onda específica. Los metales pesados como el plomo,
el cadmio, el arsénico y el mercurio tienen espectros de absorción únicos que permiten su
detección y cuantificación por espectrofotometría. En el análisis de metales pesados por
espectrofotometría, normalmente se prepara una muestra por extracción o digestión para
liberar los metales pesados de la matriz. Luego, la muestra se analiza con un
espectrofotómetro, que mide la absorción de luz por parte de los iones metálicos en la
muestra. La longitud de onda utilizada para el análisis depende del metal específico que se
analice y, por lo general, se determina empíricamente. Un método común para el análisis
de metales pesados por espectrofotometría es el uso de agentes quelantes, que forman
complejos con los iones metálicos y mejoran su absorción a una longitud de onda
específica.
Principio del método

 Arsénico: El arsénico inorgánico es reducido a arsenamina, AsH3, por acción del
zinc en solución ácida en un generador Gutzeit. La arsenamina pasa a través de un
depurador que contiene lana de vidrio impregnado con solución de acetato de
plomo, a un tubo de absorción que contiene dietilditiocarbamato de plata disuelto en
piridina, donde reacciona el arsénico con la plata, dando un complejo rojo soluble,
coloración que es adecuada para la determinación colorimétrica.

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 Cadmio: La muestra se digiere con H2SO4 y HNO3. El pH de la solución se ajusta

a 9.0. Los metales de la ditizona junto con el cadmio se extraen de la solución
acuosa con solución de cloroformo de ditizona, se estima fotométricamente a 510
nm.
 Cobre: La muestra se digiere con HNO3 y H2SO4. El cobre se aísla y se determina
calorimétricamente a pH 8,5 como dietil ditiocarbamato en presencia del agente
quelante EDTA a 400nm . El intervalo de medida del color es de 0 a 50 μg.
 Plomo: La muestra se convierte en cenizas y la solución ácida de cenizas se
neutraliza con amoníaco en presencia de citrato. Varios otros elementos
interferentes se acomplejan con cianuro y el plomo se aísla como ditizonato de
plomo en CHCl3. El color producido se lee a 510 nm y se compara con el patrón
conocido.
 Mercurio: La muestra se digiere con HNO3 y H2SO4 bajo reflujo en un digestor, el
mercurio se aísla por extracción con ditizona y se estima por medición fotométrica
del ditizonato de mercurio a 490 nm. Límite mínimo de detección de 0.002 mg/l.
Interferencias.
Metal Interferencias
Arsénico Aunque ciertos metales, tales como el cromo, cobalto, cobre, mercurio, níquel platino y
plata, interfieren en la generación de arsenamina, las concentraciones normales existentes
de estos elementos en muestras de agua no interfieren significativamente.
Las sales de antimonio producen la estibamina, SbH3 , que puede interferir en el desarrollo
del color por producir un color rojo con un máximo de absorción a 510 n m.
La cantidad mínima detectable es de 1 µg de As.
Es necesario que el sistema de producción de arsenamina sea hermético para evitar
pérdidas.
La conservación de la muestra puede hacerse con ácido nítrico a pH < 2 hasta 6 meses en
recipientes de plástico o de vidrio.
Cadmio Bajo condiciones del método, las concentraciones de iones metálicos de agua no
interfieren. Concentraciones de 6 mg de zinc hasta 3mg y cobre hasta 1mg, no interfieren.
Mercurio El cobre, oro, paladio, platino divalente y plata reaccionan con la ditizona en solución ácida.
El cobre es separado durante el procedimiento permaneciendo en la fase orgánica,

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mientras que el mercurio es trasferido a la fase acuosa. Los otros interferentes

normalmente no se presentan.
La determinación se debe llevar a cabo rápidamente debido a que el ditizonato mercúrico
es fotosensible
DESCRIPCION
Materiales, Equipos y Reactivos
Materiales
 Probeta
 Erlenmeyer
 Lana de Vidrio.
 Vasos de precipitación.
 Embudo de Separación
 Lana de vidrio p.a.
Equipos
 Balanza analítica (FQ-MSV-010)
 Arsénico: Generador de arsenamina y tubo de absorción. Ver figura 1 adjunta en
anexos.
 Espectrofotómetro.
 Placa calentadora.
Reactivos
Tabla 1. Reactivos necesarios para cada determinación de metales pesados por espectrofotometría.
Metal Pesado Reactivos
Arsénico Ácido clorhídrico concentrado.
Solución de yoduro de potasio.
Solución de cloruro estannoso.
Solución de acetato de plomo.
Solución de dietil-ditiocarbamato de plata.
Solución madre de arsénico.
Solución intermedia de arsénico.
Solución patrón de arsénico.
Agua destilada.
Cadmio Solución de cadmio
Solución patrón de cadmio
Tartrato de sodio y potasio, NaK4,H4,O6, para análisis.

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Solución de tartrato de sodio y potasio:

Solución de clorhidrato de hidroxilamina
Cloroformo, CHCl3.
Solución de Ácido tartárico.
Solución de trabajo de ditizona.
Solución indicadora de azul de timol.
Cobre Solución de dietilditiocarbamato sódico.
Solución de citrato-EDTA.
Hidróxido de amonio 6N.
Solución patrón de cobre:
 Solución madre.
 Solución intermedia.
 Solución de trabajo.
Plomo  Solución patrón de plomo
a) Solución madre.
b) Solución de trabajo
 Ácido nítrico (1%).
 Solución acidificante.
 Solución de ácido cítrico.
 Solución de ditizona.
 Solución de cianuro potásico.
 Mezcla de amoníaco y cianuro
 Papel de filtro lavado.
Mercurio  Ácido sulfúrico H2SO4concentrado
 Sulfato de sodio anhidro Na2SO4
 Cloroformo CHCl3
 Solución de permanganato de potasio KMnO4
 Solución de persulfato de potasio K3S2O8
 Solución de clorhidrato de hidroxilamina NH2OH.HC1:
 Solución de bromuro de potasio KBr
 Solución de ditizona C13H12N4S
 Solución amortiguadora (buffer) de fosfato-carbonato
 Solución de ácido sulfúrico H2SO4 0.25N
 Solución patrón de mercurio.
a) Solución patrón de mercurio concentrada
b) Solución patrón de mercurio diluida
Patrones de referencia
 Material de referencia certificado
Preparación
Acondicionamiento de muestra y equipo.
 Acondicionar la muestra a temperatura ambiente.
 Acondicionar el espectrofotómetro con las celdas y las longitudes de onda necesarias
para cada determinación.

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Ajustes y calibraciones antes del análisis

 Verificar la fecha de caducidad de los reactivos utilizados
 Verificar que los materiales usados se encuentren limpios y secos.
 Revisar el estado de limpieza de los equipos, de presentar contaminación o
suciedades visibles seguir lo establecido en I/MSV/FQ/06 y I/MSV/FQ/09
 Revisar la fecha calibración y/o verificación de la bureta y probeta.
Preparación de reactivos
a) Arsénico
 Solución de yoduro de potasio. Disolver 15 g de KI en 100 cm3 de agua destilada;
guardar en un recipiente de vidrio oscuro.
 Solución de cloruro estannoso. Disolver 40 g de Sn C122H20 libre de arsénico en
100 cm3 de ácido clorhídrico concentrado.
 Solución de acetato de plomo. Disolver 10 g de Pb (C2H302) 3 H2O en 100 cm3 de
agua destilada.
 Granallas de zinc. 20 - 30 mallas grado analítico
 Solución de dietil-ditiocarbamato de plata: Puede prepararse el reactivo de la
siguiente forma:
a) Disolver 1 g de AgSCSN (C2H5)2 en 200 cm3 de piridina; debe conservarse en un
recipiente de vidrio oscuro.
b) Disolver 410 mg de 1-efedrina en cloroformo y añadir 625 mg Ag SCSN (C2H5)2
llevar a volumen de 250 cm3 con cloroformo. Filtrar el reactivo y guardar en frasco
oscuro.
 Solución Patrón de Arsénico:
a) Solución madre de arsénico. Disolver 1,320 g de trióxido de arsénico, (As203) en 10
cm3 de una solución al 40% de hidróxido de sodio y diluir hasta 1000 cm3 con agua
destilada; 1 cm3 de esta solución contiene 1 mg de arsénico. (Trabajar con sumo
cuidado, considerando la toxicidad del reactivo).
b) Solución intermedia de arsénico. Diluir 5 cm3 de la solución madre (solución madre
de As) hasta 500 cm3 con agua destilada; 1 cm3 de esta solución contiene 10 µg de
arsénico.
c) Solución patrón de arsénico. Diluir 10 cm3 de la solución intermedia (Solución
intermedia de As) hasta 100 cm3 con agua destilada; 1 cm3 de esta solución contiene 1
µg de arsénico.
b) Cadmio
 Solución de cadmio: Pesar 100 mg de cadmio metálico puro y disolver en una solución
compuesta por 20 ml de agua destilada y 5 ml de HCl conc, calentar para facilitar la
disolución del metal. Transferir a un matraz aforado capacidad 1000mL y aforar con
agua destilada.

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 Solución patrón de cadmio: Transferir 10 ml de solución de cadmio a un matraz

aforado de 1000mL y añadir 10 ml de HCl conc y se lleva a volumen con agua destilada.
Usarse el mismo día que se prepara.
 Solución de tartrato de sodio y potasio: Disolver 250 gr de tartrato de sodio y potasio
en agua destilada y se lleva a volumen de un litro.
 Soluciones de hidróxido de sodio-cianuro de potasio
a) Solución I: Disolver 400 g de hidróxido de sodio (NaOH) y 10 gr de cianuro de
potasio (KCN) en agua destilada y aforar a 1000ml. Esta solución es estable por 1
mes.
b) Solución II. Disolver 400 g de hidróxido de sodio (NaOH) y 0,5 g de cianuro de
potasio (KCN) en agua destilada y aforar a 1000ml.
NOTA. PRECAUCIÓN: Cianuro de potasio es extremadamente venenoso. Se deben tener precauciones
especiales cuando se maneja.
 Solución de clorhidrato de hidroxilamina (NH 2OH.HCl.): Disolver 20 g de clorhidrato
de hidroxilamina en agua destilada y aforar a 100 ml.
 Cloroformo, CHCl3.
 Ácido tartárico, H2C4H4O6
 Solución de Ácido tartárico: Disolver 20 gr de ácido tartárico en agua destilada y
aforar a 1000mL, mantenerse refrigerada y usarse fría.
 Difenil-tiocarbazona (Ditizona):
 Solución patrón de ditizona I: Disolver 100 mg de ditizona en 50 ml de cloroformo en
un vaso de precipitado de 150 ml y filtrar empleando Whatman o equivalente en un
embudo de separación de 500ml, lavar con 2 porciones de cloroformo de 5 ml cada una.
Añadir 100 ml de solución de hidróxido de amonio al embudo y agitar moderadamente
por 1 minuto; se produce la separación de las capas, transferir a un embudo de
separación de 250 ml, reteniendo la capa acuosa rojo-naranja en el embudo de
separación de 500 ml. Se repite la extracción recibiendo la capa de cloroformo en otro
embudo de separación de 250 ml y se transfiere la capa acuosa, usando solución de
hidróxido de amonio, al embudo de 500 ml que contiene el primer extracto. Se repite la
extracción, transfiriendo la capa acuosa al embudo de 500 ml, se descarta la capa de
cloroformo. A los extractos combinados en el embudo de separación de 500 ml se
añade solución de HCl (1+1) en porciones de 2 ml, mezclando después de cada
adición, hasta que precipite la ditizona y la solución no sea rojo-naranja. Se extrae el
precipitado de ditizona con tres porciones de cloroformo de 25 ml cada una. Se diluyen
los extractos combinados a 1000 ml con cloroformo (1 ml = 100 mg ditizona).
 Solución de trabajo de ditizona: Diluir una alícuota de solución patrón de ditizona con
cloroformo para producir una solución de trabajo de 10 mg/ml. Debe prepararse a diario.
 Solución indicadora de azul de timol: Disolver 0,4 gr de sal de timol-sulfon-ftalefna de
sodio en 100 ml de agua destilada.

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c) Cobre
 Solución de dietilditiocarbamato sódico (1,0% p/v): Disolver 1,0 gr de la sal en agua
y diluir hasta 100ml con agua y filtrar. Almacenar en el frigorífico y preparar
semanalmente.
 Solución de citrato-EDTA: Disolver 20 gr de citrato de amonio dibásico y 5 gr de
Na2EDTA en agua y diluir hasta 100ml. Eliminar las trazas de cobre añadiendo 0,1 ml
de solución de carbamato y extrayendo con 10ml de CCl4. Repetir la extracción hasta
que el extracto de CCl4 sea incoloro.
 Hidróxido de amonio - 6N: Purificar como en Solución de citrato-EDTA.
 Solución patrón de cobre:
a) Solución madre: Colocar 0,2500 gr de alambre o lámina de Cu en un matraz
Erlenmeyer de 125ml. Añadir 15ml de HNO3 (1+4), tapar el matraz con vidrio de
reloj y dejar que el cobre se disuelva, calentando hasta que se complete la
disolución. Hervir para expulsar los humos, enfriar y diluir a 250ml.
b) Solución intermedia: (100 μg/ml) - Diluir 10mL de solución madre hasta 100mL con
agua.
c) Solución de trabajo: (2 μg/ml) - Preparar diariamente diluyendo 5mL de solución
estándar intermedia a 250mL con H2SO4 2N.
d) Plomo
 Ácido nítrico (1%): Diluir 10ml de HNO3 fresco e incoloro (sp. Gr. 1.40) hasta 1000ml
con agua destilada. Si el ácido se redestila, hervir los vapores nitrosos antes de diluir.
 Solución "acidificante": Disolver 40 gr
Nitrato de aluminio nonahidratado (Al (NO3)3.9H2O) y 20 gr Nitrato de calcio
tetrahidratado (Ca (NO3)2.4H2O) en 100 ml de agua.
 Solución de ácido cítrico: Solución concentrada sin plomo. Preparar la solución de
forma que 1 ml de solución contenga aproximadamente 0,5 gr de ácido cítrico.
 Solución de ditizona: (1 mg/ml en CHCl3): Disolver 100 mg de ditizona purificada en
cloroformo y diluir hasta 100 ml. Preparar soluciones diluidas según sea necesario
diluyendo la solución madre con cloroformo.
 Solución de cianuro potásico (10% p/v): Disolver 25 gr de KCN recristalizado, libre de
fosfatos, en agua y diluir en 100 ml libre de fosfatos y diluir hasta 250 ml.
 Mezcla de amoníaco y cianuro: A 100 ml de solución de cianuro potásico al 10% en
un matraz aforado de 500 ml matraz aforado de 500 ml, añadir suficiente solución de
NH4OH para introducir 19,1 gr de NH3 y diluir hasta volumen con agua.
 Papel de filtro lavado: Remojar papeles cuantitativos de 9 cm durante toda la noche en
HNO3 al 1%. Lavar con grandes volúmenes de agua sobre buchner para eliminar el
ácido y cualquier resto de plomo.
 Solución patrón de plomo:
c) Solución madre: (1 mg Pb/ml en HNO3 al 1%): Disolver 1,5985 gr de cristal puro de
Pb (NO)2 en HNO3 al 1% y diluir hasta 1000ml.

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d) Solución de trabajo: Preparar según sea necesario diluyendo adecuadamente la

solución madre con solución de HNO3 al 1%.
e) Mercurio
 Ácido sulfúrico H2SO4concentrado
 Sulfato de sodio anhidro Na2SO4
 Cloroformo CHCl3
 Solución de permanganato de potasio KMnO4: Disolver 5 g de permanganato de
potasio en 100 ml de agua.
 Solución de persulfato de potasio K3S2O8: Disolver 5 g de persulfato de potasio en
100 ml de agua.
 Solución de clorhidrato de hidroxilamina NH2OH.HC1: Disolver 50 g de clorhidrato de
hidroxilamina en 100 ml de agua.
 Solución de bromuro de potasio KBr: Disolver 40 g de bromuro de potasio en 100 ml
de agua.
 Solución de ditizona C13H12N4S: Disolver 6 mg de ditizona en un litro de cloroformo.
 Solución amortiguadora (buffer) de fosfato-carbonato: Disolver 150 g de fosfato
ácido disódico dodecahidratado (Na2HPO412H2O), y 38 g de carbonato de potasio
anhidro (K2CO***) en un litro de agua. Hacer extracciones con porciones de 10 ml de
ditizona hasta que la última porción permanezca de color azul. Lavar con cloroformo
para remover el exceso de ditizona.
 Solución de ácido sulfúrico H2SO4 0.25N: Aforar 7 ml de ácido sulfúrico al 90% a un
litro con agua.
 Solución patrón de mercurio.
a) Solución patrón de mercurio concentrada: Disolver 135.4 mg de cloruro de mercurio
HgCl2 en aprox 700 ml de agua, añadir 1.5 ml de ácido nítrico HNO3 concentrado y
llevar a un litro con agua (1.00 ml de esta solución equivale a 100 µg de Hg).
b) Solución patrón de mercurio diluida: Aforar 10 ml. de la solución patrón de mercurio
concentrada a un litro con agua (1.00 ml de esta solución equivale a 1 µg de Hg).
Condiciones ambientales
No aplica

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Realización
Identificación de las muestras
Durante la preparación, análisis, y almacenaje, las muestras son identificadas con un
código único de acuerdo con la sección 19 de manual de calidad. Numeral 3.2
Toma de muestras, conservación y almacenamiento

Las muestras pueden ser recolectadas en envases de vidrio o plástico que se
encuentren limpios.
Transporte de muestras
De manera general, es necesario conservar las muestras a baja temperatura 0 a 4 °C
durante el transporte de esta, así como dar un buen sellado del recipiente para evitar
pérdidas de la muestra durante su transporte al laboratorio, en la caja térmica.
Preparación de la muestra.
a) Arsénico
Colocar 35 ml de la muestra en el frasco generador limpio. Añadir sucesivamente, con
agitación enérgica después de cada adición, 5 ml de HCI conc. 2 ml de solución de KI y 8
gotas de solución de SnCL2, dejar 15 min para la reducción del arsénico al estado trivalente.
b) Cadmio
Digerir una cantidad adecuada de muestra equivalente a 5 a 10 gr de producto calculado en
base seca. Para el agua potable cuyo contenido de cadmio es inferior a 10 ug/L, añadir 0,5
ml de HCl conc a 200 ml y evaporar hasta llegar a 20 ml, adicionar unas pocas gotas de
solución indicadora de azul de timol y seguidamente solución de hidróxido de sodio 6 N,
hasta que el indicador comience a virar a amarillo a un pH de aproximadamente 2,8. Se
lleva a volumen de 25 ml con agua destilada y se procede de la misma forma que se indica
en la medición de cadmio.
c) Cobre
Pesar la muestra que no contenga más de 20 gr de sólidos en función del contenido de
cobre previsto. Si la muestra contiene menos del 75% de agua, añadir agua para obtener
esta dilución. Añadir un volumen inicial de HNO3 igual a unas dos veces el peso de la
muestra seca y un volumen de H2SO4 igual a tantos gramos de muestra seca pero no
inferior a 5ml. Calentar ligeramente el contenido, añadiendo con precaución pequeña
cantidad de HNO3 cada vez que la mezcla se vuelva marrón. Continuar la digestión hasta
que se destruya la materia orgánica y se desprendan vapores de SO3. Enfriar, filtrar, lavar
el residuo con agua, añadir H2SO4 al filtrado y realizar la digestión. Después de la

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digestión, enfriar, añadir 25ml de agua y calentar a ebullición, enfriar y diluir a 100ml con
agua. Preparar el blanco de reactivo de forma similar.
d) Plomo
Pesar de 5 a 10gr en un plato de sílice limpio. Secar la muestra húmeda en baño de vapor
o en horno. Quemar la muestra con cuidado sobre el quemador. No deje que el material se
inflame. Carbonizar la muestra mediante una llama suave (como la de un quemador
Argand) para volatilizar al máximo la materia orgánica. Cuando la muestra esté seca y
carbonizada, colocar en un horno de mufla de temperatura controlada. Cubrir el suelo del
horno con una placa de amianto o de SiO2 para que la muestra reciba la mayor parte del
calor por radiación y no por conducción. Caliente la muestra a temperaturas no superiores a
500°C durante unas 8 a 10 horas. Cuando se obtenga ceniza limpia, enfriar, cubrir la
cápsula con vidrio de reloj y añadir 15 a 20 ml de HCl conc, enjuagar el vidrio de reloj con
agua y calentar en baño de vapor. Si no se obtiene una solución clara, evaporar hasta
sequedad y repetir la adición de HCl. Diluir la solución clara con agua hasta un volumen
definido (filtrar la solución si es necesario, lavar el material insoluble en el filtro
sucesivamente con unos pocos ml de agua). Si es necesario, lavar el material insoluble en
el filtro sucesivamente con unos ml de HCl caliente, ácido clorhídrico caliente, solución de
ácido cítrico y NH4OAC caliente al 40% y completar hasta 100 ml.
e) Mercurio
En todas las determinaciones utilizar muestra equivalente a menos o igual a 10 gr en base
de peso seco. Colocar la muestra pesada en un matraz de digestión con 6 perlas de vidrio y
añadir, a través de un embudo cuentagotas, 20 ml de HNO3. Pasar una corriente rápida de
agua a través del condensador, ajustar la llave de paso de la unidad Soxhlet a la posición
de reflujo y aplicar una pequeña llama al matraz. Una vez finalizada la reacción inicial,
aplicar calor para que el digerido refluya. Si la mezcla se oscurece, añadir HNO3 gota a
gota a través del embudo según sea necesario. Continuar refluyendo 0,5 h o hasta que el
digerido no cambie de consistencia, y enfriar. Añadir lentamente 20ml de mezcla fría de
HNO3 - H2SO4 (1+1). Deje que el digerido adquiera un color marrón oscuro (NO NEGRO)
antes de añadir más incrementos de HNO3. El digerido debe ser incoloro o amarillo pálido.
Dejar enfriar el digerido en el matraz de reacción y añadir dos porciones de 50 ml de agua a
través del condensador. Haga refluir la solución hasta que todo el NO2 haya sido expulsado
del aparato. Añadir 5mL de solución de urea al 40% p/v y refluir 15 min. El digerido debe
ser incoloro o amarillo pálido.
Medición
a) Arsénico
La determinación debe efectuarse por duplicado.
1. Preparación del depurador y solución de absorción. Impregnar la lana de vidrio
del depurador con la solución de acetato de plomo. No humedecer demasiado, ya
que el agua puede caer en la solución de reacción. Colocar 4 cm3 de la solución de
dietilditiocarbamato de plata en el tubo de absorción.
2. Generación y medición de la arsenamina.

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- Añadir al generador 3 g de zinc y conectar el conjunto depurador-absorbedor

inmediatamente, asegurarse de que las conexiones sean herméticas.
- Dejar 30 min. para la reacción completa a arsenamina. Calentar suavemente el
generador para asegurar la conversión total.
- Trasvasar directamente la solución del absorbedor a una celda de 1 cm del
espectrofotómetro y medir la absorbancia de la solución a 535 nm.
- Usando el reactivo dietilditiocarbamato de plata como blanco.
3. Utilizando la curva de calibración para arsénico, determinar la concentración de
arsénico correspondiente a la absorbancia de la muestra.
b) Cadmio
Preparación de la curva patrón: Transferir alícuotas de la solución patrón de cadmio a una
serie de embudos de separación, equivalentes a 0 (blanco); 2,00;4,00; 6,00; 8,00 y 10,00 ug de
cadmio. Se añade suficiente agua destilada para llevar a un volumen final de 25 ml.
Desarrollo del color, extracción y medida:
1. Añadir los siguientes reactivos en el orden que se indica a continuación, mezclando
después de cada adición: 1 ml de solución de tartrato de sodio y potasio; 5 ml de
solución I de hidróxido de sodio-cianuro de potasio; 1 ml de solución de Clorhidrato de
hidroxilamina y 15 ml de solución patrón de ditizona.
2. Tapar los embudos y se agitar por 1 min, descargar la presión de vapor a través de la
tapa.
3. Vaciar la capa de cloroformo a un segundo embudo que contenga 25 ml de solución fría
de ácido tartárico.
4. Añadir 10 ml de cloroformo al primer embudo, agitar por un minuto y vaciar nuevamente
el cloroformo en el segundo embudo, evitando que la capa acuosa sea también
transferida.
5. Agitar el segundo embudo por dos minutos y descartar la capa de cloroformo, añadir 5
ml de cloroformo, agitar por 1 min y se vuelve a descartar la capa de cloroformo lo más
exactamente posible.
6. Añadir 0,25 ml de solución de clorhidrato de hidroxilamina, 15,0 ml de solución de
trabajo de ditizona y 5 ml de solución II de hidróxido de sodio-cianuro de potasio en el
orden mencionado e inmediatamente se agita por 1 min.
7. Insertar un tapón de algodón en el conducto del embudo y filtrarla capa de cloroformo a
un tubo fotométrico seco.
8. Leer la absorbancia a 518 nm contra el blanco.
9. Elaborar la curva de calibración.
c) Cobre
1. Pipetear una alícuota de 10 ml adecuada del digerido de la muestra en un embudo de
separación, añadir H2SO4 2N para hacer un volumen total de 25ml y añadir 10ml de
reactivo citrato EDTA. Añadir dos gotas de indicador azul de timol y NH4OH 6N gota a
gota hasta que la solución se vuelva verde o azul verdoso.

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2. Enfriar y añadir 1ml de solución de carbamato y 15ml de CCl4. Agitar vigorosamente

durante 2 min. Dejar que las capas se separen y escurrir el CCl4 a través de un algodón
en un tubo de vidrio con tapón.
3. Determinar la absorbancia "A" a 400 nm. Para comprobar la presencia de Bi y Te,
devolver la solución de CCl4 al separador, añadir10ml de solución de KCN al 5,0% y
agite durante 1 minuto. Si la capa de CCl4 se vuelve incolora, Bi y Te están ausentes.
4. Escurrir la capa de CCl4 en el segundo separador, añadir 10 ml de NaOH 1N y agite
durante 1 minuto. Dejar que las capas se separen y escurrir el CCl4 en el tercer
separador. Lavar nuevamente el extracto de CCl4 con 10ml de NaOH 1N.
5. Determinar la absorbancia de la capa de CCl4 y convertir a μg de Cu.
NOTA: No se recomienda el método de extracción con KCN debido al riesgo ambiental.
Preparación de la curva estándar:

Transferir 0, 1, 2,5, 5, 10 y 25 ml de solución patrón de cobre (2μg/ml) a separadores y añadir
H2SO4 2N para hacer un volumen total de 25ml. Añadir 10ml de reactivo citrato EDTA y
proceder como se indica en la medición de cadmio. Añadir dos gotas de indicador azul de timol.
Representar gráficamente la absorbancia 'A' frente a μg de cobre.
d) Plomo
1. Transferir una alícuota adecuada de solución de cenizas de la muestra a un separador
de 250ml y añadir reactivo de ácido cítrico equivalente a 10 gr de ácido cítrico y mezclar
bien. Hacer ligeramente alcalina al tornasol con NH4OH, manteniendo la solución fría,
agitar suavemente y dejar reposar 1 a 2 min. En este punto, la solución debe ser clara y
sin precipitados. (Si se forma precipitado, redisolver con HCl, transferir la solución a un
matraz Erlenmeyer tapado y ajustar a pH 3,0 a 3,4 (azul de bromofenol) con NH4OH).
2. Si la cantidad de plomo esperada es pequeña, añadir de 5 a 10 mg de CuSO4. 5H2O
puro a la solución.
3. Pasar en H2S hasta que la solución esté saturada (3 a 5 min), filtrar inmediatamente
con succión. Disolver el residuo de sulfuros precipitados, sin lavado previo, con 5 ml de
HNO3 caliente arrastrar la solución al matraz original, lavar con agua caliente.
4. Tapar el matraz, agitar bien los lavados con HNO3, agua destilada y hervir la solución
para eliminar el H2S. Transferir esta solución al separador, añadir solución de citrato
equivalente a 5 gr de ácido cítrico, formar amoniaco y proceder de la siguiente manera:
5. A la solución clara obtenida, añadir 5ml de solución de KCN al 10% (puede ser
necesario más si hay grandes cantidades de Zn, Cu, Cd, etc.), agitar y comprobar el pH
de la solución añadiendo una gota de solución indicadora de azul de timol (el pH debe
ser preferiblemente de 8,5 a 9,5).
6. Añadir inmediatamente 20ml de solución de ditizona, agitar durante 20 a 30 segundos y
dejar que se separen las capas.
7. Transferir la capa de CHCl3 a un separador pequeño que contenga 25mL de HNO3 al
1%, continuar las extracciones hasta que la capa de CHCl3 sea claramente verde.
Escurrir todos los extractos en el separador pequeño que contiene HNO3 al 1,0%.

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8. Agitar bien los extractos combinados en el pocillo del separador más pequeño y escurrir
la capa verde de ditizona en otro separador que contenga una porción adicional de 25
ml de HNO3 al 1,0%. Agitar el contenido del separador, dejar que las capas se separen
y desechar la capa orgánica.
9. Filtrar sucesivamente los extractos ácidos, que contienen plomo, a través de una
pequeña porción de algodón húmedo insertada en el cuello del embudo, en un matraz
de 50ml utilizando el segundo extracto ácido para enjuagar el separador en el que se
hizo la primera extracción.
10. Tomar una alícuota adecuada (o todo el volumen, si es necesario) de los 50mle solución
de HNO3 al 1,0% que contenga plomo y suficiente reactivo HNO3 al 1,0% para que el
volumen total volumen total a 50ml.
11. Añadir 10ml de la mezcla de amoniaco y cianuro y mezclar (el pH es aproximadamente
9,7).
12. Añadir inmediatamente un volumen apropiado de solución de ditizona de concentración
adecuada, agitar durante 1 minuto y dejar que se separen las capas. El volumen y la
concentración adecuados de dizona pueden elegirse de acuerdo con la información
proporcionada en la tabla siguiente:
13. Escurrir la capa inferior de ditizona en un tubo limpio y seco y leer la absorbancia a 510
nm frente a un blanco de reactivo siguiendo todos los pasos.
14. Convertir la absorbancia "A" en μg de Pb a partir de la curva de calibración o,
preferentemente, calcular con ayuda de la ecuación obtenida por el método de los
mínimos cuadrados.
15. Restar el contenido de plomo obtenido para la solución de muestra en blanco al de la
solución de muestra para obtener el contenido real de plomo de la solución de muestra
y calcular el contenido de plomo de la muestra.
Preparación de la curva estándar:
 Preparar la curva de trabajo del intervalo requerido (que se decidirá en función del
contenido de plomo contenido en las muestras), comenzando con el blanco hasta el
estándar final del rango con cuatro incrementos intermedios.
 Pipetee cantidades apropiadas de solución de plomo en una serie de separadores y
añada solución de HNO3 al 1,0%, de forma que el volumen total en los separadores sea
de 50 ml.
 Añadir 10mL de mezcla amoniaco-cianuro y mezclar (el pH resultante será 9,7).

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 Revelar inmediatamente el color agitando durante 1 min con la cantidad adecuada de

solución de ditizona de la tabla. Dejar que se separen las capas.
 Escurrir la capa inferior de cloroformo en un tubo limpio y seco. Leer la absorbancia "A"
de cada extracto patrón frente al extracto blanco de reactivos de los patrones.
 Representar gráficamente la absorbancia 'A' frente a μg de Pb o calcular la ecuación de
referencia por el método de los mínimos cuadrados.
 Las soluciones patrón de plomo y de HNO3 al 1,0% utilizadas en la preparación de la
curva patrón deben saturarse con CHCl3, antes de su uso, agitando dichas soluciones
con CHCl3 claro y desechando la capa orgánica.
e) Mercurio
1. Preparación de la curva de calibración
Colocar en una serie de vasos de precipitados, los volúmenes de solución patrón de
mercurio indicados en la tabla a continuación. Agregar a cada vaso de precipitados 500 ml
de agua y proceder tal cual como la muestra de mercurio.
Volúmenes para la Curva de Calibración
SOLUCIÓN PATRÓN DE HG (1UG/ML) CONTENIDO DE MERCURIO
0,0 0,0000
2,0 0,0020
4,0 0,0040
6,0 0,0060
8,0 0,0080
10,0 0,0100
2. Tomar una alícuota de 500 ml de la muestra de análisis.

3. Transferir la alícuota a un vaso de precipitación, agregar 1 ml de solución de
permanganato de potasio y 10 ml de ácido sulfúrico concentrado. Agitar y llevar a
ebullición. Si es necesario agregar más solución de permanganato de potasio, hasta
que persista un color rosa.
4. Añadir con cuidado 5 ml de solución de persulfato de potasio y dejar enfriar durante 30
minutos. Agregar una o más gotas de solución de clorhidrato de hidroxilamina hasta
eliminar el color rosa.
5. Cuando se haya enfriado, transferir la solución a un embudo de separación de 1 litro y
agregar 25 ml de solución de ditizona. Agitar el embudo vigorosamente y transferir la
capa orgánica a un embudo de separación de 250 ml. Repetir esta extracción por lo
menos 3 veces, hasta que la coloración en la última capa de ditizona sea de un azul
intenso como el de la solución original de ditizona.
6. Lavar los extractos acumulados de ditizona en el embudo de separación de 250 ml con
50 ml de ácido sulfúrico 0.25 N y agitar. Transferir la fase orgánica a otro embudo de
separación de 250 ml.

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7. Agregar 50 ml. de ácido sulfúrico 0.25 N y 10 ml de solución de bromuro de potasio.

Agitar vigorosamente para transferir el ditizonato mercúrico de la capa orgánica a la
acuosa y desechar la capa inferior de ditizona.
8. Lavar la capa acuosa con un volumen pequeño de cloroformo y desechar la fase
inferior. Agregar 20 ml. de solución "buffer fosfato carbonato" y 10 ml. de solución de
ditizona. Agitar fuertemente y después de la separación de las fases transferir la fase
orgánica que contiene el ditizonato mercúrico a un vaso de precipitados.
9. Agregar a la fase orgánica de 1 a 2 g de sulfato de sodio anhidro y decantar en la celda
de 1 cm de paso de luz.
10. Medir la absorbencia a 490 nm, ajustando el espectrofotómetro o el fotocolorímetro a
cero de lectura con el blanco.
Tratamiento de Resultados.
Cálculos
a) Arsénico
El contenido de arsénico se determina mediante la ecuación siguiente:
mg m
As= 3
l cm o gr de muestra
Siendo:
m = concentración de arsénico determinada en la curva de calibración, en µg.
b) Cadmio
mg A ∗C
Cd = 2
l A 1∗S
Siendo:
A1 = Absorbancia de la muestra patrón preparada.
A2 = Absorbancia de la muestra.
C = Microgramos de cadmio de la muestra patrón.
S = Volumen o gr de la muestra analizada.
c) Mercurio
mg m
Hg= 3
l cm o gr de muestra

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Siendo:
m = concentración de mercurio determinada en la curva de calibración, en µg.
Cálculo de Incertidumbre
Para el cálculo de incertidumbre se seguirá los pasos establecidos en el procedimiento
PG/MSV/06.
Informe de resultados
a) Arsénico: Como resultado final se reportan el cálculo obtenido en mg/L de muestra,
en el formato FPEFQ0109
Medidas de seguridad.
Utilizar mandil, guantes y gafas de protección para manipulación de las muestras.
Control de calidad
Inter comparaciones
Se realizará de forma regular control de los ensayos mediante Inter comparaciones
según lo planificado por el laboratorio.
Control Interno
 Cada diez muestras hacer repetición de ensayos por el mismo analista (En
condiciones de repetibilidad). o al menos un duplicado al mes
 Hacer cada mes, corridas de material de referencia, para control de exactitud.
Criterios de aceptación y rechazo

 Se acepta la verificación cuando se cumple el criterio de aceptación/rechazo de un
porcentaje de recuperación de 90 a 110 (±10%) al valor teórico.
 Para seguimiento de la precisión y exactitud del método se utilizarán gráficos de
control, los resultados obtenidos con muestras control (materiales de referencia,
duplicados de muestras, patrón químico) deben estar dentro de los límites de

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PE/MSV/FQ/
aceptación establecidos en las cartas de control. Ver carta de control de precisión y

exactitud. En el caso del patrón químico se hará una verificación alternada cada mes
en todo el rango de trabajo
Nota: En caso de que los resultados obtenidos estén fuera de los criterios de aceptación y
rechazo, se procederá de acuerdo con la sección SECC09-CONTROL DE TRABAJO NO
CONFORME.
Anexos:
Ilustración 1. Generador de Arsenamina y Tubo de Absorción

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MSDS (Hojas de seguridad de productos químicos)

La espectrofotometría es una técnica ampliamente utilizada para la determinación de

Principio del método

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 Cadmio: La muestra se digiere con H2SO4 y HNO3. El pH de la solución se ajusta

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mientras que el mercurio es trasferido a la fase acuosa. Los otros interferentes

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Solución de tartrato de sodio y potasio:

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Ajustes y calibraciones antes del análisis

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 Solución patrón de cadmio: Transferir 10 ml de solución de cadmio a un matraz

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d) Solución de trabajo: Preparar según sea necesario diluyendo adecuadamente la

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Toma de muestras, conservación y almacenamiento

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- Añadir al generador 3 g de zinc y conectar el conjunto depurador-absorbedor

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2. Enfriar y añadir 1ml de solución de carbamato y 15ml de CCl4. Agitar vigorosamente

Preparación de la curva estándar:

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 Revelar inmediatamente el color agitando durante 1 min con la cantidad adecuada de

2. Tomar una alícuota de 500 ml de la muestra de análisis.

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7. Agregar 50 ml. de ácido sulfúrico 0.25 N y 10 ml de solución de bromuro de potasio.

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Criterios de aceptación y rechazo

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aceptación establecidos en las cartas de control. Ver carta de control de precisión y

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