MAPAS

PEPTÍDICOS
Biologia Celular A L E X A A N D R E A S O L A N O

F L O R E S
J A V I E R C R U Z G U E R R E R O
 ¿QUÉ ES UN
MAPA PETÍDICO?
Herramienta inestimable para compuestos biofarmacéuticos, es un
método muy potente además de la prueba de identidad más utilizada
para proteínas

Identificación de una proteína, así como el producto final de varios

procesos que proporcionan una comprensión completa de la proteína
que se analiza.

Confirma la estructura primaria de la proteína y detecta alteraciones

en su estructura.
¿QÚÉ DEBE
INCLUIR UN MAPA
PEPTÍDICO?
Debe incluir la identificación positiva de la proteína,
maximizar la cobertura de la secuencia de péptidos
completa y proporcionar información adicional, así como
la identificación de la secuencia más allá de la que se
obtiene al nivel de proteína no digerida.
INCLUYE CUATRO
PASOS PRINCIPALES:
1. aislamiento y purificación de la proteína
2. división selectiva de los enlaces de péptidos
3. separación cromatográfica de los péptidos
4. análisis validado de los péptidos.
 1. AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE LA
PROTEÍNA

Necesarios para el análisis de fármacos a granel, formas de dosificación o

patrones de referencia o materiales que contienen excipientes o proteínas
portadoras que interfieren en el análisis.

Las sustancias residuales que interfieren pueden afectar la eficiencia de la ruptura

enzimática y la apariencia del mapa peptídico.

El impacto de las sustancias residuales o del proceso de purificación de la muestra

en el mapa peptídico de prueba final debe evaluarse y validarse durante el
proceso de desarrollo.
2. DIVISIÓN SELECTIVA DE LOS ENLACES DE
PÉPTIDOS

El enfoque utilizado para la ruptura de enlaces peptídicos,

dependerá de la proteína en estudio. Puede haber razones
específicas para usar otros agentes de ruptura o combinaciones de
los mismos.

Como el tamaño o la configuración de la proteína

DIGESTIÓN DE PROTEÍNAS:
Preparación de proteína para mejorar la separación de mapa
de péptidos
PASO 1:
PREPARACIÓN DE MUESTRAS
En función del tamaño o de la configuración de la proteína, existen
diferentes enfoques para el pretratamiento se su muestra. En
determinadas condiciones, puede ser necesario enriquecer la
muestra o separar la proteína de las sustancias añadidas y los
estabilizadores que se usan en la formulación del producto; esto es
así especialmente si interfieren con el procedimiento del mapa.
PASO 2:
SELECCIÓN DE AGENTES DE DIVISIÓN
Existen dos métodos para la división de enlaces de péptidos:
el químico
el enzimático.
La división química supone el uso de reactivos no
enzimáticos nucleofílicos

Las enzimas proteolíticas son muy útiles para varias

localizaciones de división específicas de una zona
El método y el agente de
división dependerán de la
proteína en prueba y de
las expectativas de
resultados concretos del
análisis
PASO 3:
DESNATURALIZACIÓN, REDUCCIÓN Y
ALQUILACIÓN
Para que la enzima proteolítica divida eficazmente las cadenas de
péptidos, la mayoría de las muestras deben desnaturalizarse,
reducirse y alquilarse, con el uso de diversos reactivos.

La alquilación de cisteína es necesaria para reducir más aún una

posible renaturalización.
PASO 4:
DIGESTIÓN
¿Qué se necesita para una buena digestión?

pH
tiempo y temperatura
concentración de enzima de división
PASO 5:
LIMPIEZA Y ENRIQUECIMIENTO DE
DIGESTOS
Existen muchos tipos de métodos para conseguirla limpieza y el
enriquecimiento, en función del tipo de muestra y del objetivo en
cuestión
3. SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA DE LOS
PÉPTIDOS

Es importante resolver la complejidad de la mezcla de péptidos

resultante de la digestión, de tal forma que haya una interpretación
válida de los datos, significativa y reproducible.

Las condiciones cromatográficas, columna y fases móviles finales

dependerán de la complejidad del mapa de péptidos.
 CROMATOGRAFIA POR FASE REVERSA

Permite separar moléculas en base a

su polaridad
COLUMNA Y FASES MOVILES

+ La selección de la columna cromatográfica está determinada por cada

proteína.

+ Las fases móviles que se emplean en la cromatografía de fase reversa

para el análisis de proteínas y péptidos contienen un aditivo que sirve
como agente de emparejamiento iónico.

Lo que quiere decir que aumenta la hidrofobicidad de péptidos mediante

la formación de emparejamientos iónicos con sus grupos cargados
4. ANÁLISIS VALIDADO DE LOS PÉPTIDOS.

Para determinar si la proteína de prueba es la proteína de interés

deseada, el mapa de péptidos de la proteína de prueba debe
compararse con el mapa de péptidos de la sustancia de referencia
o material generado.
MAPA PEPTÍDICO:
CÓMO SE ANALIZAN Y SEPARAN LOS PÉPTIDOS

TAMBIÉN LLAMADO "HUELLA DACTILAR" DE LA PROTEÍNA,

SE CONSIGUE MEDIANTE UN MÉTODO DE SEPARACIÓN DE
LOS PÉPTIDOS

LA DIGESTIÓN DE LA PROTEÍNA PROBLEMA RINDE UNA

MEZCLA DE PÉPTIDOS, QUE ES LA MUESTRA QUE SE
SOMETE A ANÁLISIS.
USO EN LA MEDICINA

El mapeo de péptidos puede utilizarse en el

descubrimiento de fármacos y a través del proceso
de fabricación. Esto sirve para alcanzar el control de
calidad entre los lotes, para producir una “huella
dactilar” única de una proteína individual y compararla
con la secuencia teórica de aminoácidos del gen
derivado.
 BIBLIOGRAFIA
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