Pruebas de hemaglutinación e inmunofluorescencia.

Utilizadas en el
diagnostico y enfermedades virales
La inmunofluorescencia (IF) o Técnica de Anticuerpos Fluorescentes se basa en la unión
inmunológica de un anticuerpo marcado con un fluorocromo a su antígeno unión
inmunológica de un anticuerpo marcado con un fluorocromo a su antígeno.
Se considera un fluorocromo a una sustancia que al ser excitada por una onda luminosa,
es capaz de emitir luz de menor energía (mayor longitud de onda) que la de la onda que
provoca la excitación. El fluorocromo de más amplia aplicación en esta técnica es el
isotiocionato de fluoresceína.
En 1941, la IF fue introducida por Coons y colaboradores, quienes emplearon el
isocianato de fluoresceína para marcar tanto antígenos como anticuerpos.
Posteriormente, las técnicas de conjugación fueron modificadas por Riggs y
colaboradores. Estos investigadores reemplazaron el radical isocianato por el
isotiocianato, este último más estable, más fácil de conjugar y de obtener
comercialmente.
A partir de los años 50, la IF ha sido ampliamente utilizada para la identificación de
parásitos, bacterias y numerosos virus, así como para la detección de anticuerpos contra
estos agentes.
Principio de la técnica
Las moléculas proteicas de los anticuerpos se unen al marcador fluorescente
(fluorocromo) por medio de firmes enlaces químicos. Como la actividad inmunológica de
estos anticuerpos no se altera, la capacidad de los mismos de unirse a los antígenos
homólogos permanece íntegra.
Debido a la alta especificidad de la reacción Ag-Ac, la IF se ha convertido en un método
muy útil para el diagnóstico. Otra de sus ventajas, es el tiempo relativamente corto que se
requiere para el procesamiento de la muestra hasta llegar al resultado final.
La IF es aplicable a cualquier sustancia antigénica que se localice dentro o fuera de las
células, sean antígenos protozoarios, bacterias, ricketsias, virus, hormonas, enzimas,
antígenos tisulares y otros.
La extensa variedad de estructuras y propiedades físico-químicas de los antígenos implica
que sus requerimientos para ser marcados con el fluorocromo variarán para cada caso en
específico, de ahí que se haya generalizado el procedimiento de marcar los anticuerpos
(todos los anticuerpos son proteínas). Por ello, la IF se conoce también con el nombre de
Técnica de Anticuerpos Fluorescentes.
Algunos virus son capaces de aglutinar los glóbulos rojos. La hemaglutinación (HA) es la
unión de los eritrocitos producida por el virus o por alguna estructura (HA) es la unión de
los eritrocitos producida por el virus o por alguna estructura del pozuelo por los eritrocitos
unidos por la hemaglutinina viral.
En la hemaglutinación directa el virus actúa directamente sobre las células y esta En la
hemaglutinación directa el virus actúa directamente sobre las células y esta los arbovirus
la propia partícula viral es la hemaglutinina no existiendo enzima destructora del receptor
como en los orthomyxovirus.
Los anticuerpos obtenidos contra los diferentes arbovirus poseen una amplia reactividad
de grupo por lo que la prueba de inhibición de la hemaglutinación (IH)

En las pruebas de aglutinación (p. ej., aglutinación con látex, coagregación), partículas
muy pequeñas (cuentas de látex, partículas de gelatina, bacterias) se acoplan con un
reactivo antigénico o un anticuerpo. La partícula compleja formada se mezcla con la
muestra (p. ej., líquido cefalorraquídeo o suero); si el anticuerpo o el antígeno buscados
están presentes en la muestra, producirán el entrecruzamiento de las partículas, lo que se
observa como una aglutinación.

Si los resultados son positivos, se realizan diluciones seriadas de la muestra y se prueban

nuevamente. La aglutinación de las soluciones más diluidas indica que existen mayores
concentraciones del anticuerpo o del antígeno en estudio. El título se informa como la
recíproca de la solución más diluida que produce aglutinación; p. ej., un título de 32 indica
que la aglutinación se observa hasta la dilución 1/32 de la concentración inicial.

Generalmente, las pruebas de aglutinación son rápidas pero menos sensibles que
muchos otros métodos. También permiten determinar los serotipos de algunas bacterias.