PRUEBAS BIOQUIMICAS

PROBLEMA 1

Discuta las afirmaciones:

1) Las pruebas Rojo Metilo y Voges Proskauer pueden realizarse en cualquiera de los siguientes medios:
A) Extracto de carne, peptona de carne, agua
B) Peptona, glucosa, buffer fosfato, agua

2) La prueba de nitratos revela la presencia de nitritos en el medio de cultivo. Por lo tanto, la aparición de
producto coloreado en la segunda parte de la prueba (luego de la adición del zinc) se considera positiva.

3) La prueba del Indol se realiza en un cultivo que crece en un caldo con caseína, por la alta concentración del
aminoácido alanina que posee esta proteína.

4) El agar Hierro Kligler contiene igual concentración de glucosa y lactosa para poder determinar la capacidad
de fermentar lactosa del microorganismo sembrado.

5) Una prueba Hierro Kligler Amarillo / Amarillo, se debe a que se acidificó tanto la superficie como el fondo,
y corresponde a un microorganismo que fermenta lactosa por vía ácido mixta.

6) Una prueba Hierro Kligler Amarillo / Amarillo leído a tiempo correcto, puede derivar en un Rojo / Amarillo
si se pasa el momento de lectura correcto, y en un Rojo / Rojo si la incubación se prolonga aún más.

7) La utilización de lactosa como fuente de carbono y el viraje de color del ONPG son dos pruebas que se
utilizan para evidenciar la presencia de la enzima β-galactosidasa. Sin embargo, puede haber enterobacterias
ONPG positivas / Lactosa negativas.

8) Muchas pruebas de los sistemas de multipruebas API consisten en tener una única fuente de carbono por
pocillo, para determinar si el microorganismo es capaz de crecer utilizándola. Tanto en el API 20E (para
microorganismos fermentadores) como en el API 20 NE (para no fermentadores) la utilización de la fuente de
carbono se evidencia por el viraje del indicador de pH (del azul al amarillo) que se produce por la
acidificación del medio dentro del pocillo durante la incubación
PROBLEMA 2
¿Qué tipo de metabolismo y qué productos se ponen en evidencia al realizar las pruebas bioquímicas de Rojo
Metilo y Voges Proskauer? ¿Cómo se realizan las pruebas y qué precauciones debe tener para la correcta
interpretación de los resultados?

PROBLEMA 3
Ud realiza un aislamiento de bacterias a partir de agua del lago de Palermo. Para ello realiza siembra un caldo
Mac Conkey con una muestra del agua. Tras la incubación a 37C observa que el medio está amarillento,
turbio, y se acumuló gas en la campana de Durham.

1) Indique las características de los microorganismos que pueden proliferar en el medio Mac Conkey

A partir de este cultivo, Ud realiza un estriado sobre agar EMB. Luego de la incubación, obtiene tres tipos de
colonias: unas transparentes/blancas, otras rosas/violáceas, y finalmente otras con brillo verde metálico a los
que llamó A, B y C

Fenotipo colonia Transparente/blanca Roja/morada Verde brillante

Nombre A B C
2) Indique el metabolismo de los distintos tipos microbianos crecidos en Agar EMB. Justifique en función de
las características del agar utilizado

A partir de una colonia de cada tipo, Ud realiza el paso de purificación

3) ¿Cómo se realiza este paso y cuál es el objetivo de realizarlo?

Como primer paso de caracterización, realiza una tinción de Gram y la prueba de Oxidasa a partir de cada
aislamiento. Los tres preparados mostraron formas celulares similares y las tres con la misma tinción. También
los tres preparados presentaron igual resultado para la prueba oxidasa. Considerando la marcha y los
resultados previos:
4) ¿Qué resultado habrá arrojado la tinción y la oxidasa de los tres aislamientos?

Posteriormente Ud inocula tres tubos de Agar Hierro Kligler (uno con cada aislamiento) pero los rótulos de
dichos tubos se borran durante la incubación. El resultado observado es:
Tubo 1 y 2: Amarillo / Amarillo, con el agar roto
Tubo 3: Rojo / Amarillo con precipitado negro

5) ¿A qué tiempo de incubación debe ser leído el resultado de la prueba de Agar Hierro Kligler? Justifique
brevemente.

6) Asigne los resultados de Hierro Kligler a los aislamientos

Por último, realiza las pruebas de Rojo de Metilo y Voges-Proskauer sobre los tres aislamientos, obteniendo
dos aislamientos positivos para RM y uno positivo para VP.

7) ¿Considerando los resultados acumulados, a qué aislamiento corresponde cada resultado obtenido?

PROBLEMA 4
A partir de una muestra de agua Ud realiza una estría en medio EMB. Tras la incubación a 37C obtiene
colonias de diversos fenotipos. Escoge una blanca, realiza el paso de purificación, y luego siembra un agar
Hierro Kligler que le arroja el resultado Rojo / Sin cambio tras la incubación correspondiente.

¿Qué características celulares y metabólicas debe tener el microorganismo para arrojar dichos resultados en los
dos agares ensayados?
Considerando el origen de la muestra y los resultados obtenidos, ¿Cuál puede ser el microorganismo aislado?
¿Qué otra prueba bioquímica / tinción / cultivos realizaría para comprobarlo?