INTRODUCCIÓN

Las pruebas bioquímicas en microbiología son un conjunto de ensayos

químicos que se realizan a los microorganismos presentes en una muestra con la
finalidad de identificarlos; estos microorganismos suelen ser bacterias. Hay un
gran número de pruebas bioquímicas a disposición de un microbiólogo.
Sin embargo, la elección de estas pruebas se basa en hallazgos preliminares,
como el patrón de tinción de Gram y los caracteres de crecimiento, que permiten
asignar la bacteria a una categoría particular. Las pruebas bioquímicas se basan
principalmente en las propiedades metabólicas de cada tipo de bacteria.
El agar TSI o agar hierro triple azúcar es un medio de cultivo sólido que sirve
como prueba bioquímica para orientar la identificación inicial de los bacilos
Gramnegativos. Se fundamenta en evidenciar la fermentación de los azúcares
presentes, y la producción de sulfuro de hidrógeno y gas.
El agar LIA es una prueba bioquímica utilizada para la identificación de bacterias
de la familia Enterobacteriaceae. Este medio fue creado por Edwards y Fife,
basados en la fórmula de Falkow. Sirve para demostrar la presencia de la enzima
lisina descarboxilasa, capaz de reaccionar con el grupo carboxilo del aminoácido
L-lisina. Puede ocurrir: desaminación del aminoácido por la presencia de la enzima
lisina desaminasa.
El agar MIO es un medio utilizado para la identificación de miembros de la familia
Enterobacteriaceae en base a la movilidad, producción de indol y actividad
enzimática ornitina descarboxilasa. Es un medio de cultivo altamente nutritivo por
la presencia de extracto de levadura, peptona y tripteína.
El caldo MR-VP es un medio utilizado para la realización del ensayo de Rojo de
Metilo y Vogues Proskauer. Es particularmente útil para la clasificación de
enterobacterias. En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes
necesarios para el desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono
fermentable.
El agar Citrato de Simmons medio utilizado para la diferenciación de
enterobacterias en base a la capacidad de usar citrato como única fuente de
carbono y energía. En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única
fuente de nitrógeno y el citrato de sodio la única fuente de carbono.
El agar base UREA es un medio utilizado para diferenciar microorganismos en
base a la actividad ureásica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan
urea, tales como Proteus spp, otras enterobacterias y estafilococos. En el medio
de cultivo, la tripteína y la glucosa aportan los nutrientes para el desarrollo de
microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el rojo de
fenol es el indicador de pH.
Cita: Jean F. MacFaddin-Ed. Médica Panamericana, 2003 
 OBJETIVO
 Sembrar, leer e interpretar algunas pruebas bioquímicas útiles en la
identificación de bacterias bacilares Gram negativas.
 Identificar el género y especie de la cepa problema.
 PROCEDIMIENTO
Ya teniendo los tubos con
los 6 tipos de pruebas
previamente listos, se
comienza a inocular.
En el agar Citrato como en el
agar UREA solo se siembra
haciendo estriado en la cuña
del tubo.
El agar MIO al momento de
gelificar no se pone inclinado
por lo que para sembrar
solo es necesario hacer una
picadura en el centro hasta
el fondo del tubo.
La siembra para el agar
TSI es con el asa en punta,
estriar en la superficie y
después hacer una
picadura en el centro hasta
el fondo del tubo.
Para el agar LIA, se siembra
haciendo esta vez doble
picadura hasta el fondo y
siembra en la superficie del
tubo.
Los caldos MR-VP solo es
necesario enjuagar el asa y
después se le agregan los
indicadores Rojo de Metilo,
Alfa naftol y KOH para
después agitar un poco.
RESULTADOS Y DISCUSION
De acuerdo a lo reportado los resultados obtenidos fueron buenos debido a que la
mayoría de las pruebas presentaron lectura positiva como se muestra en las
imágenes.

Figura 2. Inoculación del agar

Figura 1. Preparación del agar MIO
Citrato.

Figura 4. Siembra en la cuña del

Citrato.
Figura 3. Siembra por estría en
agar TSI
Figura 5. Prueba + de la Figura 6. Prueba (–) de
UREA (tonalidad rosa) motilidad, indol (-) y
fermentación (+)

Figura 8. Prueba (+) para

Figura 7. Prueba con una
Citrato (tonalidad azul)
desaminación (-) y una
fermentación (+) K/A

Figura 10. Prueba (+) para el

Discusión: en caso de la figura 9 de Ureas fue negativa ya que la hidrólisis de la
urea por la enzima ureasa libera dos moléculas de amoniaco que alcaliniza el
medio, entonces se vira el indicador de pH, en el caso del rojo de fenol una prueba
positiva es color buganvilia, pero como nuestra prueba salió negativa este color no
se presentó.
En el caso de LIA: La ornitina es descarboxilada por la enzima ornitina
descraboxilasa para producir la diamina putrescina y CO2 – Positivo purpura –
Negativo amarillo
• La motilidad – Positiva se demuestra por un (enturbamiento del medio) –
Negativa (crecen a lo largo de la línea de inoculación)
• La prueba del indol se basa en la reacción que se produce con el rvo de Kovacs.
(produce un color rojo)
Citrato: Estudia la capacidad de utilizar el citrato como única fuente de carbono.
En el caso de la prueba TSI: En este medio se permite evidenciar la
descarboxilación del aminoácido lisina en la diamina cadaverina, como también la
desaminación de la lisina en un alfa cetoácido
Las pruebas bioquímicas que realizamos realmente no todas resultaron positvivas
ya que cada microorganismo se comporta de una manera diferente en cada
prueba asi como su reacción es diferente.

CONCLUSIONES
Cada microorganismo reacciona de manera diferente de acuerdo a las enzimas
que sintetiza, algunas producen gases, otras cambian el color del medio de cultivo,
otras fermentan los azúcares, etc., por lo tanto es importante conocer
 CUESTIONARIO
1.- ¿Cuál es la finalidad de realizar pruebas bioquímicas?
Las pruebas bioquímicas se emplean para identificar de forma clara y precisa, la
presencia o ausencia de una enzima, de un grupo de enzimas, o de una vía
metabólica completa en uno o más microorganismos.
2.- ¿Qué otras pruebas bioquímicas existen aparte de las mencionadas en
esta práctica y cuál es su fundamento?
La prueba de catalasa es una prueba para demostrar la presencia de enzima
catalasa mediante la descomposición del peróxido de hidrógeno en oxígeno y
agua.
La prueba de la oxidasa se usa para identificar microorganismos que contienen la
enzima citocromo oxidasa (importante en la cadena transportadora de electrones).
Se usa comúnmente para distinguir entre las familias Enterobacteriaceae y
Pseudomadaceae.
Prueba del Agar Manitol salado (MSA), este tipo de ensayo es a la vez selectivo y
diferencial. La MSA seleccionará organismos capaces de vivir en ambientes con
altas concentraciones de sal, como las especies de Staphylococcus en contraste
con las especies de Streptococcus, cuyo crecimiento es inhibido en estas
condiciones.
3.- ¿En qué consisten las pruebas API?
Es un sistema de identificación rápida para bacterias de la familia
Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram (-). Básicamente consta de 21 tests
bioquímicos estandarizados y miniaturizados y una base de datos. Este sistema
presenta las ventajas de ser rápido, eficaz y de permitir realizar numerosas
pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 micro tubos o pocillos con
distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioquímica distinta.

BIBLIOGRAFÍA
Batería de pruebas API20E. Consultado el 19 de noviembre del 2019
http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/LabV/API/api.ht
ml
Microbiología. Publicado el 30 de octubre del 2014.
http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com/2014/10/pruebas-bioquimicas.html