INFORME DE LABORATORIO

Pruebas Bioquímicas para la identificación Microbiana

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Durante muchos años, la identificación microbiana se ha basado en la producción local de
medios de cultivo y en la realización de pruebas bioquímicas, que no han sido estandarizadas.
Del mismo modo, los antibiogramas tradicionalmente se han realizado mediante técnicas de
difusión manual. Aunque esta técnica se ha estandarizado y ahora está bien validada, es una
técnica engorrosa que requiere más tiempo para producir resultados que las técnicas
automatizadas disponibles actualmente.

Estas pruebas de identificación microbiana detectan proteínas específicas características del

microorganismo, actividades bioquímicas específicas (como la actividad enzimática) o
secuencias genéticas en la célula diana. Muchas pruebas de identificación microbiana brindan
resultados significativos en un corto período de tiempo, son muy económicas y fáciles de usar,
y la mayoría no requiere equipo o equipo especial. Para algunas pruebas bioquímicas, sólo es
necesario agregar una gota de reactivo a una placa de agar o medio líquido.

Este es un proceso de gran importancia para una colección de cultivos microbianos. Es uno de
los requisitos esenciales para que una cepa sea ingresada oficialmente a una colección y, a su
vez, permite direccionar la búsqueda de una aplicación al microorganismo identificado.

Identificar los microorganismos mediante pruebas bioquímicas

A. AGAR TSI
1. Realizar la siembra por picadura profunda y una estría en la superficie.
2. Incubar a 37° C por 18-24 horas.
3. Interpretación: si el fondo se vuelve amarillo, significa que fermenta la glucosa, si el
pico de flauta vira a amarillo, significa que fermenta lactosa y sacarosa. Si vira a rojo
las fermentaciones son negativas. Si en el fondo aparece una coloración oscura

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 negruzca, significa que produce sulfuro de hidrogeno. Si desprende gas, el medio de
cultivo se desprenderá del tubo y aparecerá espacios de aire
4. Realice los esquemas respectivos.

B. AGAR CITRATO
1. Inocular con la aguja de Kolle sobre la superficie inclinada del Agar Citrato de
Simmon's
2. Incubar a 37° C por 24 horas
3. Interpretación: La prueba es positiva cuando el medio vira del color verde al azul o
cuando se observa crecimiento del microorganismo.
4. Realice los esquemas respectivos.

C. AGAR LIA
1. Inocular con la aguja de kolle en el Agar Lisina un microorganismo determinado por
picadura profunda y una estría en la superficie.
2. Incubar a 37° C por 18-24 horas
3. Interpretación: se manifiesta por un color púrpura turbio a un púrpura amarillento
opaco (producido por la cadaverina) y una prueba negativa, por un color amarillo claro
y brillante (solamente fermentado por la glucosa).
4. Realice los esquemas respectivos

D. PRUEBA DE LA UREASA
1. Inocular con el asa de kolle en el tubo con Caldo Urea un microorganismo
determinado.
2. Incubar junto con un tubo control a 37° C por 24 horas.
3. Interpretación: se comprueba por el viraje del medio al rojo magenta (positivo) o
fucsia en un tiempo de incubación que varía según la capacidad del microorganismo.
4. Realice los esquemas respectivos

E. PRUEBA DE ROJO METILO/VOGUES PROSCAUER

1. Inocular con el asa de kolle en el Caldo RM y en el caldo VP un microorganismo
determinado.
2. Incubar a 37° C por 24 horas

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 3. Luego de la incubación agregar los siguientes reactivos al tubo de ensayo: 4 gotas
de solución KOH al 40%, en ese orden estricto y agitar suavemente, dejar en reposo 10-
15 minutos y observar los cambios.
4. Interpretación: En el caldo Rojo de Metilo, si vira de color a rojo, el microorganismo
realiza fermentación acido neutra. En el caldo VP, si aparece un anillo rojo-fucsia, el
microorganismo realiza fermentación butilenglicolica.
5. Realice los esquemas respectivos

F. MEDIO SIM
1. Inocular por puntura hasta el fondo con la aguja de kolle en el medio SIM y retirar la
aguja por el mismo lugar de punción.
2. Incubar a 37° C por 24 horas
3. Transcurrido el tiempo, retirar de la incubación y agregar unas gotas de reactivo de
Kovacs.
4. Interpretación: Si se forma un anillo púrpura rojizo, es positivo para producción de
indol. Si el medio se vuelve turbio, es positivo para movilidad. Si el medio se torna
oscuro negruzco, es positivo para sulfuro de hidrogeno.
5. Realice los esquemas respectivos

G. PRUEBA DE LA CATALASA
1. Sembrar en estría con la ayuda del asa de Kolle, los cultivos en agar nutritivo en cuña.
2. Incubar a 37° C por 24 horas
3. Luego de la incubación agregar unas 2-3 gotas de peróxido de hidrógeno al 3%
oxigenada).
4. Interpretación: Si aparece un burbujeo sobre las colonias, indica una prueba positiva
para catalasa.
5. Realice los esquemas respectivos

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 TABLA I. Identificación de microorganismos mediante pruebas bioquímicas

Glucosa Lactosa Sacarosa Gas Citrato Lia Ureasa F.ácido F.butil Sim Indol
neutro catalasa

E.coli. + + + - - - - - - - +

Kleb. + + + - - + + - - - -
Sal. - - - - - - - - - + -
Pro. - - - - +/- + + - - + +

De la Tabla I, se puede apreciar que E. coli y Kleb, pueden fermentar la glucosa, lactosa y
sacarosa, mientras que Salmonella y Proteus dan negativo para esta prueba. Además, se puede
observar que no hubo formación de gas durante la fermentación para ninguno de los
microorganismos. La prueba del citrato nos indica si el microorganismo puede usar el citrato
como fuente de carbono y energía, en este caso observamos que E. coli, Klebsiella y Salmonella
son negativos en esta prueba, mientras que Proteus puede dar positivo o negativo para algunos
casos. La prueba de LIA nos da positivo para Klebsiella y Proteus, esto significa que produce
ácido y amonio al fermentar la lisina. Lo que es negativo para E. coli y Salmonella. En la prueba
ureasa, es positiva para Klebsiella y Proteus, lo cual quiere decir que hay una producción de
ureasa, aumento del PH del medio y por ello hay un cambio de color generalmente rosado o
magenta. Por otro lado, la producción de ácido neutro y ácido butírico para estas pruebas en los
microorganismos mencionados es negativa. Los microorganismos Salmonella y Proteus dan
positivo para la prueba SIM catalasa, en consecuencia, podemos decir que estos
microorganismos poseen la enzima catalasa.

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Podemos visualizar que E. coli tiene una reacción enzimática a la glucosa, lactosa, sacarosa y
al indol, se manifiesta crecimiento bacteriano en nuestro medio de cultivo por ello se podría
decir que esta bacteria tiene la capacidad de desdoblar sustratos a través de una vía metabólica
donde actúan enzimas. El Klebsiella sp reacciona a la glucosa sacarosa, lactosa al ser una
bacteria anaerobia facultativa va por la vía de la fermentación. La Salmonella sp posee enzimas
que generan reacción a medio de cultivo sim que es útil para diferenciar medios de cultivos de
la familia entero bacteria, en este proceso intervienen un conjunto de enzimas llamadas
triptofanosa. El Proteus sp presenta actividad enzimática a citrato, Agar lía, ureasa, sim e indol,
podemos decir que el reconocimiento de la actividad enzimática del proteus sp desamina
fenilalanina transformándola en ácido fenil pirúvico.

Los microorganismos pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae como la E. Coli poseen

ciertos antígenos característicos. Los antígenos constituyen la parte externa del lipopolisacárido
y están formados por unidades polisacáridos repetidas por lo tanto cada género está asociado a
grupos antigénicos específicos y a su vez, éstos están relacionados con fenotipos virulentos. [1]

Las pruebas bioquímicas tienen como fundamento la presencia o ausencia de determinas

enzimas que son comunes a familias y géneros de bacterias, logrando una identificación casi
segura del tipo de bacteria presente en cuestión de horas, lo cual tiene gran valor en el campo
de la medicina y control de calidad en alimentos o productos de consumo humano y animal.

1. Romero R. Microbiología y Parasitología humana: Bases etiológicas de las

enfermedades infecciosas y parasitarias. 3ra Ed. México D.F: Editorial médica
panamericana, 2007.