Pruebas bioquímicas La producción de sulfhídrico, ya sea a

partir del tiosulfato o de los aminoácidos

Se realizaron 5 pruebas bioquímicas las
azufrados de las peptonas, se manifiesta
cuales fueron Citrato de Simns, TSI,
por la formación de precipitados negros
Urea, MIO y SIM.
SFe al reaccionar con las sales de hierro
Para realizar las diferentes pruebas (Bioser, 2024).
bioquímicas se eligieron tres placas Petri
Metodología
contaminadas (las cuales contenían agar
nutritivo). Se utilizaron 35 tubos de Se eligieron tres placas Petri
ensayos 7 para cada prueba bioquímica. contaminadas (las cuales contenían agar
nutritivo) para elegir tres colonias para su
Prueba TSI
identificación bioquímica. Se utilizaron 7
El TSI (Hierro de Triple Azúcar) Agar es tubos de ensayos, 6 para las pruebas y
un medio destinado a la identificación de uno como blanco. Utilizamos el medio de
Enterobacterias mediante la detección cultivo deshidratado agar hierro y triple
rápida de la fermentación de la glucosa azúcar. Se realizaron por duplicados por
(con o sin producción de gas), lactosa y cada colonia las pruebas bioquímicas.
sacarosa, así como por la producción de
Preparación del medio de cultivo TSI
sulfuro de hidrogeno. El agar TSI
contiene tres azúcares: dextrosa, lactosa y Se pesaron en la balanza analítica 4.752 g
sacarosa; rojo de fenol para detectar la del medio de cultivo para 800 ml de agua
fermentación de estos carbohidratos, y destilada. Una vez pesado agregamos una
sulfato ferroso para detectar la producción pequeña cantidad de agua destilada en
de ácido sulfhídrico. una botella graduada
y agregamos el
La degradación del azúcar con formación
medio de cultivo,
de ácido, se detecta por el viraje a
vertimos el resto de
amarillo en el indicador, mientras que la
agua destilada y
alcalinización vira a púrpura.
agitamos con una
En el caso de que solo se degrade la varilla de vidrio.
glucosa, la producción del ácido es débil, Calentamos en un
y se evapora en la superficie, permitiendo termoagitador
la re-oxidación del indicador, con lo que ilustración 1 hasta
queda una superficie alcalina (roja) y un que embullará Ilustración 1. Termoagitador.
fondo amarillo (ácido). durante 1 minuto.

Si se degrada la lactosa o la sacarosa, la

producción de ácido es intensa y todo el
Esterilizamos el medio de cultivo en la
medio queda amarillo. La producción de
autoclave durante 15 minutos a una
gas se detecta por la formación de
temperatura de 121°C y a una presión de
burbujas y, eventualmente, un
15 PSI.
agrietamiento del agar.
Después de esterilizar Incubación
dejamos que baje de
Incubamos los tubos de ensayos envueltos
temperatura. Cerca del
en flim plástico por 48 horas a una
mechero de Busen
temperatura de 37°C ilustración 5.
vertimos el medio de
cultivo en los 7 tubos
de ensayo se agregaron
3 ml del medio de cultivo ilustración 2.

Ilustración 2. Vertido del medio

de cultivo TSI a los tubos de
ensayos.

Para que las muestras tuvieran la forma

de pico de flauta se dejaron en reposo
inclinadas con ayuda de una pipeta hasta
que se solidificara ilustración 3.
Ilustración 3. Reposo de los tubos de
ensayos.
Siembra
Para la siembra se eligieron tres colonias
de las tres placas Petri contaminadas en la
ilustración 4 se pueden observar las
colonias seleccionadas, transferimos una
pequeña cantidad de las colonias con una
asa de siembra estéril fría inoculamos el
medio de cultivo picando el fondo, y
extendiéndolo sobre la superficie del
mismo en los tubos de ensayos.
2 tornó amarillo (ácido), el pico de flauta
1 3
Ilustración 5. Incubadora a 37°C
por 48 horas.
Resultados
No se completó las 48 horas de
incubación y debido a esto las pruebas de
la colonia 2 estaba todavía estaban
reaccionando se notaba en el pico de
flauta un color rojizo opaco en
comparación a las pruebas de la colonia 3
que tenía un color rojizo más intenso.
En la colonia 1 no hubo formación de
estrías y no cambio de color podría
deberse a que no se realizó correctamente
la inoculación. La colonia 2 las dos
pruebas presentaron estrías mientras que
en la colonia 3 la prueba 1 no hubo
formación de estrías.
En las pruebas de la colonia 2 y 3 hubo
fermentación de carbohidratos se observó
una coloración amarillo-anaranjado del
medio. El medio en la base del tubo se
adquirió un color rojo (alcalino), el
microorganismo de prueba fermenta
solamente dextrosa (glucosa).

Ilustración 4. Colonias elegidas para la prueba.

En ningunas de las tres colonias no negro lo que nos indicaría producción de
cambio de color el medio a amarillo ácido sulfhídrico.
(ácido) en el agar inclinado y el pico de
La producción de gas se indica mediante
flauta indica que el microorganismo de
la división o craqueo del medio y en
prueba no fermenta lactosa y sacarosa.
ningunas de las pruebas se observó.
No hubo producción de ácido sulfhídrico
En la tabla se muestran los resultados de
en ningunas de las pruebas, en las bases
las pruebas obtenidos por colonias.
de los tubos no se observó un precipitado

Tabla 1. Resultados de la prueba TSI.

Colonia 1 Colonia 2 Colonia 3 Blanco

1 2 1 2 1 2

TSI

Pico/Fondo - - K/A K/A K/A K/A

Producción - - - - - -
de gas
Producción
de ácido - - - - - -
sulfhídrico
A: ácido= amarillo
K: alcalino= rojo
Formación de burbujas: Producción de
gas
Ennegrecimiento de la superficie del
medio: Producción de H2S
Bibliografía
Bioser. (2024). TSI Agar. Recuperado 2 de abril de 2024, de
https://www.bioser.com/productos/tsi-agar1242p/#:~:text=El%20TSI%20(Hierro%20de
%20Triple,producci%C3%B3n%20de%20sulfuro%20de%20hidrogeno
MDC Científica. (2020). Series de identificación bioquímica (Urea, Citrato, Lisina, SIM y
TSI). MDC Científica S.A.S., IS-24.
https://mdmcientifica.com/wp-content/uploads/2021/03/IS-24-SERIES-DE-
IDENTIFICACION-BIOQUIMICA.pdf