Determinación de proteínas por el método de Biuret en clara de huevo

Dayana Trujillo a & Sara Ortiz a

a
Estudiante del Programa de Química, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad de la Amazonia
dayan.trujillo@udla.edu.co – sar.ortiz@udla.edu.co
yudy Lorena Silva Ortiz b
b
Docente del Programa de Química, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad de la Amazonia
Yu.silva@udla.edu.co
Fecha de realización: 22/02/2022 Fecha de entrega: 07/03/202

Resultados y discusión.

Para la determinación de la concentración concentración de 5mg/mL, se rotularon 8

de proteína albumina en la clara de huevo tubos de ensayo y se agregó el volumen
por el método de Biuret, se realizó una reportado en la tabla 1, posteriormente se
curva de calibración (grafico 1), leyó la absorbancia.
utilizando un patrón de albumina con una

Tabla 1. Volumen agregado para la determinación de concentración de albumina en la clara de

huevo
MUESTRA / B 1 2 3 4 5 6 7
TUBO

Patrón de albúmina 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.0 0.0

Muestra 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.5 1.0

Agua 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 1.5 1.0

Biuret 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0

Se leyó la absorbancia a 540nm, y se Tabla 2. Datos de absorbancia

obtuvo un blanco de 0.066. Las
Tubo Absorbancia
absorbancias reportadas para los de 1 0.066
2 0.145
más tubos de ensayo se reporta en la tabla
3 0.185
2. 4 0.321
5 0.538
Para la determinación de la concentración muestra, se utilizaron los datos tabulados
de albumina, en los 5 tubos de ensayo sin en la tabla 3.

Tabla 3. Datos para determinar la concentración de albumina

Concentración
patrón de Volumen
albumina albumina Volumen
tubo blanco (mg/mL) (mL) total (mL)
1 0.2
2 0.4
3 0.066 5.0 0.6 6.0
4 0.8
5 1.0

Posteriormente se restó el blanco de la Tabla 4. Datos de absorbancia y

absorbancia, con las absorbancias leídas, concentración albumina para la curva de

para obtener la absorbancia real en la calibración

curva de calibración, datos reportados en Concentració

Absorbanci n albumina
la tabla 4. Tubo a (mg/mL)
1 0.066 0.167
Se calculo la concentración de los 5 tubos
2 0.145 0.333
de ensayo sin muestra, utilizando los 3 0.185 0.500
datos reportados en la tabla 3, 4 0.321 0.667
5 0.538 0.833
remplazándolos como se observa en el
Posteriormente se graficó la absorbancia
cálculo 1.
vs concentración de albumina, como se
Calculo 1. Determinación de la
observa en el grafico 1, para la
concentración de albumina en los tubos de
determinación de la proteína albumina en
ensayo sin muestra.
la clara de huevo
[ patron de albumina ] x volumen de albumina
[ albumina ] =
volumen total

mg
5.0 x 0.2ml
ml mg/
[ albumina ] = =0.167
6.0 ml
mL
Gráfico 1. Curva de calibración para la determinación de la proteína albumina en la clara de
huevo

Curva de calibracion albumina

0.6
0.5
0.4 f(x) = 0.672 x − 0.0850000000000001
Absorbancia

R² = 0.91504602949973
0.3
0.2
0.1
0
0.100 0.200 0.300 0.400 0.500 0.600 0.700 0.800 0.900
Concentracion (mg/mL)

La concentración de la proteína albumina 0.612−(−0.085)

x=
en la clara de huevo, se determinó 0.672
utilizando la ecuación de la pendiente x=1.037 mg/mL
y=0.672 x−0.085 , remplazando los
datos cómo se observa en el cálculo 2, Se realizo factor de dilución para cada
para los tubos seis y siete, utilizando los tubo de ensayo, como se observa en el
valores de absorbancia reportados en la calculo 3.
tabla 6.
Calculo 3. Factor de dilución –
Tabla 6. Datos absorbancia tubos seis y determinación de la proteína albumina en la
siete, determinación de albumina en la clara de huevo
muestra.
Tubo Absorbancia 1.037 mg
∗6,0 mL
6 0.612 mL
∗10 mL
7 0.718 0,5 mL
=124.44 mg/mL
1mL
Calculo 2. Determinación de la proteína
albumina en la clara de huevo NOTA: Los datos de volumen utilizados
y=mx+b para el factor de dilución se encuentran
reportados en la tabla 1.
y−b
x= Pasando de mg a g
m
124.44 mg
∗1 g
Donde: mL
=0,124 g /mL
y=absorbancia 1000 mg
b= - 0.085
m=0.672
Se utilizo regla de tres, para determinar
cuantos gramos de albumina hay en
100mL.

Figura 1. Tubos de ensayo, resultado de los

0,124 g → 1mL volúmenes agregados de solución patrón y
muestra.
x → 100 mL
0,124∗100mL
X= =¿
1 mL
x=12.4 g
Posteriormente se determino el %p/v de
la concentración de albumina en el tubo
de ensayo, como se observa en el calculo
4.

Calculo 4. Determinación del % de albumina

en la muestra.

p 12.4 g
% = ∗100 Donde se observa que los tubos 1 y 2, no
v 100 mL reaccionaron y no cambiaron a color
violeta, esto quiere decir que no hay
P presencia de proteínas. Los tubos 3-5,
% =12.4 %
v cambiaron de color, tornando a violeta,
esto quiere decir que hay una pequeña
Estos cálculos se realizaron para la cantidad de proteína presente en estos tres
determinación de porcentaje de albumina tubos de ensayo.
en el tubo 7, como se reporta en la tabla
7. Los tubos 6 y 7, cambiaron de color, esto
quiere decir que es positivo para
Tabla 7. concentración de albumina en la
presencia de proteínas. El reactivo de
muestra clara de huevo.
Biuret reacciona con una solución
alcalina de CuSO4 para formar un
Concentració Concentració compuesto quelado de color violeta(MT
Tubo n (mg/mL) n (%) Ryan, 1976). Esto se debe a una reacción
6 1.037 12.4 entre el reactivo Biuret y la muestra
7 1.194 7.17 (proteína de albumina de la clara de
huevo). La reacción de Biuret ocurre
Los colores obtenidos a partir de los cuando el Cu2+, que generalmente se
volúmenes agregados de la tabla 1, se disuelve como sulfato cúprico, se reduce
observan en la figura 1. a Cu1+ cuando forma complejos con los
enlaces peptídicos de
las proteínas(LibreTexts- proteins, n.d.),
obteniendo un color violeta claro cuando
hay baja presencia de proteínas y un color
intenso cuando hay más presencia de
proteína(¿Cómo Reacciona El Reactivo
de Biuret Con La Proteína?, n.d.)
La clara de huevo de gallina contiene más
de 40 tipos de proteínas con
concentraciones que alcanzan los 100
mg/mL(Iwashita et al., 2015), en esta
práctica se determinó la proteína
albumina presente en la clara de huevo,
obteniendo un porcentaje de 12.4% en el
tubo de ensayo 6 al cual se le agregaron
0.5ml de muestra y 7.17% en el tubo de
ensayo 7 con un volumen de 1ml de
muestra.
Para la determinación de la concentración
de la proteína albumina presente en la
clara de huevo, se realizó con una curva
de calibración de los datos obtenidos en la
tabla 4, con la ecuación de la pendiente
obtenida en el grafico 1, se calculó la
concentración en mg/ml obteniendo una
concentración de 1.197mg/ml para el tubo
7, que contenía 1ml de muestra y una
concentración menor de 1.037mg/ml para
el tubo 6 con 05ml de muestra.
Realizando factor de dilución las
concentraciones cambiaron, obteniendo
un mayor porcentaje para el tubo con
0.5ml de muestra, que el tubo con 1.0ml
de muestra.
Según la norma técnica colombiana 1240,
el contenido de proteína de albumina para
la clara de huevo es de 11% (Norma
Técnica Colombiana NTC, 2003).
Relacionando este porcentaje con los
resultados obtenidos, el porcentaje de
error es mínimo. Atribuyéndose a errores
sistemáticos, en la preparación de la
muestra por contaminación de esta y
tiempo de mezcla entre el reactivo y la
proteína.
Conclusiones
Se determino el porcentaje de proteína
soluble en una solución de cloruro de
sodio al 0.5 M, siendo esta proteína la
albumina presente en la clara de huevo.
Se realizo una curva de calibración para
la determinación cuantitativa de las
proteínas solubles en la clara de huevo,
obtenido porcentajes similares a lo
establecido por la norma técnica
colombiana (NTC).
Para concluir se cumplieron los objetivos
de la práctica, determinando la
concentración de albumina en la clara de
huevo utilizando el método de reactivo
Biuret, obtenido resultados positivos con
baja presencia de proteínas debido a
errores en la preparación de la muestra y
dilución.
Anexos
1. ¿Describa que es el
espectrofotómetro y para qué
sirve?
R/: Los espectrofotómetros son
instrumentos de medición del
color que se usan para capturar y
evaluar el color(¿Qué Es Un
Espectrofotómetro? | X-Rite, n.d.)
2. Cuáles son las ventajas y las
desventajas, de emplear los
reactivos de biuret para cuantificar
proteínas explique.
 R/: Método Biuret, ventaja
especifico para proteínas,
pocas interferencias, es
económico. Desventaja
poca sensibilidad.
 Método lowry, ventaja
bastante sensibilidad.
Desventaja no todas las
proteínas reaccionan igual
muestra muchas
interferencias como
detergentes no iónicos,
sulfato amónico.
 Método Bradford,
Ventajas método sensible,
 Desventaja muestra
interferencias con
detergentes(Fernández &
Galván, 2006)
3. ¿Cuál es la finalidad de utilizar un
tubo como blanco? Mencione si
siempre se utiliza agua como
blanco
R/: Con "blanco de reactivo" se hace
referencia a un leve error positivo en
los resultados de un test que sea
consecuencia de los propios reactivos.
Hach Company hace todo lo posible
por fabricar reactivos con valores
despreciables de blancos.
Normalmente son tan reducidos que
no tienen efecto alguno en la
exactitud de los test(¿Cuál Es La
Diferencia Entre Un Blanco de
Reactivo y Un Blanco de Muestra?,
n.d.)
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