Curso : Laboratorio y Toxicología

Dra. Rosa Elizabeth Carrera Palao

Mg.Esp.Tox. Q.F. Luis Alberto López Avila

La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para
realizar análisis cualitativos ya que pese a no ser una técnica muy potente no
requiere de ningún tipo de equipamiento.
La fase estacionaria esta constituida por placas de silica gel. La muestra se deposita
en un extremo, con ayuda de capilares, colocando pequeñas gotas de la solución y
evaporando el solvente. Se coloca,de manera vertical, la placa dentro de una cuba
cromatográfica que contiene la fase móvil(mezcla de solventes).Luego la fase móvil
se hace ascender por capilaridad.
 La cromatografía es un método físico de separación para la
caracterización de mezclas complejas cuyo objetivo es separar los
distintos componentes, la cual tiene aplicación en todas las ramas de la
ciencia; en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar
los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y
determinar las cantidades de dichos componentes. Diferencias sutiles en
el coeficiente de partición de los compuestos dan como resultado una
retención diferencial sobre la fase estacionaria y, por tanto, una
separación efectiva en función de los tiempos de retención de cada
componente de la mezcla.

Técnica de separación en la cual, los componentes de la muestra, se distribuyen

entre dos fases de diferente naturaleza, como consecuencia de la variación de
velocidad que se establece al ser arrastrados por una fase móvil, líquida o gaseosa,
a través de una fase estacionaria, sólida o líquida.
TLC o CCF

Cromatografía Líquida

Cromatografía de Gases

Las cuales tienen diferente fase estacionaria, fase móvil, especificaciones del analito
utilizado y otros
Diferenciación de clorofilas Amplitud de ondas
 La máxima altura (h) alcanzada por el disolvente en su avance, se
denomina frente del disolvente, y sea dA la distancia recorrida por la
sustancia A.
Se define Rf como el cociente entre la distancia recorrida por una
sustancia desde el origen (d) y la distancia del origen al frente del
disolvente (h). Para la sustancia A:
RfA = dA/h
Clínicos y bioquímicos.

separación de los aminoácidos y péptidos se llevó a cabo con regularidad

para ayudar en la investigación de las estructuras de las proteínas.
examen rutinario de orina y otros líquidos corporales de los aminoácidos y
azúcares (esto es más importante, ya que pueden ser utilizados para el
diagnóstico de una serie de patologías con el mapa de la técnica estándar).
separación de las bases de purina y de los nucleótidos en el examen de los
ácidos nucleicos. separación de los esteroides.

Analítica general.

Aplicaciones generales analíticamente incluye análisis de polímeros,

detección y estimación de metales en sólidos y especímenes geológicos,
investigación de materiales fenolicos en plantas extraídas, separación de
alcaloides y separación de componentes radio isotópicos.
FUNDAMENTO:

La separación de mezclas de moléculas mediante la cromatografía de capa

fina se basa en el principio del reparto entre dos fases.  En general, una
cromatografía se realiza permitiendo que la mezcla de moléculas que se
desea separar (muestra) interaccione con un medio o matriz de soporte que
se denomina fase estacionaria. Un segundo medio  (la fase móvil) que es
inmiscible con la fase estacionaria se hace fluir a través de ésta para eluir las
moléculas de la muestra. Debido a que las distintas moléculas en la muestra
presentan diferente coeficiente de reparto, la fase móvil eluirá a los distintos
componentes con diferente eficiencia, de modo que aquellos que "prefieren
disolverse" en la fase móvil serán eluídos más rápido que los que sean
retenidos por la fase estacionaria.

PRINCIPIO DE REPARTO ENTRE DOS FASES:

Es especialmente útil cuando se quiere separar y determinar los componentes de
una mezcla o identificar los compuestos existentes en una mezcla.

En la cromatografía de capa fina, un adsorbente está depositado formando una

delgada capa sobre una placa de vidrio, papel de aluminio u otros materiales, por
la que ascienden, arrastradas por un disolvente (eluyente), una o más sustancias
que se pretenden separar o identificar.

La mezcla de solventes asciende

entonces por capilaridad a lo largo de la
placa, arrastrando a los compuestos a
diferentes velocidades, según el grado de
adsorción de éstos en la fase estacionaria
o la fase móvil produciéndose así su
separación.
Eluyentes más comunes para cromatografía en capa fina.
-éter de petróleo
-tolueno
-dietil-éter, t-butil-éter
-diclorometano
ADSORBENTES MÁS COMUNES PARA
-acetato de etilo
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA.
-n-pentano, n-hexano
a) Silica gel (se utiliza en el 80% de las
-ciclohexano
separaciones)
-tetracloruro de carbono
b) Óxido de Aluminio ó Alúmina (ácida, neutra
-éter dietílico
ó básica)
-cloroformo
c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
-acetona
d) Poliamidas
-iso-propanol
-etanol
-metanol
-ácido acético
-hexano
-benzeno
FACTORES QUE INFLUYEN EN UNA SEPARACIÓN POR CROMATOGRAFÍA
DE CAPA FINA.

a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben más en

la fase
estacionaria.
b) Estándares primarios o secundarios
d) Pureza de los disolventes.
e) Adecuada extracción de tóxicos
f) Muestra adecuada
g) Hora toma de muestra
h) Contaminación de muestras
i) Descomposición de analitos
La cromatografía en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros
métodos cromatografíca (en columna, en papel, en fase gaseosa, ...) ya que el lo
que precisa es más simple. El tiempo que se necesita para conseguir las
separaciones es mucho menor y la separación es generalmente mejor. Pueden
usarse reveladores corrosivos, que sobre papel destruirían el cromatograma. El
método es simple y los resultados son fácilmente reproducibles, lo que hace que
sea un método adecuado para fines analíticos.
La técnica cromatografíca con un enfoque al área clínica
nos sirve para identificar bacterias mediante la
comparación obtenida del Cromatograma obtenido con un
patrón predispuesto, para identificar distintos tipos de:
tóxicos orgánicos fijos etc.
Identificación de Nucleótidos

Identificación de
proteínas