TÉCNICAS DE SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA

En esta unidad entraremos al tema de separación por cromatografía como su nombre lo indica
estas técnicas nos sirven para separar componentes de una muestra. Para llevar a cabo cualquier
tipo de separación química se debe tomar en cuenta la caracterización de los materiales así como
también conocer la composición de los mismos ya que las propiedades de los materiales
dependen fundamentalmente de los componentes que lo forman y de la proporción existente
entre ellos. Las técnicas de separación sólo sirven para eso, separar, y que no nos dan ninguna otra
información acerca de la naturaleza de los componentes separados, es por eso que en la mayoría
de los casos estas técnicas o métodos de separación vayan acompañados de otros métodos de
análisis cualitativos y cuantitativos con el fin de identificar y cuantificar los componentes de la
muestra separados.

Esta técnica fue empleada por primera vez en 1906, para la separación de pigmentos vegetales
pero no fue hasta mediados del siglo XX cuando aparezcan los primeros equipos de cromatografía
de gases. En esa misma fecha empezaría a desarrollarse la cromatografía líquida de alta resolución
(HPLC). Existen al menos tres puntos importantes de relevancia de la cromatografía referidos a la
ciencia y tecnología de los materiales el primero nos menciona que muchos sólidos se preparan a
partir de precursores moleculares organometálicos o de complejos de coordinación, y éstos a su
vez a partir de compuestos orgánicos. De aquí la necesidad de controlar el grado de pureza de los
compuestos de partida, de efectuar el seguimiento de las reacciones de síntesis en que
intervienen los mencionados compuestos para a si poder conocer con anterioridad posibles
procesos secundarios mediante aplicación cromatográfica. Lo segundo nos dice que
frecuentemente nos veremos en la necesidad de analizar, identificar y cuantificar los compuestos
transformados por la acción de materiales sobre sustancias orgánicas. Las técnicas
cromatográficas son imprescindibles para una correcta evaluación de la actividad de materiales
catalizadores y para el estudio de soportes sólidos de reacciones químicas de gran importancia en
petroquímica y en la elaboración de compuestos orgánicos de alto valor añadido.

En el punto numero tres hablas de las nuevas fases (estacionarias) de la cromatografía (rellenos
de columnas cromatográficas). La extensión cada vez mayor de las técnicas de análisis
cromatográfico llevan a su vez a una demanda de materiales utilizables como fases estacionarias
los cuales den soluciones a la deficiencias de las fases utilizadas tradicionalmente, tales como la
existencia de interacciones secundarias no deseadas.

Claro que esta que para entender de que nos hablan estos puntos se debe conocer algunos
términos básico como los siguientes: Cromatografía: método físico de separación en el que los
componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales está en reposo (fase
estacionaria o lecho estacionario) mientras que la otra (fase móvil) se mueve en una dirección
definida; Fase estacionaria: Es una de las dos fases que forman un sistema cromatográfico. Puede
ser un sólido, un gel o un líquido. Si es un líquido, puede estar distribuido en un sólido, el cual
puede o no contribuir al proceso de separación; Soluto: término que se refiere a los componentes
de la muestra en la cromatografía de reparto; Disolvente: término que en ocasiones se refiere a la
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fase estacionaria líquida en la cromatografía de reparto. En la cromatografía líquida, el término
"disolvente" se ha usado a menudo para la fase móvil.

Dentro de los mecanismos de separación se pueden mencionar a la Cromatografía de Adsorción

aquí la separación se basa principalmente en las afinidades en términos de adsorción de los
componentes de la muestra sobre la superficie de un sólido activo (estas afinidades son
diferentes). La cromatografía de adsorción, es una técnica particularmente útil para separar
compuestos de polaridad baja o media. La separación de compuestos muy polares mediante
cromatografía de adsorción requiere la utilización de adsorbentes muy poco activos, o bien,
tratamientos químicos previos a fin de reducir su polaridad.

Cromatografía de Reparto este tipo de cromatografía se basa en la diferente solubilidad de los

componentes de la muestra en la fase estacionaria (caso de la cromatografía de gases), o en las
diferentes solubilidades de los componentes en las fases móvil y estacionaria (caso de la
cromatografía líquida). La cromatografía de reparto se utiliza para la separación de mezclas de
compuestos de polaridad media y alta. Algunos ejemplos de este tipo de cromatografía son las
cromatografías sobre papel, sílice hidratada.

Cromatografía de Exclusión se basa principalmente en efectos de exclusión, tales como las

diferencias de tamaño molecular o de forma, o las diferencias de carga dentro de esta clase de
cromatografía también entra las siguiente clasificación: Cromatografía de exclusión por tamaños
(SEC). La SEC es una de las más usadas y su mayor característica es su límite de exclusión que se
define como la masa molecular a partir de la cual los compuestos pasarán a través del lecho
estacionario sin experimentar retención.

Cromatografía en columna se caracteriza por tener un lecho estacionario ubicado dentro de un

tubo, donde las partículas de fase estacionaria sólida, o de soporte recubierto con una fase
estacionaria líquida, pueden llenar por completo el tubo (columna empaquetada) o estar
concentradas sobre o a lo largo de su pared interna para dejar un canal o ruta para el paso de la
fase móvil por el centro del tubo (columna tubular abierta).

Cromatografía Plana Técnica de separación en la que la fase estacionaria está en forma de plano o
sobre un plano. Éste puede ser un papel, que sirva como tal o que esté impregnado con una
sustancia que actúe de fase estacionaria (cromatografía en papel), o una capa de partículas sólidas
extendida sobre un soporte, tal como una placa de vidrio (cromatografía en capa fina, TLC). A
veces a la cromatografía plana se la llama también cromatografía de lecho abierto.

Las técnicas cromatografías pueden clasificarse en: Cromatografía gas-líquido (GLC), Cromatografía
gas-sólido (GSC), Cromatografía líquido-líquido (LLC), Cromatografía líquido-sólido (LSC),
Cromatografía de Gases (GC), Cromatografía Líquida (LC) y Cromatografía con fluido supercrítico
(SFC).

A continuación se mencionan a groso modo los parámetros básicos de cromatografía: Retención y

factor de capacidad: La retención es la capacidad real de la fase estacionaria para retardar la salida
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de un componente. El tiempo muerto, tM, es el tiempo que tarda en salir un componente que no
se retiene (o el propio eluyente). El tiempo de retención, tR, es el tiempo medio que tarda en salir
un determinado componente. Y el factor de capacidad K que expresa la retención de un
compuesto por la fase estacionaria independientemente del caudal de la fase móvil. La dispersión
de bandas: esto se aprecia cuando es introducida una mezcla de componentes en una columna
cromatografía que al fluir la mezcla desde un extremo a otro de la columna se observa que las
bandas de los componentes se van ensanchando (se denomina bandas a la distribución de
concentración de un determinado componente) al mismo tiempo que se separan. Y este proceso
va en función del tiempo de elución. Eficacia: este parámetro se basa en las anchuras de las
bandas cromatográficas que van de la mano con las características de la columna (tamaño de las
partículas de la fase estacionaria, homogeneidad de ésta, etc.), así como de otros factores como
por ejemplo, la velocidad de la fase móvil. Por último tenemos a la Separación y resolución: las
cuales son estudiadas bajo dos parámetros 1) retención relativa, α, definida como el cociente
entre los tiempos de retención corregidos de las dos bandas. 2) La resolución, Rs, definida como el
cociente de la distancia entre los centros de las dos bandas y el valor medio de la anchura de las
mismas.

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