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Introducción

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 FITOQUÍMICA

Metabolitos secundarios

 Alcaloides
 Saponinas
 Flavonoides
 Taninos
 Quinonas
 Terpenos
DIAGRAMA DE FLUJO DE PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

PLANTA ENTERA

RECOLECCIÓN

SELECCIÓN

ESTABILIZACIÓN
Y SECADO

MOLIENDA

CONSERVACIÓN

EXTRACIÓN EVALUACIÓN FITOQUÍMICA

PRELIMINAR
 OBTENCIÓN DE DROGAS Y PRINCIPIOS ACTIVOS

Es necesario el conocimiento de diferentes técnicas y de

fuentes potenciales para la obtención de extractos o de
principios activos

Extracción mecánica

Destilación

Extracción con fluidos

en condiciones supercríticas

Extracción con solventes

 OBTENCIÓN DE DROGAS Y PRINCIPIOS ACTIVOS

Extracción mecánica: Permite

obtener los principios activos
disueltos en los fluidos propios de la
planta, los cuales una vez extraídos
se denominan jugo.

Expresión: Consiste en ejercer una

presión sobre la droga (zumos de
cítricos y aceites).
Incisiones o cortes por las que fluyen
los fluidos de la planta. Se utiliza
para extrer material vegetal
exudados (gomas, resinas y mieles)
 OBTENCIÓN DE DROGAS Y PRINCIPIOS ACTIVOS

Destilación:
 OBTENCIÓN DE DROGAS Y PRINCIPIOS ACTIVOS

• Destilación por arrastre de vapor y

extracción simultánea con solventes
orgánicos.
• Hidrodestilación
• Hidrodestilación asistida con radiación
microonda
 OBTENCIÓN DE DROGAS Y PRINCIPIOS ACTIVOS

Extracción con fluidos en condiciones supercríticas:

Se opera con dispositivos especiales donde es posible controlar la

presión (P) y la temperatura (T) y se trabaja a P y T superiores a la P y
T críticas.

El gas más utilizados son el dióxido de carbono

 OBTENCIÓN DE DROGAS Y PRINCIPIOS ACTIVOS

Características
Control de la
de la droga
Extracción difusión celular
con
solventes

Naturaleza del Tiempo de

solvente contacto entre la
droga y el
disolvente
Temperatura
 OBTENCIÓN DE DROGAS Y PRINCIPIOS ACTIVOS

Extracción discontinua o simultánea:

 OBTENCIÓN DE DROGAS Y PRINCIPIOS ACTIVOS

Extracción continua o progresiva:

 OBTENCIÓN DE DROGAS Y PRINCIPIOS ACTIVOS

Concentración de líquidos extractivos:

 Al vacío
 Liofilización
OBTENCIÓN DE DROGAS Y PRINCIPIOS ACTIVOS

Al vacío: Utilizando un rotavapor,

se trabaja a temperaturas inferiores
a 40°C y en ausencia de oxígeno.
Se aplica para concentrar líquidos
extractivos obtenidos con solventes
orgánicos y mezclas
hidroalcohólicas.

Liofilización: Consiste en eliminar el

solvente mediante una congelación a
temperatura bajas, seguido de una
sublimación del solvente, que pasa
directamente del estado solido a vapor.
Este método se aplica principalmente en
el caso de líquidos extractivos acuosos.
 OBTENCIÓN DE DROGAS Y PRINCIPIOS ACTIVOS

Se puede distinguir distintos tipos de extractos según la

concentración de principio activo respecto a la droga
original y según su consistencia.

 Extractos fluidos
 Extractos blandos
 Extractos secos
 Tamizaje fitoquímico

El tamizaje fitoquímico o screening fitoquímico es una de

las etapas intermedias de la investigación fitoquímica, que
permite determinar cualitativamente los principales grupos
químicos presentes en una planta y a partir de allí, orientar
la extracción y/o fraccionamiento de los extractos para el
aislamiento de los grupos de mayor interés. El tamizaje
fitoquímico consiste en la extracción de la planta con
solventes apropiados y la aplicación de reacciones de color
y precipitación. Debe de permitir la evaluación rápida, con
reacciones sensibles, reproducibles y de bajo costo.
 SEPARACIÓN Y PURIFICACIÓN DE EXTRACTOS

 Cromatografías de adsorción
 Cromatografía de partición
 Cromatografía en contracorriente
 Cromatografía gaseosa
 Cromatografía de afinidad
 Cromatografía liquida de alta resolución (HPLC).
 ¿Qué es la Cromatografía?

 Es un método de
separación de mezclas en
sus constituyentes
individuales
 Tiene dos finalidades:
 Purificación
 Análisis
 Por qué se llama Cromatografía

KHROMATOS GRAPHOS
(Color) (Escritura)

MIGUEL TSWEET (BOTANICO RUSO-1906). REALIZO LA PRIMERA

CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA.
Eter de Eter de
Eter de
petróleo petróleo
petróleo

Mezcla de
pigmentos
vegetales

CaSO4
 Inicios de la Cromatografía…

 Es una técnica de separación basada en la diferente

velocidad con que se mueven los solutos a través de un
medio estacionario mediante el flujo en un disolvente
llamado eluente o fase móvil.
 F. F. Runge químico alemán, describió el proceso de
separación que actualmente se conoce como
cromatografía en papel.
 El ruso Mijail Tswett corresponde el haber establecido
las ventajas de la cromatografía y la adopción parcial
de la terminología, también fue quien sentó las bases
de los principales procedimientos experimentales
relativos a ésta técnica.
 Inicios…

 A pesar de que el método  Las únicas sustancias que no

cromatográfico prometía pueden ser examinadas por
simplificar la separación de cromatografía son:
sustancias de mezclas  Las insolubles
complejas, no fue sino  Las que descomponen con el
hasta finales de la década solvente o con la fase
de los 30 y principios de los estacionaria.
40 cuando se empezó a
desarrollar la técnica
teniendo este método
diversas aplicaciones.
 Métodos:

MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS

SIMPLES INSTRUMENTALES

PAPEL PLACA COLUMNA GASES LÍQUIDOS

 Elementos básicos de la cromatografía
 Fase estacionaria Fija
Sólida: Sílica gel, alúmina,etc.
Líquida: Solventes polares, no polares, y mixtos.

 Fase móvil Se desplaza

Líquida: Solventes polares, no polares y mixtos.
Gaseosa: Gas inerte (Nitrógeno, helio, etc. )
 La separación de los compuestos…
Columna
Fase
Móvil

Inyección Migración Elución

Compuestos
Proceso de las Fase móvil Fase móvil
separaciones
cromatográficas

Es la distribución de
los constituyentes de Fase
una mezcla entre la estacio-
naria
fase estacionaria y la
fase móvil.
Por qué se separan los compuestos?

Algunas compuestos son retenidas más fuertemente en la

fase estacionaria por:
 Su mayor polaridad, lo que favorece su adsorción en dicha
fase.
 La menor solubilidad en la fase móvil.

Otras compuestos son menos retenidas, debido a:

 Su menor polaridad, lo que disminuye su capacidad de
adsorción en la fase estacionaria.
 Su mayor solubilidad en la fase móvil
 Clasificación de la cromatografía

 Esta técnica analítica se clasifica de acuerdo a

su mecanismo de separación en cromatografía
de:
 Reparto
 Adsorción
 Exclusión.
 Intercambio iónico
 Cromatografía de afinidad
 Cromatografía de Reparto…

 Usa una fase  La fase móvil puede ser

estacionaria líquida que
forma una fina película
sobre la superficie de
un soporte sólido.
 El soluto está en
equilibrio entre el
líquido estacionario y la
fase móvil
un líquido o un gas
según sea el caso de la
cromatografía; en caso
de que la cromatografía
sea líquido / líquido la
fase móvil será un
liquido, o de un gas en
cuyo caso es
cromatografía gas/
líquido.
 Cromatografía de reparto

El soluto se disuelve en la
fase líquida con que está CROMATOGRAFIA DE
recubierta el soporte REPARTO O PARTICIÓN
sólido
Fase estacionaria:
Líquido sostenido o
adsorbido en un sólido inerte.

Fase móvil:
Líquido (CLL)
Gas (CLG)

Nota: Los líquidos de las 2 fases

deben ser inmiscibles entre sí.
 Cromatografía de Adsorción

 Usa una fase estacionaria  El soluto se adsorbe sobre las

sólida y una fase móvil líquida superficie de las partículas
o gaseosa sólidas, la separación se
CROMATOGRAFÍA DE explica con la desorción de
ADSORCIÓN sustancias contenidas en la
fase móvil sobre un
 Fase estacionaria: sólido.
sólido estacionario

 Fase móvil:  Pueden ser sistemas

líquido/sólido y gas/sólido. En
Líquido ( CSL)
cualquier fenómeno de
Gas (CSG) adsorción influyen tres
variables:
adsorbente, eluente y solutos .
 Cromatografía de adsorción

 El término adsorción en el contexto

cromatográfico se refiere a interacciones
débiles.
Xm

S
 Cromatografía de adsorción
 Cromatografía líquido/
sólido: la fase
estacionaria suele ser gel
de sílice , alúmina, carbón
activado y polvo poliamida.
 Algunas veces al aplicar
alúmina pueden ocurrir
cambios químicos, es decir,
quimisorción durante el
paso del soluto por la fase
estacionaria.
 Cromatografía gas
/sólido: los adsorbentes
mas
usados son: alúmina, gel de
sílice, carbón activado y
mallas moleculares. Se
realizan en columna.
 El material que sea utilizado
como adsorbente debe
presentar una estructura
rígida, tamaño uniforme y
ser químicamente inerte.
 CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

Es una forma de cromatografía de adsorción sólida- liquida la

cual consta de una fase estacionaria (adsorbente) y una fase
móvil (disolvente).

La adsorción es un fenómeno de superficie que consiste; en

una acumulación de la sustancia disuelta en la fase móvil, en
la superficie de un sólido (fase estacionaria).

En la cromatografía en capa fina la separación se realiza en

función de la mayor o menor tendencia de cada componente
de la mezcla a quedar adsorbido sobre el adsorbente (fase
estacionaria) y de la mayor o menor facilidad para quedar
disuelto en el disolvente (fase móvil).
 Proceso de Adsorción

La muestra aplicada en la capa es adsorbida en la superficie

del material por la acción de fuerzas electrostáticas (fuerzas de
Van der Waals, puentes de Hidrógeno, efectos inductivos, etc).
Adsorbentes
Los adsorbentes más utilizados en la Cromatografía de Capa
Fina son:
· Silica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones)
· Óxido de Aluminio ó Alúmina (ácida, neutra ó básica)
· Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
· Poliamidas
La técnica de cromatografía en capa fina (TLC) es una de las
más comunes empleadas en un laboratorio de Química
Orgánica. Se utiliza para:

*Determinar el grado de pureza de un compuesto

*Comparar muestras

*Industria farmacéutica
Control de calidad
Controles de pureza

*Medioambiente
Análisis de aguas, de suelos y de residuos
Interpretación de los resultados
 6) Determinar las posiciones
relativas de los puntos
mediante el cálculo del Rf

Ratio of Front
 Preparación de la Placa Cromatográfica

•Se usan como soporte del adsorbente láminas de:

Vidrio, Plástico ó Metálicos (ej: Aluminio).

•Los tamaños de la placa para TLC convencional son :

20 cm x 20 cm; 10 cm x 20 cm y 5 cm x 2 cm
 Cromatografía de Exclusión

 La separación está basada en los diferentes

volúmenes moleculares de los solutos.
 El tiempo de elusión es proporcional al peso
molecular de los mismos, lo que provoca ser no
muy usada con compuestos de alto peso
molecular.
 Principalmente en este proceso se emplean
geles no iónicos de partículas uniformes y
porosos, como fase estacionaria.
 También llamada de filtración por gel o de
permeación por gel.

 Separa moléculas por su tamaño, las moléculas

grandes pasan más rápido que las pequeñas,
no hay una interacción entre la fase estacionaria
y el soluto, sino que la fase móvil pasa a través
de un gel poroso.
 Los poros pequeños dejan pasar a las
moléculas grandes y las moléculas pequeñas
tardan más tiempo en pasar a través de la
columna.
Cromatografía de exclusión molecular

Se excluyen las
moléculas
grandes
 Cromatografía de Afinidad

 Es la más selectiva, emplea interacciones de

moléculas de un soluto en particular y una
segunda molécula que está unida
covalentemente (inmovilizada) a la fase
estacionaria.
 La molécula inmovilizada podría ser un
anticuerpo unido a una proteína determinada.
 Solo la proteína que reacciona con el anticuerpo
se fija en la columna.
 Cromatografía de Afinidad

 Todas las demás moléculas se eliminan

Una clase
específica de
moléculas, se une
a la fase
estacionaria
 Cromatografía líquida.

 Y Cromatografía de líquidos de alta eficacia

 Fase móvil, líquido a alta presión
 Fase estacionaria sólido en columnas de un
diámetro de 3 a 10 micras.
 Analito: líquido.
 Utiliza instrumentación especializada.
 http://kerouac.pharm.uky.edu/ASRG/HPLC/HPL
CMYTRY.HTML
 Cromatografía de líquidos en columna

 Sentido de flujo

A+B
1

A+B
A B
2
 Cromatografía de líquidos en columna

 Sentido de flujo

3 A B

4 A B
 Cromatografía de líquidos en columna

 Sentido de flujo
Tiempo
5
A B Registrador

Diafragma
de
Columna
inyección
de muestra
Detector
 Cromatografía gaseosa.

 La cromatografía también se puede clasificar en

cuanto al método de análisis en cromatografía
de gases:
 Fase móvil: gas portador (He, N2 o H2)
 Fase estacionaria: líquido no volátil, o un sólido.
 Analito: gas o líquido volátil
 Ver:
http://www.uib.es/depart/dqu/dquo/pau/Cromatograf%92a/chrom10/chrom/GC/
concept/main.htm
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

 Un suministro y una entrada de gas de acarreo

 Puerto de inyección
 Columna normalmente localizada en el interior de
una cámara termostatizada (horno)
 Detector
 Sistema computarizado para analizar, registrar e
imprimir el cromatograma
Cromatógrafo de gases