Escuela de Tecnología Medica

Departamento Académico de Tecnología Medica

Laboratorio Clínico
CURSO BIOQUIMICA Y BIOLOGIA
MOLECULAR

PRACTICA: EXTRACCION RAPIDA DE ADN

En esta práctica realizaremos la extracción del ADN de las células de descamación del
epitelio mucoso del interior de la boca, poniendo de manifiesto su estructura fibrilar y el
extraordinario grado de enrrollamiento, que permite el empaquetamiento en el núcleo
celular de las larguísimas cadenas de esta molécula.

MATERIALES:

- Agua mineral

- Etanol absoluto muy frío

- NaCl 3M

- Alcohol de 70º

- Tampón de Lisis

- Palillo o varilla de vidrio

- Tubo de ensayo

- Gradilla

- Vasos descartables

- Tubos de microcentrifuga 1,5 mL

PROCEDIMIENTO:

1. Preparar un tubo de ensayo con Etanol absoluto por cada alumno y poner a
enfriar lo máximo que sea posible (-20°C).

2. Poner un 20mL de agua en un vaso y enjuagarse la boca enérgicamente durante

al menos medio minuto para arrastrar el mayor número posible de células de
descamación de la mucosa bucal (antes de hacerlo conviene haber tragado saliva para
eliminar la acción de los enzimas contenidos en ella).

3. Mientras tanto pondremos 20mL de tampón de Lisis y 2mL del Sol NaCl 3M en
el mismo vaso.

4. Expulsar el agua en el vaso de precipitados sobre la solución anterior. Dejaremos

actuar durante unos 10 minutos, removiendo de vez en cuando suavemente para disolver
estos componentes evitando la formación de espuma.

5. A continuación, añadir la solución suavemente al tubo de ensayo que contiene el

alcohol muy frío dejándola resbalar por la pared del tubo inclinado. El filtrado, más
denso que el alcohol y algo turbio, se deposita en el fondo del tubo. Dejar reposar
durante 2 ó 3 minutos sin moverlo en absoluto. El alcohol formará un sobrenadante por
encima de la fase acuosa, en la que se encuentra el ADN en disolución, provocando que
éste precipite.

6. Esperar unos minutos mientras el ADN precipita en la interfase alcohol-agua

formando una masa blanquecina que asciende lentamente formando un grumo de
aspecto algodonoso.

7. Tras unos minutos de reposo, el ADN tiende a subir hacia la superficie del
alcohol.

8. Entonces podremos recogerlo utilizando una varilla de vidrio, una pipeta Pasteur
o simplemente un palillo. Para ello, se introduce en la masa de ADN y se extrae
suavemente mientras se hace girar entre los dedos.

9. Entretanto habremos preparado los tubos de microcentrífuga con 1mL de

alcohol de 70º.

10. Una vez extraído el ADN podemos suspenderlo en el tubo de microcentrífuga y

a proceder a realizar un par de lavados con alcohol al 70%.
CUESTIONARIO

1. Describa cuáles son los pasos comunes para la extracción de ADN a partir de
células/tejidos.

Procedimiento para una extracción casera:

Material

 1 bolsa de plástico con cierre (tamaño para sándwich)

 1 fresas grande o 2 pequeñas (frescas o congeladas)

 2 cucharaditas de detergente para platos

 1 cucharadita de sal

 ½ taza de agua

 2 vasos chicos

 1 filtro de café

 1L de Alcohol 96% o alcohol del 96°

 1 palo de paleta de madera o agitador de café de plástico

Procedimiento

Coloca una fresa grande o dos pequeñas y retirale las hojas verdes que puedan
quedar en la fruta.

Colocalas en la bolsa de plástico, retire el aire y séllela para que puedas

romperalas suavemente las fresas dentro de la bolsa durante unos dos minutos.
Triturar completamente las fresas.

Buffer de extracción de ADN: En un vaso mezcle 2 cucharaditas de detergente, 1

cucharadita de sal y ½ taza de agua.

Agregue 2 cucharaditas del líquido buffer de extracción a la bolsa con las fresas
trituradas.

Vuelva a sellar la bolsa y aplaste suavemente durante 1 min. NOTA: Evite hacer
muchas burbujas.

Coloque el filtro de café dentro del otro vaso

Abra la bolsa y vierta el líquido de fresa en el filtro. Puede exprimir suavemente

hasta obtener el líquido restante.

Luego, vierta por las paredes del vaso el alcohol frío con una cantidad igual al del
líquido con fresa .

NOTA: No mezcle ni revuelva, solo deja que la mezcla repose por unos segundos.
En unos segundos, observe el desarrollo de una sustancia turbia blanca (ADN)
en la capa superior sobre la capa de extracto de fresa. Incline el vaso y recoja el
ADN con un palo de madera. Separe el ADN del resto del material contenido en
las células de la fresa
2. Mencione y describa el principio de los métodos comúnmente usados para la
extracción y purificación de DNA.
 Obtención de la muestra celular
 Lisis celular: es el proceso físico o químico por el cual se rompen las
membranas para liberar sus componentes celulares.
 Degradación de proteínas: se rompen las proteínas que cubren al ADN
usando proteasas.
 Procesos de Separación: procesos físicos o químicos mediante los
cuales se separan diferentes componentes celulares como lípidos,
proteínas, ARN, ADN y moléculas pequeñas. Para esto se usa una
centrífuga.
 Degradación de ARN por RNAsa: proceso que rompe específicamente
cadenas ARN remanente con el fin de evitar contaminación de este
material.
 Cuantificación de ADN: técnica mediante la cual se mide la
concentración del material genético usando un espectrofotómetro.

3. ¿Cuál es la función del NaCl en la extracción de DNA?

El DNA es soluble en alcohol, pero se torna insoluble en presencia de sal (NaCl)

porque el sodio neutraliza la carga negativa de los grupos fosfatos. El etanol
formará una capa en la superficie por ser menos denso que la solución acuosa.

4. Explique ¿por qué y cómo el ADN precipita con la adición del alcohol frío?

La adición de alcohol frío precipita el ADN dado que es insoluble en altas

concentraciones de sal y alcohol. El ADN precipitado forma unas finas hebras
blancas y visibles en el límite de separación de la fase de alcohol, mientras que el
resto de las sustancias permanecen disueltas.

REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

Alberto Checa Rojas. (2016). Extracción de ADN. 2020, Noviembre 24,

Conogasi.org Sitio web: http://conogasi.org/articulos/extraccion-de-adn