INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

LABORATORIODEMICROBIOLOGÍA

TINCIONES SELECTIVAS
INTEGRANTE PROFESORAS:
Vega Montes Ayrton Dra. Shantal Lizbeth Baltierra Uribe
Gallardo Cortes Oswaldo Dra. Alejandra Valdivia Flores

GRUPO 4IV2 EQUIPO 6

 Objetivos

• Realizar varias técnicas de coloración selectiva que permitan

observar algunas estructuras bacterianas.

• Diferenciar las distintas tinciones selectivas.

 INTRODUCCIÓN

¿Quées un colorante?

Son sustancias que tienen la

capacidad de teñir células,
estructuras o tejidos.
Permiten hacer visibles los objetos
microscópicos y transparentes,
conocer su forma y tamaño, así
como sus estructuras internas
y externas.

1
 Clasificación según la acidez
Colorantes ácidos
La sustancia colorante está a
cargo del anión, mientras que el
catión no tiene esa propiedad.
No tiñen a la celula, ayudan a revelar las
capas superficiales (capsula)
Colorantes básicos
La acción colorante está a cargo
del catión, mientras que el anión
no tiene esa propiedad.
Tiñen a la celula y permite observar la
pared como estructura engrosada
 Tincionesselectivas

Ponen de manifiesto las estructuras de

las celulas aprovechando las propiedades
fisicoquimicas de algunos de sus
componentes, por lo que se tiñen de
manera selectiva con los colorantes

Permiten observar un organelo celular

determinado, porque el colorante se
combina selectivamente con él.
Esquema de una bacteria ideal. Asterisco indica estructuras que se ponen en
manifiesto con tinciones selectivas.
 Tinción - Tinta China
Cápsulas
Negativa - Rojo Congo

Esporas
- Schaeffer Fulton
Tinciones
selectivas

- Loeffler
Gránulos
metacromáticos
- Albert
 Tincionesnegativas
Fue diseñada para microscopía de luz con el fin de rodear y delinear las
bacterias no teñidas.
Este método es muy útil y valioso por la información que provee sobre
las bacterias que pueden presentar cápsula.

La cápsula está compuesta por
una capa de polisacáridos, los
cuales se encuentran
fuertemente unidos a la pared
celular y ofrecen
permeabilidad a la misma.
Fundamento
Se tiñe el exterior pero no el interior
de células. Escherichia coli
Tinción negativa. 1000x.
Adicionalmente, sólo requiere tinta
china como colorante o rojo congo.
 TINCIÓN DE TINTA CHINA

El cromógeno es ácido (carga negativa), la cual

repele la célula cargada negativamente, por lo que
dicha célula permanece sin teñir contra un fondo
coloreado.

Además, este colorante está compuesto

por particulas finas de carbono
Tinción negativa de Bacillus cereus. suspendidas en agua formando un
Microscopía óptica de campo claro auténtico coloide.
(100x).
 Metodología
Colocar una gota de agua del Con el asa tomar un poco
mismo tamaño junto a la tinta. de K. pneumoniae

Observar de manera
inmediata en el microscopio
con objetivo en seco fuerte e
inmersión
IMPORTANTE

- Portaobjetos
- Cubreobjetos
- Agua destilada
 TINCIÓN DE ROJO CONGO
Consiste en el uso de un colorante y un mordente, el colorante se fija con el
mordente y el fondo se tiñe de color rojo.
El colorante es ácido y posee una
carga negativa (un colorante ácido
cede un ión hidrógeno y deja con una
carga negativa).

La carga negativa repele el colorante

cargado negativamente, por lo que la
célula permanece sin teñir contra un
Dos reactivos
fondo coloreado. Rojo Congo y un mordente de cápsula.
 Metodología
(No fijar al calor)

Pequeña gota de Suspender Cubrir frotis con

Cultivo de
rojo congo en el K.pneumoniae en la Secar al aire mordente de
K.pneumoniae
portaobjetos gota de rojo congo cápsula (1 min)

Desechar la Cápsula Observamos en el

Lavar frotis con
preparación en un microscopio
estructura de agua destilada
recipiente con con el objetivo de
antiséptico. K.pneumoniae Secar al aire
inmersión
IMPORTANTE

Mordente de cápsula
- Solución de cloruro ferrico al 6%
-Ácido acético glacial
-Fenol al 5%
- Fucsina básica al 5% en agua
 Tinción de Knaysi
Es un mordente que esta compuesto de:

Acido tánico Alumbre de potasio

C76H52O46
KAl(SO₄)₂·12H₂O
Ayuda a fijar la tinta a la célula para Engrosa la pared celular,
que se pueda ver la pared celular. debido al tamaño molecular
del alumbre de potasio
Metodología
 Tinción de Shaeffer y Foulton

ESTRUCTURA DE LA ENDÓSPORA
• Método empleado para la tinción de esporas BACTERIANA

• Son células resistentes al calor y dificiles de destruir.

• Son impermeables por colorantes.
• Compuesta por: 1.exosporio.
2.cubierta de la espora.
3.córtex o corteza.
4.Núcleo o protoplasma de la endóspora.
Metodología
 TINCIÓN DE LÖEFFLER
Se emplea para la observación de los gránulos metacromáticos en las bacterias.
Los gránulos metacromáticos tienen una afinidad más fuerte por colorantes básicos que
el resto de la célula.
 Azul de metileno Loeffler:
(agua destilada, alcohol y una disolución de potasa)

Los gránulos se observan de color rojo-violeta o azul

intenso y el citoplasma de azul claro.
 Metodología
Colocar microgota de Realizar extensión y
homogeneizar con un asa Fijar frotis con calor.
agua en Pasar 3-5 veces encima
bacteriológica el material a
portaobjetos. estudiar. del mechero.

Lavar con agua y Cubrir frotis con

Observar al
dejar secar al azul de metileno
miscroscopio.
aire. por 1 min.
 Resultado Rojo Congo

INTERPRETACIÓN
Un halo claro (cápsula) alrededor del
microorganismo sobre un fondo rojo de
colorante de rojo Congo.

Klebsiella pneumoniae
Tinción rojo congo. 1000x.

Klebsiella pneumoniae, tinción con

rojo congo, 100x
 Resultados Tinta China

Klebsiella pneumoniae, tinción con tinta china, 100x

INTERPRETACIÓN
Un halo claro (cápsula) alrededor del
microorganismo sobre un fondo oscuro de tinta
china.
Resultado Tinción de Knaysi

Interpretación:
La pared se observa de color rojo
intenso alrededor de la bacteria cuyo
citoplasma se ve de color rosa o rojo
tenue.

Bacillus megaterium,
tinción de Knaysi, 1000x
 Resultados Tinción Schaeffer-Fulton
INTERPRETACIÓN
Las células son de color rosa y las esporas
son de color verde.

Bacillus cereus, tinción de Schaeffer-Fulton

observadas a 100 X
 RESULTADO TINCIÓN DE LÖEFFLER

INTERPRETACIÓN
El citoplasma es de color azul claro y los
gránulos son de color azul intenso.

Corynebacterium xerosis, tinción de Loefer, 100 X

 BIBLIOGRAFIA:
Microbiologia Practica 15° Edicion. "Tinciones Selectiva"
Luis Esaú López-Jácome,* Melissa Hernández-Durán,* Claudia Adriana Colín-Castro,* Silvestre Ortega-
Peña,* Guillermo Cerón-González,* Rafael Franco-Cendejas*. (Enero-Marzo 2014). Las tinciones básicas en
el laboratorio de microbiología. 15/02/2022, de Medigaphic Sitio web:
https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf
Roberto C. González Meléndez, Briseida Elizalde Cuevas, Marian Estefanía Cortés Cruz, Manuel Orduña
Sánchez. (noviembre de 2020.). Las tinciones básicas en el Laboratorio de Microbiología: Un enfoque
gráfico. 15/02/2022, de UNAM Zaragoza Sitio web: https://www.zaragoza.unam.mx/wp-
content/Portal2015/publicaciones/libros/cbiologicas/libros/Tinciones.pdf
María Guadalupe Orozco Benítez, Rafael Martín Murray Núñez, Vianey Alexandra Murray Orozco, Alethia
Aramara Murray Orozco. (Mayo del 2019). ESTRATEGIA DIDÁCTICA PARA LA PRÁCTICA DE LABORATORIO DE
MICROBIOLOGIA. 16/02/2022, de TecnoCientifica Sitio web: http://tecnocientifica.com.mx/libros/36-
Estrategia-did%C3%A1ctica-para-la-pr%C3%A1ctica-de-laboratorio-de-microbiolog%C3%ADa.pdf
Universidad Autónoma de Guerrero, Técnicas de coloración selectiva o especiales, las cuales le permitirán
observar algunas estructuras bacterianas, 2018. Sitio web: https://www.studocu.com/es-
mx/document/universidad-autonoma-de-guerrero/microbiologia/practica-no-12-microbiologia/2864689