Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Carrera acreditada de Licenciatura en Químico

Bacteriólogo Parasitólogo

Microbiología General
Práctica 9 “Tinciones Selectivas”

Equipo 2 Sección 2

Jacinto Sosa Mitzy Anais

López Hernández Ailyn Naomi
López Merlo Ximena

27 de Mayo del 2022

Introducción.

Las tinciones selectivas tienen por objeto poner de manifiesto las estructuras de las
células aprovechando las propiedades físicas o químicas de algunos de sus
componentes o bien, proporcionar información acerca de la naturaleza de ciertas
estructuras a través de su comportamiento tintorial. En general estas técnicas de
tinción se basan en el hecho de que la estructura celular que se desea poner de
manifiesto tiene afinidad por los colorantes utilizados, mayor que el resto de la
célula; a veces se aumenta la afinidad de la estructura por un tratamiento especial
de la preparación.

De este modo se pueden demostrar estructuras como la cápsula, pared celular

esporas, flagelos, material nuclear e inclusiones como depósitos de materiales de
reserva de glucógeno, gránulos metacromáticos y poli-β-hidroxi-butirato.

Ortigoza Ferado J. y Ruiloba de León Frescas S.L (2021) “Microbiología práctica”

pp.49 15a Ed.

Objetivos.

● Teñir estructuras específicas: cápsula, pared celular y esporas.

● Comprender el fundamento de cada una de las técnicas para teñir las
estructuras.
● Lograr observar al microscopio las estructuras que se desean estudiar
y aprender a identificarlas.

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Desarrollo experimental.

1.- Tinción con tinta china.

Esta tinción se emplea para la identificación de la cápsula en Klebsiella
pneumoniae. El fundamento se basa en teñir el fondo del frotis en un color oscuro.
En este escenario las estructuras capsuladas resaltan en color claro o incoloro.

Colocar una gota de tinta Poner una gota de agua Colocar un poco de Mezclar la tinta china, gota
china en el portaobjetos. encima de la tinta china. de muestra de K. de agua y la muestra sin
pneumoniae. extender.

Colocar un cubreobjetos. Observar en el microscopio

a seco fuerte e inmersión.

1000 x
Klebsiella pneumoniae.

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2.- Tinción con Rojo de Congo.
Esta tinción se emplea para la identificación de la cápsula Klebsiella
pneumoniae, emplea una solución colorante en la cual el colorante es ácido y
posee una carga negativa (un colorante ácido cede un ión hidrógeno, lo cual
lo deja con una carga negativa). La carga negativa en la superficie bacteriana
repele el colorante cargado negativamente, por lo que la célula permanece
sin teñir contra un fondo coloreado

Colocar una gota de Colocar un poco de cultivo Cubrir el frotis con mordente Lavar el frotis con agua destilada
Rojo Congo en el y suspenderlo sobre el de cápsula y dejarlo actuar y dejarlo secar.
portaobjetos Rojo Congo. por 1 minuto.

Observar a inmersión.

Resultados

1000 x Klebsiella pneumoniae.

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3.- Tinción de Shaefer y Fulton.

Esta tinción se va a utilizar para la identificación de esporas en Bacillus megaterium,

El fundamento de esta técnica consiste en alterar la envoltura de las endosporas, la
impermeabilidad de su cubierta dificulta que puedan ser teñidas, por lo tanto se
realiza un calentamiento del colorante primario para que pueda alterarse su
envoltura.

Resultados:

Se pueden observar las esporas de color verde muy tenue y

las bacterias se ven de un color rosita. 1000 x
Bacillus megaterium

4.- Tinción de Knaysi.

Esta tinción se va a utilizar para la identificación de pared celular en Bacillus CFW.

El fundamento de esta técnica de tinción consiste en teñir la pared con un colorante

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básico y después aplicar un mordente, esto va a permitir visualizar la pared como
una estructura engrosada.

Resultados:

Se pueden ver las bacterias de color rojo, no se

alacanza a percibir la pared celular, por lo que se piensa
que hubo algún paso de la determinación que no se
realizo correctamente o alguno de los reactivos no
funciono como debía.

Bacillus CFW 1000 x

Discusión.

Tinción con tinta negra:

Se logra distinguir, en un color muy tenue o claro las cápsulas en esta tinción.

Tinción con Rojo de Congo:

En esta tinción resaltan las cápsulas sobre un fondo rojizo.

Tinción de Shaeffer y Fulton:

Se alcanzan a distinguir perfectamente las esporas de un color verde y se

diferencian muy bien de las bacterias en forma de bacilo color rojo.

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Tinción de Knaysi:

No se logró el resultado que se esperaba, se planeaba observar la pared celular de

un color rojo intenso y el citoplasma de un rojo más tenue o inclusive rosado.
Las bacterias se observan de un color rojo intenso en toda la célula. El paso crítico
de esta tinción es el tiempo de reposo con el mordente, se cree que posiblemente
pudo haber alguna falla en este paso del procedimiento, también pudo ocurrir que
se usará colorante de más y por lo tanto tiño de más a la célula, así como que no se
haya enjuagado bien o que haya estado en a una concentración más alta de la que
se requería.

Conclusión

Las tinciones selectivas se utilizan para la identificación de bacterias y para

obtener información acerca de los microorganismos que se analizan. Las
tinciones selectivas se basan en la tinción de estructuras específicas, en ésta
práctica se identificaron cápsulas y esporas, esto se logra debido a la afinidad
de los colorantes utilizados.

Cuestionario

1. ¿Por qué cree que la cápsula no se puede teñir?

R= Debido a su composición principalmente no iónica y su tendencia a repeler las

manchas, los métodos de tinción simples no funcionan con la cápsula; en su lugar,
la tinción de cápsulas utiliza una técnica de tinción negativa (como la tinción con rojo
congo) que tiñe el medio en dónde están los microorganismos y no tiñe a la célula
completamente , dejando la cápsula como un halo claro alrededor de ella.

2. Cite tres microorganismos que tengan cápsula.

● Bacillus anthracis
● Bacillus licheniformis
● Streptococcus pneumoniae

3. ¿Cuáles son la naturaleza química y funciones de la cápsula?

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La mayoría de las cápsulas se componen de polisacárido, ya sea homopolisacárido
(formado por un solo tipo de monosacárido) o heteropolisacárido (lo conforman más
de un tipo de monosacáridos)

Las cápsulas contribuyen a la capacidad de invasión de la bacteria patógena. Las

bacterias con cápsula resisten mejor la acción de las células fagocitarias del sistema
inmunitario, esto se debe a que la cápsula de algún modo impide la adherencia del
fagocito a la célula bacteriana.

4. ¿Tienen pared celular todas las bacterias?

R= No todas las bacterias tienen pared celular, existen bacterias del género
Mycoplasma que no tienen pared celular.

5.¿Pueden teñirse con la tinción de Shaeffer y Fulton las esporas de actinomicetos o

de hongos?

R= no, hay técnicas para teñir a los hongos como la tinción con azul de algodón y
los actinomicetos con la tinción de Gram o de Ziehl Neelsen.

Bibliografía.
● JOVE Science Education (s.f) “Microscopy and Staining: Gram, Capsule, and
Endospore Staining” recuperado de:
https://www.jove.com/es/v/10513/microscopy-and-staining-gram-capsule-and-
endospore-staining
● García Pertierra Méndez D.(10/02/2018) “”La cápsula bacteriana”, recuperado
de:
https://es.linkedin.com/pulse/la-c%C3%A1psula-bacteriana-david-garc%C3%
ADa-pertierra-m%C3%A9ndez#:~:text=Las%20c%C3%A1psulas%20y%20ca
pas%20mucilaginosas,c%C3%A1psula%20de%20%C3%A1cido%20poli%2D
Dglut%C3%A1mico.
● Clínica Universidad de Navarra (s.f) “Cápsula bacteriana” recuperado de:
https://www.cun.es/diccionario-medico/terminos/capsula-bacteriana
● Jawtz, Melnick y Adelberg (s.f) “Capítulo 25: Micoplasmas y bacterias con
pared defectuosa” recuperado de:
https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?bookid=1507&sectionid
=102893415