Centro de Ciencias Básicas

Departamento de Microbiología

Prácticas de Laboratorio de Microbiología

Carrera Médico Veterinario Zootecnista

Profesor: L.A.Q.B. Rosa Isela Chávez Gómez

Apoyo Técnico: D. En C. David Alejandro Hernández Marín

SEMESTRE: ENERO – JUNIO 2022

Reporte de Practicas

4. Tinciones especiales.
Alumnos:
Sophia Guadalupe Herrada Vazquez
Alejandro Lara Jaime
Paola Ponce López.
Capsula bacteriana.

¿Qué es? Es una estructura externa a la pared celular pero sintetizada entre la membrana
cellar y la pared del peptidoglicano.

• Streptococcus, Bacillus, Klebsiella, Neisseria, etc.

Capsula
Glucocálix es el Las mas Funciones: Evasión de la
termino que se refiere importantes son • Proteger respuesta inmune:
generalmente a las que tienen contra agentes • Mimetiza
sustancias que rodean una capsula que antibacterianos estructuras
la célula. La glucocálix es • La desecación del propio
bacteriana es un Polisacárido • Constituye el hospedador
polímero viscoso, antígeno K de • Evita la
pegajosos, gelatinoso complejo. fagocitosis
las bacterias
y se encuentra Característica que la poseen
rodeado a la célula y general: son • Previene la
está compuesto por Solubles de deshidratación
polisacáridos, agua
polipéptidos o ambos
Funciones: Papeles de la Microscopia óptica:
• Adhesión y capsula Tinción negativa
formación de A sustratos aparecen
biopelículas inertes: Favorece transparentes sobre
• Inmunogénicas la formación de fondo oscuro,
(antígeno K) y microcolonias de utilizando anticuerpos
serotipos de la misma especie
Estreptococos y consorcios de
diferentes
especies con
ventajas
metabólicas.

Tinción negativa
Es una técnica que permite contrastar las muestras mediante una sustancia opaca a los
fotones (microscopia óptica) o a los electrones (microscopia electrónica). Este método de
tinción utiliza colorantes neutros o ácidos ya que tienen poca afinidad por la célula bacteriana

Mecanismo de acción del colorante: Es la tinción negativa se utilizan tintes ácidos, los tintes
ácidos poseen un cromógeno negativo que no penetra la célula de la bacteria debido a la
carga negativa en la pared celular. La bacteria se vera transparente y el fondo de la laminilla
de color del tinte que en este caso es negro
Endospora bacteriana
Solo los bacilos gran + forman esporas. Los cocos no

Esporas Características
Las esporas o endosporas son formas de
resistencia de algunas bacterias cuando
carecen de nutrientes y agua
Extraordinaria resistencia
Al calor
La desecación
Las radiaciones
Los ácidos y a desinfectantes químicos
Pueden permanecer años en reposo
No presenta actividad metabólica
La forma de crecimiento se denomina celular
o vegetativa
Los géneros Bacillus y Clostridium
Formadas por peptidoglicano, calcio y
ACIDO DIPICOLINICO

Tinción de esporas:

• Tinte primario: Verde malaquita, requiere calor para la penetración de este tinte.
• Agente decolorante: Agua, remueve el exceso de tiente, decolora la célula vegetativa
• Contratinte: Safranina, tiñe las células vegetativas

Reactivos: La verde malaquita es colorante débilmente básico y por tanto, se une débilmente a
la bacteria. Penetra en las células vegetativas, cuando se calienta la preparación también
penetra las endosporas.

Decoloración: Durante el lavado con agua, el verde malaquita se elimina de las células
vegetativas, pero no de la endospora.

Safranina: El colorante de contraste solo puede teñir a las células vegetativas (decoloradas
por el agua)

Tinción de Zhiel Neelsen (Mycobacterium spp.)

Este método se basa en que las paredes células de ciertos parásitos y bacterias contienen
ácidos grasos (acido micólico) de cadena larga, que les confieren la propiedad de resistir la
decoloración con alcohol-acido después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se
denominan acido alcohol resistentes o BAAR.

La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante

atraviese la pared bacteriana que contiene ceras
 Metodología:

1. Coloque una gota de tinta china en un porta objetos bien limpio y sin grasa, cerca de uno

de los bordes.

2. Coloque una asada del cultivo sobre la tinta china.

3. Mezclar bien con el asa y luego extender la mezcla a lo largo del porta objetos. utilizando la

técnica descrita por su profesor.

4. Dejar secar.

5. Cubrir con Cristal violeta durante 1 minuto, luego enjuagar con cuidado y secar

Objetivos Fundamento Materiales y reactivos

1. Reconozca la presencia de
la cápsula en las bacterias.
2. Practique otra técnica de
coloración.
3. Discuta la importancia de la
cápsula desde el punto de
vista médico e industrial.
Algunas bacterias están rodeadas por una • Cultivos de 24 horas de
sustancia viscosa que forman una cubierta o Klebsiella pseumoniae o de
envoltura alrededor de la célula. Esta estructura Aerobacter aerogenes, en
se denomina cápsula o capa mucosa. No todas caldo glucosa.
las especies bacterianas producen fácilmente • Tinta china o nigrosina
cápsulas detectables y el volumen de ésta, se • Cristal violeta
encuentra notablemente condicionado por el • Portaobjetos
medio donde la bacteria se cultiva. El tratar de • Asa bacteriológica
visualizar, la cápsula es un problema algo difícil • Mechero
ya que se compone de material soluble en • Microscopio
agua, además está compuesta de sustancias • Bandeja de coloración
no iónicas generalmente polisacárido. Como se
sabe, las técnicas de tinción se basan en una
interacción química entre componentes
ionizados. De hecho, el mejor modo de
visualizar las cápsulas, consiste en usar el
microscopio de fase para observar los
organismos en un medio que proporcione un
fondo adecuado. En los laboratorios, donde no
se cuenta con este equipo, es posible duplicar
los resultados mediante un método no
específico muy simple denominado TINCION
NEGATIVA
Resultados:

Izquierda:
Bacilos

Derecha:
Diplobacilos

1 Pilus 5. Capsula

2. Flagelo 6 mesosoma

3 membrana plasmática 7 ribosoma

4 pared celular 8 nucleoide

9. Plásmido
 1.Cocobacilo 7.Diplococo
encapsulado
2.Bacilo 8.Estafilococo
3.Diplobacilo 9.Estreptococo
4.Estreptobacilo 10.Sarcina
5.Coco 11.Tetrada
6.Diplococo 12.Vibrio/ Coma
Bdellovibrio
13.Espiroqueta

++ 1 a 10 BAAR por campo en 50 campos observados.

acido micólico) de cadena larga, que les confieren la

propiedad de resistir la decoloración con alcohol-acido después
de la tinción con colorantes básicos
Discusión

La tinción negativa es un método de coloración especial para destacar la presencia de la

cápsula en algunos microorganismos —principalmente Streptococcus pneumoniae, Klebsiella
pneumoniae y Cryptococcus neoformans—, provenientes de muestras clínicas o de cultivos
puros. La observación de estructuras celulares se consigue al dar contraste a las mismas,
para ello se tiñen directamente o de manera indirecta al teñir el medio que lo rodea y ponerlas
en evidencia tal como se hace en las tinciones negativas. (Gil, 2014)

Mediante este procedimiento, las células sin teñir resaltan sobre un fondo teñido utilizando un
colorante acido; la nigrosina, un colorante negro, es el más comúnmente utilizado. El método
sirve para observar bacterias o estructuras que difícilmente se tiñen con las técnicas directas.
(Gil, 2014)

Algunas bacterias se encuentran rodeadas de una capa de apariencia mucoide, en el exterior

de la envoltura celular. Estas estructuras usualmente consisten de polisacáridos; sin
embargo, en ciertos bacilos, están compuestas de polipéptidos (por ejemplo, el ácido
poliglutámico) segregados por la bacteria. (Gil, 2014).

Conclusión
Es muy importante conocer las técnicas y estructuras de las bacterias, conocer sus
componentes mas importantes asi como también las características de las esporas que las
mas importantes son que están Formadas por peptidoglicano, calcio y ACIDO DIPICOLINICO.

Las funciones de las capsulas

• Adhesión y formación de biopelículas

Inmunogénicas (antígeno K) y serotipos de Estreptococos

Todas estas características nos ayudan a tener un diagnostico mas certero y apoyarnos mas
que nada en el tratamiento y diagnostico del paciente. Sobre todo a cumplir con los análisis de
laboratorio

Cuestionario
1. ¿Qué función desempeñan las cápsulas en la infectividad de un microorganismo? Se ha
descrito que las cápsulas pueden desempeñar, entre otras, las siguientes funciones: servir de
barrera de permeabilidad (p. ej., frente a metales pesados), evitar la desecación.

2. ¿Qué problemas a nivel industrial pueden causar bacterias capsuladas? Dado a su mayor
capacidad de infectividad estas bacterias en la industria alimentaria pueden causar brotes que
afectan a la salud y la seguridad de los consumidores
3. Investiga el nombre de por lo menos 3 bacterias formadoras de cápsula (distintas a las que se
mencionaron en la práctica).

Las cápsulas no tiñen bien con las tinciones habituales

(Gram), Pero pueden observarse con las tinciones negativas.
Los colorantes empleados en este tipo de tinciones no son
capaces de penetrar la célula ni fijarse en ella. Como
consecuencia, las células se ven claras, sin teñir y el fondo
se observa coloreado

Tinción negativa para observación de Cápsula por Muir. a) Klebsiella spp. Colonias rosas,
mucoides, bordes irregulares, convexas. Medio de cultivo Mac Conkey. b) Klebsiella
pneumoniae Tinción de cápsula por Tinción Muir. c) Klebsiella pneumoniae, Bacteria que se
presenta libre, por pares o cadenas cortas, gram-positiva. Tinción de Cápsula, LM X1000.

Tinción negativa para observación de Cápsula por

tinta china. a) Diplococcus pneumoniae. b) Tinción de
un quiste c) Tinción de bacilos capsulados. d) Tinción
negativa de Staphylococcus aureus. e) Levadura
encapsulada llevando a cabo gemación

Bibliografía
Gil, M. (05 de Mayo de 2014). Tincion de capsula . Obtenido de
https://mediacampus.cuaieed.unam.mx/node/4229

Vera-García (Introducción a la microbiología (2a ed.). Editorial Universidad Estatal a Distancia

(EUNED)

Gil, Marielsa. (18 de enero de 2019). Tinción negativa: fundamento, técnica,

ventajas y desventajas. Lifeder. Recuperado
de https://www.lifeder.com/tincion-negativa/.