Universidad de Sonora

Departamento de Ciencias Químico Biológicas y Agropecuarias

Dr. Heriberto Torres Moreno
PRÁCTICA 3
Observación de Células en Mitosis

Objetivo
Conocer las técnicas de tinción más utilizadas en citogenética y aprender a visualizar
cromosomas y células en mitosis.

INTRODUCCIÓN
El núcleo de cada célula en nuestro cuerpo contiene aproximadamente 1.8 metros de ADN
en total, aunque cada hebra tiene menos de una millonésima de un centímetro de espesor.
Este ADN está estrechamente empaquetado en estructuras llamadas cromosomas, que
consisten en largas cadenas de ADN y proteínas asociadas. En las células eucariotas, las
moléculas de ADN están estrechamente enrolladas alrededor de proteínas, llamadas
histonas, que brindan soporte estructural y desempeñan un papel en el control de las
actividades de los genes. Una cadena de 150 a 200 nucleótidos de largo se envuelve dos
veces alrededor de un núcleo de ocho proteínas histonas para formar una estructura llamada
nucleosoma. El octámero de histonas en el centro del nucleosoma se forma a partir de dos
unidades de cada una de las histonas H2A, H2B, H3 y H4. Las cadenas de histonas se
enrollan a su vez para formar un solenoide, que se estabiliza por la histona H1. El
enrollamiento adicional de los solenoides forma la estructura del cromosoma propiamente
dicho. Cada cromosoma tiene un brazo p y un brazo q, el brazo p (de la palabra francesa
'petit', que significa pequeño) es el brazo corto, y el brazo q (la siguiente letra del alfabeto)
es el brazo largo. En su forma replicada, cada cromosoma consta de dos cromátidas.

Figura 1. Empaquetamiento de cromosoma.

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Los cromosomas, y el ADN que contienen, se copian como parte del ciclo celular y se
pasan a las células hijas a través de los procesos de mitosis y meiosis.
Los seres humanos tienen 46 cromosomas, que consisten en 22 pares de autosomas y un
par de cromosomas sexuales: dos cromosomas sexuales X para mujeres (XX) y un
cromosoma sexual X e Y para hombres (XY). Un miembro de cada par de cromosomas
proviene de la madre (a través de la célula del huevo) y un miembro de cada pareja
proviene del padre (a través de la célula espermática).
Una fotografía de los cromosomas en una célula se conoce como un cariotipo. Los
autosomas están numerados 1-22 en orden de tamaño decreciente.

Figura 2. Cariotipo de un macho humano.

Tinción con Orceína

1. Poner las cebollas en agua durante varios días hasta que se desarrollen las raíces,
para conseguirlo se colocan las cebollas en un vaso, de tal forma que el agua toque
la parte inferior del bulbo. Es necesario que los vegetales se mantengan a 10°-12° C
y en ausencia de luz (un frigorífico casero reúne perfectamente estas condiciones).
2. Cuando las raíces tengan 7 mm o más de longitud, se corta un trozo de 4 mm de
longitud con la ayuda de unas tijeras.
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3. Pasar las raíces a un fijador compuesto por etanol-ácido acético glacial (3:1). Si las
raíces con colocadas en el fijador pueden conservarse por largos periodos de tiempo
a 4 °C.
4. Someter las raíces a hidrolisis utilizando HCl 0.1 N a 60 °C durante 1 min.
5. Teñir las raíces con orceína acética al 2% y posteriormente incubar el tubo por 10-
15 min.
6. Acto seguido, eliminar los restos de orceína de las raíces teñidas utilizando un
portaobjetos limpio donde colocará previamente una gota de ácido acético al 45%.
7. Utilizando una lupa, una aguja enmangada y una lanceta, separar el extremo apical
de la raíz (con terminación en punta redondeada) del meristemo radicular.
8. Añadir al portaobjetos una gota de orceína acética y con la base de la aguja
enmangada macerar hasta que no se aprecien trozos grandes de tejido.
9. Montar la muestra en un portaobjetos con la ayuda de las pinzas metálicas y
posteriormente cubrirla con un cubreobjetos. Hacer una suave presión sobre el
cubreobjetos, evitando que el cubreobjetos resbale (técnica de splash), con esto se
consigue que la raíz quede extendida.
10. Observar cinco campos microscópicos con el objetivo de 40 X y contabilizar 100
células.
11. Expresar los resultados como número de células en cada fase de la mitosis.

CUESTIONARIO
1. Describe el fundamento de la tinción de cromosomas con orceína.
2. Describa la metodología a través de la cual se realiza un cariotipo.
3. ¿Qué es el índice mitótico y qué información nos aporta el conocer el índice mitótico en
el análisis de un carcinoma?
4. Investigue cómo actúa la colchina sobre la mitosis celular.