CROMATINA SEXUAL

INTRODUCCIÓN

El ser humano tiene una constitución cromosómica diploide de 46 cromosomas: 22

pares de autosomas y un par de cromosomas sexuales. Las mujeres representan el sexo
homogamético (XX) y los varones el sexo heterogamético (XY). El cromosoma X es un
cromosoma submetacéntrico perteneciente al grupo C, cuyos genes se conocen como
ligados al sexo. En 1949 M. Barr y E.G. Bertram observaron una pequeña masa de
cromatina en el núcleo de células nerviosas de gato, la cual según lo constataron, era más
frecuente en hembras y muy rara en los machos. Esta es la llamada Cromatina Sexual o
Corpúsculo de Barr que consiste en un cromosoma X inactivado, altamente condensado.
Así, se dice que los individuos son cromatina-positivos cuando esta estructura se
encuentra presente y cromatina-negativos cuando falta. Más tarde, la cromatina sexual fue
hallada e identificada en células de hembras de la mayoría de especies de mamífero
incluyendo al hombre.

Por muchos años los investigadores se preguntaron, ¿cómo era posible que las
mujeres al tener dos cromosomas X formen igual cantidad de producto génico que los
varones con un sólo cromosoma X? Al parecer debía existir un mecanismo de
"compensación de dosis". En 1961 Mary Lyon, a la par de muchos otros científicos que
estudiaban este tema formuló una hipótesis conocida como la "Hipótesis de Lyon", basada
en una serie de experimentos llevados a cabo en ratones. Esta teoría establece que:

1. En las células somáticas de las hembras de mamíferos sólo un cromosoma X es

activo y el segundo cromosoma X está condensado o inactivado y aparece en
interfase como cromatina sexual.

2. La inactivación se inicia a comienzos de la vida embrionaria (blastocisto).

3. El cromosoma inactivado puede ser indistintamente un X de origen paterno o un X

de origen materno, en diferentes células del mismo individuo, pero todos los
descendientes clonales de dicha célula tendrán inactivado el mismo cromosoma X.
Por ello se dice que la inactivación del X es al azar pero fija. Este proceso explica el
hecho de que el producto génico de los genes ligados al X es igual en ambos sexos.

Los individuos con una constitución cromosómica anormal en que se incluyen X

supernumerarios Ej. Síndrome de Klinefelter (47, XXY), presentan mayores anomalías
fenotípicas mientras más cromosomas X extras posean, a pesar de que todos ellos suelen
estar inactivados formando corpúsculo de Barr. Al respecto, se sabe que es muy probable
que la región terminal del brazo Xp, así como otras regiones del X inactivado permanezcan
aún activas, lo que explicaría en parte los defectos fenotípicos encontrados. Por otro lado,
se debe considerar el hecho de que esta inactivación se produce recién en el estadío entre
1.000-2.000 células durante la vida embrionaria, lo que daría oportunidad a los genes
extras para expresarse durante algún tiempo y podría influir en el fenotipo. Aunque otros
autores informan que esta inactivación ocurre en el estadío de alrededor de 32 a 64
células.
 Se ha observado que el cromosoma X que forma la cromatina de Barr es un
cromosoma en forma de lazo en el cual los dos telómeros se juntan y se sitúan en la
membrana nuclear, es heteropicnótico y es alocíclico, pues completa su replicación
tardíamente en la fase S del ciclo celular. Se trata en definitiva de heterocromatina
facultativa con capacidad de inactivarse y reactivarse según las diferentes etapas del
desarrollo del individuo. Así se ha hablado de un evento de “reactivación del X”, que se
cree se halla altamente metilado, a cargo de enzimas demetilantes, durante las etapas
previas a la oogénesis. Los valores normales dependen de cada laboratorio. Por regla
general los valores de alrededor del 20-50% en células bucales se consideran como
positivos, en 30-80% de fibroblastos, y en más del 90% de células de membranas
amnióticas. Los valores inferiores deberán hacer pensar en la posible existencia de un
mosaicismo.

Se sabe que en casos de alteraciones estructurales y numéricas del cromosoma X,

son los X alterados o supernumerarios los que se inactivan dando lugar a corpúsculos de
Barr de forma, número y tamaño anormales. Existe una regla que indica que el número de
cuerpos de Barr es igual al número de cromosomas (X-1). Hasta el año 60 se usaban los
estudios de cromatina sexual para la determinación del sexo. Sin embargo con el
descubrimiento de hombres cromatina-positivos (S. de Klinefelter) y mujeres cromatina-
negativas (S. de Turner) se prefiere un estudio del cariotipo para la determinación del sexo
cromosómico.

OBJETIVOS

1. Implementar la técnica necesaria para la observación de la cromatina sexual en

células de epitelio bucal y bulbo piloso.

2. Relacionar los hallazgos citológicos con los datos teóricos.

MATERIALES

- placas portaobjetos - pinza

- papel filtro - tijeras
- cubreobjetos - estiletes

- colorante Orceína Acética (2%) - ácido acético al 50%

- bajalenguas - estufa a 60

- esmalte para uñas transparente - estereoscopio

- goteros
- aceite de inmersión
- microscopio óptico
PROCEDIMIENTO

Células de Epitelio bucal:

1. Evitando cerrar la boca durante el proceso, raspe con el bajalenguas la cara interior
de su mejilla hasta descartar el depósito mucoide.

2. Con la ayuda de un bajalenguas raspe esta región con firmeza y extienda las células
obtenidas en un portaobjetos limpio y seco.

3. Sin dejar secar, coloque 3 gotas del colorante orceína acética sobre la muestra y
tape con un cubreobjetos limpio y seco.

4. Con una tira de papel filtro absorba el exceso de colorante y espere 5 minutos.
Entonces, cubra la preparación con papel filtro y aplaste suavemente con el pulgar
hasta retirar el exceso de colorante, cuidando de que el cubreobjetos no resbale
sobre la placa.

5. Finalmente, selle el borde del cubreobjetos con esmalte de uñas.

Observe 50 células y anote el número de cromatinas sexuales encontradas.

Células de bulbo piloso:

1. Obtener una muestra con la ayuda de una pinza, el cabello debe tener raíz.
Cortarlo a 1 o 2 cm. de su base.
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2. Fijación: colocar el pelo en un portaobjetos limpio, añadir una gota de orceína
acética y calentar a 60 por 30 segundos y transferir el pelo a otro portaobjetos
que contenga una gota de ácido acético al 50%.

3. Disección en Estereoscopio: Con ayuda de un estilete, separar las células del bulbo
piloso, el resto de pelo debe ser eliminado del portaobjetos, y se debe eliminar el
exceso de fijador con papel filtro.
4. Coloración: Añadir una gota de orceína acética y cubrir la muestra con un
cubreobjetos limpio, calentar a 60 por 5 minutos, y luego aplastar la muestra
utilizando papel filtro para eliminar el exceso de colorante.
RESULTADOS

CONCLUSIONES

CUESTIONARIO

1. ¿En qué región se encuentra el centro de inactivación del cromosoma X?

1. ¿En los siguientes casos encierre en un círculo el cromosoma X que se inactivaría. Y

explique por qué?

1) a. X normal b. X en anillo
2) a. X normal b. Translocación X-autosoma
3) a. X normal b. X con deleción q Terminal

2. Enumere 3 genes que se encuentren en el cromosoma X y especifique su función.

3. Explique de que tipo de cromatina está compuesto el cromosoma Y.

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