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&
ELECTROFORESIS HORIZONTAL EN AGAROSA
🧬ÍNDICE
● RESUMEN
……………………………………………………………………………....PÁG 02
● PALABRAS CLAVE
………………………………………………………………………………PÁG 02
● INTRODUCCIÓN
………………………………………………………………………………PÁG 02
● MATERIALES
………………………………………………………………………………PÁG 03
● METODOLOGÍA
………………………………………………………………………………PÁG 05
● RESULTADOS
………………………………………………………………………………PÁG 06
● DISCUSIÓN
………………………………………………………………………………PÁG 08
● CONCLUSIÓN
………………………………………………………………………………PÁG 09
● BIBLIOGRAFÍA
………………………………………………………………………………PÁG 10
● ANEXOS
………………………………………………………………………………PÁG 12
*gmail: Juanp.ospinaj@uqvirtual.edu.co
*gmail: johans.martinezl@uqvirtual.edu.co
*gmail: eavalenzuelav@uqvirtual.edu.co
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UNIVERSIDAD DEL QUINDÍO
FACULTAD EN CIENCIAS DE LA EDUCACIÓN
LICENCIATURA EN CIENCIAS NATURALES Y EDUCACIÓN AMBIENTAL
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA 2022-II
RESUMEN
Se realizaron dos prácticas de laboratorio rápidas y sencillas de bajo costo para la extracción
de ácidos nucleicos y electroforesis horizontal en agarosa, a partir de métodos caseros y
comerciales ideales para el conocimiento del estudio de la bioquimica y las ciencias naturales
en el entorno educativo universitario, Los componentes del los equipos son de elevado costo,
por lo que la aplicación del método, por parte de los químicos y en centros educativos, se ha
retrasado. En este sentido, optar por otras metodologías propuestas por los currículum de
educación superior es válido. Las prácticas se realizaron en un laboratorio de nivel uno,
destinados para la enseñanza y educación; La universidad proporciona gran parte de los
elementos de laboratorio, más sin embargo los practicantes deben suministrar algunas
muestras biológicas que no provee la universidad; Se aplicó el más trillado y conocido
método científico, siguiendo paso riguroso para una práctica eficiente. Ya para terminar se
obtuvieron los ácidos nucleicos según lo teórico, para el caso de la electroforesis horizontal
en agarosa se pudo corroborar que el ADN también se puede estudiar y tiene otras formas de
ser interpretado, diferentes a lo convencional. Este informe es clave para la reestructuración
organizacional de los tópicos de la bioquímica orientados a fortalecer las herramientas
didácticas y opciones de desenvolvimiento a favor en situaciones poco favorables para los
educandos en zonas de difícil acceso a material educativo.
PALABRAS CLAVE
INTRODUCCIÓN
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Hoy en día extraer ADN de una célula, representa una gran importancia para la humanidad ya
que, por medio de este, se determina la variabilidad genética de un individuo a otro, ayuda a
explicar patrones evolutivos y sus relaciones con otras especies, además se utiliza también
para detectar organismos patógenos y la creación de antibióticos para la prevención de
enfermedades. A lo largo del tiempo se han diseñado distintos protocolos con la finalidad de
obtener una cantidad y calidad de ADN adecuados, así como garantizar la eliminación de
inhibidores potenciales que dificulten el tratamiento posterior de la molécula, los cuales van
cambiando con el tiempo por los nuevos hallazgos, Rodríguez (2014). El método
implementado para la extracción del ADN en el laboratorio era uno de los más tradicionales,
lo cual no garantiza la obtención de una muestra pura de ADN.
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Los componentes del equipo son de elevado costo, por lo que la aplicación del método, por
parte de los químicos y en centros educativos, se ha retrasado. En este sentido, las dos
prácticas de laboratorio compendiadas en este informe tuvieron como propósito: Extraer los
ácidos nucleicos (ADN) de tejido animal y vegetal, utilizando métodos caseros y comerciales.
Y Realizar la separación por medio de electroforesis de moléculas de ADN. Rojas y
colaboradores (2011).
MATERIALES
Extracción de ADN
● Mortero
● Pipetas
● Gasa
● Hielo
● Etanol al 70%
● Baker
● Detergente
● NaCl
● Muestra biológica ( vegetal-animal)
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● SYBR Green
● Guantes de nitrilo
● Transiluminador de luz ultravioleta
METODOLOGÍA
Preparación de la muestra:
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Una vez se colocó la muestra en cada uno de los pozos se cerró la cámara de electroforesis y
se conectaron los cables a la fuente de poder y se le aplicó el voltaje respectivo (70V) se
observó hasta que el color azul de bromofenol estaba a una distancia aproximada de 2 cm del
borde del gel en ese momento se detuvo la electroforesis.
RESULTADOS
La figura. 1 muestra las fibras de a) ADN, precipitadas en la interfase, entre alcohol y agua,
formando un grumo de color blanco amarillento, gelatinoso y b) Restos celulares
(membranas, orgánulos) y otros componentes de la solución
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La figura. 2 muestra las fibras de a) ADN, precipitadas en la interfase, entre alcohol y agua,
de color blanco y b) Restos celulares (membranas, orgánulos) y otros componentes de la
solución.
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DISCUSIÓN
Extracción de ADN
El DNA se encuentra en el interior del núcleo de las células eucariotas rodeado de proteínas
(histonas) que lo mantienen unido y compactado. Para poder observarlo se debe romper la
membrana, la envoltura nuclear y también se precisa la desnaturalización de las proteínas
(Martínez, 2015). Mediante la fricción con el mortero lo que se logra es que se rompan las
uniones entre las células y la pared celular. Esta homogeneización facilita el efecto de lisis o
ruptura que ayuda a liberar el material genético. El jabón o detergente líquido ayuda a
romper las membranas celulares, que están compuestas por lípidos. Los componentes no
solubles como el material fibroso y las proteínas se separan del ADN por filtración. Después
que son eliminados los lípidos y las proteínas, los grupos fosfato del ADN están cargados
negativamente y son polares. El ADN se disuelve en soluciones acuosas, pero es insoluble en
alcohol. La adición de etanol y altas concentraciones de iones sodio que se unen a los grupos
fosfato, reduce las fuerzas repulsivas entre las cadenas y permite que el ADN se pliegue sobre
sí mismo haciéndolo insoluble. De esta forma precipita y forma una malla filamentosa
blanquecina que contienen proteínas y otros materiales. El cloruro de sodio ayuda a separar
algunas de las proteínas que están unidas al ADN. También mantiene las proteínas disueltas
en la capa acuosa de forma que impide que estas se precipiten también con el alcohol, junto
con el ADN. Adicionalmente, los cationes sodio (Na +) contrarrestan las cargas negativas de
los fosfatos del ADN. Posteriormente el alcohol disminuye la constante dieléctrica de la
solución acuosa. Por último, el etanol frío provoca que el ADN se separe del agua y se
precipite. Cuando el ADN se separa de la solución acuosa, tiende a agruparse, lo que hace
que sea visible, encontrándose así en la interfase, es decir, entre las dos capas .
Lo cual se pudo evidenciar el ADN en la práctica de laboratorio y se puede observar tanto en
la figura. 1 como en la figura. 2.
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La electroforesis es uno de los procedimientos más utilizados cuando se trabaja con ácidos
nucleicos. Mediante este proceso podemos separar fragmentos de ADN y ARN según de su
tamaño, observarlos mediante tinción, y de esta forma determinar la cantidad de ácidos
nucleicos de una muestra, teniendo una estimación de su concentración y grado de entereza.
Además, se puede extraer del gel los fragmentos de ADN que se deseen, para posteriormente
utilizarlos en diferentes aplicaciones (Fierro, F. F. 2014). La electroforesis horizontal se lleva
a cabo con gel de agarosa para ácidos nucleicos. Para el corrimiento del buffer este debe
cubrir el gel para evitar que se seque debido al calentamiento que se genera al pasar la
corriente eléctrica (Salasar, M. A et al. 2013). Por medio de la electroforesis, Thorne pudo
separar y visualizar tres formas topológicas distintas del ADN del polyomavirus las cuales
fueron: superenrollada, relajada y lineal, este trabajo recibió poca atención hasta principios de
los años 70, cuando se permitió el análisis de moléculas de ADN más grandes que los
genomas virales (Fierro, F. F. 2014). En la figura 3 se puede evidenciar que la muestra
presentaba ADN en los carriles 2 y 3
CONCLUSIONES
Tras realizar las prácticas de laboratorio y discutir los resultados obtenidos, podemos
demostrar que:
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BIBLIOGRAFÍA
Castello Branco da Cunha, Karla Maria , & Abreu de Andrade, Viviane , & Vianna Barbosa,
Júlio (2011). "Pajitex": una propuesta de modelo didáctico para la enseñanza de ácidos
nucleicos. Revista Eureka sobre Enseñanza y Divulgación de las Ciencias, 8(1),115-124.
Hassan, A.B., Chemicharo, P., Rodriguez, U., Cardoso, I. y Ferreira, M.S. A utilização de
modelos didáticos no ensino de Biologia: uma experiência de prática de ensino no Colégio de
Aplicação da UFRJ. En: Caderno de Programa e Resumos. X Encontro “Perspectivas do
Ensino de Biologia”; 1º Encontro Regional de Ensino de Biologia (MT/MS/SP). Histórias e
Percursos da Biologia no Currículo. São Paulo: Brasil.
Barros, M.P. y Teixeira, F.M. (2006). Jogo “Dominó DNA”: Experiência de ensino de
duplicação de DNA. En: Caderno de Programa e Resumos. X Encontro “Perspectivas do
Ensino de Biologia”; 1º Encontro Regional de Ensino de Biologia (MT/MS/SP). Histórias e
Percursos da Biologia no Currículo. São Paulo: Brasil.
Smith, I. y Feinberg, J. (1965).Paper and thin layer chromatography and electrophoresis. (2a.
ed.). London: Shandon (trabajo original publicado en s/f)
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Muñiz-Salazar , R, & Sánchez-Brambila , CH, & Baptista-Rosas , RC, & Arreola-Cruz , A, &
Radilla-Chávez , P, & Salas-Vargas , DS (2009). EXTRACCIÓN DE ADN E
IDENTIFICACIÓN MOLECULAR DE PROTOZOARIOS PATÓGENOS EN MUESTRAS DE
AGUA. Bioquimia, 34(1),63.
Uribe Soto, Sandra Inés, & Cadavid Sánchez, Isabel Cristina, & Rosero García, Doris
Amanda (2013). Comparación de dos métodos de extracción de ADN a partir de plantas del
género Solanum, subgénero Leptostemonum. Revista Colombiana de Biotecnología,
XV(2),186-192.
Salazar Montes, A. M., Sandoval Rodríguez, A. S., & Armendáriz Borunda, J. S. (2013).
Biología molecular: Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud (1a. ed.--.).
México D.F.: McGraw Hill, 114.
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ANEXOS
Actividad:
R/: Tabla. 1 diferencias entre los fundamentos científicos del concepto biológico,
químico y físico
Diferencias entre los fundamentos científicos del concepto
La actividad enzimática es sensible a la Cuando en una molécula son más Cuando se juntan compuestos inmiscibles
temperatura y el pH, entre otros factores, numerosos los protones que los electrones de diferentes densidades, los compuestos
por lo que ambos deben ser tenidos en su carga neta es positiva y se denomina ion menos densos quedan encima de los más
cuenta en el proceso de extracción. Para positivo o catión. Sin embargo, cuando el densos. Si los compuestos son miscibles, es
optimizar la extracción de ADN el proceso número de electrones es superior al de necesario que no se mezclen al juntarlos,
debe realizarse a baja temperatura, lo que protones, su carga neta es negativa y se para que queden separados por densidades.
se consigue empleando agua fría y denomina ion negativo o anión.
manteniendo los recipientes utilizados en
una bandeja con hielo. La baja temperatura
ralentiza la actividad enzimática, evitando
que las moléculas biológicas, como el
ADN, sean degradadas tras la ruptura de las
membranas celulares que conlleva la
liberación de los componentes subcelulares
La actividad enzimática Las cargas eléctricas de las moléculas, ya La densidad o cantidad de masa en un
que estas son responsables de las determinado volumen de sustancia.
interacciones electrostáticas.
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¿Dónde fue publicado? Universidad Autónoma de Baja California Universidad Nacional de Colombia
Autores Muñiz-Salazar , R, & Sánchez-Brambila , CH, & Isabel Cristina Cadavid Sánchez*
Baptista-Rosas , RC, & Arreola-Cruz , A, & , Doris Amanda Rosero García*
Radilla-Chávez , P, & Salas-Vargas , DS (2009). , Sandra Inés Uribe Soto*
Título del documento EXTRACCIÓN DE ADN E IDENTIFICACIÓN Comparación de dos métodos de extracción de
MOLECULAR DE PROTOZOARIOS ADN a partir de plantas del género Solanum,
PATÓGENOS EN MUESTRAS DE AGUA subgénero Leptostemonum
¿Cómo realizaron la Mediante método de extracción de ADN por Realizaron la extracción de ADN con métodos
extracción de ADN? floculación, con kits comerciales de varias caseros de bajo costo.
farmacéuticas.
¿De qué material realizaron Se colectaron 4 L de agua de cuatro localidades Nueve plantas del subgénero Leptostemonum:
la extracción de ADN? diferentes en la ciudad de Ensenada, B.C
Propósito de la extracción de El Objetivo de este estudio fue Optimizar un El objetivo de este estudio fue seleccionar el mejor
ADN método de extracción de ADN a partir de método de extracción de ADN para este grupo de
muestras concentradas por el método de plantas, en términos de eficiencia, costos y que
floculación para identificación molecular de representará un bajo riesgo para la salud y el medio
protozoarios patógenos en muestras de agua ambiente.
Cuestionario:
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R/: para D1, el peso aproximadamente fue de 500 pb; para D2, el peso aproximadamente fue
de 115 pb; para D3, el peso aproximadamente fue de 300 pb; para D4, el peso
aproximadamente fue de 400 pb.
*Los serotipo fueron positivos para el virus dengue, lo que se hizo fue agarrar a D1 y hacer la
serotipificacion y dio el resultado de L1, Es una reacción en cadena dela polimerasa, se tomó
la muestra, se hizo extracción de ADN, luego electroforesis, pcr y finalmente electroforesis.
Del mismo modo L2 corresponde a D2. Da positivo por la cantidad del virus en las muestra.
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