BIOLOGÍA

CELULAR Y
MOLECULAR:
Control ciclo
celular
 El ciclo celular
Características universales del ciclo celular:
- Pasar correctamente la información genética
a la siguiente generación
-Replicar correctamente el DNA de sus
cromosomas
- Separar correctamente los cromosomas
replicados (segregación) a cada célula hija
- Duplicar sus organelas y macromoléculas
- Separar las copias en dos células hijas
genéticamente iguales

Las células en división deben coordinar su

crecimiento (el aumento de su masa) con su
división
Eventos de una división celular eucariota

El ciclo celular tiene dos fases principales: S (síntesis de DNA) y M (mitosis)

Mitosis: división nuclear y división citoplasmática (citoquinesis)

Muy regulado por proteínas regulatorias llamadas sistema de control del ciclo celular

Por señales internas y externas

 Fases del ciclo celular
G1 y G2: gap phases:
• Le brindan mas tiempo a la célula
para que crezca
• Permite un monitoreo del ambiente
interno y externo de la célula
• G1+S+G2: interfase
• G1: es la etapa que puede variar
mas dependiendo de las
G0
condiciones externas y las señales
extracelulares de otras células
• Si las condiciones externas no son
favorables pueden entran en G0 un
estado de resistencia
• Una vez que pasan el Star
(levaduras) o punto de restricción
(células de mamíferos) al final de
G1 no hay vuelta atrás se va a
replicar el DNA
Características del sistema de control del
ciclo celular
 Interruptores binarios (on/off) que disparan eventos de manera completa
e irreversible.
 Un mecanismo para iniciar los eventos en el orden correcto. Ej. Mitosis solo
después de replicación ADN
 Mecanismos de respaldo (más robusto) para asegurar que el ciclo pueda
avanzar a pesar de que partes del sistema no funcionen correctamente
 Un mecanismo que asegure que cada evento se inicie una sola vez por
ciclo
 Adaptabilidad, que el comportamiento del sistema se modifique en
función de los distintos tipos de células y condiciones ambientales
 El sistema de control del ciclo celular puede arrestar el ciclo
en 3 puntos de control (Checkpoints)

Checkpoints:
• Puntos en donde el ciclo celular puede
ser arrestado si los eventos previos no
se han completado

• Lugares donde el sistema de control

del ciclo celular puede ser regulado
por señales extracelulares
provenientes de otras células. Las
señales pueden promover o inhibir la
proliferación celular
 El control del ciclo celular depende de la
activación cíclica de las CdKs
 El componente principal del sistema de control son proteínas quinasas
llamadas: cyclin-dependent kinases (Cdks)

 La actividad de las Cdks oscila durante el ciclo celular

 La oscilación en la actividad de las Cdks provoca la fosforilación de

proteínas que regulan eventos del ciclo celular (replicación,mitosis,
citoquinesis)

 Los cambios cíclicos en la actividad de las Cdks está regulado por

complejos de enzimas. Los reguladores mas importantes son: ciclinas

 El sistema de control del ciclo celular depende de proteolisis cíclica y

de la regulación de transcripción
Cyclin dependent Kinases (Cdks) o quinasas
dependientes de ciclinas
Intervienen:
1)Quinasas dependientes de ciclinas (Cdk).
- Interactúan con ciclinas y fosforilan (activan) moléculas responsables de la división
- Si no están unidas a ciclinas NO tienen actividad quinasa
- NO oscilan durante el ciclo celular. El nivel de proteínas es constante

2) Ciclinas.- se unen y activan CdKs

- Sus niveles de expresión oscilan (cambian) durante el ciclo celular
- Por lo tanto, la actividad de los complejo ciclinas-Cdks oscila durante el celular
- Hay 4 clases de ciclinas cada una definida por la etapa del ciclo celular en la que se unen a Cdks y
funcionan. Todas las células eucariotas requieren tres de estas clases: Ciclinas G1/S; Ciclinas S y
Ciclinas M
- En la mayoría de las células eucariotas las Ciclinas G1 ayudan a controlar la actividad de las
ciclinas G1/S que controlan la progresión a traves del start en G1
 Las principales ciclinas y sus CdKs

Cómo hacen los complejos CdKs-Ciclinas para activar las distintas etapas del ciclo celular?

1) Las ciclinas activan específicamente las Cdks

2) Las ciclinas también ayudan a dirigir a las Cdks a sus proteínas blanco Cada complejo ciclina-
CDK fosforila diferentes
proteínas blanco
 Corazón del sistema de control del ciclo celular
Levaduras: Sólo un tipo de CdK
Distintos complejos ciclinas-Cdks controlan
el ciclo celular
Ciclinas y Cdks

G1/S-ciclinas: Activa CdK en G1 tardía.

Gatilla progresión a través de Star, lo cual
compromete a la célula a entrar en el ciclo
celular. Sus niveles caen en fase S

S-ciclinas: Activan Cdks que estimulan la

duplicación de los cromosomas. Contribuye
al control de eventos tempranos de la
mitosis

M-ciclinas: activan Cdks que estimulan

entrada en mitosis en la transición G2/M

G1 ciclinas: regulan la actividad de G1/S

ciclinas que son las responsables de inducir
la progression del ciclo celular
 Base estructural de la activación de Cdk
Las Cdks se activan totalmente por: 1) la union a ciclinas
2) la fosforilación por una quinasa activadora de Cdk (CAK. Cdk-activating Kinase)

Las ciclinas no solo activan a las Cdks si no que la dirigen a su proteína blanco, como resultado cada
complejo ciclina-Cdk fosforila a distintas proteínas
 ¿Cómo se regula la actividad de las Cdk?
-El aumento y disminución de los niveles de ciclinas es el primer determinante de activación de CdKs
-La actividad del complejo ciclina-Cdks se puede inhibir por fosforilación por quinasa (Wee kinase) M-CdK
-La actividad del complejo ciclina-Cdks se puede activar por desfosforilación (Cdc25 Phosphatase)
-La actividad del complejo ciclina-Cdk se inhibe por la unión de proteínas inhibidoras de Cdks (CKIs)
Via fosforilaciones

Control fino por fosforilación

 Inhibición del complejo ciclina-Cdk por CKI
(Cdk Inhibitor Proteín)
La actividad del complejo ciclina- CdKs se puede regular por CdK inhibitor proteins (CKIs)

Dibujo basado en la estructura tridimensional de la ciclina humana A-Cdk2 unido al CKI p27

Los CKIs se unen tanto a la ciclina como la CdK y distorsionan el sitio activo de la CdK.
Se unen al sitio de unión del ATP e inhiben la actividad del complejo ciclina-CdK
Este mecanismo regula los complejos G1/S-Cdks y S-Cdks
 Control del ciclo celular vía proteólisis
Control de Metafase-Anafase:
El regulador mas importante de la transición metafase-anafase es el complejo promotor de anafase o
Ciclosome o APC/C (anaphase promotor complex)
-APC es una ubiquitin ligasa

-APC ubiquitina a dos proteínas importantes: Activa en M

-Securina: protege las uniones proteicas que
mantienen unidas las cromatidas hermanas. Su
destrucción desencadena la anafase
-Ciclinas S y Ciclinas M: Destruye a estas ciclinas
y por lo tanto se inactivan prácticamente todas las
CdKs. Como resultados de esta inactivación
muchos de los sustratos fosforilados por las Cdks
se desfosforilan por acción de fosfatasas en
anafase.
La desfosforilación de las proteínas blanco de las
Cdks es necesaria para la compleción de la fase M

-APC se activa en la mitad de la mitosis y Marcado por ubiquitinación

permanece activa en G1 para proveer un tiempo
Permite a la célula salir de mitosis
estable de inactivación. Cuando las G1/S-Cdks se
activan en G1, la APC se inactiva lo que permite un
nuevo aumento de la expresión de ciclinas.
 Control del ciclo celular vía proteólisis

itina SCF: Skp, Cullin, F-box containing complex. Otra ubiquitin ligasa
ubiqu

-Activa en G1 tardío
-inhibe CKI y por lo tanto activa S-Cdks y
permite que la replicación ocurra
res de

-Inhibe ciclinas G1/S

MA
EOSO
igado
lejos l

PROT
Marcado por ubiquitinación
Permite a la célula entrar en mitosis
Comp
 ¿Cómo se regulan a su vez APC y SCF las dos ubiquitin ligasas?

El APC / C y el SCF son complejos grandes de múltiples subunidades y están regulados de manera diferente.

a) APC
La actividad de APC cambia durante el ciclo celular, principalmente como resultado de cambios en su
asociación con una subunidad activadora, ya sea Cdc20 en la mitad de la mitosis o Cdh1 desde la mitosis
tardía hasta la G1 temprana. Estas subunidades ayudan al APC / C a reconocer sus proteínas objetivo

b) SCF
La actividad de SCF depende de subunidades de unión al sustrato llamadas proteínas F-box.
A diferencia de la actividad APC, la actividad SCF es constante durante el ciclo celular.
La ubiquitilación mediante SCF se controla mediante cambios en el estado de fosforilación de sus proteínas
diana, ya que las subunidades F-box reconocen solo proteínas específicamente fosforiladas
 Mecanismos de control de los complejos ciclinas-Cdks

La oscilación de la actividad de los complejos ciclinas-Cdks es lo que provoca la iniciación de los

distintos eventos del ciclo celular

¿Como se regula la actividad de los complejos ciclinas-Cdks?

• El aumento y disminución de los niveles de ciclinas es el primer determinante de

activación de CdKs

• Fosforilación de las Cdks (progresión a través de Start, G2/M)

• Unión de las proteínas inhibitorias de Cdk (CKIs)

• Proteólisis de las ciclinas (progresión a través de metafase/anafase)

• Cambios en la transcripción de los genes que codifican para ciclinas

 Una visión general del sistema de control del ciclo celular

El centro del sistema de control del ciclo celular esta formado por complejos de ciclinas-Cdks cuya
actividad esta influenciado por distintos mecanismos inhibitorios que proveen información acerca del
medio extracelular, daño celular y eventos del ciclo celular incompletos.
Estos mecanismos inhibitorios no están en todos los tipos celulares (Por ej: están ausentes en los ciclos
celulares de embriones tempranos)
 Fase S

Dos desafíos:

1) Replicar correctamente todo el DNA contenido en los cromosomas para evitar mutaciones en la sgte
generación

2) Tiene que haber 1 replicación por ciclo. Cada nucleótido tiene que ser replicado UNA SOLA VEZ por
ciclo celular

Además del DNA se tienen que sintetizar todas las proteínas que ayudan a formar la cromatina en la
fase S
 Las S-CdKs inician la replicación una vez por ciclo celular

1er evento activación (Helicasas

inactivas) Los complejos pre replicativos están en
los orígenes de replicación y sólo estos
pueden replicarse (Licencia para replicar)

2do evento activación Helicasas activadas

Se mueven fuera de los origenes de
replicación.
Los ORI no pueden ser reutilizados hasta
que se formen en ellos un nuevo pre-
complejo de replicación
Inicio fase S:
-S-Cdks activan orígenes de replicación por fosforilar proteínas que en
última instancia activan DNA- helicasas

- S-Cdks: previenen el ensamblado de nuevos preRCs porque fosforila

Y entonces inhibe a Cdc6 y ORC

- APC esta inactiva en G1 y esto ayuda a evitar el ensamblado de los

preRC en G1 ya que inhibe a cdt1

En general: se previene la formación de los preRC desde la fase S a

la mitosis y de esta manera se asegura que los origenes de
replicación se usen una sola vez por ciclo

¿Como se resetea todo de nuevo?

Al final de la mitosis APC inactiva las Cdks permitiendo el ensamblado

de los preRC para la siguiente fase S
 Las cohesinas mantienen unidas las cromátidas hermanas

Al final de la fase S, cada cromosoma replicado consiste en un par de cromátidas hermanas idénticas pegadas
a lo largo de su longitud.
Esta cohesión prepara el escenario para una mitosis exitosa porque facilita enormemente la union de las dos
cromátidas hermanas a los polos opuestos del huso mitótico.

La cohesión de las cromatidas hermanas depende de un complejo proteico llamado Cohesinas, que forman una
especie de gancho alrededor de las cromatidas
 Fase M

Mitosis: Separación de cromatidas hermanas y distribución en los núcleos de las dos células hijas.
La fase M se divide en función del comportamiento de los cromosomas en: profase, prometafase,
metafase, anafase y telofase.
Finalizada la mitosis viene la citoquinesis en donde se divide a la célula en dos mitades iguales cada
una con núcleos idénticos

Desde el punto de vista regulatorio la mitosis se puede dividir en dos partes principales:
1) Un aumento de la actividad de M-Cdk en la transición G2/M que gatilla los eventos tempranos de
la mitosis (profase, prometafase y metafase)
2) Durante la transición metafase-anafase APC inicia la separación de las cromatidas (destruye a
securina que permite la liberación de proteasa que cliva cohesinas) y luego induce destrucción de
las ciclinas lo que produce inactivación de Cdks
Video 18.2
Mitosis
El complejo M-Cdk es el principal responsable de todos los rearreglos que sufre la célula
cuando entra en mitosis

El complejo M-CdK induce la fosforilación de distintas proteínas involucradas en:

- el ensamblado del uso mitotico

- asegura que las cromatidas hermanas se unan a los polos opuestos del huso

- la condensación de los cromosomas

- la ruptura de la membrana nuclear

- induce los rearreglos del citoesqueleto y del aparato de Golgi

 ¿Cómo se activa el complejo M-Cdk?
1- Al final de G2 y en M hay un aumento de la expresión de ciclina M Mayor cantidad de complejos M-Cdk
2- Al final de G2 hay una gran cantidad de M-Cdk inactivada por la proteína Wee que la fosforila
3-Que activa a la M-Cdk? La fosfatasa Cdc25 que remueve el P que inhibe la actividad de la M-Cdk

activa

Esta inactiva En mitosis temprana

al final de G2 se activa Cdc25, se
inactiva Wee
 La separación de las cromatidas hermanas depende de la formación del huso mitótico
El complejo M-Cdk induce el ensamblado del huso mitótico y la re-estructuración de los cromosomas
en las etapas tempranas de la mitosis

Centrosomas se duplican
al inicio de la fase S.

Su duplicación esta
inducida por las G1/S
Cdks

Uso mitótico: es una arreglo de distintos microtúbulos bipolares:

Microtúbulos astrales: contactan con la membrana plasmática ayudando a localizar el uso mitótico
Microtubulos del cinetocoro: el extremo (+) se une al cinetocoro de cada cromatida hermana
Microtúbulos interpolares: los extremos (+) de los microtúbulos generados en centrosomas distintos
interacciones entre si formando un huso antiparalelo
Proteínas motoras de microtúbulos ayudan en el ensamblado del uso mitótico y localizan a las cromatidas
hermanas en el ecuador
 Transición metafase-anafase
En esta etapa se tienen que separar las cromatidas hermanas

Las cromatidas hermanas se La transición metafase-anafase

mantienen unidas por la esta controlada por APC que
proteina cohesina ubiquitina y entonces induce
degradación de muchas
proteínas regulatorias de la fase
M.
Mecanismo de acción de APC/C que controla la separación de las cromatidas
hermanas
1- M-Cdk promueve el aumento de
actividad de APC/C-Cdc20 en G2 (fosforila
a APC/C y por lo tanto aumenta su
afinidad a Cdc20 que es el activador de
APC/C)

2- APC/C ubiquitina y degrada securina

(proteína que esta unida e inhibie a
separasa)

3- Separasa una proteasa se activa por la

degradación de securina

4- Separasa degrada a cohesina

5- Se separan las cromatidas hermanas

6- APC/C tambien degrada ciclinas S y M

provocando la inactivación de las Cdks

7- La inactivación de M-Cdks es necesaria

para el desensamblado del huso mitotico y
la re formación de la envoltura nuclear
 Los cromosomas no apareados al uso mitótico bloquean la separación
de cromatidas: the spindle assembly checkpoint (SAC)

Colchicina o vinblastina desestabilizan los microtúbulos y arrestan a las células en mitosis

SAC asegura que la célula no entre en anafase a menos que los cromosomas estén correctamente
orientados en el uso mitótico

Este punto de control depende de mecanismos de sensado que monitorean la fuerza de unión de los
microtúbulos al cinetocoro.

Cada cinetocoro que no este unido apropiadamente con los microtúbulos manda señal que bloquea la
activación del complejo APC/Cdc20 y entonces bloquea la transición metafase-anafase
 Al final de la fase M

- Un evento regulador clave en la fase M tardía es la inactivación de Cdks, que se debe principalmente a la
destrucción de ciclinas dado por APC

- La inactivación de Cdks en la fase M tardía tiene muchas funciones: desencadena los eventos de mitosis tardía,
promueve la citocinesis y permite la síntesis de complejos prerreplicativos en los orígenes de replicación del ADN.

- En la mayoría de las células, este estado de inactividad de Cdk genera una fase G1, durante la cual la célula
crece y monitorea su entorno antes de comprometerse con un nuevo ciclo celular.
 En la fase G1 las Cdks están inactivas

Fase G1: permite el crecimiento celular y que el ciclo celular sea regulado por señales extracelulares
En G1 las Cdks deben estar inactivas, para resetear el ciclo celular
Como se logra????
●
Usan otra proteína activadora de APC/C que se llama Cdh1
●
APC se puede unir a Cdc20 o Cdh1
●
M-Cdk activa Cdc20-APC/C pero inhibe Cdh1-APC/C porque fosforila Cdh1
●
Cdh1-APC/C se activa después que Cdc20-APC/C (que inactiva las M ciclinas y por ende las MCdks)
●
Otro mecanismo es la inducción de inhibidores de CDks (CKIs)
• La disminución de la expresión de las ciclinas M en la mitosis tardia lleva a la inhibición de las M-Cdks
Como se inicia el ciclo celular nuevamente?

Aumento de las ciclinas G1 (inducida por señales extracelulares

de proliferación)
Aumento de la actividad G1-Cdks que inducen la transcripción
de las ciclinas S en la fase tardía de G1 y desbloquean los
mecanismos de control inhibitorios
 Control del ciclo celular y del crecimiento celular

El tamaño de un órgano o del cuerpo esta determinado por 3 procesos fundamentales:

-Crecimiento celular
-División celular Regulado por señales extra e intracelulares
-Supervivencia celular

Señales extracelulares: en general proteínas secretadas o de membrana; componentes de la matriz

1- Mitógenos: estimulan la división celular. Activan G1/S- Cdks (Por ej: PDGF; EGF, etc)
2- Factores de crecimiento: estimulan crecimiento celular (aumento de la masa celular). Inducen
síntesis de proteínas e inhiben su degradación
3- Factores de supervivencia: Suprimen la muerte celular programada o apoptosis
 Los compuestos mitogénicos inducen la activación de G1-Cdks y G1/S-Cdks

1- Interactuan con receptores de la superficie celular y activan múltiples vías de transducción de

señales
Mitógenos: PDGF (platelet-derivated growth factor): induce la proliferación de fibroblastos
EGF (epidermal growth factor): induce la división en células epidermales y no epidermales
En ausencia de señales mitógenicass para proliferar las células pueden mantener inhibidas las CDKs
quedar en G1 a traves de distintos mecanismos

Muchas neuronas y células del músculo liso estan en un

estado diferenciado de Go y no se dividen mas

Los mitogenos inducen la activación de las Cdks en G1

Ej: MAPKs
Activación por mitógenos del ciclo celular

- Ej: A través de la activación de una GTPasa

Rac, que activa MAPK, que induce expresión de
Myc, que induce expresión de G1 ciclinas que
lleva a activación de G1-Cdks

Las G1-Cdk activan factores de regulación de la

expresión como E2F
E2F: induce la expresión de G1/S y S ciclinas
RB: retinoblastoma protein

En presencia de mitógenos G1-Cdk fosforilan

RB
Señal intracelular: Daño al ADN arresta el ciclo celular

El ciclo celular puede detectar daño en el DNA y

arrestar el ciclo en dos transiciones:
1) En el Start que previene el inicio del ciclo y la
fase S
2) En G2/M que previene la entrada en mitosis

Mdm: ubiquitin ligasa que degrada p53

p53: Factor de transcripción que activa la expresión de p21

p21: inhibidor de Cdks (CIKs)

p21 se une a G1/S Cdks y S-Cdks y las inhibe. Impide que
las células entren en el ciclo

La mitad de los canceres humanos presentan

mutaciones en el gen de p53, la perdida de función
de p53 le permite a la célula cancerosa acumular
mas mutaciones
 Senescencia celular replicativa:

Muchas células humanas se dividen un numero limitado de veces antes de quedar en un arresto del
ciclo celular permanente, a esto se lo llama senescencia celular replicativa

El origen de este fenómeno parece estar causado por cambios en la estructura de los telómeros

Telomerasa replica los telómeros y los protege cubriéndolos con un cap.

Telomerasa esta presente sólo en algunos grupos celulares

En las células que no tienen telomerasa, los telomeros y sus caps se van acortando con cada división

Los extremos expuestos del cromosoma pueden ser sensados como DNA dañado e inducir arresto
celular mediado por p53

La mayoría de las células cancerosas pueden producir telomerasas y por lo tanto NO tienen
senescencia celular replicativa
 Estimulación del crecimiento celular por factores de crecimiento extracelulares
Si la célula prolifera sin crecer se va ir achicando progresivamente y no va haber un aumento neto de la
masa celular. Por lo tanto en la mayoría de los tipos celulares el crecimiento celular acompaña a las
divisiones celulares

Factores de crecimiento se unen a receptores de

la superficie celular y activan vías intracelulares
que aumentan la síntesis de proteínas y
macromoléculas

Una de las vía intracelulares mas importante

activada por receptores de factores de crecimiento
quinasa
es la Pi 3 quinasa (PI3K) que agrega fosfatos a
inositol fosfolípidos en la membrana.
PI 3 K activa a otra quinasa TOR que regula vías
de crecimiento celular
TOR activa procesos metabólicos, aumento
síntesis de proteínas
S6: proteína ribosomal
elf4E: factor de iniciación de la traducción
Resumen del sistema de control del ciclo
celular
 El Sistema de control del ciclo celular se puede analizar
genéticamente en levaduras

Dos modelos muy utilizados: Sacharomyces pombe y Sacharomyces cerevisiae

El tamaño de la gema provee una indicación de la etapa del ciclo en la que están ya que varía a
lo largo de la progresión del ciclo celular.

G1: Las células no tienen gema

La progresión del ciclo celular gatilla el crecimiento de la gema que al
principio es pequeña
Un poco mas grande el fase S
Igual de tamaño que la célula madre en la fase M

En levaduras los mutantes condicionales de temperatura permitieron estudiar la función de los genes
de división celular cdc genes (cell-división.cycle genes)
 El sistema de control del ciclo celular de
mamíferos se puede estudiar en cultivo
Los cultivos de células humanas constituyen
un excelente sistema para explorar molecular
y microscópicamente el ciclo celular.

Se usan líneas celulares inmortalizadas

(líneas que tienen mutaciones que le
permiten proliferar indefinidamente en
cultivo)
Son células genéticamente homogéneas
Observación morfológica bajo el microscopio
Las células redondeadas están en mitosis
Observación de la fase S.
Tinción con BrdU
(análogo artificial de la
timidina bromo-
deoxyuridina). El BrdU se
visualiza por tinción con
anticuerpos anti-BrdU
(verde)
 FACS: fluorescence-activated cell sorter
Permite analizar en que estadio del ciclo celular se encuentra una población celular (sincronizada)
analizando su contenido de DNA. El contenido de DNA es doble en la fase S

Citómetro de flujo especial