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CELULAR
Fases del Ciclo Celular
Fases de la Mitosis
Citocinesis. La formación del
anillo contráctil se produce
durante la etapa de
citocinesis. Dicho anillo es el
encargado de estrangular el
citoplasma de la célula hasta
dividirla en dos. La
composición del anillo
contráctil es principalmente de
filamentos de actina y miosina.
y cuando ya no se
requieren más células?
1. Regulación extracelular
2. Regulación intracelular
Figura 17-11 Complexos de ciclina-Cdk do sistema de controle do ciclo celular. As concentrações dos três principais tipos de ciclinas
oscilam durante o ciclo celular, enquanto as concentrações das Cdks (não mostrado) não mudam e superam as quantidades de ciclinas. Na
fase G1 tardia, níveis crescentes de G1/S-ciclina levam à formação de complexos G1/S-Cdk que promovem a progressão através da
transição de Início. Os complexos S-Cdk se formam no início da fase S e desencadeiam a replicação do DNA, assim como alguns eventos
mitóticos iniciais. Os complexos M-Cdk se formam durante G2, mas são mantidos em um estado inativo; eles são ativados no fim de G2 e
desencadeiam a entrada na mitose na transição G2/M. Um complexo proteico separado, o APC/C, inicia a transição metáfase-anáfase,
como discutiremos mais tarde.
Principales ciclinas y Cdks presentes en los
vertebrados y en las levaduras que forman yemas
Se conocen 6 combinaciones distintas de Cdk-ciclina
que actúan en tiempos específicos durante el ciclo.
P16 (INK4 )
inhibitoria
(+)
(anaphase-promoting
complex/cyclosome) is
inactive during the S and
G2 phases.
El complejo APC/C es una enzima que pertenece a la familia de las ubiquitina ligasas. Transfieren múltiples copias de
ubiquitina lo que resulta en la destrucción proteolítica por los proteosomas. Esta se encuentra inactiva, pero se activa al
asociarse con la subunidad activadora Cdc20, cataliza ligamiento de ubiquitina a proteínas relacionadas a la salida de
mitosis tales como: securina, ciclinas D, A y B. Estas, luego de ser ligadas con ubiquitina se degrada en proteosoma y la
Cdk se libera. Cuando las G1/S-Cdk son activadas en la fase tardia de G1, el complejo APC/C se apaga, lo cual permite la
acumulación de ciclina para que pueda empezar el próximo ciclo.
Destruye ciclinas A y D
Otro tipo de ubiquitina ligasa es SCF. Esta tiene la capacidad de ligar ubiquitina al
inhibidor de Cdk (CKI) en la etapa tardía de G1 y por lo tanto juega un papel en la
replicación del DNA y en la activación de S-Cdks, el cual tiene que ser fosforilado por
una kinasa para que este proceso se realice. (Este siempre está activo y reconoce
cuando la proteína está fosforilada)
Puntos de control del ciclo celular
La proteína p16 (INK4) inhibe a los complejos cdk4 y cdk6–ciclina D. La p16 se interpone entre cdk4 y la
ciclina D y da lugar a una kinasa inactiva. Asi, el E2F no se libera y la célula no pasa el punto de restricción.
La acción de p16 tiene que ver con el medio extracelular, pues si no hay suficientes señales del exterior
(mitógenos, factores de crecimiento, nutrientes, etc.) p16 y p27 se acumulan y se hacen muy activos. La
fosfoproteína p27 (una CIP), suprime la actividad de los complejos cdk-ciclina activos en los primeros dos
puntos de control, y ayuda a retirar a la célula del ciclo celular llevándola a G 0.
Primer punto de control: G1
En el puesto de
control G1, el
complejo Cdk2-
ciclina E,
inactiva a Rb y
favorece el
trabajo de E2F
para que estén
listas las
enzimas
necesarias para
el inicio de la
síntesis de DNA
en la fase S.
Figure 5.4 Structure and function of
the RB protein. (a)
Hypophosphorylated RB sequesters
E2F/DP and HDAC. Transcription is
repressed. (b) Partial phosphorylation
of RB by cyclin D–cdk4 causes a
conformational change, and release of
HDAC but not E2F/DP. Repression is
relieved for some genes such as cyclin
E (top) but not for E2F target genes
(bottom). (c) Additional
phosphorylation by
cyclin E–cdk2 causes an additional
conformational change, release of
E2F/DP, and transcription of E2F
target genes.
p21 y p53 impiden el paso de G1 a S
Polo Kinasa
CiclinaA
Ciclina B (+)
Cdk1-ciclina B
Cdk1-ciclina A
(MPF)
Activacion de M-Cdk (MPF). Cdk1 se asocia con M-cyclin conforme aumentan los niveles de M-cyclin en
forma gradual. El complejo M-Cdk resultante es fosforilado en un sitio activador por la kinasa activadora
de Cdk (CAK) y en un par de sitios inhibitorios por la kinasa Wee1. El complejo M-Cdk inactivo resultante
es luego activado al final de G2 por la fosfatasa Cdc25. Cdc25 es estimulada en parte por Polo kinasa..
Cdc25 es además estimulada por el M-Cdk activo, resultando en un feedback positivo. Este feedback es
mejorado por la capacidad de M-Cdk para inhibir WeeI.
Las cohesinas son
proteínas que mantienen
unidas a las cromátidas Mad2
hermanas.
(-)
Durante la anafase las
cromátides se separan
por acción del complejo
promotor de la
anafase (APC). Este
complejo es activado por
una proteína semejante a
una cdk, llamada Cdc20
(cdc= ciclo de división
celular). Una vez
activado, el APC marca,
para que se degrade, a la
securina, que inactiva a
la separasa. La
separasa libre (activa)
degrada las cohesinas y
así elimina las uniones
entre las cromátides
hermanas.
Esquema general de los puntos de control en el ciclo celular. El punto de control del DNA no replicado (1) impide
la activación de los complejos ciclina A- CDk1 y ciclina B – Cdk1 (factor promotor de la mitosis, MPF) al activar la
cascada de la proteín kinasa ATR-Chk1, que fosforila e inactiva Cdc25C, inhibiendo así la entrada en la mitosis. En el
punto de control de ensamblaje del huso (2), Mad2 y otras proteínas inhiben la activación del factor de especificidad
del APC (Cdc20) necesario para la ubiquitinación de la securina, impidiendo así la entrada en anafase. El punto de
control de separación de los cromosomas (3) impide la liberación de la fosfatasa Cdc14 de los nucléolos, bloqueando la
activación del factor de especificidad del APC (Cdh1) necesario para la ubiquitinación de las ciclinas tipo B, asi como
para la inducción de Sic1. Como resultado, no disminuye la actividad de MPF necesario para los acontecimientos de la
telofase. En la fase inicial del punto de control de daño al DNA (4) se activa la proteín kinasa ATM o ATR (ATM/R).
Las kinasas activas desencadenan dos vías; la vía de Chk-Cdc25A (4b y 4c), que bloquea la entrada en fase S, y la vía
del p53-p21CIP, que produce la detención en G1, S y G2 (4a - 4b).
Control extracelular del ciclo celular
El tamaño y la forma de un órgano u organismo depende
del crecimiento, división y la muerte celular (reguladas
por programas intracelulares y por señales
extracelulares).
Las señales extracelulares que regulan el tamaño celular
y el número de células son proteínas secretadas que se
unen a la superficie de las células:
1.Mitógenos: estimulan división celular, eliminan controles
negativos,
2.Factores de crecimiento: estimulan crecimiento
celular, induciendo síntesis de proteínas e inhibiendo su
degradación.
3.Factores de supervivencia: estimulan supervivencia
inhibiendo apoptosis.
1. Mitógenos: estimulan la división celular
Proceden de otras células. Son de tres tipos:
• De especificidad amplia: PDGF, actúa sobre
fibroblastos, fibras musculares lisas, y neurogliales. EGF,
actúa sobre células epidérmicas, epiteliales, no epiteliales.
• De especificidad reducida: Eritropoyetina, actúa sobre
los precursores de los glóbulos rojos.
• TGF-b: a) Estimula la proliferación en algunas células y
en otras inhibe; b) Estimula proliferación a una
concentración y la inhibe a otra concentración.
En ausencia de mitógeno, la actividad Cdk se mantiene
inhibida en G1 y las células entran en estado no proliferativo
G0 y retrasan la división celular.
(PDGF, EGF)
Los mitógenos
activan Cdk4-Ciclina
D y Cdk2-ciclina E
Actúan en G1 y permiten el paso
G1 S. Se unen a receptores
tirosina kinasa de la superficie
celular, activan una GTPasa Ras
(codificada por gen inductor de
cancer), esta activa una casacada de
MAP kinasas que a su vez activan la
proteína reguladora de los genes
Myc. Myc estimula la entrada en el
CC pues activa la expresión de los
genes de la ciclina D ( la
actividad de Cdk4-D). Myc también
expresión del gen de ubiquitina
ligasa SCF la que induce degradación
de la CKI p27 provocando de
actividad de Cdk2-ciclina E. Se
inhibe Rb y se libera E2F.
Las señales de proliferación anómalas originan
detención del CC o la muerte celular, Excepto
en las células cancerosas
La estimulación mitogénica excesiva induce síntesis de la proteína inhibidora del CC llamada p19ARF, la
cual inhibe a Mdm2 (Mdm2 activa la degradación de p53). Por lo tanto, se incrementan los niveles de
p53 y se detiene el CC o se produce la apoptosis. En cambio en las células cancerosas el sistema
protector está inactivado por mutaciones en los genes que codifican componentes esenciales de los
mecanismos bloqueadores, tales como Arf o p53 o las proteínas que ayudan a activarlos.
En ausencia de mitógenos
FIGURE 41.9 REGULATION OF CELL-CYCLE PROGRESSION BY THE E2F/DP/RB COMPLEX. A, The Rb/E2F/DP complex
recruits histone deacetylases (see Chapter 8) and represses specific genes that are required for cell-cycle progression. This blocks cellcycle
progression at the restriction point. B, Phosphorylation of Rb by Cdks alleviates this block and permits passage of the restriction point. cAMP,
cyclic adenosine monophosphate; MEK, mitogen-activated protein kinase kinase; PKA, protein kinase A.
2. Los Factores de
crecimiento
extracelular
estimulan el
crecimiento celular
Se unen a receptores de
superficie y activan vías de
señalización que incrementan
la velocidad de síntesis de
proteínas y disminuyen la
velocidad de degradación.
También activan la absorción
de nutrientes y la producción
de ATP requerido para la
síntesis incrementada de
proteínas.
3. Factores de supervivencia inhiben la
apoptosis
Efecto de un medio fresco sobre una monocapa celular confluente. Las células de una monocapa
confluente no se dividen (gris). La células se vuelven a dividir (verde) si son expuestas directamente a un
medio de cultivo fresco. Aparentemente, en la monocapa confluente, la proliferación ha cesado porque el
medio de cultivo en contacto con las células carece ya de mitógenos, por los cuales compiten las células.
5. Anclaje
Fibroblastos cultivados en suspensión sin que se unan a ninguna superficie sólida adoptan
forma redondeada y no se dividen (dependencia del anclaje de la división celular). Pero, si
se contactan o adhieren a un sustrato crecen y proliferan al formar adhesiones focales en
los sitios de contacto. Las células deben estar ancladas para pasar de G1 a S.
La división celular depende de la forma de la célula y del anclaje. En este experimento las células se han mantenido en suspensión o
han sedimentado sobre parches de material adhesivo (paladio), los cuales se han colocado sobre un sustrato no adhesivo. El diámetro del
parche, que es variable, determina el área sobre la que se puede extender una célula y la probabilidad que ésta progrese hacia a la fase S.
Al medio de cultivo se le añade timidina-3H y al cabo de 1 o 2 días el cultivo se fija y se autoradiografía para determinar el % de células que
han entrado en fase S. (A) Pocas células de la línea celular 3T3 entran en la fase S cuando se mantienen, redondeadas, en suspensión,
pero la adeherencia a un parche, aunque sea tan pequeño que no permita que la célula se extienda, hace posible que muchas de ellas
entren en fase S. (B y C) Imágenes de una célula que se ha adherido a un parche pequeño y de una célula que se ha extendido sobre un
parche grande
Adhesiones focales
• Son sitios donde las moléculas
de la matriz extracelular
(laminina y fibronectina)
interactúan con las integrinas
que se conectan con el
citoesqueleto de actina. Esta
unión de moléculas a las
integrinas activa proteínas
locales como la kinasa de
adhesión focal (FAK), la cual
activa vias que estimulan la
supervivencia, el crecimiento o
la división celular.
• El control por anclaje actúa en
G1. Las células deben estar
ancladas para pasar de G1 a S.
Las adhesiones focales como sitios de producción de señales intracelulares. Fibroblasto cultivado sobre un sustrato recubierto
con fibronectina, molécula de matriz extracelular ( imagen de fluorescencia). Los filamentos de actina han sido marcados con
fluorescencia verde, y las proteínas activadas que contienen fosfotirosina han sido marcadas con un anticuerpo que emite
fluorescencia de color rojo. Donde se superponen los dos componentes, el color resultante es naranja. Los filamentos de actina
terminan en las adhesiones focales, a través de las cuales la célula se une al sustrato. Las proteínas que contienen fosfotirosina
también se acumulan en estos lugares. Este hecho refleja la activación local de la kinasa de adhesión focal (FAK) y de otras
proteín kinasas estimuladas por las proteínas transmembrana integrinas, que se unen extracelularmente a la fibronectina e,
indirectamente, a los filamentos intracelulares de actina. Las señales que se generan en estos lugares de adhesión facilitan la
regulación de la división, el crecimiento y la supervivencia celular en fibroblastos y en células epiteliales .
Inhibidores extracelulares del crecimiento, división y
supervivencia celular
• TGF-b: inhibe proliferación de muchos tipos de células,
bloqueando el CC en G1 o estimulando la apoptosis. Se
une a receptor de superficie y activa Smad y se
producen cambios en la expresión de proteínas que
regulan división celular y muerte celular.
• Proteína osteomorfogénica BMP (un TGF-b): induce
apoptosis que elimina tejido situado entre dedos del
ratón.
• Miostatina (un TGF-b): inhibe proliferación de
mioblastos que se fusionan para formar las fibras
musculares esqueléticas. Si se elimina gen que la
codifica, el músculo crece mas de lo normal por aumento
de número y tamaño de células musculares.
Figure 17-51. Efectos de una mutación en la miostatina sobre el tamaño de los músculos. La mutación conduce a
un dramático incremento en la masa del tejido muscular, como ilustra este toro Azul Belga. La raza Azul Belga fue
producida por criadores y solo recientmente se ha sabido que que era portadora de una mutación en el gen de la
miostatina. Los ratones en los que se provoca la deficiencia de este mismo gen también tienen músculos
remarcablemente grandes. (From A.C. McPherron and S.-J. Lee, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:12457