BIOLOGIA CELULAR

Y MOLECULAR:
ADN y Genomas
Ácidos Nucleicos:
- Historia del descubrimiento e implicancias
- Relación entre estructura y función
- Propiedades físico químicas
- Enzimas relacionadas y replicación
Que molécula sería capaz de replicarse, transmitir la información y guiar el desarrollo de un organismo?

Qué instrucciones contiene la información genética?

Cómo se organiza físicamente esta información dentro de una pequeña célula?

¿Que se espera del material genético?

Estabilidad física-química

Capacidad para replicarse con precisión

Heredabilidad: transmisible de generación en generación

Puede cambiar -> Evolución

¿Candidatos?.
 1.Historia

Nacimiento de la genética moderna, Gregor Mendel

1865 Publicación del artículo de

Gregor Mendel. Planta de arvejas.

Leyes de segregación independiente

de factores hereditarios
 1.Historia
Friedrich Miescher, 1869

• Aisla por primera vez de esperma de salmón una sustancia blanca,

azucarada con alto contenido de fósforo
• Presente sólo en el núcleo nucleína

Proporción inusual de N y P = nueva sustancia biológica?

ADN
 1.Historia

Walter Sutton 1903 establece la hipótesis según la cual los cromosomas, segregados
de modo mendeliano, son unidades hereditarias (portadores físicos de los factores
mendelianos).

Probó que las Leyes Mendelianas de

segregación y clasificación
independiente eran válidas con el uso
de cromosomas de saltamonte

Teoría de la herencia
cromosómica.
-
Una de las 3 teorías
integradoras de la biología
 1.Historia
Phoebus Levene, Bioquímico,

 1909 descubre el azúcar ribosa

 1929 desoxiribosa
 En la década del 1930 descubrió las bases nitrogenadas (A,T,C,G,U)
 Determino dos tipos de acidos nucleicos: ADN y ARN
 Dedujo que el ADN estaba formado por unidades estructurales:
nucleotidos= base+desoxiribosa+fosfato
• El ADN formado por 4 bases nitrogenadas, un grupo fosfato y azúcar
de 5 carbonos
• Las bases estaban en cantidades iguales y, que un tetranucleótido era
la unidad repetitiva de la molécula.

Teoría del tetranucleótido -> estructura homogénea, no explica complejidad

Ácidos nucleicos: polímero de nucleótidos 1.Historia
 1.Historia

En 1914 Robert Fuelgen, describió un método para revelar por tinción el ADN basado
en el colorante básico fucsina (afinidad con el ADN).
Mostró que todos los núcleos de las células poseían ADN que se encontraba en los
cromosomas.
Tinción de Fuelgen.
1.Historia
1928 - Griffith 1.Historia
Hipótesis

1.La cepa S, muerta por el calor, fue reanimada o resucitó.

1.La cepa R viva fue modificada por algún "factor de transformación"

(transforming factor).
 1.Historia

¿Cual es la naturaleza del principio transformante?

El ADN de la cepa S llevaba la información para que la cepa R sintetizara una capsula
 Estudios Bioquímicos: 1.Historia
Chargaff 1950
Analizó el ADN de diferentes especies y analizó su composición

• A, T, C, G no se encontraban en cantidades iguales

• La cantidad de bases variaba entre especies, pero no entre individuos

de la misma especie

• La cantidad de A siempre era igual a la cantidad de T y la cantidad de C

siempre era igual a la cantidad de G (A = T y G = C)

• ADN doble cadena, consiste en 50% purinas (A,G) y 50 % pirimidinas

(T,C)
Ejemplos de proporciones de bases nitrogenadas en diferentes especies 1.Historia

Contenido A-G = T-C

Contenido A-G ≠ T-C

 1.Historia

(Variable)

(A mayor %G-C mayor densidad del ADN)

 1.Historia

Cual era el material hereditario?

ADN o Proteínas?

Ciclo lítico
Hershey and Chase, 1953 1.Historia

ADN era el material genético que llevaba la

información
1.Historia
 ¿Qué sabemos?
1. Los genes, los factores hereditarios descriptos por Mendel, estaban asociados con
caracteres específicos, pero se desconocía su naturaleza física. De igual manera, se
sabia que las mutaciones alteraban la función de los genes, pero no se sabia con
precisión que era una mutación.
2. Teoría de un gen -> postulaba que los genes controlaban la estructura de las
proteínas.
3. Los genes estaban contenidos en los cromosomas.
4. Los cromosomas consistían de ADN y proteínas
5. Varios exp. demostraron que bacterias pueden ser «transformadas» cambiando su
fenotipo y que el agente de transformación es el ADN.

ADN responsable de la herencia = material genético.

Molécula relativamente simple (4 nucleótidos)
¿como se explica la complejidad biológica?
 1.Historia

Rosalind Franklin

Durante 50 años, la historia de la ciencia ha

sostenido que los descubridores de la doble
hélice del ADN fueron Crick y Watson. En los
últimos años, las investigaciones han
sacado a la luz la labor de Rosalind Franklin,
sin cuyas radiografías sus colegas no
hubieran llegado tan rápido a la meta. Hoy
se puede decir que si éstos son los
«padres» del hallazgo de la estructura
helicoidal de la molécula, Franklin merece
ser considerada la «madre».

Patrón obtenido del DNA en forma de X sugiere estructura helicoidal

 1.Historia
CONTEXTO HISTORICO

1953 James D. Watson y Francis Crick presentan el modelo de la estructura de doble hélice del ADN
 1.Historia
Mayor deducción: complementariedad de bases

Cumple la regla de Chargaff: A=T y C=G

El apareamiento de purinas con pirimidinas genera el diámetro exacto de la doble hélice determinada por la difracción de rayos X
1.Historia

7. La espiral gira para la derecha

El hallazgo de Watson y Crick al dilucidar la estructura del ADN es
considerado el descubrimiento biológico mas importante del siglo 20.
El modelo de doble hélice propuesto no solo es consistente con datos estructurales previos, sino que cumple con los 3
requisitos necesarios para una sustancia hereditaria.

1. Sugiere forma en que el material genético determina la estructura de

las proteínas. Idea de Código Genético.
Secuencia nucleótidos –> secuencia aminoácidos.

2. Es pasible de cambios, mediante la substitución de un tipo de base

por otra en una o más posiciones.
Mutaciones -> diversidad -> evolución.

3. Se puede sugerir mecanismos de copia del material genético.

Mecanismo de replicación.
 Fuerzas que estabilizan la doble hélice

 Enlaces de hidrógeno (pequeña contribuión)

 Apilamiento de bases e interacción hidrofóbica

 Interacciones iónicas:

- Repulsión entre las cargas negativas de los fosfatos

- Los cationes actúan como contraiones estabilizando el DNA (divalentes

más eficientes que monovalentes; el Mg+2 estabiliza la estructura del RNA)

GENOMA= El conjunto completo de información contenida en el ADN
de un organismo

Una célula humana contiene 2 metros de DNA (contiene 3,2 x 109 pares de nt)

Como lo guarda dentro del núcleo que tiene un tamaño de 6 µm de diámetro?

El DNA esta empaquetado en cromosomas

 Genoma Nuclear Eucariota

El DNA esta divido entre un set de cromosomas. (ej humanos 46 cromosomas

totales, 22 pares comunes mas 2 cromosomas sexuales)

Cada cromosoma consiste en una larga molécula lineal de DNA asociada con
proteínas que lo pliegan y empaquetan en una estructura mas
compacta.

Complejo de DNA + proteínas= cromatina

Función de los cromosomas? Transportar los genes

Los genes son segmentos de DNA que contienen la información para
codificar una determinada proteína o RNA (estructural o catalítico)

Molecular Biology of the cell; 6 th edition

 En general cuanto mas complejo es el organismo mayor es su genoma…..

Bacterias, arquea, algunas células eucariotas unicelulares (x ej levaduras) tienen genomas concisos, genes muy
empaquetados.
Los genomas de animales y plantas multicelulares contienen además de genes una gran cantidad de DNA intercalado
(DNA no codificante) cuya función esta pobremente entendida.
Es la diferencia en la cantidad de DNA no codificante entre genes mas que la diferencia en el numero de genes lo que
cuenta para la gran variación en tamaño cuando se compara una especie con otra
La secuencia nucleotídica del genoma humano muestra cómo están organizados los genes en
humanos
En 2004 se publico la secuencia del genoma humano

Molecular Biology of the cell; 6 th edition

 Nuestro genoma de alguna manera nos recuerda nuestro garaje / dormitorio, etc: altamente individualista,
desaliñado, muy poca evidencia de organización; mucho desorden, virtualmente nada se descarta y los pocos
Ítems de valor están descuidados y esparcidos

-Bajo porcentaje del genoma codifica para proteínas o RNA estructural o catalítico
-La mayor parte del genoma esta constituido por transposones y secuencias repetidas
-Tamaño promedio de un gen: 27000 nt. Solo 1300nt forman una proteína de tamaño
promedio. El resto intrones o secuencias regulatorias (responsables de que el gen se
exprese en el nivel apropiado, en el momento indicado y en la célula que corresponde)
-La información esta muy desordenada
Cada molécula de DNA que forma un cromosoma lineal debe contener:
1 origen de replicación: donde comienza la duplicación. Los eucariotas poseen varios orígenes de replicación. Procariotas solo 1
1 centrómero: permite que una copia de cada cromosoma duplicado y condensado se separe a cada celula hija
2 telómeros: se encuentran en los extremos de los cromosomas. Están formados por secuencias repetidas que permiten que los
extremos de los cromosomas puedan replicarse adecuadamente sin perder información genética

Los cromosomas son estructuras dinámicas: condensan y descondensan según la célula necesite
Proteínas nucleares que se unen al DNA para formar los cromosomas:
- Histonas
- Proteínas cromosomales no histonas

Proteínas nucleares + DNA nuclear: CROMATINA

Nucleosomas: Complejos de DNA + proteínas. Estructura más básica de
los cromosomas

En 1974 se identificaron los nucleosomas

 ¿Como están formados los nucleosomas?

• Nucleosoma consiste en un complejo de 8 histonas (2 de cada tipo):

- H2A
- H2B
- H3
- H4
- DNA doble cadena de 146 nt que se enrolla alrededor del complejo
de histonas

• Los nucleosomas están separados unos de otros por DNA linker

• Cada 200 nt se forma un nucleosoma
• Los nucleosomas se empaquetan uno arriba del otro generando una
cromatina de unos 30 nm de diámetro
 Organización estructural de los nucleosomas

• Las 4 histonas son unas de las proteínas

mas conservadas de las células
eucariotas. (La mayoría de las
mutaciones son letales).
• Son proteínas relativamente pequeñas
de 102-135 aa
• El extremo N-ter se extiende hacia
afuera del nucleosoma y sufre distintos
tipos de modificaciones covalentes, los
cuales controlan muchos aspectos de la
estructura de la cromatina
• Las histonas se sintetizan en la fase S del
ciclo celular y se ensamblan en
nucleosomas en el DNA hijo justo por
detrás de la orquilla de replicación
 En donde se posicionan los nucleosomas?

Dos características determinan donde se van a formar en el DNA:

1- Secuencia del DNA:

La dificultad de doblar a la doble hélice del DNA en vueltas muy apretadas alrededor del octámetro de histonas.
Esto requiere una compresión del surco interior de la doble hélice. Las zonas ricas en A-T son mas fáciles de doblar
alrededor de las histonas que las zonas ricas en G-C

2- La presencia de otras proteínas fuertemente unidas al DNA

 Niveles de organización estructural de la cromatina

Nucleosomas: Proteínas-segmentos de DNA.

Fibras de cromatina: Los nucleosomas se

empaquetan para formar arreglos regulares
de fibras de cromatina de 30 nm

Las fibras de cromatina se pliegan para

formar loops mas grandes
 El arreglo de los nucleosomas en el DNA es altamente dinámico- CAMBIA de acuerdo a las
necesidades de las células

Chromatin remodeling complexes: proteínas que usan la energía que obtienen de hidrolizar ATP para cambiar la
estructura de los nucleosomas temporalmente, lo que permite que el DNA este unido mas débilmente al núcleo de
histonas. Hay muchos complejos remodeladores de la cromatina distintos.

Reposicionan los nucleosomas para exponer regiones específicas del DNA, haciéndolas mas accesibles para otras
proteínas.

Cooperan con unas chaperonas de histonas permitiendo cambiar todo o una parte del núcleo de histonas de los
nucleosomas. Los nucleosomas son reemplazados cada 1 o 2 horas dentro de la célula

La actividad de estos complejos está muy regulada. Participan en el control de la expresión génica, remodelando la
estructura de la cromatina
 Diferentes estructuras de la cromatina en la interfase nuclear de células eucariotas

Heterocromatina: Cromatina altamente condensada

-Presente en ciertas regiones especializadas: centrómeros y
telómeros
-Mas del 10 % del genoma humano esta empaquetado de
esta forma.
-Contiene pocos genes
-En gral los genes están silenciados

Eucromatina: Cromatina menos condensada

La estructura de la cromatina gobierna la lectura de la información genética que contiene y por lo tanto
la estructura y función de la célula que la contiene

La estructura de la cromatina se puede heredar!!!!!!

HERENCIA EPIGENÉTICA

Epigenética: es el estudio de los cambios heredables en la expresión génica que no involucra cambios
en la secuencia de DNA pero que sí afecta cómo las células pueden leer sus genes
 La heterocromatina se auto-propaga y se hereda

Efecto de posición: La translocación de una zona de eucromatina cerca de una zona de heterocromatina genera
el silenciamiento de los genes que en ella se encontraban. La heterocromatina se propaga. Este patrón
estructural de la cromatina se hereda. Este fenómeno se llama efecto de posición de variegación. Se identifico
primero en Drosophila y luego se vio en otros eucariotas como levaduras, plantas y humanos
 Las cadenas laterales de los aa de las cuatro histonas de los nucleosomas están sujetas a
modificaciones covalentes

Las modificaciones son reversibles y catalizadas por distintas enzimas

HAT: Histone acetyl transferase: agrega grupos acetilos a las lisinas
HDAC: Histone deacetylase complex: remueve grupos acetilos
Histone metyl transferase: agrega metilos a las lisinas
Histone deacetyltransferase complex: remueve metilos
 Enzimas responsables de algunas de las modificaciones

Reclutadas en sitios específicos de la

cromatina en un momento determinado
Este reclutamiento depende de factores de
transcripción (FT). Los FT se producen en
distintos momentos y lugares, determinando
donde y cuando las enzimas que modifican
la cromatina van a actuar.

La modificación covalente de las histonas permite el reclutamiento de otras proteínas que modifican:
-la propagación de la heterocromatina (trimetilacion de la lisina de la H3 atrae a la proteína HP1 que propaga la
heterocromatina)
-Determinan como y cuando se van a expresar distintos genes
 Significado específico de la modificación de histonas

• Distintos patrones de modificaciones covalentes se

encuentran en distintos nucleosomas dependiendo
de su posición en el genoma y de la historia celular.

• Modificación covalente: muy regular

• Acetilacion de lisinas en el extremo N-ter: afloja la

estructura de la cromatina (disminuye afinidad por los
nucleosomas adyacentes) Permite expresión

• Trimetilación de la lisina de la cola de la H3, atrae la

proteína específica de la heterocromatina HP1 y
contribuye a la dispersión de la heterocromatina

 La H3 puede ser marcada por distintas modificaciones covalentes que actúan conjuntamente para
transmitir un significado específico
La modificaciones covalentes se heredan !!! EPIGENÉTICA
Provee a la célula una memoria de su historia del desarrollo que puede ser transmitida de generación en generación
2) Genomas Procariotas y de organelas eucariotas

2.1) Procariotas
- Eubacterias (E. coli)
- Arqueobacterias

2.2) Organelas eucariotas con ADN (extracromosómico)

- Mitocondria
- Cloroplastos
 2) Genomas Procariotas y de organelas eucariotas

2.1) Procariotas
- Eubacterias (E. coli)
- Arqueobacterias (poco estudiadas)

- Moléculas empaquetado: HU, tetrámero 80 pb.

DNA girasa y topoisomerasa I

Idea general: un único cromosoma,

más pequeño, circular, super- Novobiocina
enrollado, ubicado en región Ác. nalidíxico
denominada nucleoide.

Superenrollamiento: Topo I y Topo II

- Moléculas lineales: Borrelia, Streptomyces y Agrobacterium (estructuras equiv. telomeros).

- Múltiples moléculas (multipartitos): Existen con 2 o más (circulares o lineales), difíciles de

diferenciar de plásmidos grandes (megaplásmidos). Vibrio, Deinococcus
 2.1 Genoma bacteriano
Nucleoide
Giemsa E. coli

Bacillus subtilis

No-ribosomas

DAPI GFP
Teñido con uranil acetate y TEM
Organization and segregation of bacterial chromosomes 4′,6‑diamidino-2‑phenylindole (DAPI)
Xindan Wang, Paula Montero Llopis, and David Z. Rudner. Nat Rev Genet. 2013 March ; 14(3): .
doi:10.1038/nrg3375.
 2.1) Procariotas
Comparación del genoma lineal de Buchnera proveniente de B. pistaciae, A. pisum, and S. graminum
(Parásitos – Patógenos).

Estructura del genoma mas corto conocido

600 kb

Azul: genes
Negro: RNAs
Verde: pseudogenes
rosa: inversiones
Naranja: genes únicos
Roeland C. H. J. van Ham et al. PNAS 2003;100:581-586

©2003 by National Academy of Sciences

 2) Genomas Procariotas y de organelas eucariotas
2.2) Organelas eucariotas con ADN (extracromosómico)
- Mitocondria
- Cloroplastos

- ADN promiscuo (transferencias de genes o porciones ADN entre ellas y núcleo)

- Generalmente circular y único… obvio… hay excepciones.
Dinoflagelados: múltiples circulares, 1 gen
Paramecios, y varias levaduras: Lineales.

Mitocondria:
- Cloroplasto:
- Humana: 10 moléculas por organela, 8000 x
- Menos variable tamaño, 120-195 Kb.
célula!. 6500 S. cerevisiae.
- Estructura génica mas conservada (ca. 200 genes).
- 16,5 Kb Humano, muy variables en tamaño (2
– 2500 Kb) y nro genes (5 – 92),
- algunos genes pueden tener intrones.
Esto es todo….POR HOY!!!!