REPORTE DE PRACTICA DE NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-113-SSA1-1994, BIENES

Y SERVICIOS. MÉTODO PARA LA CUENTA DE MICROORGANISMOS COLIFORMES

TOTALES EN PLACA.
Bustamante Ramírez Claudia Alejandra, Díaz Gutiérrez Isidro, Franco Ramos Marco Leopoldo,
Huerta Barrón Yeimi Raquel, Jose Hidalgo Alicia, Luna Blanco Soledad, Núñez Pacheco Jose
Joaquín & Ramos Alvarado Abner.

RESUMEN
En la presente practica se llevara a cabo realizar los procedimientos acorde a la NORMA
OFICIAL MEXICANA NOM-113-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. MÉTODO PARA LA
CUENTA DE MICROORGANISMOS COLIFORMES TOTALES EN PLACA, usando como
muestra lechuga y huevo.
Esta Norma Oficial Mexicana establece el método microbiológico para determinar el número de
microorganismos coliformes totales presentes en productos alimenticios por medio de la técnica
de cuenta en placa.
El método permite determinar el número de microorganismos coliformes presentes en una
muestra, utilizando un medio selectivo (agar rojo violeta bilis) en el que se desarrollan bacterias
a 35 °C en aproximadamente 24 h, dando como resultado la producción de gas y ácidos
orgánicos, los cuales viran el indicador de pH y precipitan las sales biliares.

INTRODUCCIÓN
El grupo de los microorganismos coliformes es el más ampliamente utilizado en la microbiología
de los alimentos como indicador de prácticas higiénicas inadecuadas.
El uso de los coliformes como indicador sanitario puede aplicarse para:
La detección de prácticas sanitarias deficientes en el manejo y en la fabricación de los alimentos.
La evaluación de la calidad microbiológica de un producto, aunque su presencia no
necesariamente implica un riesgo sanitario.
Evaluación de la eficiencia de prácticas sanitarias e higiénicas del equipo.
La calidad sanitaria del agua y hielo utilizados en las diferentes áreas del procesamiento de
alimentos.
La demostración y la cuenta de microorganismos coliformes, puede realizarse mediante el
empleo de medios de cultivos líquidos o sólidos con características selectivas o diferenciales.

PLANTEO DEL PROBLEMA Y ABORDAJE

6. REACTIVOS Y MATERIALES
Reactivos
Los reactivos que a continuación se mencionan, deben ser grado analítico y cuando se indique
agua debe entenderse como agua destilada.

Soluciones diluyentes
✓ Solución reguladora de fosfatos (solución concentrada)
✓ Agua peptonada.
✓ Medio de cultivo Agar-rojo- violeta-bilis-lactosa (RVBA)

Materiales:
✓ Pipetas bacteriológicas para distribuir 10 y 1 ml (o si es necesario de 11 y 2 ml), con tapón
de algodón.
✓ Las pipetas pueden ser graduadas en volúmenes iguales a una décima de su volumen
total.
✓ Frascos de vidrio de 250 ml con tapón de rosca.
✓ Tubos de 16 X 150 mm con tapón de rosca.
✓ Utensilios esterilizables para la obtención de muestras: cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas,
espátulas, etc.
✓ Cajas Petri.
Todo el material e instrumentos que tengan contacto con las muestras bajo estudio debe
esterilizarse mediante:
✓ Horno, durante 2 h a 170 - 175°C, o 1 h a 180°C;
✓ En autoclave, durante 15 minutos como mínimo a 121 ± 1,0°C.
El material de vidrio puede sustituirse por material desechable que cumpla con las
especificaciones deseadas.
La preparación de la muestra debe ser de acuerdo a lo establecido en la NOM-110-SSA1-1994
"Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico".
Duración del procedimiento.
En general, las diluciones de la muestra deben ser preparadas inmediatamente antes del análisis
y éstas deben ser usadas para inocular el medio de cultivo dentro de los 20 minutos posteriores
a su preparación. 9. Concordancia con normas internacionales Esta norma es técnicamente
equivalente a la Norma ISO 6887-1983 (E) Microbiology General guidance for the preparation of
dilutions for microbiological examination. International Organization for Standardization.

PROCEDIMIENTO

1. Colocar en cajas Petri por duplicado 1 ml de la muestra líquida (lechuga) directa o de la

dilución primaria, utilizando para tal propósito una pipeta estéril.
2. Repetir el procedimiento tantas veces como diluciones decimales se requiera sembrar,
utilizando una pipeta estéril diferente para cada dilución.
3. Vertir de 15 a 20 ml del medio RVBA fundido y mantenido a 45 ± 1,0°C en baño de agua.
En el caso de utilizar cajas de Petri de plástico se vierte de 10 a 15 ml del medio.
4. El tiempo transcurrido entre la preparación de la dilución primaria y el momento en que se
vierte el medio de cultivo, no debe exceder de 20 minutos.
5. Mezclar cuidadosamente el inóculo con el medio con seis movimientos de derecha a
izquierda, seis movimientos en el sentido de las manecillas del reloj, seis movimientos en
el sentido contrario al de las manecillas del reloj y seis de atrás para adelante, sobre una
superficie lisa y nivelada.
6. Permitir que la mezcla solidifique dejando las cajas Petri reposar sobre una superficie
horizontal fría.
7. Preparar una caja control con 15 ml de medio para verificar la esterilidad.
8. Después de que está el medio completamente solidificado en la caja, verter
aproximadamente 4 ml del medio RVBA a 45 ± 1,0°C en la superficie del medio inoculado.
Dejar que solidifique.
9. Invertir las placas y colocarlas en la incubadora a 35°C, durante 24 ± 2 horas.
 10. Después del periodo especificado para la incubación, contar las colonias con el contador
de colonias.
11. Seleccionar las placas que contengan entre 15 y 150 colonias.
12. Las colonias típicas son de color rojo oscuro, generalmente se encuentran rodeadas de
un halo de precipitación debido a las sales biliares, el cual es de color rojo claro o rosa, la
morfología colonial es semejante a lentes biconvexos con un diámetro de 0,5 a 2,0 mm.

RESULTADOS
Cálculo del método
Placas que contienen entre 15 y 150 colonias características. Separar las placas que contienen
el número antes mencionado de colonias características en dos diluciones consecutivas. Contar
las colonias presentes.
Calcular el número de coliformes por mililitro o por gramo de producto, multiplicando el número
de colonias por el inverso de la dilución correspondiente, tomando los criterios de la NOM-092-
SSA1-1994. Método para la Cuenta de Bacterias Aerobias en Placa.
Placas que contienen menos de 15 colonias características. Si cada una de las placas tiene
menos de 15 colonias características, reportar el número obtenido seguido de la dilución
correspondiente.
Placas con colonias no características. Si en las placas no hay colonias características, reportar
el resultado como: menos de un coliforme por 1/d por gramo, en donde d es el factor de dilución.
Informe de la prueba Informar:
UFC/g o ml en placa de agar rojo violeta bilis, incubados a 35°C durante 24 ± 2 h.
En caso de emplear diluciones y no observar crecimiento, informar utilizando como referencia la
dilución más baja utilizada, por ejemplo dilución 10-1.
En caso de no observar crecimiento en la muestra sin diluir se informa: "no desarrollo de
coliformes por ml".
CÁLCULOS
Se llevo a cabo el conteo de colonias en nuestras placas,
Y obtuvimos los siguientes datos:
DILUCION MUESTRA 1 MUESTRA 2

10-1

10-2

10-3
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
No se obtuvieron los resultados esperado durante esta practica, pero si se pudo presenciar unas
pocas colonias en nuestras placas.

CONCLUSIONES
Para concluir la presente practica, podemos decir que quizás nos fallo hacer en algún paso de
nuestro procedimiento por eso no obtuvimos los resultados esperados.
Pero sin duda alguna comprendimos el objetivo de la norma que se uso el cual es la NORMA
OFICIAL MEXICANA NOM-113-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. MÉTODO PARA LA
CUENTA DE MICROORGANISMOS COLIFORMES TOTALES EN PLACA.

BIBLIOGRAFÍA

→ Director General, José Meljem Moctezuma. (10 de mayo de 1995). NORMA

Oficial Mexicana NOM-113-SSA1-1994, Bienes y servicios. Método para la
cuenta de microorganismos coliformes totales en placa. . 08-06-2022, de
Secretaría de Salud Sitio web:
http://www.ordenjuridico.gob.mx/Documentos/Federal/wo69536.pdf

→ El Director General de Control Sanitario de Bienes y Servicios, José Meljem

Moctezuma. (10 de mayo de 1995). NORMA Oficial Mexicana NOM-110-
SSA1-1994, Biene. 09-06-2022, de e Control Sanitario de Bienes y Servicios
Sitio web:
http://www.ordenjuridico.gob.mx/Documentos/Federal/wo69533.pdf