Guía de Bioquímica Laboratorio

Laboratorio de Bioquímica
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
Facultad de Química Farmacéutica

Biológica
MANUAL DE LABORATORIO DE
BIOQUÍMICA
Elaborado por:
Dra. Yolanda Cocotle Ronzón
Dra. Minerva Hernández Lozano
M.C. Marcos Fernando Ocaña Sánchez
Dr. Alberto Sánchez Medina
M.C. Gabriel Arturo Soto Ojeda
Dra. Alma Vázquez Luna
Xalapa de Enríquez, Veracruz 2020
Academia de Bioquímica y Biología Molecular
1
ÍNDICE
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................... 1
Objetivo General .............................................................................................................. 2
Objetivos Particulares ..................................................................................................... 2
AGUA ................................................................................................................................ 4
PRÁCTICA No. 1 ........................................................................................................... 7
DETERMINACIÓN DE pH y pKA EN SOLUCIONES. ................................................... 7
PRÁCTICA No. 2 ......................................................................................................... 11
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES AMORTIGUADORAS. ........................................ 11
CARBOHIDRATOS ......................................................................................................... 15
PRÁCTICA No. 4 ......................................................................................................... 18
IDENTIFICACION GENERAL DE LOS CARBOHIDRATOS. ...................................... 18
REACCIONES CARACTERÍSTICAS........................................................................... 18
PRÁCTICA No. 5 ......................................................................................................... 24
IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA24
PRÁCTICA No. 6 ......................................................................................................... 27
CUANTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS. ............................................................... 27
AMINOÁCIDOS ............................................................................................................... 31
Y 31
PÉPTIDOS ...................................................................................................................... 31
AMINOÁCIDOS Y PÉPTIDOS......................................................................................... 32
PRÁCTICA No. 7 ......................................................................................................... 34
IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA. ... 34
PROTEÍNAS .................................................................................................................... 41
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA .............................................................................. 44
PRÁCTICA No. 8 ......................................................................................................... 44
IDENTIFICACIÓN GENERAL DE PÉPTIDOS Y PROTEÍNAS .................................... 44
PRÁCTICA No. 9 ......................................................................................................... 50
CRISTALIZACIÓN DE LA ALBÚMINA DE HUEVO .................................................... 50
PRÁCTICA No. 10 ....................................................................................................... 53
CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS ........................................................................... 53
ENZIMAS ........................................................................................................................ 57
PRÁCTICA No. 11 ....................................................................................................... 61
2
EFECTO DE LOS INHIBIDORES ENZIMÁTICOS SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA

CATALASA. ................................................................................................................ 61
PRÁCTICA No. 12 ....................................................................................................... 67
EFECTO DEL SUSTRATO, ENZIMA Y LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD
ENZIMÁTICA. . ............................................................................................................ 67
PRÁCTICA No. 13 ....................................................................................................... 70
EFECTO DEL pH Y LA TEMPERATURA SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE
LA UREASA. ............................................................................................................... 70
LÍPIDOS .......................................................................................................................... 76
PRÁCTICA No. 14 ....................................................................................................... 78
IDENTIFICACIÓN GENERAL DE LOS LÍPIDOS. ........................................................ 78
PRÁCTICA No. 15 ....................................................................................................... 74
EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DEL COLESTEROL ........................................... 74
ÁCIDOS NUCLÉICOS ..................................................................................................... 79
PRÁCTICA No. 16 ....................................................................................................... 82
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DEL ADN ........................................................... 82
VITAMINAS ..................................................................................................................... 86
PRÁCTICA No. 17 ....................................................................................................... 87
DETERMINACION DE CAROTENOS y DETERMINACION DE VITAMINA C EN
ALIMENTOS. ............................................................................................................... 87
ANEXOS ................................................................................ ¡Error! Marcador no definido.
1. PREPARACIÓN DE REACTIVOS ........................................................................... 91
2. REGLAMENTO INTERNO DE LA FACULTAD DE QFB……………………………....92
BIBLIOGRAFÍA ............................................................................................................... 98
3
EVALUACIÓN:
Técnicas Porcentaje
• Evaluación de conocimientos y habilidades del
pensamiento:
60 %
a) Examen parcial.
b) Reportes de prácticas.
• Evaluación de habilidades de ejecución y actitudes:
a) Pruebas de ejecución, escala, guías de
observación, asistencia. 40 %
Corresponde al 40 % del curso teórico 100 %
INVESTIGACIÓN POR PRÁCTICA:
Incluirá una investigación documental para el marco teórico acompañada del

diagrama de trabajo. Incluirán fundamentos o conceptos manejados en la sesión,
así como una justificación del uso de los reactivos y métodos empleados en la
práctica acompañados de sus respectivas citas bibliográficas.
PRÁCTICA:
Deberá incluir parte de la investigación realizada previamente. Si existen dos o más

trabajos individuales iguales no tendrán valor en la evaluación. La práctica completa
para ser válida deberá incluir los siguientes apartados:
1) Titulo
2) Objetivo
3) Resumen
4) Introducción
5) Marco teórico
6) Material y método
7) Resultados
4
8) Discusión
9) Conclusión
10) Cuestionario
11) Bibliografía
ACTIVIDADES DURANTE LA PRÁCTICA:
Comprende la realización de la práctica de acuerdo con el diagrama de trabajo

propuesto. Se considerará tanto la forma de trabajar, como la disposición de trabajo
en equipo, el cumplimiento en el horario establecido. Material, puntualidad, y
limpieza durante la realización de las prácticas. No se permitirá abandonar el
laboratorio a los integrantes del equipo hasta que recojan su material y limpien la
mesa.
CUESTIONARIO:
Se entregarán como parte de la práctica. La bibliografía utilizada para obtener las

respuestas también se incluirá en la práctica.
5
INTRODUCCIÓN
La Bioquímica es una ciencia joven que hasta hace unas décadas no se le
consideraba por derecho propio una ciencia sino una rama de alguna otra como la Fisiología
o la Química. Hoy el progreso que esta ciencia ha alcanzado ha enriquecido de manera
notable el entendimiento de las bases de la vida y ha abierto nuevas áreas de interés como
son la diferenciación celular, la evaluación, el comportamiento y la memoria.
No obstante que los organismos vivos e incluso las células individuales que los constituyen
tienen una gran complejidad, comparten ciertas características unificadas como es el hecho
de que se usan los mismos tipos de biomoléculas y todos consumen energía. Por ello los
seres vivos pueden estudiarse con los métodos de la Química, Física y las disciplinas
aparentemente sin relación con la Bioquímica pueden contestar importantes preguntas en
esta área de la ciencia.
La experiencia educativa denominada Laboratorio de Bioquímica que se imparte en la

Facultad de la Universidad Veracruzana tiene, al igual que todas las experiencias
educativas que integran el plan de estudios de esta licenciatura, como uno de los principales
objetivos que los alumnos desarrollen conocimientos, habilidades, destrezas, actitudes y
valores necesarios para adquirir un pensamiento lógico, crítico y creativo, este manual tiene
el fin de contribuir a ello.
El contenido hace énfasis en la estructura y dinámica de importantes componentes de la

célula y se encuentra divido por temas acorde al programa de estudios de la parte teórica
cada uno contempla una serie de prácticas que además de proporcionar el fundamento de
la parte experimental incluye un breve cuestionario para reforzar los conocimientos y cada
practica a realizar ha sido adaptada para resaltar conceptos, principios y pruebas concretas
representativas de la notable unidad bioquímica que exhiben todas las formas de vida.
En la parte final de este trabajo se incluye un anexo en donde se encuentran las

metodologías para la preparación de reactivos y soluciones a utilizar en cada práctica,
además de las consideraciones necesarias sobre el control de calidad de equipos y material
del laboratorio.
1
Objetivo General
Que el alumno adquiera conocimientos y desarrolle habilidades, destrezas, actitudes y

valores necesarios para favorecer el trabajo responsable individual y en equipo, adquiriendo
un pensamiento lógico, crítico y creativo y adquieran las competencias y habilidades propias
de su formación en el área de la Bioquímica.
Objetivos Particulares
Que el alumno:
• Realice una serie de prácticas que le permitan identificar las características

fisicoquímicas y bioquímicas de las biomoléculas.
• Desarrolle habilidades para aprender a utilizar el método científico como una
herramienta en la identificación, análisis y la solución de problemas.
• Fortalezca actitudes de compromiso y apertura mediante el trabajo en equipo.
2
Agua
3
AGUA
A causa de su ubicuidad el agua La mayor electronegatividad del
es considerada con frecuencia un líquido oxígeno con respecto al hidrógeno
inerte y meramente destinada a llenar los determina una distribución asimétrica de
espacios en los organismos vivos. Pero, la carga eléctrica en torno al átomo de
en realidad el agua es una sustancia de oxígeno y por lo tanto un déficit
gran reaccionabilidad con propiedades electrónico en torno a la de hidrógeno.
poco frecuentes, que la diferencia tanto Todo ello hace que la molécula de agua
física como químicamente de los líquidos sea un dipolo eléctrico.
corrientes.
Una importante consecuencia de la
El agua es la biomolécula más polaridad de la molécula de agua es la
abundante en el ser humano. Constituye atracción de las moléculas de agua por
un 65- 70% del peso total del cuerpo, este otras. La atracción entre una carga
contenido debe mantenerse próximo a parcialmente positiva del átomo de
esos valores pues de lo contrario al fallar hidrógeno y una molécula de agua, una
la homeostasis, el organismo se ve parcialmente negativa del átomo de
abocado a situaciones patológicas. La oxígeno y otra, produce un puente de
importancia del estudio de esta hidrógeno.
biomolécula radica en el hecho de que
prácticamente la totalidad de las
reacciones bioquímicas del organismo
tiene lugar en el seno del agua.
104.5 °C
La estructura de la molécula del
agua (H2O) tiene carácter tetraédrico, con
el átomo de oxígeno en el centro y los dos
átomos de hidrógeno dispuestos en dos
de los vértices de dicho tetraedro,
quedando los otros dos restantes Figura 1.1
ocupados por los electrones no
Ángulos entre los enlaces covalentes de
compartidos. El ángulo formado entre los
la molécula de agua.
dos átomos de hidrógeno es de 104.5°
mientras que la distancia de enlace entre
el oxígeno e hidrógeno es de 0.096nm.
4
La estructura del agua, con la • Disolvente de moléculas

consiguiente capacidad de formar anfipáticas: se lleva a cabo por la
puentes de hidrogeno va a reconstituir el formación de micelas.
fundamento de las propiedades físicas y • Disolvente de compuestos polares
químicas del agua. Estas son: de naturaleza no iónica: gracias a
la capacidad para establecer
• Elevada temperatura de ebullición:
puentes de hidrógeno.
100 °C.
• Elevada tensión superficial:
• Densidad máxima de 4 °C: basada
determinada por una elevada
en la presencia de puentes de
cohesión entre las moléculas de
hidrógeno. Se debe al aumento
su superficie tendiendo a que la
del volumen de agua sólida con
superficie libre de agua sea
respecto a la líquida.
mínima.
• Elevado calor específico: (1 cal/g x
• Transparencia: no afecta
°C) calor necesario para elevar la
directamente al ser humano, pero
temperatura de 1 g de líquido en 1
es importante para que se pueda
°C.
producir el proceso de la
• Elevado calor de evaporización:
fotosíntesis a la masa oceánica y
(536 cal/g) calor necesario para
fondos marinos.
vaporizar 1 g de líquido.
• Elevada conductividad calorífica: Ionización del agua
permite una conducción de calor
Debido a la ionización de algunas
adecuada en el interior corporal
moléculas de agua, el agua pura no solo
(termorregulación)
consiste en H2O, también tiene una
• Elevada constante dieléctrica: (K=
concentración baja de iones hidronio, otra
80 a 20 °C), implica que es un
concentración igual de iones hidróxido. El
buen disolvente de compuestos
ion hidronio algunas veces escrito como
iónicos.
H3O+ realmente tiene varias moléculas de
• Capacidad de hidratación y
agua asociadas a él. Es más conveniente
solvatación de iones: debido al
referirnos al ion hidronio como protones
carácter bipolar sus moléculas
representando así: H+.
pueden rodear distintos iones
aislándolos del resto:
5
De acuerdo con el concepto de Bronsted- La ionizacion del agua pura produce

Lowry un ácido es un donador de protones 10−7 M H + y 10−7 M OH −.
y una base un aceptador.
Ácido- base
La ionización del agua puede ser
Los valores de [H + ] de la mayor parte de
analizada cuantitativamente. La constante
las disoluciones son muy pequeñas, como
de equilibrio para ionización del agua está
para compararse. Una magnitud más
dada por:
práctica es la conocida como pH.
[H +][OH]
Keq =
H2 O
Porque la masa de 1 L de agua es 1000 g pH = −log [H + ]
y la masa de 1 mol de agua es de 18 g, el

La relación entre el pH de una disolución
agua tiene una concentración de
y las concentraciones de un ácido y de su
aproximadamente 55.5 M. por lo que:
base conjugada pueden deducirse con la
Keq(55.5 M) = [H+][OH] ecuación de Henderson- Hasselbach:
La constante de equilibrio para la log [A− ]

pH = pK +
[HA]
ionización del agua es de 1.8 x 10-16 a 25
°C debido a que la constante de equilibrio Tampones:
es tan pequeña, la concentración de agua
Los tampones estabilizan el pH de
permanece casi inalterada por ionizacion.
una solución.
Sustituyendo la Keq queda:
La capacidad de un tampón para resistir
1.0 × 10−14 𝑀2 = [𝐻 + ][𝑂𝐻− ]
las variaciones de pH cuando se añade
A 25 °C tiene un valor de 1 × 10−14 M2 , ácido o base es directamente
constante designada como Kw. proporcional a la concentración del par
conjugado ácido- base [𝐻𝐴] + [𝐴− ] . Es
Kw = [H + ][OH − ] = 1 × 10 −14
M 2
máxima cuando pH=pK y decrece al variar
Tomando la raíz cuadrada de los el pH desde dicho punto.
términos:
[𝐻 + ] = 1.0 × 10−7 𝑀
6
ÁREA ACADÉMICA TÉCNICA
FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA BIÓLOGICA
LABORATORIO DE BIOQUIMÍCA
PRÁCTICA No. 1
DETERMINACIÓN DE pH y pKA EN SOLUCIONES.
Evaluación Realización de la práctica
Bitácora
Reporte
Duración de la práctica 3 horas (dependiendo del número de potenciómetros disponibles).
Medidas de seguridad El alumno debe portar su equipo y material de seguridad y atender al
reglamento del laboratorio
Disposición de los residuos De acuerdo con el reglamento interno de la facultad en el anexo 1. En
caso de tener duda preguntar al profesor responsable de la
experiencia educativa.
Objetivo: biológicas diferentes, es importante poder

predecir el grado de disociación de un ácido
Que el alumno realice una curva de
a cualquier pH. Es conveniente modificar la
titulación de aminoácidos y a partir de ella
expresión de 𝐾𝑑 en una forma análoga al pH,
determine el pK y el pH en el que se
el pK.
encuentra su poder amortiguador.
pK = − log K d
Fundamento:
Ahora es posible usar la ecuación de
Los ácidos difieren en el grado en que
Henderson- Hasselbalch para predecir el
se disocian en agua. Los ácidos fuertes se
grado de disociación del medio:
disocian por completo; los ácidos débiles no.
La probabilidad de que un ácido se disocie se [A− ]
pH = pK + log [HA]
define por su constante de disociación, K d :
[H + ][A] Los aminoácidos tienen un grupo amino que

K d= les permite actuar como base y combinarse
[HA]
con ácidos; y un grupo carboxilo les permite
Debido a que las formas protonadas y no
combinarse con bases. Los aminoácidos y
protonadas de un ácido tienen propiedades
7
las proteínas sirven de amortiguadores y 4. Repita el paso 3 hasta llegar a un pH de

pueden resistir a cambios de acidez y de 12 aproximadamente.
alcalinidad. 5. Haga lo mismo (pasos del 1 a 4) para
los otros aminoácidos.
Materiales y reactivos
6. Haga una gráfica de pH contra
Material de laboratorio volumen en mL de NaOH gastados
2 vasos de precipitado de 100 mL luego de tomar en cuenta que cada
2 vasos de precipitados de 150 mL 0.1 mL de NaOH diluido en 20 mL
1 pipeta graduada de 1 mL aumenta la concentración de 𝑂𝐻 − en
1 bureta 50 mmoles.
1 agitador magnético 7. Localiza en la gráfica los diferentes pK
Piceta de los aminoácidos.
8. Identifica a que pH tienen poder
Reactivos amortiguador.
20 ml por equipo de los siguientes

Determinación de la capacidad buffer
aminoácidos:
La capacidad buffer es la cantidad de
Glicina 0.025 M pH 2.0
base fuerte requerida para alterar el pH
Lisina 0.025 M pH 2.0
de la disolución reguladora, en una
Ácido aspártico 0.025 M pH 2.0
unidad de pH:
NaOH 1M
db
C. B =
dpH
Equipo
Siendo dpH el incremento de pH
Potenciómetro
resultante de la adición de un volumen 𝑑𝑏
de base.
Procedimiento
1. Ponga su disolución en un vaso,
Determinación de pKa:
introduzca los electrodos del
1. Ponga 20 mL de la solución de glicina en
potenciómetro y disponga una bureta
un vaso de precipitado de 100 mL.
con disolución de NaOH 1N y un
2. Proceda a la medición del pH.
agitador magnético, dentro del vaso.
3. Añada 0.1 mL de NaOH 1.0 M. agitar el
Determine el pH inicial.
vaso y volver a medir el pH anotando los
2. Ponga el agitador en marcha sin que
resultados. Determinación de la capacidad
este golpee los electrodos, y agregue
Buffer.
un volumen de NaOH 1N medido
8
exactamente en la bureta (1 mL). iguales (1 mL) y anote los valores de

Anote el pH resultante. Repita las pH correspondientes, hasta obtener
adiciones de base, en volúmenes por lo menos cinco lecturas.
HOJA DE RESULTADOS
Nombre: Grupo: Fecha:
1. Determinación de pKa:
mL de NaOH agregados pH obtenido

Gly Lys Asp
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
1.0
2. Realice una gráfica de los resultados (pH contra mL de NaOH gastados).

3. Calcule el pK y el pH en el cual se encuentra la máxima capacidad amortiguadora.
4. Determine la capacidad buffer.
Discusión de resultados:
Conclusión:
Cuestionario:
1. Indique el pKa de los siguientes ácidos:
a) Ácido pirúvico
b) Ácido láctico
c) Ácido benzoico
d) Ácido oxálico
9
e) Ácido succínico
f) Ácido carbónico
2. Indique el nombre completo, pKa y peso molecular (o fórmula) de los siguientes
compuestos usados como reguladores de pH en bioquímica: TRIS, CAPS, MES, TES y
tricita.
3. ¿Para qué valores de concentración de los componentes de un buffer, tiene este la máxima
capacidad amortiguadora?
4. ¿Por qué los aminoácidos actúan como reguladores del pH?
5. Defina ¿Qué es la capacidad buffer?
Referencias Bibliográficas:
Libro: apellidos autor; Nombre. (Año).Titulo. Editorial. Edición. País. Página consultada.
Página de internet: Autor o responsable. Título. Fecha de última actualización. Liga: http://www.
10
PRÁCTICA No. 2
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES AMORTIGUADORAS.
Bitácora
Reporte
Duración de la práctica 3 horas (dependiendo del número de potenciómetros disponibles).
Objetivo:
Que el alumno aprenda a utilizar la una solución que será resistente a los
ecuación de Herderson- Hasselbalch y por cambios bruscos de pH.
medio de esta prepare una solución
Cuando el pH de la solución se aproxima al
amortiguadora.
valor del pK del Ácido este comienza a
Fundamento: disociarse. Los protones liberados en el
proceso reemplazan a muchos de los
Las soluciones amortiguadoras son
titulados por la base. Asi una solución que
soluciones que conservan su pH con
contiene un ácido débil resiste cambios en el
tenacidad a pesar de que se les añadan
pH mejor que un volumen igual de agua
cantidades importantes de ácidos o álcalis.
debido a que el efecto amortiguador depende
Están formadas por una mezcla de ácidos
de los cambios en la disociación de un ácido
débiles y su base conjugada. Al hacer la
débil, un amortiguador es más eficaz dentro
mezcla entre un ácido débil y su sal en las
de los límites del pH, donde estos cambios
proporciones adecuadas, (estas
son más grandes, esto es, cerca del pK del
proporciones se calculan con la ecuación de
ácido.
Henderson-Hasselbach) logramos obtener
11
Procedimiento: pH mayores a 6 usar la sal di básica de

fosfatos.
Preparación de solución amortiguadora.
4. Aforar a 100 mL con agua destilada y
1. Al recibir su problema, estudie las verifique nuevamente el pH.
condiciones que se piden y buscar un
Determinación de la capacidad Buffer.
buffer cuyo pKa sea adecuado y aplicando
la ecuación de Henderson-Hasselbach, La capacidad buffer es la cantidad de base
calcule las cantidades de ácido y base fuerte requerida para alterar el pH de la
conjugada que debe usar para preparar disolución reguladora, en una unidad de pH:
100 mL de disolución.
d𝑏
2. Pesar las cantidades que calculó o mida C. B. = dpH
los volúmenes adecuados y disuelva.

Siendo dpH el incremento de pH resultante
Afore aproximadamente a 75 mL.
de la adición de un volumen de db de base.
3. Transferir esta disolución a un vaso de
precipitados de 150 mL y verifique el pH 5. Ponga su disolución en un vaso,
en un potenciómetro previamente introduzca los electrodos del
calibrado y ajustar la temperatura a las potenciómetro y disponga una bureta con
condiciones de trabajo. Si el pH no es disolución de NaOH 1 N medido
exactamente el pedido, ajústelo exactamente en la bureta (1ml). Anote el
agregando el componente (ácido o base), pH resultante. Repita las adiciones de
que sea necesario para subir o bajar el pH base, en los volúmenes iguales (1 ml) y
hasta el valor requerido. Para valores de anote los valores de pH correspondientes,
hasta obtener por lo menos cinco lecturas.
Disposición de residuos
Las soluciones amortiguadas pueden ser vertidas en la tarja; los sobrantes de NaOH deben
recuperarse en frascos ámbar con tapa para ser reutilizados.
12
HOJA DE RESULTADOS
a) Preparación de soluciones amortiguadoras:

1. Problema # ______ pH requerido ______ concentración molar _____ volumen final _____
ml.
2. Cálculos efectuados.
3. Cantidades por pesar o medir de A- y HA
4. ¿Cuál es el pH de la solución inicial y cuál el valor final de pH?
5. ¿Porqué para valores de pH cercanos a 5 se usan acetatos y para valores cercanos a 7
fosfatos?
Discusión.
Conclusiones.
Referencias Bibliográficas.
Libro: apellidos autor; Nombre. (Año). Titulo. Editorial. Edición. País. Página consultada.
13
Carbohidratos
14
CARBOHIDRATOS
La palabra se refiere a compuestos respiración. Segundo, dentro de la célula
con la fórmula general Cn (H2 O)n , sin viva ciertos carbohidratos son unidades
embargo, solo el azúcar simple o integrantes de nucleótidos y de ácidos
monosacárido presenta esta fórmula. Los nucleicos.
otros tipos de carbohidratos, oligosacáridos
y polisacáridos están basados en las El término carbohidrato literalmente
unidades de monosacáridos y tienen quiere decir hidrato de carbono.
formulas generales ligeramente diferentes. Químicamente, los azucares son aldehídos
Los oligosacáridos están formados por y cetonas polihidroxilados y sus derivados
pocos monosacáridos unidos, los por reducción, oxidación, sustitución o
polisacáridos están formados por muchos polimerización.
monosacáridos unidos. La reacción de Los azúcares sencillos abundan en
adición de monosacáridos para hacer las frutas (glucosa, fructosa y sacarosa) y
crecer la molécula del carbohidrato lleva a en la leche (lactosa), en cambio sus
la perdida de agua por cada nueva unión, polímeros abundan en los cereales,
dando razón a la diferencia en la fórmula tubérculos y legumbres (almidón), hígado y
general. carnes (glucógeno).
Las principales funciones biológicas
Están íntimamente relacionados en
pueden ser:
los procesos vitales, primero desempeñan
• Constituyen el material energético
un papel clave en las relaciones
de uso inmediato: la glucosa es el
energéticas de todos los organismos. Por
principal carbohidrato usado como
una parte son productos principales que se
fuente de energía.
originan de la captura de energía solar
• Pueden constituir un material
durante el proceso de fotosíntesis, esto es
energético de reserva: el almidón
que la luz solar es utilizada para convertir
en vegetales y el glucógeno en
la poca energía de las ligaduras del CO2 y
animales, se acumulan en
del agua hasta ligaduras de más energía
determinadas células para su
de los carbohidratos. Por otra parte todas
utilización en el momento
las células son capaces de obtener energía
oportuno.
para sus actividades características, a
• Cumplen funciones estructurales:
partir de la degradación de estos
la celulosa y otros azúcares
carbohidratos durante el proceso de la
15
fibrosos constituyen la pared Por sus propiedades químicas se clasifican

externa de las células vegetales. en reductores, que es cuando conservan
un grupo aldehído o cetona libre (maltosa,
Clasificación de los carbohidratos lactosa) y no reductores, cuando no tienen
De acuerdo con su naturaleza un grupo cetona o aldehído libre
química: monosacáridos simples, (sacarosa).
monosacáridos derivados, oligosacáridos,
polisacáridos simples, polisacáridos
Monosacárido Monosacárido
derivados.
Monosacáridos simples: son aldehídos o No reductor
cetonas polihidroxilados. Los
monosacáridos que tienen un grupo
aldehído se denominan aldosas y los que Monosacárido Monosacárido
tienen un grupo cetona que se denominan Reductor

cetosas. Son sólidos blancos, cristalinos, Figura 2.1 Representación de los azúcares
solubles en agua y con sabor dulce. Suelen reductores y no reductores. El círculo
desviar el plano de la luz polarizada, representa su grupo cetona o aldehído.
reducen el ión cúprico (azul) a cuproso
(rojo). Polisacáridos simples: son polímeros
lineales o ramificados de monosacáridos
Monosacáridos derivados: se forman por simples. Según sus funciones biológicas se
modificación química de los agrupan en polisacáridos de reserva
monosacáridos simples por reducción (se (amilosa o almidón, amilopectina,
forman desoxiazúcares: desoxirribosa y los glucógeno) y polisacáridos estructurales
alditoles: glicerol), oxidación (se forman (celulosa).
azúcares ácidos: ácido glucorónico) o
sustitución (se forman aminoazúcares: Polisacáridos derivados: son polímeros de
glucosamina). monosacáridos derivados. Pueden estar
constituidos por un solo monómero, por
Oligosacáridos: se forman por dos monómeros repetidos en secuencia
condensación de 2 o más monosacáridos alternadamente o por más componentes.
simples. En general reacciona el grupo Los polisacáridos más complejos son los
aldehído de un monosacárido con un grupo constituyentes se las paredes bacterianas
alcohol de otro originando un disacárido. (ácido teicocico y peptidoglicano).
16
Todos los monosacáridos simples tienen lineal: el primero o el segundo tiene la

estructura química semejante. Los átomos función, aldehído o cetona y los demás
de carbono suelen formar una cadena están hidroxilados.
17
PRÁCTICA No. 4
IDENTIFICACION GENERAL DE LOS CARBOHIDRATOS.
REACCIONES CARACTERÍSTICAS

Bitácora
Reporte
Duración de la práctica 3 horas
reglamento del laboratorio.
Objetivo: Fehling) o en la reducción de Ag1+, Bi2+ u otros

Determinar la presencia de carbohidratos iones.
mediante reacciones de identificación específicas. El tiempo que tarda en realizarse la
reducción a una temperatura controlada, da idea
Fundamento: del tipo de carbohidrato reductor, pero su
identificación precisa, requiere la formación de
La identificación y separación de derivados cuya forma cristalina y punto de fusión
carbohidratos es un problema analítico frecuente son determinables. Otros reactivos como el de
en bioquímica. Existen reactivos de carácter Seliwanoff, son relativamente específicos para
general, como el de Molisch, el cual permite identificar cetonas. Los reactivos de Bial y de la
identificar carbohidratos en general e incluso bencidina, son bastante específicos para
glucoproteínas. Otros reactivos dan prueba identificar pentosas.
positiva únicamente con carbohidratos reductores;
casi todos ellos se basan en la reducción del ión Prueba de Fehling: El grupo aldehído
Cu2+ con formación de ácido cuproso (Benedict, (grupos reducidos) es oxidado por un número de
18
reactivos. Una reacción usada para distinguir dando derivados de furfural, que se condensan
azúcares reductores de esta manera es la prueba con resorinol para formar un complejo rojo; por lo
de Fehling. El tartrato une cobre para prevenir la tanto, se debe evita un calentamiento prolongado
formación del hidróxido cúprico insoluble que de la muestra que se está estudiando.
ocurre cuando el cobre libre está presente en la
solución alcalina. La formación del óxido cuproso Prueba de Bial para pentosas: Cuando se
insoluble rojo es el criterio de una reacción calientan pentosas con HCl concentrado se forma
positiva. La prueba de Fehling de ninguna manera furfural, que se condensa con orcinol en presencia
específica. Los aldehídos, en general, deben de iones férricos para dar un color verde-azuloso.
reducir este reactivo. La reacción no es absolutamente específica para
Otras sustancias que reaccionan en esta las pentosas, ya que el calentamiento prolongado
prueba son: fenoles, aminofenoles, benzoina, de algunas hexosas produce hidroximetil furfural
ácido úrico, catecol, ácido fórmico, que también reacciona con orcinol dando
hidrazobenzeno, fenilhidrazina, pirogalol y complejos coloreados.
resorcinol.
Prueba de Barfoed: El reactivo de Barfoed es
Prueba de Molisch: En la prueba de Molisch el débilmente ácido y sólo puede ser reducido por
ácido sulfúrico concentrado hidroliza enlaces monosacáridos. Si se deja hervir por largo tiempo
glucosídicos para dar monosacáridos que pueden existe la posibilidad de que hidrolice disacáridos
ser luego deshidratados dando furfural y sus dando así reacciones falsamente positivas. El
derivados. Estos productos se combinan luego precipitado de óxido cuproso es menos denso que
con α-naftol sulfonato originando un complejo en los métodos previos y se recomienda dejar el
púrpura. tubo hasta que el precipitado sedimente. El color
Esta reacción es general para los hidratos del óxido cuproso es también diferente, tendiendo
de carbono; pero algunos otros compuestos más al rojo ladrillo que al pardo naranja obtenido
orgánicos dan también furfural con ácido sulfúrico en la prueba de Benedict.
concentrado.
Prueba de Yodo: El yodo forma complejos
Prueba de Benedict: En la modificación de la coloreados de absorción con los polisacáridos; el
prueba de Fehling introducida por Benedict, se usa almidón da un color azul con yodo, mientras que el
únicamente una solución, lo cual la hace mucho glucógeno y el almidón parcialmente hidrolizado
más simple, con la ventaja adicional de que el reaccionan dando una coloración pardo-rojiza.
reactivo es más estable que el de Fehling.
Material y reactivos:
Prueba de Seliwanoff para cetosas: Las cetosas
se deshidratan más rápidamente que las aldosas Material de laboratorio
19
20 Tubos de ensaye 13 x 100 Prueba de Molisch:
4 Pipetas graduada de 10 ml MÉTODO:
4 Pipetas graduadas de 5 ml 1. En una serie de tubos de ensaye poner 1 mL de
1 Piceta las soluciones de los diferentes carbohidratos.
1 Gradilla 2. Añadir 2 gotas de reactivo de Molisch y
mezclar.
Perlas de vidrio 3. Verter con cuidado 0.6 ml de H2SO4
Algodón concentrado. Por las paredes del tubo hasta
Hielo que forme una capa bajo el agua.
Vidrios de reloj (diámetro de 9-12 cm). 4. La aparición de un color violeta-rojizo en la
superficie de separación de los líquidos
Reactivos significa una prueba positiva.
Ácido sulfúrico concentrado
HNO3 concentrado Prueba de Benedict:
NaOH diluido MÉTODO:
Clorhidrato de fenilhidrazina 1. En un tubo de ensaye poner 1 ml del reactivo
Solución de yodo de Benedict y 0.2 mL de las
Soluciones de carbohidratos 0.1M: soluciones de carbohidratos y el problema.
Glucosa, Maltosa, Sacarosa, Galactosa, Lactosa, 2. Calentar en baño maría a ebullición durante 5
Fructosa, Manosa, Xilosa, Dextrosa, Arabinosa, minutos.
Celulosa, Almidón 3. La aparición de un precipitado color amarillo,
Reactivo de Benedict verde o rojo indica una prueba positiva.
Reactivo de Seliwanoff
Reactivo de Bial Prueba de Seliwanoff para cetosas.
Reactivo de Fehling MÉTODO:
Reactivo de Molisch 1. A 0.2 mL de las soluciones de carbohidratos 0.1
M añadir 1 mL del reactivo de Seliwanoff.
Prueba de Fehling 2. Poner los tubos en baño María hirviendo y
MÉTODO: observar cada 5 min. Durante 15 min.
1. A 1 mL de la muestra (cada uno de los 3. Anotar el momento en el cual aparece color en
carbohidratos, incluido el problema), agregar 1 cada tubo, un color rojo indica la presencia de
mL de reactivo de Fehling. cetosas. El reactivo da un color verde con las
2. Hervir en baño maría durante 5 min. pentosas.
3. Comparar las cantidades de Cu2O (precipitado
rojo) formado en cada una de las muestras. Prueba de Bial para pentosas:
MÉTODO:
20
1. A 0.2 mL de las soluciones de carbohidratos 0.1
M, añadir 1 mL del reactivo de Bial. Prueba de Barfoed
2. Calentar en baño maría hirviente durante 15 MÉTODO:
min. 1. En un tubo de ensaye poner 0.3 mL del reactivo
3. Un resultado positivo da un color azul-verdoso. de Barfoed y añadir 0.16 mL de la solución de
Las hexosas producen un color amarillo pardo. cada azúcar; hierva por un minuto, deje reposar
y observar.
Prueba de yodo
MÉTODO:
1. Acidifique la muestra con HCl diluido, agregue
luego dos gotas de yodo y compare los colores
obtenidos con los de yodo en agua.
21
HOJA DE RESULTADOS
NOMBRE: ________________________________GRUPO: ________FECHA:______________
1.- Completa la siguiente tabla comparativa de resultados obtenidos en cada prueba.
Prueba/
Fehling Molish Benedict Seliwanoff Bial Yodo Barfoed
Solución
Fructosa
Glucosa
Galactosa
Manosa
Almidón
Sacarosa
Xilosa
Dextrosa
Maltosa
Lactosa
Problema
Discusión.
Conclusión.
Cuestionario:
1. ¿Qué errores pueden ser introducidos por aumento de la concentración de los reactivos? ¿Cómo
podrían ser corregidos?
2. Glucosa, manosa y fructosa forman la misma osazona. ¿Son los mismos tiempos de formación?
3. Celulosa, el compuesto orgánico más abundante en la biosfera es un homopolisacárido lineal
de D-glucosa. Sin embargo, los humanos no pueden digerirla. Explica por qué.
22
23
FACULTAD DE QUÍMICA FARMA CÉUTICA BIOLÓGICA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
PRÁCTICA No. 5
IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

Bitácora
Reporte
Objetivo: Los azúcares son retenidos o la fase

Que el alumno aplique la técnica de acuosa adherido a la placa y arrastrado por
cromatografía en capa fina para la la fase orgánica móvil.
separación e identificación de
carbohidratos.
Cada azúcar avanza desde su origen en
Fundamento: una longitud proporcional al
La cromatografía es una técnica desplazamiento de la fase orgánica, esta
analítica que permite separar sustancias de longitud se reseña mediante el parámetro
estructura química muy similar, como lo es Rf (relación de frentes):
en el caso de los carbohidratos. Se basa en
la distinta capacidad que tienen las distancia recorrida por el azúcar
Rf = distancia recorrida por el disolvente
sustancias para: arrastradas por una fase
móvil y ser retenidas por un soporte fijo, o
Antes de que el disolvente alcance
fase estacionaria.
el extremo de la placa, esta se extrae de la
24
cámara de cromatografía, se evapora y se Ver preparación de reactivos en la sección

revelan los azúcares. correspondiente.
Para identificar un azúcar desconocido, se
debe correr en la placa cromatográfica Procedimiento:
junto con patrones conocidos y se 1. Cortar los cromatofolios en tiras de
comparan los valores de Rf utilizando 4.5 x 6 cm. Marcar en ellos una
diferentes mezclas liquidas. El azúcar línea paralela al borde inferior del
problema corresponde al patrón cuyos rectángulo a una distancia de 1cm
valores de Rf sean idénticos en todos los del borde.
casos. 2. Colocar las muestras con ayuda de
Material y reactivos: tubos capilares. Las gotas deben
Material de laboratorio ser pequeñas para evitar que se
Cromatofolios cortados en tiras de 4.5 x 11 mezclen. Se aconseja colocarlas
cm. con una distancia de 1 cm entre
Tubos capilares. cada mancha. Se deben poner los
Vaso de precipitado de 250 ml. cuatro estándares y el problema.
Vidrio de reloj 3. Poner solventes al vaso hasta una
Parrilla de calentamiento altura aproximada de 0.5 cm. Tapar
inmediatamente con un vidrio de
Material biológico reloj o papel aluminio.
Jugo de frutas 4. Revisar que las placas están secas,
una vez así se pueden colocar
Reactivos hasta dos cromatofolios en un vaso
Soluciones 0.1 M de azúcares: sacarosa, de 400 mL.
glucosa, fructosa y lactosa (100 ml de c/u). 5. Para colocarlas debes destapar el
Mezcla de disolventes: a) isopropanol- vaso, colocarlas dentro de él y tapar
ácido acético-agua (3:1:1); b) butanol-ácido nuevamente.
acético-agua (4:1:2); c) agua-n-butanol- 6. Sacar los cromatofolios cuando el
ácido acético glacial (5:4:1); metanol- agua solvente alcanza una altura de 4.5
(9.5:0.5). cm.
Solución reveladora 7. Nebulizar con la solución
a) 1.23 g de p-anisidina + 1.66 g de ácido reveladora y calentar hasta la
ftálico en 100 ml de metanol; b) NaOH al aparición de manchas alargadas de
1% en etanol al 60% calentar dos minutos.
25
color morado que permitirán la

identificación de azúcares.
8. Determinar el Rf de cada estándar
y del problema, comparar los Rf
para saber que carbohidrato
contenía su problema.
HOJA DE RESULTADOS
1. Realizar un esquema de los resultados observados:

2. Calcular los Rf y determinar que carbohidrato contiene su muestra:
Discusión:
Conclusión:
Cuestionario:
1. ¿Cuáles son las ventajas de la cromatografía en capa fina con respecto a otros métodos
de separación e identificación de carbohidratos?
2. ¿Qué otros métodos analíticos pueden ser utilizados para identificación de carbohidratos?
Mencione ventajas y desventajas.
3. Buscar en la bibliografía los Rf y comparar con los resultados, discutir sobre ello.
26
FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA BIOLÓGICA
PRÁCTICA No. 6
CUANTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS.
Bitácora
Reporte
Objetivo: hidróxido, en la solución de Fehling se

El alumno aprenderá dos técnicas emplea el tartrato de sodio y potasio, el cual
para cuantificación de carbohidratos, por forma con el ión, tartrato cúprico soluble en
espectrofotometría y lactosa por titulación. agua. El color azul de las soluciones se
debe a la presencia de complejos del ión
Fundamento: cúprico.
Método volumétrico de Lane- Eynon El cambio del color azul a un
La propiedad reductora de la lactosa precipitado rojo ladrillo es una prueba
nos permite cuantificarla utilizando positiva para el grupo aldehído.
soluciones de cobre como lo es la solución
de Fehling. Método espectrofotométrico por DNS
La solución de Fehling es una El carbohidrato más común es la
solución alcalina del ión cobre (cúprico) la glucosa (C6H12O6), un monosacárido que
fuente de este ión es el sulfato de cobre. A se comporta como azúcar reductor
causa de que el ión cúprico forma un debido a que posee un grupo aldehído o
hidróxido soluble en solución básica, debe puede formar uno en solución. Este grupo
añadirse otro reactivo a la solución a fin de funcional, le permite actuar como un
evitar la precipitación del ión cobre como agente reductor, y es justamente esta
27
propiedad, lo que nos permite cuantificar Solución estándar de lactosa (2mg/mL).

este tipo de azúcares mediante el uso de Nota: medir el pH de esta solución, en
ácido dinitrosalicílico (DNS), un caso de no ser alcalino, alcalinizar con
componente aromático que reacciona NaOH.
con los azúcares reductores formando el Solución A de Fehling
ácido 3-amino-5-nitrosalicílico que Solución B de Fehling
absorbe la luz a 540 nm.
Estas reacciones se realizan en Procedimiento:
condiciones ligeramente alcalinas. Es a) método de Fehling
una prueba sumamente sensible para Titulación de las soluciones A y B de
detectar la presencia de carbohidratos. Fehling.
1. Medir con una pipeta volumétrica
Material y reactivos: 0.5 mL de solucion B y 0.5 mL de
Material de laboratorio solución A y pasar a un matraz
Matraz volumétrico de 100 mL. Erlenmeyer de 100 mL.
Pipetas volumétricas de 5 y 10 mL. 2. Añadir 10 mL de agua destilada y unas
Bureta. perlas de vidrio.
Embudo de filtración. 3. Calentar en parrilla a ebullición y agregar
Parrilla. poco a poco, con una bureta la solución
Matraces Erlenmeyer de 150 mL patrón de lactosa hasta la casi reducción
Pipetas graduadas de 10 mL del cobre.
Pinzas para bureta. 4. Añadir una gota de solución acuosa de
Soporte universal azul de metileno al 0.2% y continuar la
titulación hasta la desaparición del color
Material biológico azul.
Leche no deslactosada 5. Calcular el factor de Fehling para lactosa
Leche deslactosada de la siguiente forma:
F = V1 × 2 mg
Reactivos V1 = mL gastados de lactosa
Ácido acético glacial.
Solución saturada de acetato de plomo Preparación de la muestra
Solución saturada de sulfato de sodio 1. Colocar 20 mL de muestra en un
Solución acuosa de benzoato de sodio al matraz volumétrico de 100 mL con 25
2% mL de agua.
28
2. Añadir 6 mL de solución saturada de 8 0.7 0.3

acetato de plomo, 10 mL de solución 9 0.8 0.2
acuosa saturada de sulfato de sodio y 10 0.9 0.1
2 mL de ácido acético glacial y 11 1 0
mezclar. 12 p 0.2 0.8
Deje reposar 30 min. 13p 0.2 0.8
3. Aforar con agua a 100 mL, filtrar y
este filtrado colocarlo en una bureta y 3. Agregar 1 mL de reactivo de DNS a cada
titular como en las soluciones de tubo y agitar
Fehling. 4. calentar en un baño de agua en ebullición
4. Calcular la concentración de lactosa durante 5 minutos.
con la siguiente fórmula: 5. Enfriar en agua corriente y luego en baño
F×100
mg lactosa/100 mL muestra = de hielo.
V
6. Agregar 8mL de agua destilada a cada
F= factor de Fehling
tubo y agitar.
V= mL del filtrado gastados
7. Leer densidad óptica en cada tubo a 540
nm en el espectrofotómetro previamente
b) Determinación de azúcares
calibrado con el blanco (tubo1).
reductores por el método de DNS
1. Preparar 100 mL de una solución patrón
La muestra problema a analizar (1ml y una
de glucosa con una concentración de 1g/L.
dilución 1:100) se somete al mismo
2. Con la solución anterior preparar por
tratamiento que la curva patrón (tubos 12 y
duplicado la siguiente curva patrón:
13).
Solución A540
Tubo patrón Agua
1. Trazar una curva con las lecturas
(mL) (mL)
obtenidas de la curva estándar graficando la
1 0 1 0
absorbancia en el eje de las ordenadas y la
2 0.1 0.9
concentración de glucosa (calcularla para
3 0.2 0.8
cada tubo) en el eje de las abscisas.
4 0.3 0.7
2. Interpolar las lecturas obtenidas de los
5 0.4 0.6
tubos problema.
6 0.5 0.5
3. Expresar los resultados en mg de
7 0.6 0.4
glucosa/L
29
HOJA DE RESULTADOS
Gráfica:
Cálculos:
Método volumétrico de Lane- Eynon
Cantidad calculada:
Método del ácido dinitrosalicílico (DNS)
Cantidad calculada:
Discusión:
Conclusión:
Cuestionario:
1. ¿Por qué algunos azúcares son designados “reductores”?. Da ejemplos con estructuras.
2. ¿Qué métodos se utilizan para la determinación de azúcares reductores además del

método empleado en la práctica?
3. De acuerdo con la naturaleza química de los carbohidratos a que clasificación pertenecen

la sacarosa y la lactosa.
Libro: apellidos autor; Nombre. (Año). Título. Editorial. Edición. País. Página consultada.
30
AMINOÁCIDOS
Y
PÉPTIDOS
31
AMINOÁCIDOS Y PÉPTIDOS
Los aminoácidos son moléculas Todos los aminoácidos proteicos

orgánicas que, como indica su nombre tienen el mismo diseño estructural. Los
contiene al menos un grupo amino (-NH2) grupos amino y carboxílico están unidos a
y otro ácido (-COOH). La existencia de un un mismo carbono, denominado carbono
grupo básico y otro ácido les confiere dos α que a su vez completa cuatro
características muy importantes para su sustituyentes con un átomo de hidrógeno
función: y un radical orgánico que constituye la
cadena lateral especifica se cada uno, por
• Son sustancias anfóteras, es
lo tanto, de los cuatro sustituyentes sobre
decir, que pueden comportarse
ese carbono α, tres son comunes a todos
como ácidos y bases.
los aminoácidos y solo la cadena lateral
• Pueden reaccionar entre ellos,
es lo que determina la individualidad a
para dar lugar a polímeros de
cada uno. De acuerdo con la naturaleza
cualquier longitud al existir
de esta cadena, los aminoácidos se
siempre un grupo reactivo libre.
suelen dividir en cuatro grupos:
• La fórmula general de un
Grupo I: aminoácidos apolares.
aminoácido es:
Los aminoácidos tienen cadenas
COOH laterales de naturaleza hidrocarbonada,

con algún otro elemento que no afecta la
H2N ----Cα---H polaridad. En este grupo de menor a
mayor complejidad, se pueden
R
considerar: glicina, alanina, valina,
El carbono α es asimétrico, tiene cuatro leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina,
sustituyentes distintos, salvo que el triptofano y metionina. El aminoácido es
radical R sea un hidrógeno: en el caso del más hidrófobo cuanto más voluminosa es
aminoácido glicina. Lo que caracteriza a la cadena lateral.
un aminoácido es el radical R, de acuerdo Grupo II: aminoácidos polares con carga
a este radical los aminoácidos se pueden neutra.
clasificar en cuatro grupos: apolares,

Poseen en sus cadenas laterales
polares con carga neutra, catiónicos y
grupos hidrofílicos que aumentan su
aniónicos, explicados más adelante.
solubilidad. Pertenecen a este grupo los
32
hidroxilados: serina, treonina, tirosina,

cisteína y los amidados: aspargina y aminoácidos que integran una proteína.
glutamina. Se sabe además, que las proteínas
poseen una secuencia precisa de
Grupo III: aminoácidos aniónicos o
aminoácidos y una conformación espacial
ácidos.
perfectamente definida para que pueda
Los aniónicos tienen en la cadena
ejercer su función. La conformación es
lateral un grupo carboxílico que puede
condicionada, en principio, por la
disociarse, lo que les confiere una carga,
secuencia de aminoácidos, en la
negativa y características ácidas. Son los
distribución espacial que adoptan los
ácidos aspártico y glutámico.
aminoácidos secuenciales.
Los péptidos se nombran leyendo
Grupo IV: aminoácidos catiónicos o
secuencialmente los radicales de los
básicos.
aminoácidos que los integran
Los catiónicos, por el contrario,
comenzando por el que tiene el grupo
tienen en la cadena lateral un grupo
amino libre, al que se añade la
nitrogenado que les confiere una carga
terminación “il” y dejando al último el que
positiva y características básicas. Son la
tiene el carboxilo libre con su nombre
histidina, la lisina y La arginina.
propio.
Los polímeros de los aminoácidos Las propiedades físicas y
son llamados péptidos. Los péptidos que químicas de los péptidos suelen reflejar la
se encuentran en la naturaleza varían en de los aminoácidos integrantes.
tamaño, desde pequeñas moléculas que Aunque la mayor parte de los
solo contiene 2 ó 3 aminoácidos y macro péptidos se hayan integrados en las
moléculas que contienen miles de ellos. proteínas existen algunos que se
encuentran libres en la naturaleza y tienen
Dos moléculas de aminoácidos pueden funciones especializadas. Como ejemplo
unirse de forma covalente a través de un tenemos las hormonas peptídicas
enlace amida sustituido, en un (insulina y oxitocina), otros péptidos
denominado enlace peptídico, formando tienen poder antibiótico (gramicidina) o
un dipépdido. son cofactores en reacciones bioquímicas
La unión peptídica es la unión (glutatión).
covalente que existe entre los
33
FAC. DE QUÍMICA FARMACÉUTICA BIÓLOGICA
PRÁCTICA No. 7
IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA.

Bitácora
Reporte
Medidas de seguridad El alumno debe portar su equipo y material de seguridad y
atender al reglamento del laboratorio.
Disposición de los residuos De acuerdo con el reglamento interno de la facultad en el anexo
1. En caso de tener duda preguntar al profesor responsable de
la experiencia educativa.
Objetivo:
Que el alumno aprenda el método cromatografía incluye una amplia gama

analítico de cromatografía en capa fina de técnicas, que se pueden clasificar
identificando un aminoácido en una atendiendo al fundamento fisicoquímico
solución problema. en el que se basa la separación
(cromatografía de adsorción, de reparto,
Fundamento:
de cambio iónico, de filtración molecular,
El estudio y caracterización de las hidrofóbica y de afinidad), o al material
distintas biomoléculas (azúcares, lípidos, sobre el que se lleva a cabo
proteínas, ácidos nucleicos, etc.) requiere (cromatografía en papel, capa fina, en
en numerosos casos su aislamiento y columna y de gases).
purificación a partir de mezclas complejas
Todas las técnicas intentan explotar las
como son los preparados de cualquier
diferencias físicas, químicas y biológicas
material biológico. Una de las técnicas
de las distintas biomoléculas para llevar a
bioquímicas más clásicas y utilizadas
cabo su separación y aislamiento.
para dicho fin es la cromatografía. La
34
Entre dichas propiedades podríamos soportes hidrófobos facilita la separación

citar: de compuestos no polares (lípidos, por
ejemplo). En la CCF, la fase estacionaria
a) Diferencias en solubilidad en distintos
es una lámina de 0.25-0.50 mm de
solventes, tanto orgánicos como
espesor, extendida de forma uniforme
acuosos.
sobre la superficie de una placa de vidrio
b) Diferencias en tamaño y forma.
o plástico. El volumen de muestra a
c) Diferencias en carga.
aplicar es crítico, ya que va a afectar a la
d) Diferencias en afinidad por otras
resolución (separación de los
biomoléculas.
componentes de una mezcla compleja), y
Todas estas propiedades y, por tanto, la depende de la concentración del
separación de diferentes compuestos compuesto o compuestos de interés en la
está influenciadas por las condiciones del muestra. Para soluciones concentradas
medio de separación, pH, temperatura, bastará una cantidad muy pequeña
fuerza iónica e hidrofobicidad. (rango de µl) para aplicar suficiente
cantidad de los solutos a separar sin llegar
De forma general, en las técnicas
a saturar la capacidad de resolución de la
cromatográficas existe una distribución de
placa cromatográfica. Para soluciones
las moléculas entre dos fases, la fase
muy diluidas, deberá aplicarse un
estacionaria o parte del sistema
volumen suficiente (de hasta varios ml)
separador que permanece fija en el
para asegurar una cantidad detectable de
espacio, y la fase móvil que circula sobre
soluto o solutos de interés. El solvente se
la fase estacionaria en íntimo contacto
desplaza a través del soporte por
con ésta.
capilaridad provocando un reparto de los
En la cromatografía en capa fina (CCF), solutos entre él y la fase estacionaria de
se puede utilizar como soporte cualquier acuerdo con sus solubilidades relativas
sustancia que puede dividirse en (coeficientes de reparto). Las manchas
partículas finas y distribuirse correspondientes a cada compuesto, si no
uniformemente en forma de láminas. Esto son visibles, se pueden revelar mediante
incluye sustancias inorgánicas (gel de técnicas analíticas concretas. Se
sílice, óxido de aluminio, tierra de determina la posición de cada mancha
diatomeas, silicato de magnesio, etc.) y relativa al frente alcanzado por el
orgánicas (celulosa, poliamida, solvente, calculándose el correspondiente
polietileno, etc.). La utilización de valor de Rf. La identificación de tales
35
compuestos se suele realizar Reacciones coloreadas de los

comparando sus Rf con los de aminoácidos
compuestos de referencia (patrones) de
Los métodos colorimétricos de
naturaleza química conocida.
determinación de aminoácidos se basan
La CCF presenta una serie de ventajas en la reacción específica de éstos con
respecto a cromatografías alternativas, determinados compuestos, dando
como es la de papel, tales como las derivados coloreados. La formación de
siguientes: color se toma como resultado positivo e
indica su presencia, mientras que el no
I. Una mayor resolución, obteniéndose
desarrollo de color es indicativo de que no
por lo general manchas más
está presente. Para cada prueba se
pequeñas.
utilizará un control negativo, también
II. Una mayor velocidad de separación.
denominado blanco de la reacción, en el
III. Pueden utilizarse un gran número de
que el reactivo se añadirá a agua
materiales como soportes y
destilada (o solvente adecuado). Aunque
disolventes.
en la presente práctica se llevará a cabo
IV. Los compuestos pueden ser
la determinación cualitativa de
detectados con facilidad y su
aminoácidos (ausencia o presencia de
recuperación es muy simple.
dichos compuestos), las reacciones
La mayor resolución obtenida por CCF se coloreadas pueden también ser utilizadas
debe a que pueden formarse partículas para la determinación cuantitativa de
muy finas del soporte, por lo que la dichas biomoléculas.
relación superficie/volumen es muy
Hay una amplia gama de métodos
elevada, proporcionando una gran área
colorimétricos que permiten la
superficial por unidad de longitud. Esto se
determinación cuali-cuantitativa de
traduce en que la cantidad de muestra
aminoácidos, entre ellos el más general y
que se puede aplicar es mayor y la
utilizado es el de la reacción con
difusión es mucho menor. La ventaja
ninhidrina La ninhidrina (hidrato de
respecto a la cromatografía en papel es
tricetohidrindeno) reacciona con
que éste tiene una estructura fibrosa y la
aminoácidos que tengan el grupo amino
capilaridad asociada a las fibras tiende a
libre, dando lugar a la formación de
aumentar la difusión de las moléculas.
amoniaco y anhídrido carbónico, con
reducción del reactivo (ninhidrina) a
36
hidrindantina. La hidrindantina reacciona Juego de pipetas (0.5, 1, 2, 5, 10, y 25

a su vez con el amoniaco y otra molécula mL).
de ninhidrina para dar un compuesto de Micropipetas
adición doble que presenta una coloración Probetas (100 y 250 mL).
azul-púrpura, con la excepción de la Vasos de precipitado (100 y 500 mL).
prolina que da una coloración amarillenta Frasco lavador con agua destilada.
(recordar que en la prolina el grupo amino Recipientes de muestras biológicas de 50
está sustituido). El derivado coloreado mL.
presenta máximo de absorción en torno a Papel de filtro.
570 nm. La reacción se lleva a cabo en Capilares para aplicar muestras.
caliente y a valores de pH comprendidos Papel de parafilm.
entre 4 y 8. Rotulador de vidrio.
Pipetas Pasteur de plástico.
Las aminas primarias (R-CH2-NH2) dan
Guantes de látex.
también positiva la prueba de la
Frascos pulverizadores.
ninhidrina, aunque en este caso no se
Tijeras.
libera CO2. La técnica es muy sensible,
Reactivos
por lo que es ideal para detectar
Glutamato.
concentraciones bajas de aminoácidos,
Glicina.
utilizándose para revelar su presencia en
Lisina.
cromatogramas y fracciones procedentes
Prolina.
de otras técnicas de separación. La
Leucina.
presencia de aldehídos resultantes de la
Solución problema de aminoácidos.
degradación de la ninhidrina por reacción
Etanol.
con los aminoácidos modifica, bajo ciertas
Hidróxido amónico.
condiciones, el color formado, lo que sirve
Ninhidrina.
para identificar el tipo de aminoácido.
Material y reactivos: Procedimiento:

Material de laboratorio Usar guantes para manejar la placa.
Placa de silica gel para cromatografía en 1. Sobre una placa de silica gel de 20 x
capa fina. 20cm se traza con un lápiz una recta
Agitador de tubos. paralela a uno de los bordes y a una
Tanque cromatográfico. distancia de éste de 2 cm. Sobre esta
Gradillas con tubos de ensayo.
37
línea se pone 6 puntos equidistantes de 1 cm y sin que éste alcance la zona

entre si y sobre los bordes. de aplicación de las muestras. Se mete
2. En cada punto (identificado con el la placa en el tanque, se tapa y se deja
nombre de cada uno de los desarrollar la cromatografía hasta que
aminoácidos) se aplicarán tres gotas el eluyente alcance el borde superior,
de la solución de aminoácidos y sin llegar a sobrepasarlo (2-3h
solución problema (un aminoácido en aproximadamente).
cada punto y en el último la solución 5. Terminada la cromatografía se saca la
problema). Se utiliza un capilar para placa, se marca la distancia recorrida
aplicar la muestra gota a gota (hacerlo por el eluyente, se seca dentro de la
con mucho cuidado). campana de gases con la ayuda de un
3. Se seca después de haber aplicado secador de aire y se rocía con un
cada gota. Se marca con lápiz, y en el pulverizador que contiene la solución
extremo opuesto de la placa, algún reveladora (en la campana de gases).
indicativo del grupo que realiza la La placa se secará haciéndole llegar
cromatografía. aire caliente con el secador.
4. Se añade al tanque cromatográfico
eluyente hasta una altura aproximada
38
HOJA DE RESULTADOS
¿Qué aminoácidos hay en la mezcla problema?
En la siguiente tabla anote las distancias recorridas por cada uno de los aminoácidos y Calcule
el Rf.
Aminoácido Distancia recorrida (cm) Rf

Glutamato
Glicina
Lisina
Prolina
Leucina
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑑𝑒 𝑒𝑙 𝑝𝑢𝑛𝑡𝑜 𝑑𝑒 𝑎𝑝𝑙𝑖𝑐𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑙 𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑎𝑛𝑐ℎ𝑎

𝑅𝑓 =
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑑𝑒 𝑒𝑙 𝑝𝑢𝑛𝑡𝑜 𝑑𝑒 𝑎𝑝𝑙𝑖𝑐𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑙 𝑓𝑟𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑙𝑢𝑦𝑒𝑛𝑡𝑒
Discusión:
Conclusión:
Cuestionario:
1. Consulte, en diversos textos, los tipos de cromatografías que existen y sus aplicaciones.
2. ¿Qué propiedades ácido- base poseen los aminoácidos?
3. ¿Qué son los péptidos?
4. ¿Por qué hay algunos aminoácidos llamados esenciales y cuáles no?
5. ¿Cuáles son los elementos de la cromatografía en capa fina?
39
Proteínas
40
PROTEÍNAS
Las proteínas son moléculas nuevas posiciones de los grupos químicos

cuyas propiedades químicas originan a la y cambio en las propiedades del péptido.
mayoría de las funciones biológicas. Son
Plegado de las cadenas peptídicas.
polímeros de aminoácidos, cada
Estructura primaria: es la secuencia lineal
aminoácido de los que componen las
de residuos de aminoácidos en la cadena
proteínas contiene un grupo amino y uno
polipeptídica. En esta estructura está
carboxilo, que sirven para la unión de las
implícito el enlace peptídico que se forma
moléculas formando largas cadenas. El
entre cada uno de los aminoácidos, pero
enlace se produce entre el nitrógeno
no incluye ninguna otra fuerza o enlace.
amínico de un aminoácido y el carboxilo
del siguiente y es de tipo amida. Este
Estructura secundaria: se refiere a los
enlace se forma por la eliminación de los
patrones de plegamiento regulares de
elementos de agua del grupo α-carboxilo
porciones contiguas de la cadena
de un aminoácido y el grupo α-amino del
polipeptídica. La α-hélice y la lámina β-
otro.
plegada constituyen ejemplos:
Los polímeros lineales producidos se
α-hélice: la hélice α de una
denominan cadenas peptídicas, estando
proteína es una hélice con giro a la
las proteínas formadas de una o algunas
derecha, lo que indica que la cadena gira
veces de más cadenas peptídicas. Las
en el sentido de las manecillas del reloj
diferentes proteínas se forman de 20
conforme se observa hacia abajo a lo
aminoácidos que contienen grupos
largo de la hélice el avance de la cadena
sustituyentes distintos o cadenas laterales
polipeptídica.
que no participan en la polimerización de
Lámina β-plegada: los átomos se
las cadenas peptídicas. Una cadena
sitúan en un plano plegado y las cadenas
peptídica tendrá en consecuencia una
laterales de residuos sucesivos a lo largo
disposición de grupos químicos a lo largo
de la cadena polipeptídica sobresalen
de su estructura que dependerá de los
alternadamente por arriba y por debajo
diferentes grupos de aminoácidos que la
del plano general de la estructura.
integran y del orden en que se encuentran
Estructura terciaria: se refiere a la
unidos. Un cambio de esta secuencia o
estructura tridimensional en particular los
estructura primaria del péptido creará
enlaces que se forman entre residuos de
aminoácidos que están distantes entre sí
41
en la cadena polipeptídica y el arreglo de desnaturalizada recupera su estructura

los elementos de la estructura secundaria nativa se llama re naturalización.
con respecto uno del otro. El término de Todos los niveles estructurales de
estructura terciaria se aplica a proteínas una proteína globular, desde el
globulares. secundario al cuaternario dependen de un
conjunto de interacciones químicas. La
Estructura cuaternaria: define la conformación fina refleja un equilibrio de
estructura que resulta de las interacciones estas fuerzas: interacciones hidrofóbicas,
entre las unidades polipeptídicas enlaces de hidrogeno, interacciones
individuales de una proteína que contiene iónicas, fuerzas de Van der Waals y los
más de una subunidad. De este modo, la entrecruzamientos covalentes (uniones
enzima fosforilasa contiene 2 disulfuro). Los productos de
subunidades idénticas que solas son desnaturalización en solución se agregan
catalíticamente inactivas pero cuando se físicamente y según las condiciones de
unen en un dímero forman la enzima pH y fuerza iónica, precipitan.
activa. Cuando la estructura se forman de Tres métodos se suelen usar:
2 subunidades se denomina estructura temperatura, pH y solventes orgánicos. Si
cuaternaria homogénea, si son distintas bien el fundamento de cada uno de ellos
las dos subunidades se denomina es distinto, no son independientes entre
estructura cuaternaria heterogénea. sí. La desnaturalización por temperatura
depende fuertemente del pH y viceversa.
Desnaturalización de las proteínas En el fraccionamiento por solventes
Se llama desnaturalización de las orgánicos, pH y fuerza iónica deben estar
proteínas a la pérdida de las estructuras claramente definidos.
de orden superior (secundaria, terciaria y Temperatura: muchas proteínas se
cuaternaria), quedando la cadena desnaturalizan por calor, que afecta las
polipeptídica reducida a un polímero interacciones débiles como enlaces
estadístico sin ninguna estructura hidrógeno. El cambio es abrupto, la
tridimensional fija. perdida de la estructura en una parte de la
Una proteína desnaturalizada proteína desestabiliza el resto.
cuenta únicamente con su estructura pH: los pH´s extremos causan
primaria. Por este motivo, en muchos desnaturalización porque áreas de la
casos, la desnaturalización es reversible. molécula proteica adquieren cargas,
El proceso mediante el cual la proteína causando repulsión, otras áreas pierden
42
cargas que estaban involucradas en La desnaturalización por solventes se

mantener la estructura. debe a que las moléculas de los solventes
Solventes orgánicos: los solventes interfieren con las interacciones
orgánicos miscibles con el agua producen hidrofóbicas en el interior de las proteínas.
una variedad de efectos que, Este proceso se ve favorecido a
combinados, permiten la precipitación de temperaturas mayores de 0°C.
proteínas.
43
FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA BIOLÓGICA
PRÁCTICA No. 8
IDENTIFICACIÓN GENERAL DE PÉPTIDOS Y PROTEÍNAS
Bitácora
Reporte
Objetivo: disolución incrementando la fuerza de atracción

entre las cargas opuestas, disminuyendo de
Determinar la presencia de péptidos y
este modo el grado de ionización de los grupos
proteínas mediante reacciones de identificación
R de la proteína.
específicas.
b) Precipitación de las Proteínas por
Fundamento:
Metales. Las proteínas forman sales insolubles
En esta práctica se verificarán con algunos iones metálicos. Esta reacción es
reacciones de desnaturalización y precipitación útil para eliminar las proteínas, de una solución.
de proteínas, que tienen importancia en En presencia de cationes de metales pesados
métodos se separación de algunas proteínas o se forman sales de proteinato metálico que
explican los efectos del calor o los metales pueden ser solubles o insolubles según la
pesados y ácidos sobre la actividad de las naturaleza del metal. En general, las sales
mismas. proteínicas de Na, K y Mg son solubles, pero
a) Precipitación de Proteínas con Etanol y las de Hg, Pb, Cu y Zn son insolubles.
Acetona. La adición de disolventes orgánicos
c) Precipitación Salina. Las sales neutras
neutros miscibles con el agua, particularmente
ejercen efectos pronunciados sobre la
etanol o acetona disminuye la solubilidad de la
solubilidad de las proteínas globulares de tal
mayor parte de las proteínas globulares en el
manera que a medida que la fuerza iónica
agua de tal manera que precipitan de su
44
aumenta la solubilidad de una proteína variable, de su estructura original o nativa, con
comienza a disminuir. la consiguiente alteración o desaparición de
sus funciones. El fenómeno puede producirse
d) Precipitación de las Proteínas por los
por una diversidad de agentes físicos: Calor,
Ácidos. Cuando las soluciones de proteínas se
radiaciones ultravioleta, altas presiones, o
acidifican, adquieren una carga negativa
químicos, como los ácidos, los álcalis, la urea y
positiva. Las proteínas actúan como base y
la sustancias con actividad de detergente. Las
pueden formar sales con los ácidos o los
uniones disulfuro también son sensibles a los
aniones que se le añadan. Algunas de estas
agentes desnaturalizantes; en ocasiones esta
sales resultan insolubles. Se utilizan ácidos
alteración es reversible cuando se elimina el
como el túngstico tanto para aislar proteínas
agente agresivo.
como para quitarlas de soluciones.
La ruptura de los puentes de hidrógeno puede
e) Prueba de Biuret para Enlaces Peptídicos.
causar la desnaturalización y un menor
En la prueba de Biuret el sulfato alcalino de
plegamiento de la cadena peptídica. En las
cobre reacciona con compuestos que
proteínas desnaturalizadas están disminuidas
contienen dos o más enlaces peptídicos dando
la solubilidad, la viscosidad, la velocidad de
un complejo de coloración violeta. La
difusión y la facilidad con que se cristalizan.
intensidad del color obtenido es una medida del
número de enlaces peptídicos presentes en la Los cambios físicos coinciden con
proteína. La reacción no es absolutamente modificaciones químicas: cuando se rompen
específica para los enlaces peptídicos, ya que los puentes disulfuro se ponen en libertad
cualquier compuesto que contenga dos grupos grupos –SH con sus propiedades
carbonilos unidos por un átomo de nitrógeno o características; al desplegarse las cadenas
de carbono da un resultado positivo. pueden aparecer otros grupos activos o
funcionales. Siendo la conformación de la
La reacción de Biuret debe su nombre a que
molécula proteínica la base principal de su
también es positiva con la biurea, por poseer un
actividad fisiológica, al desnaturalizarse se
enlace peptídico. El color se debe a la
pueden desarreglar los grupos que determinan
formación de un complejo de coordinación del
su actividad funcional y de esta manera, se
cobre con cuatro átomos de N peptídico. El
alteran sus características fisiológicas. Por
método de Biuret es muy útil por ser mucho
ejemplo, las globulinas del suero humano
más sencillo que el clásico método de
desnaturalizadas pierden sus funciones de
Kjehldalh.
anticuerpos.
f) Desnaturalización por Calor y pH
Material y procedimiento experimental:
Extremos. La desnaturalización de las
Material de laboratorio:
proteínas implica modificaciones, en grado
Papel filtro
45
1 Pipeta graduada de 10 mL - Sulfato de cobre al 1 %
3 pipetas graduadas de 5 mL
a) Precipitación de Proteínas con Etanol y
1 Gradilla Acetona.
12 Tubos de ensaye 13 x 100
1. A 2 mL de la clara de huevo diluida agregar
Baño de agua hirviendo 2 mL de alcohol al 95%.
Embudo de filtración
2. Anotar el resultado observado.
Vaso de precipitado de 250 mL
Material biológico: b) Precipitación de las Proteínas por

Metales.
Clara de huevo diluida 1:5 con agua destilada.
1. Preparar dos tubos con 1 mL de clara de
Reactivos:
huevo diluida cada uno.
- Etanol al 95%
2. Agregar a uno de ellos 5 gotas de AgNO3 al
- HgCl2 al 5%
5% y al otro 5 gotas de HgCl2 al 5%.
- AgNO3 al 5%
- Disolución saturada de sulfato de amonio. 3. Mezclar bien y anotar el resultado.
- Ninhidrina. c) Precipitación Salina.

- Disolución de sulfato de amonio al 50%
1. Pesar exactamente 3 papeles filtro y anote
- Disolución de sulfato de amonio al 10% los pesos.
- Albúmina, caseína, gelatina y peptona al 0.5%
2. Tomar 2 mL de clara de huevo diluida,
- Solución de tungstato de sodio
dilúyalos en 2 mL de agua.
- Solución de albúmina 1%
- Ácido pícrico
- Ácido tricloroacético
- Ácido acético diluido 3. Agregar agitando 2 mL de disolución

- Ácido sulfosalicílico saturada de sulfato de amonio.
- Ácido clorhídrico 0.1 N

4. Filtrar a través de uno de los papeles filtros
- Ácido clorhídrico (1 mol/L) previamente pesados.
- Ácido nítrico concentrado.
5. En el filtrado determine la presencia de
- Hidróxido de sodio 0.1 N
proteínas con ninhidrina.
-Hidróxido de sodio al 40 %
6. Repetir el procedimiento con otros 2 mL de
- Hidróxido de sodio (1 mol/L)
clara de huevo diluida utilizando disolución
46
al 50% de sulfato de amonio, y con otros 2 e) Prueba de Biuret para Enlaces Peptídicos.
ml utilizando disolución de sulfato de amonio
1. A 2 mL de la muestra agregar 5 gotas de
al 10%.
sulfato de cobre.
7. Dejar secar perfectamente los papeles, y
2. Añadir 2 ml de NaOH al 40 %.
péselos.
3. Mezclar vigorosamente y observar los

8. Anotar los pesos de los 3 precipitados
colores formados.
obtenidos, que han quedado retenidos en
los papeles filtro. f) Desnaturalización por Calor y pH
Extremos.
d) Precipitación de las Proteínas por los
Ácidos. 1. En 4 tubos de ensaye colocar 5 mL de cada
una de las proteínas y agregar 0.5 mL de
1. Añadir algunas gotas de solución de
HCl 0.5 de NaOH y 0.5 mL de agua.
tungstato de sodio a 3 mL de solución de
albúmina al 1%. 2. Colocar los tubos en el baño de agua
hirviendo durante 10 minutos y enfríar a
2. Acidificar ésta solución con ácido acético
temperatura ambiente.
diluido.
3. Ajustar los tubos ácidos y alcalinos hasta la
3. Sin emplear tungstato repita el experimento
neutralidad agregando álcali o ácido según
con ácido pícrico, tricloroacético o
sea necesario.
sulfosalicílico y se someter algunas de las
4. A 2 mL de la solución de proteína, agregar
lentamente por las paredes del tubo 2 mL de
HNO3 concentrado hasta que se formen dos
capas.
proteínas disponibles a estos reactivos. No
5. Mezclar cuidadosamente los 2 líquidos y
es necesario añadir ácido después. Volver a
observe.
disolver alguno de los precipitados
proteínicos.
47
HOJA DE RESULTADOS:
Nombre: Fecha: Grupo:
1.- Anotar tus observaciones en el siguiente cuadro:
Reacción Observaciones
a) Precipitación con etanol y acetona.
b) Precipitación de las proteínas por

metales.
c) Precipitación salina.
d) Precipitación de las proteínas por los

ácidos.
e) Prueba de Biuret para enlaces

peptidicos.
por calor
f) Desnaturalización
pH extremos
Conclusiones:
Cuestionario:
1.-Escriba la reacción de formación de biurea por calentamiento de la urea.
2.-Escriba la fórmula del complejo de coordinación de la biurea con los iones Cu+2.
3.-Describe el método calorimétrico para evaluar proteínas basándose en la formación de

complejos tipo Biuret.
4.-Las proteínas pueden clasificarse según sus funciones biológicas en:
5.- ¿Cuál de las siguientes proteínas tiene una estructura cuaternaria? Explica tu respuesta.
a) α-quimotripsina
b) hemoglobina
c) insulina
48
d) mioglobina
e) tripsina
49
PRÁCTICA No. 9
CRISTALIZACIÓN DE LA ALBÚMINA DE HUEVO

Bitácora
Reporte
Objetivo: A baja concentración, las sales
El alumno separará por medio de incrementan la solubilidad de muchas
cristalización una proteína, a partir de proteínas, fenómeno que recibe el nombre
huevo. de solubilización por salado. Las sales de

iones divalentes tales como el MgCl2 y el
Fundamento: (NH4)2SO4 son más eficaces para la
Las sales neutras ejercen efectos solubilización de las proteínas que las
pronunciados sobre la solubilidad de las sales de iones monovalentes tales como el
proteínas globulares, esta capacidad para NaCl, NH4Cl y el KCl.
influir en la solubilidad de las proteínas está
La adición de disolventes orgánicos
en función de su fuerza iónica, que
miscibles en agua, particularmente etanol y
constituye una medida, tanto de la
acetona, disminuye la solubilidad de la
concentración como del número de las
mayor parte de las proteínas globulares en
cargas eléctricas existentes en los cationes
el agua, de tal manera que producen su
y los aniones aportados por la sal.
precipitación.
50
Material y reactivos: 4. Se juntan los SN que son de color

Material de laboratorio amarillo transparente, se mide el
Probeta de 200 mL volumen y se añade un volumen
Embudo de filtración igual de (NH4)2SO4 al 50% (la
Varilla de vidrio cantidad añadida dependerá de la
Gasa formación del precipitado). El
Reactivos sobrenadante amarillo al ponerse
Ácido acético 1N en contacto con él (NH4)2SO4, se
Solución de sulfato de amonio al 50% torna de color blanco lechoso, se
observa precipitación.
Material biológico 5. Se agita esporádicamente.
1 huevo 6. Se deja la mezcla en el refrigerador
durante 2 a 5 días.
Procedimiento: 7. Se separan los cristales de
1. Medir 10 mL de clara de huevo albúmina por centrifugación.
2. Agitar las claras y añadir 0.1 mL de 8. Suspender en acetona (5 mL) y
ácido acético 1N, se filtra para romper recuperar filtrando en embudo
las membranas agitando fuertemente Buchner.
con una varilla para acelerar el paso por 9. Secar al aire.
la gasa. 10. Guardar en un vial etiquetado.
3. Se miden 8 mL de filtrado y se añaden 8 Los residuos generados no se
mL de la solución de (NH4)2SO4 al 50%, consideran tóxicos y se pueden
y se deja precipitar por 30 min., se verter en la tarja.
separa por centrifugación el precipitado
de globulina de huevo a velocidad de
3500 rpm.
51
HOJA DE RESULTADOS
Observar los cristales obtenidos, anotar sus características y esquematizarlos.
Comparar los resultados obtenidos con datos bibliográficos y determinar si la estructura es

parecida.
Discusión.
Conclusión.
Cuestionario:
1. Sugieran métodos de identificación de los cristales obtenidos con base en el peso

molecular.
2. ¿Qué es la albúmina?
3. ¿Por qué se utiliza sulfato de amonio al 50%?
52
PRÁCTICA No. 10
CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS

Bitácora
Reporte
Objetivo: Método basado en la unión directa del
colorante azul de Coomasie a la estructura
Que el alumno cuantifique una
terciaria de las proteínas y aminoácidos
proteína utilizando dos métodos diferentes,
específicos. El colorante cambia de color
compare los métodos y establezca su
de marrón a azul al unirse a las proteínas.
eficiencia.
Fundamento: Método de Biuret

Basado en la formación de un complejo
Existen diferentes métodos que
coloreado entre el Cu++y los nitrógenos de
permiten la cuantificación de proteínas en
los enlaces peptídicos.
muestras biológicas, tres de los más
Se requiere al menos dos enlaces
usados, que se basan en las diferentes
peptídicos para dar positiva esta reacción
propiedades de las proteínas, son:
el máximo de absorción del complejo
Método de Coomasie (Bradford)
proteína- Biuret se produce a 545nm,
Método de Biuret
cuando se lee la absorbancia frente a un
blanco constituido por el reactivo de Biuret.
Método de Coomasie (Bradford)
53
Sol. std 0 0.25 0.5 0.75 1
Sol. pb - - - - -
agua 1 0.75 0.5 0.25 0
Reactivo
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
A
Reactivo
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
B
2. Después de 10 min, leer la

absorbancia a 540nm.
Material de laboratorio
Vaso de precipitado de 250 mL
Determinación cuantitativa de proteínas
10 tubos de ensaye
por el método de Bradford.
1. Prepare una serie de tubos como
se indica en la siguiente tabla:
Gradilla
Reactivos
Tubos 1 2 3 4 5 6 7
Solución estándar de albúmina 20mg/
100mL Sol. std 1 0.75 0.5 0.25 0 - -
Reactivo de Biuret A
Sol. pb - - - - - 0.5 0.5
Reactivo de Biuret B
Buffer de
Reactivo de Bradford
fosfatos 0 0.25 0.5 0.75 1 0.5 0.5
pH 7.0
Procedimiento
Reactivo
Nota: para cada determinación se debe 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
Bradford
respetar el orden de adición de los
reactivos y los tiempos de incubación.
2. Agitar en vórtex y leer absorbancia
a 595nm.
Determinación cuantitativa por Método de
Biuret.
1. Preparar una serie de tubos de
acuerdo al siguiente cuadro:
Tubos 1 2 3 4 5
54
HOJA DE RESULTADOS
1. Anota los resultados en la siguiente tabla:

Concentración Absorbancia (595nm) Absorbancia (540nm)
Tubo
(mg) Método de Bradford Método de Biuret
1 0
2 0.05
3 0.10
4 0.15
5 0.20
2. Grafica la curva patrón para cada método colocando en las abscisas mg de albúmina y en
las ordenadas la absorbancia.
3. Interpola en la curva las lecturas de los problemas y calcula la concentración de los mismos
en mg de proteína/ mL.
4. Determina la concentración de proteína del problema para cada método.
Ajustar por regresión lineal.
Discusión:
Conclusión:
Cuestionario:
1. Mencione y describa brevemente tres métodos para el aislamiento y purificación de
proteínas.
2. ¿Por qué se utilizó diferente longitud de onda?
3. Plantee las diferencias de cada método y elija el que de acuerdo a los cálculos realizados
le reporte más eficiente.
55
Enzimas
56
ENZIMAS
La enorme variedad de reacciones postuló en 1860 que estos se hallaban
bioquímicas que comprenden la vida es ligados de modo inseparable con la
mediada, casi todas ellas por una serie de estructura y la vida de las células de la
catalizadores biológicos notables conocidos levadura. En 1897 E. Buchner consiguió
como “enzimas”. Aunque las enzimas se extraer las enzimas que catalizan la
hallan sometidas a las mismas leyes fermentación alcohólica de las células de
naturales que gobiernan el comportamiento levadura. En 1926 J.B. Sumner cristalizó por
de otras sustancias, se diferencian de los primera vez la enzima ureasa y entre 1930 y
catalizadores químicos ordinarios en varios 1936 Northrop aisló pepsina cristalizada, la
aspectos: tripsina y la quimiotripsina. En la actualidad
se han identificado cerca de 2000 enzimas
• Velocidades de reacción más elevadas.
diferentes. 17
• Condiciones de reacción más suaves.
• Especificidad de reacción mayor. Muchas enzimas se identifican por la adición
• Capacidad para la regulación. del sufijo- asa al nombre de la sustancia o

sustrato que hidrolizaban, de este modo, las
Las enzimas son proteínas que catalizan las lipasas hidrolizan grasas (lipos en griego).
reacciones bioquímicas. Generalmente Aunque hasta hoy persisten numerosos
existen en muy bajas concentraciones en las vestigios de esta terminología, demostró ser
células, donde aumentan la velocidad de una inadecuada cuando se descubrieron varias
reacción sin alterar su equilibrio; es decir, las enzimas que catalizan reacciones diferentes
velocidades de reacción directa e inversa del mismo sustrato. Aunque el sufijo – asa
aumentan en un mismo factor, que sigue en uso, en la actualidad los nombres
generalmente es de alrededor de 103 − de las enzimas enfatizan el tipo de reacción
12
10 . La existencia y capacidad de las catalizada, ejemplo, las deshidrogenasas
enzimas se conoció por primera vez durante catalizan la eliminación de hidrogeno; aun
el siglo XIX cuando se encontró que las así surgieron ambigüedades inevitables.
reacciones que se habían considerado que Para remediar esta deficiencia, la Unión
ocurrían sólo en presencia de células Internacional de la Bioquímica IUB
también eran mediadas por extractos libres (International Union of Biochemistry) adoptó
8
de éstas. un sistema complejo pero inequívoco basado
en el mecanismo de reacción. 21
Aunque Luis Pasteur reconoció que la
fermentación es catalizada por enzimas Especificidad del sustrato
57
Las fuerzas no covalentes mediante las que respecto al sustrato no pueden unirse de
los sustratos y otras moléculas se unen a las modo productivo a la enzima, es decir, no
enzimas son de carácter idéntico a las fuerzas pueden formar complejos enzima- sustrato
que dictan las conformaciones de las que conduzca a la formación de producto.
proteínas, en ambas intervienen interacciones
Además, muchas enzimas tienen
Vander Wasls, electrostáticas, enlaces de
pequeñas moléculas no proteínicas asociadas
hidrógeno e hidrofóbicas. En general el sitio
con o cerca del sitio activo que determina la
de unión del sustrato está constituido por una
especificidad del sustrato. Estas moléculas se
entalladura o grieta sobre la superficie de la
denominan cofactores si no están unidas
molécula de una enzima que es de forma
covalentemente a la proteína y grupo
complementaria con la del sustrato. Además,
prostético si están unidas covalentemente.
los restos de un aminoácido que forman el
sitio de unión se hallan dispuestos para Inhibición enzimática
interactuar específicamente con el sustrato de
Con frecuencia las velocidades de
una manera atractiva (Fig. 3.1).
reacción enzimática son afectadas por
sustancias que no son sustratos; cuando un
compuesto reduce la velocidad de una
reacción se dice que es inhibidor. En el
manejo de inhibidores, es importante
distinguir entre los efectos que se observan
experimentalmente y los mecanismos
propuestos para explicarlos.
Existen tres tipos básicos de inhibición. Estos

se definen en términos del grado de inhibición
i, el cual se define como:
Figura 3.1
V0 − V1
𝐢=
Complejo enzima-sustrato que ilustra las V0
complementariedades geométrica y física Donde V0 y V1 son las velocidades iniciales

entre las enzimas y su sustrato en presencia y de reacción no inhibida e inhibida
en ausencia de un inhibidor. respectivamente.
Las moléculas que se diferencian en la

forma o distribución del grupo funcional
58
1. Existe una inhibición no segundo se refiere a la interpretación de los

competitivamente pura si i no es afectada 14
datos.
por la concentración del sustrato.
2. Existe inhibición competitiva si i Ecuación de Michaelis y Menten
disminuye a medida que aumenta la Para explicar la relación observada
concentración del sustrato. entre la velocidad inicial (v) y la concentración
3. Existe inhibición incompetitiva o inicial del sustrato ([S]0) Michaelis y Menten
acompetitiva si i aumenta a medida que propusieron que las reacciones catalizadas
se incrementa la concentración del enzimáticamente ocurren en dos etapas:
sustrato. • Formación del complejo Enzima-
sustrato
Cinética enzimática • Formación del producto
La cinética enzimática comprende el
estudio de los factores que participan y
regulan las reacciones químicas catalizadas
por enzimas. Las leyes generales de la
K1, K2 y K3 son las constantes cinéticas
catálisis y de las interacciones químicas son
individuales de cada proceso, según esto
aplicables a las reacciones enzimáticas,
podemos afirmar que:
excepto por un factor especifico de las
enzimas que es su estabilidad, con el peligro V1 = 𝐾1[E][S]
de su desnaturalización y la pérdida de su
V2 = K 2 [ES]
capacidad catalítica, por ejemplo, debido a los
cambios extremos de pH o de temperatura. V3 = K 3 [ES]
La única manera de caracterizar fun-
Donde:
cionalmente una enzima es por medio del
análisis integral de su cinética que comprende E= enzima libre
diversos factores como el tiempo de reacción, ES= enzima unido al sustrato
la concentración de la enzima y del sustrato,
ET = concentración total de enzima
etc.15
[ET ] = [E] + [ES]
Esencialmente es una materia
experimental relacionada con dos aspectos Como [E]= [ET ] − [ES], resulta que
principales. El primero implica el diseño de los
experimentos, incluyendo métodos para V1 = K1 [ET][S] − K1 [ES][S]
determinar el progreso de la reacción. El
59
Este modelo cinético adopta la Por lo tanto, en el estado estacionario, la

hipótesis del estado estacionario. Por lo tanto, velocidad de formación del producto es
la velocidad de formación del complejo E-S
K3[ET][S]
(V1 ) es igual a la de su disociación (V2 + V3 ). V = V3 = K 3 [ES] =
KM + [S]
K3 y [ET] son constantes y nos permiten

Además como [ES] es constante, la velocidad
introducir un nuevo parámetro, la velocidad
de formación de los productos es constante:
máxima de la reacción (Vmax). Vmax= K3[Et],
V = V3 = K 3 [ES] =constante. que es la velocidad que se alcanza cuando
Como (V1 = V2 + V3 ) podemos decir que: toda la enzima se encuentra unida al sustrato.
K1 [ET ][S] − K1 [ES][S] = K 2 [ES] + K 3 [ES] Si introducimos este parámetro en la

ecuación general de la velocidad de reacción
Despejando [ES]: obtendremos la expresión más conocida
[ET][S] K2+K3
Michaelis-Menten:
[ES]= , siendo K M =
KM +[S] K1
Vmax[S]
V=
Km + [S]
60
PRÁCTICA No. 11
EFECTO DE LOS INHIBIDORES ENZIMÁTICOS SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA CATALASA.
Vitacura
Reporte
Duración de la 3 horas
práctica
Medidas de El alumno debe portar su equipo y material de seguridad y atender al
seguridad reglamento del laboratorio
Disposición de los De acuerdo con el reglamento interno de la facultad en el anexo 1. En
residuos caso de tener duda preguntar al profesor responsable de la
Objetivo: puesto que posee una estructura a la que se

Determinar los cambios en la velocidad con encuentra unido un grupo fosfato:
respecto a la concentración del sustrato, de la
enzima y el incremento de la temperatura.
Fundamento:
La cinética enzimática se ve afectada por varios El p- nitrofenol absorbe la luz a 410nm, en
factores de entre los que destacan la esta longitud de onda su coeficiente de
concentración del sustrato, la concentración de extinción es de16mM−1∗cm−1. Esta
la enzima y la temperatura. En esta práctica se propiedad nos permite seguir
analizará el efecto de estos factores sobre la cuantitativamente su aparición en el
fosfatasa alcalina, la función fisiológica de esta transcurso de la reacción enzimática en el
es hidrolizar el enlace fosfoéster de compuestos transcurso de la reacción enzimática.
orgánicos fosforilados, liberando el grupo El efecto de la concentración del sustrato lo

fosfato terminal. observaremos añadiendo concentraciones
Como sustrato de esta enzima utilizaremos un de p- nitrofenilfosfato en forma creciente,
compuesto artificial, el p- nitrofenilfosfato
(NPP), que puede ser reconocido por la enzima
61
realizaremos lecturas a 410nm y L= paso de luz (cm)
determinaremos la concentración de p-
Despejando C de esta ecuación tenemos:
nitrofenol. En el caso del efecto de la

concentración de la enzima se realizará el
mismo procedimiento solo que en este caso
la concentración del sustrato permanecerá Puesto que L= 1 cm para calcular los μmoles NP
constante y la de la enzima será creciente.
Para el efecto de la temperatura se utilizará un

tubo en el cual tendremos una cantidad de
enzima y de sustrato constante, la reacción se
iniciará a 25 °C y se irá aumentando hasta 60 A partir de los valores obtenidos se pueden
°C, en cada cambio de temperatura se tomará calcular la actividad de la preparación enzimática
una muestra y se leerá a 410nm, la actividad en:
enzimática se determinará de la misma manera
que para los otros factores.
La actividad enzimática de la fosfatasa alcalina

AE= actividad enzimática
la calcularemos a partir de los micromoles
Sustituyendo el valor de n en la ecuación anterior
(μMoles) de nitrofenol aparecidos, en un
tenemos:
determinado tiempo de reacción (minutos) y en
un determinado volumen de ensayo (mL).
Los micromoles de nitrofenol se calculan a partir

Para calcular la concentración de NPP (sustrato)
de la concentración correspondiente al
se utiliza la siguiente formula:
incremento de absorbancia a 410nm, según la
ley de Lambert- Beer:
Siendo:
A= lecturas de absorbancia Material y procedimiento experimental:
ɛ= coeficiente de extinción (16mM−1∗cm−1) Material de laboratorio
62
• Tubos de ensaye
• Pipetas graduadas de 1 y 2 mL 2. Centrifugar 5 minutos a 2500 rpm
3. Separar el suero con una pipeta pasteur y
Reactivos colocarlo en un tubo limpio y seco.
• Tris – HCL 0.1M (pH 8)
• Fosfato de potasio 1 M Efecto de la concentración del sustrato.
• Fosfatasa alcalina 1. Tomar 7 tubos de ensayo, rotularlos y seguir
• p-nitrofenilfosfato (0.5 mg/ mL) el procedimiento según la tabla:

Nota: todas las adiciones se hacen en mL.
Material biológico Reactivos B 1 2 3 4 5 6
• Sangre humana NPP

(0.5mg/mL)
Tris- HCL
0.1M pH=
Procedimiento: 8
Nota: se recomienda dividir la práctica en tres Fosfatasa
alcalina
sesiones para dar tiempo a los alumnos a Incubar 15 minutos a 30 °C y leer.
entregar el reporte.
Para obtener la enzima fosfatasa alcalina se

deben seguir los siguientes pasos:
1. Obtener una muestra se sangre humana (5

mL) y colocarla en un tubo sin anticoagulante.
63
HOJA DE RESULTADOS
1. Calcular los parámetros pedidos en la siguiente tabla:
Efecto sobre la concentración del Efecto sobre la concentración

sustrato de la enzima
Tu Actividad Conc. Actividad Conc.
bo enzimática NPP enzimática NPP
(U/ mL) (mg/ (U/ mL) (mg/
mL) mL)
1
2
3
4
5
6
2. Representar en papel milimétrico la concentración de NPP (mg/ mL) frente a los valores de
actividad enzimática (U/mL) obtenidos.
3. Llenar la siguiente tabla, que será útil para calcular KM y Vmax:
p- nitrofenil fosfato [S] Cantidad de sustrato hidrolizada (V)
a. Hacer una gráfica 1/V contra 1/ [S]

b. Calcular KM y Vmax para esta enzima
Temperatura Actividad enzimática (U/ mL)

25 °C
30 °C
40 °C
50 °C
60 °C
c. Graficar la temperatura contra actividad enzimática y observar el comportamiento.
d. Observaciones:
Discusión:
Conclusión:
Cuestionario:
1. ¿Qué es la velocidad de una reacción enzimática?

2. ¿Cómo se define las constantes de Michaelis (KM ) de una reacción enzimática?
3. ¿Cómo se define la velocidad máxima (Vmax) de una reacción?
4. ¿Qué parámetros fundamentales influyen en la constante de velocidad de una reacción
enzimática?
5. ¿Cuáles son las enzimas cuya determinación tiene valor diagnóstico?
Libro: apellidos autor; Nombre. (Año). Titulo. Editorial.Edición.País.Página consultada.
Página de internet: Autor o responsable.Título. Fecha de última actualización.Liga:
http://www.
PRÁCTICA No. 12
EFECTO DEL SUSTRATO, ENZIMA Y LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA.
.
Objetivo: - 2 Vasos de precipitados de 250 ml
Obtener un extracto enzimático crudo de - Gradilla

catalasa a partir de una serie de sustratos
- Parrilla
animales y vegetales.
- Navaja o exacto
Fundamento:
La catalasa, como otras enzimas, es alterable - Arena lavada y seca
por la presencia de activadores o de inhibidores - Placa de toque
y por todos los factores que afectan la
Material biológico:
estructura y conformación proteica, como son
principalmente el pH y la temperatura. Hígado de pollo o de res, gusanos, triturados,
papa, manzana, fríjol macerados en seco, 5 a
Procedimiento experimental:
10 g de cada uno.
Reactivos:
.Mortero con pistilo
Agua oxigenada al 3%
- Gasa
Solución de almidón al 2%
- Baño maría
Solución indicadora de lugol
- 3 Pipetas graduadas de 10 ml
Reactivo de Benedict
- 3 Pipetas graduadas de 5 ml
NaCN y Pb(NO3)2 al 5%
- 6 Tubos de ensaye
Determinación de catalasa:
- 1 Tubo de ensaye de boca ancha
1. Corte en trozos delgados cada uno de
- Frasco de vidrio grande
los tejidos disponibles y póngalos sobre
- Termómetro
papel absorbente, rotulando
- 1 Embudo de filtración cuidadosamente su nombre. No deben
- Agitador mecánico
tocarse los tejidos con los dedos, sino (1 A 5+)
manipularlos con pinzas.

2. De cada tipo de tejido separe una
5. Prepare un calorímetro sencillo en la
porción, póngala en un tubo cubriéndola
siguiente forma: Introduzca 1 tubo de
3. con agua destilada e introdúzcalo en un

ensaye de boca ancha, con tapón
baño de agua hirviente durante 5
monohoradado, de corcho (u oasis), en
minutos, para que hierva el contenido
un frasco de vidrio suficientemente
del tubo. Coloque estas porciones
grande para contenerlo rodeado de
hervidas sobre papel absorbente,
material aislante térmico (lana de vidrio,
anotando el nombre y la indicación de
arena o aceite). Separe una ventana en
que se ha hervido.
el material aislante, que permita
4. Prepare una serie de tubos, 4 por cada
observar el interior del tubo sin sacarlo;
tejido, marcados según una clave que
para ello puede usar 2 placas de vidrio,
permita distinguirlos. Agregue lo que se
madera o nieve seca, del tamaño
indica en el cuadro. Mezcle bien y
adecuado (ver figura 4.1). Introduzca un
póngalos a incubar en un baño a 37°C.
termómetro a través del tapón
Observe y anote lo que sucede en cada
monohoradado, de manera que el bulbo
tubo. Cuando haya terminado con un
quede sumergido al poner 10 ml de
tipo de tejido, lave bien los 4 tubos con
solución. Ponga 10 ml de H2O2 al 3%,
agua destilada y empiece con otra serie.
tape y anote la temperatura inicial.
Marque con 1 a 5 cruces, según aprecie
Introduzca dos trozos pequeños de
en cada caso la intensidad del burbujeo
hígado o 10 gotas de sangre, en el tubo,
en cada tubo de cada serie.
tapándolo de nuevo rápidamente pero
CONTENIDO 1 2 3 4 sin ajustar demasiado el tapón. Anote la
H2O2 al 3% 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL temperatura cada 30 seg., durante 5
min.
NaCN al 5% 5 gotas
Pb(NO3)2
5 gotas
al 5%
Porción Porción Porción

Porción
Tejido sin sin sin
hervida
hervir hervir hervir
Resultado
Calorímetro
HOJA DE RESULTADOS
1. Realice una tabla donde indique la intensidad del burbujeo que apreció en cada tubo de cada serie.
2.- Anote la temperatura observada en el calorímetro para cada 30 segundos.
Discusión:
Conclusiones:
Referencias bibliográficas:
Libro: apellidos autor; Nombre. (Año).Titulo. Editorial.Edición.País.Página consultada

http://www.

PRÁCTICA No. 13
EFECTO DEL pH Y LA TEMPERATURA SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA
UREASA.
Bitácora
Reporte
Objetivo: a) Una alteración de la carga eléctrica neta de

la proteína, repercutiendo esto en su
Determinar, en forma práctica, la
solubilidad.
manera en que el pH y la temperatura afectan
la actividad enzimática. b) Una alteración de la estructura terciaria
cuaternaria que determina el cambio a una
Fundamento: conformación más activa o inactiva.
Uno de los factores que más pueden influir c) Un efecto del cambio del pH sobre el
sobre la velocidad de las reacciones sustrato.
enzimáticas, en condiciones biológicas, es el
d) Los efectos anteriores combinados.
pH. Cada enzima tiene un pH óptimo de acción,
En procesos microbiológicos
que no siempre es cercano a la neutralidad,
industriales, es importante determinar los
aunque este es el caso más frecuente. El efecto
efectos del pH sobre la velocidad de reacción,
del pH sobre la velocidad de reacción depende
a fin de encontrar el pH óptimo para el
o puede explicarse por:
rendimiento deseado. En estudios teóricos
- Soluciones buffer de los siguientes pHs: 5, 6,

sobre mecanismos de acción, determinación 6.3, 7.2 y 8.5.
del sitio activo de una enzima y similares, - HCl 0.1 N, 1 litro.
también es muy útil establecer la curva de pH - HgCl2 al 1%, 50 mL
contra la actividad enzimática. - Etanol
- Acetona
En la práctica se empleará HgCl2, como
- Indicador de Shiro-Tashiro
envenenador de la enzima a fin de detener su
actividad en el momento exacto que se desee y
en el blanco, para eliminar toda traza de a) Extracción de Ureasa
actividad atribuible a la enzima. Esta enzima 1. Para obtener harina de haba o de soya
cataliza la siguiente reacción: triturar perfectamente en un mortero las
O semillas desengrasadas, dejar secar
II
H2N-C-NH2 + 3 H2O ------------------> CO2 + 2 NH4OH perfectamente en un horno a 60° C durante
Urea Agua Bióxido Hidróxido la noche y pulverizar más el polvo seco.
de Carbono de Amonio
2. Agitar la harina en un matraz con una mezcla
de acetona-agua (3:1), en cantidad
Material y procedimiento experimental suficiente para cubrir perfectamente el
polvo.
3. Filtrar la mezcla, lavando con pequeñas
Gradilla
porciones de acetona.
Baño maría
Parrilla 4. El filtrado se deja en el refrigerador hasta que
8 Tubos de ensayo cristalice. Los cristales se pueden volver a
8 Matraces Erlenmeyer de 125 ml cristalizar disolviéndolos en agua caliente y
Bureta adicionando gota a gota acetona fría hasta

conseguir un ligero enturbiamiento.
Termómetro
5. El extracto se debe conservar a pH 6.3,
Material biológico:
adicionándole la cantidad adecuada de
Harina de haba o de soya 100 g. buffer de fosfatos para lograr este pH. Puede
emplearse alcohol en lugar de acetona, en
Reactivos:
especial si la harina es de soya.
- Disolución de urea 0.25 M, 500 mL
6. En caso de emplear una ureasa comercial
- Disolución de rojo de metilo al 0.04%, 50 mL
prepara la disolución para la prueba en
Disolución de ureasa 50 mL
buffer de fosfatos a pH 6.3 a una concentración 2da Serie Tubos Problema

de 0.1%. 1 2 3 4 5
Urea 0.25 M
b) Determinación de la Actividad a diferente 5 5 5 5 5
(ml)
pH y temperatura. Buffer (ml) 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5
1. Prepara dos series de tubos, 5 que sirvan De pHs 5 6 7.2 8 10

Extracto de
como blanco y 5 que contendrán el 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
ureasa (ml)
problema, rotulando claramente, agregue lo Incubar a 50° C durante 30 minutos
que indica los cuadros e incubándolos como HgCl2 al 1%
0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
se indica, (ml)
Titular con HCl 0.1N
2. Terminando el proceso de incubación, titule
Resultados
el contenido de cada tubo, en un matraz (ml de HCl
0.1N)
diferente, agregando 4 gotas del indicador
Diferencia entre titulaciones x 50 = micromoles
Shiro-Tashiro o de rojo de metilo y para
de urea hidrolizados.
titular utilice HCl 0.1N.1
I. Efecto pH:
II. Efecto Temperatura:
1ra Serie Tubos Blanco
1ra Serie Tubos Blanco
1 2 3 4 5
1 2 3 4 5
Urea 0.25 M
5 5 5 5 5 Urea 0.25 M
(ml) 5 5 5 5 5
(ml)
Buffer (ml) 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5
Buffer(ml) pH
De pHs 5 6 7.2 8 10 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5
6.0
HgCl2 al 1% HgCl2 al 1%
0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
(ml) (ml)
Incubar a 50° C durante 5 minutos, agitando Temperatura
Extracto de de incubación 20 30 40 50 60
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 (° C)
ureasa (ml)
Incubar a 50° C durante 25 minutos, titular con HCl Tiempo de incubación 5 minutos.
0.1N Extracto de
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Resultados ureasa (ml)
(ml de HCl Incubar 25 minutos más y titular con HCl 0.1N
0.1N)
Resultados (ml
de HCl 0.1N)
2da Serie Tubos Problema
1 2 3 4 5
Urea 0.25 M
5 5 5 5 5
(ml)
Buffer (ml)
4.5 4.5 4.5 4.5 4.5
pH 6.0
Extracto de
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
ureasa (ml)
Temperatura
de incubación 20 30 40 50 60
(° C)
Tiempo de incubación 30 minutos
HgCl2 al 1%
0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
(ml)
Titular con HCl 0.1N
Resultados
(ml de HCl
0.1N)
HOJA DE RESULTADOS
1. Grafique en papel milimétrico los micromoles de urea hidrolizados (ordenadas) contra el pH o

temperatura según sea el caso (abscisas) y una los puntos en línea recta. Cálculos:
El número de micromoles de urea hidrolizados en cada tubo es igual a los ml de HCl 0.1 N
multiplicados por 50, que se deduce de la siguiente forma: se necesitan dos moles de HCl por cada
mol de urea hidrolizada. Así, la solución de HCl 0.1 N contiene 100 micromoles/mL, por lo que a cada
ml le corresponden 50 micromoles de urea hidrolizados.
2. Escriba la reacción balanceada y con fórmulas desarrolladas, de la hidrólisis de la urea.
3. Escriba la reacción que ocurre entre el carbonato de amonio y el HCl durante la titulación.
4. De acuerdo con los resultados de tu grafica ¿cuál es el pH óptimo y la temperatura óptima para la
ureasa?
Conclusiones:
Cuestionario:
1. Una enzima la cual tiene su actividad máxima en pH 5 exhibe una gran reducción de su
actividad en pH 7 Explica brevemente ¿por qué?
2. ¿Qué parámetros fundamentales influyen en la constante de velocidad de una reacción
enzimática? ¿Qué parámetros influyen en la velocidad de una reacción enzimática?
3. En las reacciones químicas orgánicas e inorgánicas la temperatura es incrementada más
rápidamente. Esta misma dirección es observada cuando una reacción de la enzima catalizada
es llevada a cabo a 15, 25 y 40° C. Sin embargo a 45 y 50 ° C la velocidad de reacción
disminuye fuertemente. Explica ¿Por qué sucede esto?
4. Indica si los siguientes enunciados son Falsos o Verdaderos, si el enunciado es falso, corrígelo.
a) El valor de la Vmáx es una característica fundamental para cada enzima.

b) Enzimas las cuales se ajustan a la cinética de Michaelis-Menten no están directamente
involucradas en cualquier regulación de realimentación.
c) El HCl puede actuar como un ácido general de la catálisis.
Lípidos
LÍPIDOS
Los lípidos se definen como esquema aceptado universalGmente para
compuestos insolubles en agua extraídos de clasificarlos.
los organismos vivos por solventes no polares
Se han clasificado de diferentes
o débilmente polares. Esta definición se basa
maneras, siendo la más satisfactoria la que se
en una propiedad física.
basa en la estructura de sus esqueletos.
Se consideró que el papel de los
Tabla 1.1 clasificación de los lípidos.
lípidos como formas de almacenamiento de
energía y como componentes estructurales de Complejos (saponificables): esteres de ácidos
las membranas carecía de interés debido a grasos que contienen otro grupo químico
que no tenían diversos papeles metabólicos además de un alcohol y un ácido graso.
de otras biomoléculas. Actualmente con
Fosfolípidos (contienen nitrógeno y fosfato)
ayuda de nuevas técnicas tales como la
cromatografía en capa fina y la cromatografía Lecitinas (fosfatidil colina)
gas- líquido, la investigación sobre los lípidos Cefalinas (fosfaditil etanolamina,

ha alcanzado un papel clave en la fosfatidil serina)
investigación bioquímica. Fosfatidil inosítidos
Los lípidos se pueden clasificar en Plasmalógenos

saponificables (lo que significa que son Esfingomielinas
hidrolizables mediante calor y un álcali
Glucolípidos (contienen nitrógeno, pero no
rindiendo sales y ácidos grasos entre otros fosfato)
componentes moleculares) e
Cerebrósidos
insaponificables. La primera clase incluye
grasas neutras de animales, plantas y varios Gangliosidos
tipos de lípidos presentes en las membranas Sulfolípidos
de los sistemas biológicos. La segunda
Lipoproteínas
incluye terpenos, esteroides y vitaminas
liposolubles. Simples (insaponificables): esteres de ácidos
grasos con diversos alcoholes.
El termino lípido (del griego lipos)
abarca a un grupo de compuestos con una Triacilglicéridos o grasas neutras.+ Esteres de
estructura muy diversa, por lo que no existe un ácidos grasos con glicerol).
Ceras: esteres de ácidos grasos con Calor de combustión: los lípidos en especial
alcoholes distintos al glicerol + alcoholes los grandes ácidos grasos, son moléculas
alifáticos, colesterol, etc.) altamente reducidas pues casi no contienen
oxígeno. Por ello, tienen el más alto calor de
Lípidos derivados: obtenidos por hidrólisis de
combustión de todas las biomoléculas, 9 Kcal
los grupos anteriores.
por gramo.
Ácidos grasos
Glicerol, etc. Propiedades químicas:
Sustancias asociadas a los lípidos:
Hidrólisis: puede hacerse en medio alcalino,
Serie de terpeno: carotenos, vitamina A.
ácido o por acción de enzimas.
Serie de las naftoquinonas: vitamina K y
tocoferoles (vitamina E). Saponificación: se da por la hidrolisis en
Serie esteroide: esteroles, ácidos biliares, medio alcalino, el hidrogeno carboxílico del
hormonas corticales y sexuales, etc. ácido es desplazado por un metal más activo
(sodio).
Propiedades de los lípidos.
Propiedades de las dobles ligaduras en los
Algunas de las propiedades generales, físicas ácidos grasos: los puntos de insaturación en
y químicas, de los lípidos se derivan de las las moléculas son sitios más activos que las
características de los ácidos grasos que regiones con estructuras saturadas.
forman parte de ellos.
Halogenación: se emplea para cuantificar la
Propiedades físicas: proporción de ácidos grasos poliinsaturados
en una muestra de lípidos y se expresa por el
Solubilidad: en general, en las células hay un
número de yodo, es decir, los gramos de yodo
promedio de 70% de agua. Los lípidos son
que se pueden unir a 100 g de grasa.
insolubles en agua, solubles es disolventes no
polares. Oxidación: se lleva a cabo con el oxígeno del
aire a la temperatura ambiente; da como
Punto de fusión: el punto de fusión de los
resultado la formación de derivados
ácidos grasos y de los lípidos que contiene,
oxigenados de los ácidos grasos en el sitio de
aumentan con la longitud de la cadena y
insaturación.
disminuye con las insaturaciones.
Hidrogenación: es la introducción del

Peso específico: todos los lípidos tienen
hidrogeno en las dobles ligaduras.
menor densidad que el agua.
PRÁCTICA No. 14
IDENTIFICACIÓN GENERAL DE LOS LÍPIDOS.
Vitacura
Reporte
Medidas de seguridad El alumno debe portar su equipo y material de seguridad y
atender al reglamento del laboratorio
Disposición de los residuos De acuerdo con el reglamento interno de la facultad en el anexo
1. En caso de tener duda preguntar al profesor responsable de la
Objetivo: 1. El índice de refracción,

determinación sencilla y rápida que en
Determinar la presencia de lípidos
trabajos de rutina pueden identificar un
mediante reacciones de identificación
compuesto o detectar adulteraciones,
específicas y diferenciar las clases de
por comparación con el índice de
lípidos mediante diversos análisis
refracción del aceite o ácido graso
físicos y químicos.
patrón, puro.
Fundamento:
2. El índice de acidez, que se define
Para diferenciar la gran cantidad de como la cantidad de mg de KOH
lípidos que se pueden encontrar en necesarios para neutralizar la acidez
alimentos y productos biológicos, es libre de 1 g de muestra. Si se conoce la
necesario efectuar diversos análisis fórmula del ácido graso se puede
físicos y químicos. En esta práctica se calcular fácilmente el índice de acidez
efectuarán algunos representativos, teórico correspondiente al ácido graso
como son: puro. Cuando se emplea NaOH en
lugar de KOH para efectuar la titulación
debe convertirse el resultado a su cuyo punto de fusión y forma de cristalización

equivalente en KOH. ayudan a la identificación del ácido graso.
Trabajando con NaOH de normalidad 4. Para la identificación del colesterol y otros

N, la fórmula para calcular el índice de esteroides, se han descrito varias reacciones
acidez será: sencillas como la de Salkowski y la de
Lieberman-Burchard. El fundamento de
estas reacciones es la formación de
derivados coloreados de los esteroides,
cuando se tratan con ácidos. El color y su
40: Es el peso molecular de NaOH. intensidad varían según el esteroide, el tipo
de ácido y la concentración de éste.
56: Es el peso molecular de KOH.
Material y procedimiento experimental:
56/40: Es el factor que permite convertir
el peso de NaOH a peso de KOH. Material de laboratorio:
V: Es el volumen en ml de NaOH de 2 Vasos de precipitados de 250 mL

normalidad N requerido en la titulación 1 Probeta de 100 mL
(restando el volumen que se gaste en
1 Bureta
el blanco).
5 Tubos de ensaye de 13 x 100
M: Es el peso de la muestra en gramos.
1 Pipetas graduadas de 10 mL
El índice de yodo sirve para determinar el
2 Pipetas graduadas de 5 mL
grado de insaturación de un ácido graso o
Soporte universal.
aceite, debido a que el yodo es absorbido
únicamente en los dobles En este caso se Pinzas para bureta
determinará únicamente en forma Mechero
cualitativa, para saber si el compuesto tiene
Parrilla
dobles enlaces. El índice de yodo se define
como la cantidad de yodo, expresada en Baño maría
gramos, que absorben 100 g de muestra. Gradilla
3. La formación de los complejos de ácidos Material biológico:

grasos con urea permite la obtención de
• Aceites de oliva y de maíz (20 mL)
compuestos cristalinos fácilmente aislables,
Equipo:
• Refractómetro de Abbe 2. Agregar 50 mL de etanol

• Microscopio neutralizado.
Reactivos:
3. Introducir el matraz en un baño
• Ácidos oleico, esteárico y palmítico (25 g de agua mantenido a 60° C sin
cada uno) dejar de calentar, agregando 10
gotas de disolución de fenolftaleína
• Colesterol 1 g
y poniendo en la bureta NaOH 0.1
• Solución de lugol N el cual se agrega hasta obtener
color rosa resistente.
• Anhídrido acético, 10 ml
c) Formación de Complejos de
• Ácido sulfúrico concentrado, 10 mL
Ácidos Grasos con Urea.
• Solución de almidón
1. Disolver 1 g de un ácido graso en 5 mL de
• Disolución de urea en metanol disolución de urea en metanol. (Si el ácido
graso es sólido, disuélvalo en metanol,
• Etanol neutralizado
calentando suavemente).
• NaOH 0.1N
2. Agitar intensamente y luego deje enfriar
• Disolución saturada de fenolftaleína al 1% hasta cero grados en baño de hielo o en
en etanol al 75%, 20 mL refrigerador. Filtrar, secar los cristales v
obsérvelos al microscopio.
Procedimiento:
3. Determina su punto de fusión y dibuje los
a) Índice de Refracción.
cristales.
1. Determine el I.R. de un aceite
d) Absorción de Yodo por Ácidos Grasos
vegetal, en el refractómetro de
Insaturados.
Abbe, y anotar los resultados
obtenidos. 1. Ponga en un tubo de ensayo 2 mL de
aceite de oliva o de ácido oleico.
b) Índice de Acidez.
2. Agregar 5 gotas de lugol y agitar. Esta
1. Pesar exactamente una muestra mezcla debe ser rojiza, como la
entre 10 y 15 g de aceite de maíz, disolución de yodo.
sobre un vaso de precipitados o un 3. Calientar a la flama y observar que el
matraz previamente tarado. color va cambiando cuando el color
inicial ha desaparecido totalmente, deje 3. Repartir esta disolución en 2 tubos para

enfriar y agregue 10 gotas de disolución efectuar, con la mitad, la reacción siguiente:
de almidón. Se observará que no hay A uno de los tubos agregar 1mL de H2SO4
formación del color azul lo cual indica concentrado deslizándolo por las paredes.
que no hay yodo libre en la mezcla. Si se 4. Observar el tubo de lado, contra un fondo
agregó lugol en exceso aparecerá el semi-oscuro, para apreciar la fluorescencia.
color azul, por haber sido incompleta la
5. Anotar lo observado.
absorción agitar. La capa superior y la
II. Reacción de Liebermann.
inferior tomaran colores distintos.
e) Identificación de Colesterol. 1. Agregar 5 gotas de anhídrido acético y dos

gotas de H2SO4 concentrado, a la otra
I. Reacción de Salkowski. porción de disolución de colesterol en
cloroformo.
1. En un tubo de ensayo perfectamente
seco, ponga 100 mg aproximadamente de 2. Mezclar suavemente y anotar el color que
colesterol. adquiere inicialmente y los cambios que se
van observando en el mismo.
2. Agregar 3 mL de cloroformo para
disolverlo
HOJA DE RESULTADOS
1. Índice de refracción Aceite empleado

2. Volumen de NaOH gastado Normal
3. Peso de la muestra Cálculos efectuados
4. Aplicando la fórmula indicada en la introducción, calcule el índice de acidez.
5. Forma de los cristales.
6. Punto de fusión
7. Reacción de Salkowski
8. Reacción de Liebermann
Discusión:
Conclusiones:
Cuestionario:
1. Sugiere una lista de características generales y sobresalientes de los

ácidos grasos encontrados en los organismos.
2. ¿Qué información práctica se obtiene de la determinación del índice de
yodo?
3. ¿Podría el índice de acidez incrementarse si el aceite de maíz estuviera
viejo? Explica ampliamente.
4. ¿De los datos obtenidos en la práctica podrías tu predecir si el aceite de
maíz que utilizaste era viejo o fresco?
5. ¿Por qué los detergentes son superiores a los jabones?
6. La propaganda comercial hace creer que el colesterol es malo para la salud
a) Explica por qué esto es totalmente cierto.

b) Explica por qué esta aseveración no es totalmente correcta
1. Explica la naturaleza hidrofóbica de los lípidos.
¿Cuál es la diferencia entre los lípidos saponificables y los no saponificables?
¿Qué es el índice de acidez?
¿Qué es el índice de refracción?
¿Para qué sirve el índice de saponificación?
Libro: apellidos autor; Nombre. (Año).Titulo. Editorial.Edición.País.Página consultada.
http://www.
PRÁCTICA No. 15
EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DEL COLESTEROL
Bitácora
Reporte
Objetivo: un medio ácido fuerte (ácido sulfúrico). La

Extraer colesterol a partir de la yema etapa inicial del proceso consiste en la
de huevo y hacer su identificación por el protonación del grupo hidroxilo del colesterol,
método de Liebermann- Burchard. seguido de su deshidratación para formar un
ión carbonilo 3,5- colestadieno. La oxidación
Fundamento: secuencial de este ión carbonilo alílico por el
Una característica fundamental de los sulfúrico produce un compuesto cromóforo, el
lípidos es su solubilidad, estos son solubles en colestahexano- ácido sulfónico, que absorbe
compuestos apolares e insolubles en energía en la zona de la luz visible, a 410nm.
compuestos polares, por lo que pueden
extraerse de los materiales que los contienen Material y reactivos:
mediante disolventes orgánicos más o menos Material de laboratorio:
apolares. Varilla de vidrio
Para identificar el colesterol en esta Embudo de filtración
práctica utilizaremos un método colorimétrico: Vasos de precipitado de 250 mL
el más popular es el de Liebermann- Parrilla
Burchard, en el que la reacción tiene lugar en Cápsula de porcelana
Pinzas para cápsula 4. Vaciar lentamente la solución de éter a

Matraz de 250 mL 30 mL de acetona agitando. El
Embudo Buchner precipitado presente es lecitina que
Tubos de ensaye forma generalmente un conglomerado
mascarrilla esférico. Filtrar para separar la lecitina.
googles Guardar el filtrado en un matraz de 250
mL para aislar el colesterol.
Reactivos: 5. Evaporar el filtrado sobre una parrilla
Etanol en una cápsula hasta formar una
Éter pasta. Enfriar.
Solución etanol- éter 2:1 6. Agregar 5 mL de solución alcohólica
Acetona de KOH al 10% a la pasta. Agitar bien
Alcohol etílico y calentar la solución en un matraz
Solución alcohólica de KOH al 10% durante 6 minutos sobre la parrilla (se
Ergosterol 0.02% en cloroformo pueden agregar algunos mL de alcohol
Anhídrido acético para mantener el volumen).
Ácido sulfúrico concentrado 7. Después del calentamiento en KOH
(saponificación) enfriar el matraz y
Material biológico: agregar 40 mL de éter para extraer el
Huevo colesterol.
8. Evaporar la solución de colesterol a
Procedimiento: sequedad en cápsula de evaporación
1. Separar la yema de la clara, una vez grande sobre parrilla. Separar
separada, agitar con 30 mL de etanol cualquier líquido que quede.
y 15 mL de éter. Reposar 10 minutos y 9. Extraer el colesterol calentando el
agitar a intervalos. residuo con 5 mL de etanol (en
2. Filtrar la mezcla a través de un papel parrilla).
filtro humedecido en etanol, recibir el Transferir la solución a un tubo seco.
filtrado en un vaso seco. Lavar el Volver a extraer el residuo con otros 3
residuo del papel filtro con una nueva mL de etanol y combinar los extractos
porción de etanol, éter (2:1) alcohólicos. Centrifugar durante 3 a 4
3. Evaporar el filtrado a sequedad en minutos.
cápsula de evaporación sobre parrilla. 10. Decantar la solución alcohólica que
Disolver el residuo en 10 mL de éter. contiene el colesterol a otro tubo seco
y agregar agua gota a gota hasta que patrón) al 0.02% en cloroformo y

ya no se forme más precipitado. Dejar añadir 15 gotas de anhídrido acético a
reposar el tubo 10 minutos y cada tubo.
centrifugar. 2. Mezclar y dejar enfriar.
Guardar el precipitado y descartar el
líquido. 3. Añadir 5 gotas de ácido sulfúrico
11. Secar el colesterol inclinado el tubo concentrado.
sobre un lado y pasar una ligera 4. Mezclar y observar los cambios de
corriente de aire en el interior del tubo. color.
12. Efectuar la prueba de Liebermann-
Burchard al colesterol seco.
Prueba de Liebermann- Burchard.

1. Poner en tubos de ensaye secos 2 mL
de soluciones diluidas de colesterol
(problema) y ergosterol (solución
HOJA DE RESULTADOS
¿Cómo se observó el colesterol extraído de la yema de huevo?
La reacción de Liebermann- Burchard fue: Positiva______ Negativa______
Esquematizar los resultados.
Discusión:
Conclusión:
Cuestionario:
1. ¿Qué son los lípidos?
2. ¿Cómo se clasifican los lípidos?
3. ¿Qué funciones biológicas tienen los lípidos en nuestro organismo?
Ácidos
nucleicos
ÁCIDOS NUCLÉICOS
La información genética es citosina o timina. La fig. 4.2 muestra las

almacenada y trasmitida por los ácidos estructuras químicas de las bases purínicas y
nucleicos DNA (ácido desoxirribonucleico) y pirimidínicas.
RNA (ácido ribonucleico). El DNA y RNA son
polímeros lineales de nucleótidos, los Purinas
nucleótidos son las unidades manoméricas de
los ácidos nucleicos. Los ribonucleótidos y los
desoxirribonucleicos constan cada uno de tres
componentes: una base aromática, un azúcar
pentosa y de uno a tres grupos fosfatos. La
figura 7.1 muestra la estructura química de un Adenina Guanina
desoxirribonucleótido y ribonucleótido.
Pirimidinas
Desoxirribonucleosido-5´-P
ó
5´-desoxirribonucleotido Citosina Timina Uracilo
Figura 4.2
Si el azúcar no está fosforilado, la estructura
se denomina nucleosido. Un Nucleosido
Ribonucleosido-3´-P consta de una base púrica o piridínica unida a
ó una pentosa. Los grupos fosforilos pueden
3´-ribonucleotido
estar unidos a cualquier grupo hidroxilo en el
Figura 4.1
residuo de azúcar de un nucleosido para
Los ribonucleótidos contienen el azúcar ribosa
formar el correspondiente nucleótido el cual
y una base por lo general adenina, guanina,
se denomina como un éster fosforilo de un
citosina o uracilo. Los desoxirribonucleótidos
nucleosido.
contienen el azúcar 2´-desoxirribosa y una
base, por lo general adenina, guanina,
Los nombres de las bases principales del RNA

y del DNA y sus derivados nucleosidos y
nucleótidos, aparecen en la siguiente tabla:
Tabla 2.1 Nomenclatura de bases, nucleosidos y nucleótidos. 25
Base Ribonucleosido Ribonucleótido (5´-monofosfato)
Adenina (A) Adenosina Adenilato (AMP)
Guanina (G) Guanosina Guanilato (GMP)
Uracilo (U) Uridina Uridilato (UMP)
Citosina (C) Citidina Citidilato (CMP)
Base Desoxiribonucleosido Desoxirribonucleótido (5´-monofosfato)
Adenina (A) Desoxiadenosina Desoxiadenilato (dAMP)
Guanina (G) Desoxiguanosina Desoxiguanilato (dGMP)
Uracilo (U) Desoxiuridina Desoxiuridilato (dUMP)

Citosina (C) Desoxicitidina Desoxicitidilado (dCMP)
hidrógeno (interior), estando los azúcares
Los mononucleótidos en el DNA y RNA fosfato en el exterior.
están unidos entre sí por enlaces 3´-5´- Solo dos pares de bases pueden ser
fosfodiesteres. Los polinucleótidos, al igual acomodadas en la estructura helicoidal doble
que los polipéptidos, tienen polaridad. (dúplex), las dos bandas son
El azúcar en un extremo de la cadena complementarias.
tiene un grupo 3´-hidroxilo o fosforilo (3´- Las moléculas de RNA son por lo
terminal) y en el otro extremo tiene un grupo general de una sola banda. Exhiben
5´-hidroxilo o fosforilo (5´- terminal). estructuras helicoidales parciales e irregulares
En 1953 Watson y Francis Crack con enlaces de hidrógeno intercambiables
dedujeron la estructura del DNA de su patrón entre las secuencias ocasionalmente
de difracción de rayos X, la molécula de DNA complementarias y antiparalelas.
es una hélice de doble banda con dirección El DNA de doble banda es el
hacia la derecha. Las bases de las dos bandas transportador de la información genética en
forman pares unidos por puentes de todos los sistemas vivientes, excepto en virus
que contienen genomas de RNA y algunos Las moléculas de RNA de

que contienen DNA, la cual es pequeña, transferencia (RNAt) son los transportadores
circular y de una sola banda. de los monómeros de aminoácidos, activados
La información genética en el DNA se para la síntesis de proteínas.
transcribe en tres clases de RNA. Las Varios RNAt han sido secuenciados,
moléculas de RNA mensajero (RNAm) son las todos ellos parecen tener la característica de
copias de las secuencias de nucleótidos de la estructura secundaria en hoja de trébol.
DNA que dirigen la síntesis de proteínas. Todas las moléculas de RNAt finalizan en el
Varían en la longitud de la cadena desde unos terminal 5´con pG y tienen la secuencia
pocos cientos a unos varios miles de terminal 3´pCpCpA. Las moléculas de RNAt
nucleótidos. contienen algunos nucleótidos raros.
El RNA ribosomal (RNAr) es un
componente estructural de los ribosomas.
Existen tres clases de RNAr de tamaño
discreto, por lo general designados por sus
coeficientes de sedimentación como 5s, 16s y
23s en células procariontes y 5s, 18s y 28s en
eucariotas (s= Svedberg).
PRÁCTICA No. 16
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DEL ADN
Bitácora
Reporte
Objetivo: Para verificar que verdaderamente

Que el alumno aísle el DNA estos filamentos obtenidos son de ADN,
cromosómico a partir de un fruto. primero se rompe la cadena utilizando NaOH,
una vez separada la cadena se hace
Fundamento:
reaccionar con di fenilamina, colocamos en
El NaOH 0.2 N- SDS es un detergente baño maría y si después de unos minutos se
alcalino que nos ayuda a disolver las observa un color azul, sabemos que lo
membranas celulares y a desnaturalizar obtenido sí es ADN. 29
algunas proteínas que podrían interferir en la

extracción del ADN. Una vez que las Material y reactivos:
membranas han sido disueltas el material Material de laboratorio:
genético se encuentra libre en la solución; Tubos de ensaye
para lograr su precipitación se le adiciona Gradilla
etanol el cual produce el precipitado de las Pipetas de 1 y 5 mL
cadenas de ADN porque excluye las Varilla de vidrio
moléculas hidrófilas. Baño maría

Mortero de porcelana con pistilo
papel filtro 4. Dejar reposar 2 o 3 minutos. Observar

Reactivos cómo se precipitan los filamentos del
Buffer de extracción: 2 cucharadas de jabón ADN (zona turbia entre las dos capas).
lavavajillas líquido y una de sal en 250 ml de 5. Colectar el ADN con una varilla de
agua vidrio (girándola suavemente) y llevar
Etanol absoluto frío el ADN a un tubo pequeño que
Reactivo de Difenilamina contenga 0.2 mL de agua.
Solución de NaOH al 0.4% 6. En caso de no poder recoger el ADN
con la varilla como se indica, proceder
Material biológico a centrifugar 5 minutos a 3000 rpm.
Kiwi o fresas Descartar el sobrenadante y al
sedimento agregarle 0.2 mL de agua.
Procedimiento:
1. Retire la cáscara del fruto, retirar las Identificación:
semillas y tomar 2g de tejido blando. 1. Traslape a un tubo una pequeña
Homogeneizar y agregar 2ml de buffer porción del precipitado de ADN y
de extracción. Centrifugar durante 5 disuélvala en 1mL de hidróxido de
minutos a 1500 rpm. Filtrar el sodio.
sobrenadante. 2. Añada un volumen igual de reactivo de
2. Adicionar un volumen igual de zumo difenilamina (hasta disolver el
de piña y mezclar bien. precipitado).
3. Añadir un volumen de etanol muy frío 3. Ponga el tubo en baño maría a
equivalente al del filtrado, ebullición de 15 a 20 minutos y
cuidadosamente, haciéndolo resbalar observe la coloración azul.
por las paredes del vaso para que
forme una capa sobre el filtrado.
HOJA DE RESULTADOS
1. Anota que aspecto tenía el ADN en el tubo de ensaye cuando agregaste etanol frío.
2. En el aislamiento; menciona si hubo algún cambio de color.
Discusión:
Conclusión:
Cuestionario:
1. Menciona como está organizada la cromatina en células eucariotas
2. Dónde se encuentra el ADN en una bacteria y cuantas barreras hay que romper para
liberarlo
3. ¿Cómo actúa un detergente?
4. ¿Para qué se usó el zumo de piña?
Vitaminas
VITAMINAS
Las vitaminas son necesarias en el en agua y soluble en alcohol, éter,
desarrollo normal de los procesos vitales, acetona, aceite y grasas.
por lo que los alimentos las deben aportar
Vitamina E: Son tocoferoles y se
en cantidades suficientes.
encuentran en el insaponificable, no
Se diferencian de las enzimas en su esterólico de los aceites vegetales, es
estructura química, puesto que no son de estable al calor pero sensible a la luz,
naturaleza proteica. Son en general, tiene propiedades antioxidantes.
moléculas pequeñas de estructura muy
Vitamina B1: Se le llama también tiamina,
variada. Sin embargo, juegan un papel de
se disuelve fácilmente en agua y
coenzima, es decir, que asociadas a un
difícilmente en alcohol, es prácticamente
apoenzima de naturaleza proteica,
insoluble en éter, hexano, acetona y
desarrollan una actividad biocatalítica.
benceno.
En general las vitaminas se clasifican en
Vitamina C: Se le llama también ácido
dos grandes categorías:
ascórbico, se disuelve fácilmente en agua,
Vitaminas hidrosolubles (vitaminas del es poco soluble en alcohol e insoluble en
grupo B, vitamina C) que se encuentran éter, en ausencia de humedad es bastante
en la fase acuosa. estable al aire, pero las soluciones
acuosas se oxidan fácilmente. Es sensible
Vitaminas liposolubles (vitamina A, D, E)
a la luz sobre todo en presencia de
que están asociadas a la materia grasa.
vitamina B2.
Algunas vitaminas importantes son:
Vitamina A: Se les llama todavía

retinoles, la carencia de esta vitamina
entraña problemas visuales. Es insoluble
FACULTA. DE QUÍMICA FARMACÉUTICA BIÓLOGICA
PRÁCTICA No. 17
DETERMINACION DE CAROTENOS y DETERMINACION DE VITAMINA C EN ALIMENTOS.

Bitácora
Reporte
Disposición de los residuos En caso de tener duda preguntar al profesor responsable de la
Objetivo: carotenos que se encuentran en el extracto

Realizar una extracción de carotenos y acetónico utilizando el éter de petróleo
posteriormente realizar la identificación por disolvente apolar. 34
espectrofotometría. Se realizará una La identificación se realiza por
extracción del ácido ascórbico con ácido espectrofotometría, realizando lecturas del
metafosfórico y se realizará una valoración extracto a 450nm, longitud de onda en la que
visual oxidométrica del ácido ascórbico con los carotenos absorben la luz. 30
una solución de 2,6-Diclorofenol-Indofenol.
Fundamento: Material de laboratorio:
Las vitaminas liposolubles, como la Mortero
vitamina A, solo se pueden extraer con Pipetas de 10 mL y 5mL.
disolventes apolares, es por esto que se utiliza Vaso de precipitado de 250 mL.
éter de petróleo. En la primera maceración se Embudo de filtración rápida.
utiliza acetona para extraer los carotenos Embudo de separación.
junto con otros compuestos que se disuelven Matraz aforado de 50 mL.
en acetona. Después de esto separamos los
Reactivos: 4. Después se le agregan 15 mL de agua

Acetona destilada por cada 10mL de extracto, se
Éter de petróleo agita, se deja reposar 5 minutos (se
Solución de Ácido metafosfórico al 2% observa la separación de las capas).
Solución de Ácido metafosfórico al 10% 5. La capa superior que contiene los
Ácido acético al 10% carotenos se extrae nuevamente con 5 mL
Solución estándar de ácido ascórbico 0.5 de éter de petróleo y 15 mL de agua.
mg/mL 6. Los extractos etéreos se lavan 3 veces con
Solución de 2,6-Dicloro indofenol (D. I.) al 10 mL de agua destilada, se aforan a 50 mL
0.05% con éter de petróleo.
7. Se realiza la lectura a 450nm utilizando
Material biológico: como blanco éter de petróleo.
1 Zanahoria
1 Naranja Cálculos
1 Limón Carotenos ∁µg/100g)
1 Papa L × 3.857 × A × 100
=
1 Tomate 𝑄
en donde L es el volumen total del extracto
Procedimiento: 3.857 el coeficiente de extinción molar de los
1. Pesar 1 g de muestra y macerarlo con 10 carotenos, A la Absorbancia, y 𝑄 el peso de la
mL de acetona, decantar a matraz con muestra en gramos.
tapa; se repite esta operación hasta que la

muestra quede incolora. Determinación de vitamina C:
2. Los extractos acetónicos de cada 1. Homogeneizar de 1 a 2 g de muestra con
maceración se reunirán en un vaso de 20 mL del ácido metafosfórico.
precipitado. 2. Pasar la mezcla a un matraz aforado de
3. Filtrar el extracto y pasarlo a un embudo de 100 mL y aforar con agua destilada.
separación y agregar 5 mL de éter de 3. Valorar con solución de 2,6-Diclorofenol
petróleo por cada 10 mL de extracto y indofenol, hasta que se obtenga una
mezclar a inversión. coloración rosa que persista durante 15

segundos
HOJA DE RESULTADOS
1. Calcular la concentración de carotenos en µg/ 100 g presentes en la muestra.

2. Comparar los resultados con datos bibliográficos.
Discusión:
Conclusión:
Cuestionario:
1. ¿En qué otros vegetales podemos encontrar los carotenos?
2. ¿Qué provoca la deficiencia de vitamina A?
3. ¿Cuál es el metabolismo que sigue la vitamina A en nuestro organismo?
4. ¿Qué ocurriría en caso de sobrepasar los límites de vitamina A requeridos en el cuerpo?
Cálculos:
mg de ácido ascórbico/100mg a x T x U X 100
vxm
En donde:
a = mL de reactivo empleado en la titulación.
T = Titulo del reactivo.
U = mL de solución de la toma de ensayo (100 mL)
v = mL del filtrado empleados (10 mL)
m = Gramos de muestra.
Anexos
1. PREPARACIÓN DE REACTIVOS % = en volumen

Preparación de soluciones molares y = mL de soluto
normales: × 100 mLde solución.
La molaridad (M) es el número de moles de CONTROL DE CALIDAD:

soluto por litro de disolución. La fórmula para
preparar soluciones molares es: Determinación de volumen mínimo de
lectura y observación del “efecto
g/PM
M= menisco”.
L
La normalidad (N) es el número de En las determinaciones fotométricas es de
equivalentes gramo de soluto por litro de vital importancia que el volumen que se
disolución. La fórmula para preparar deposita en la celda de lectura sea el
soluciones normales es: adecuado para asegurar que el rayo de luz

atraviese completamente la solución.
Eq
N=
L El manejo de volúmenes inferiores al volumen
mínimo requerido ocasiona lecturas erróneas
Un equivalente de una sustancia se puede
y como consecuencia resultados incorrectos.
expresar de la siguiente forma:
Cuando se coloca una cantidad insuficiente de
(moles de la sustancia) solución en la celda, el rayo de luz atraviesa
Equivalente =
n
por el menisco de la misma y por efecto de
n es el número de H + o OH − que puede ceder. difracción se obtienen lecturas elevadas.
Soluciones porcentuales: Es por esto que al realizar las lecturas deben

observar que el volumen que se coloque en la
Porcentaje en peso: son los gramos de soluto
celda sea el adecuado para que el
disueltos en 100 g de solutos
espectrofotómetro pueda leer correctamente.
% en peso = g de soluto × 100 g de solución.
Verificación de espectrofotómetro.
Porcentaje en volumen: se define como los
La confiabilidad de las determinaciones
mililitros de soluto disueltos en 100 mL de
analíticas en el laboratorio depende entre los
solución.
otros aspectos, tanto del uso adecuado como
del buen funcionamiento de los equipos
fotométricos.
La adecuada calibración instrumental es uno Una de las fuentes de variación que más
de los factores claves para lograr exactitud en afectan la confiabilidad de los resultados
los resultados analíticos. analíticos y que se presenta con mayor
frecuencia es el inadecuado uso y
Tres características que permiten verificar el
funcionamiento de las micropipetas.
correcto funcionamiento de los
espectrofotómetros son: la calibración, la Las micropipetas pueden ser verificadas por el
sensibilidad y la linealidad. Las dos primeras método gravimétrico o el fotométrico; para el
las podemos verificar mediante la primero es indispensable contar con una
determinación del espectro de absorbancia de balanza analítica y para el segundo con
una solución de cloruro de cobalto que tiene micropipetas previamente calibradas.
una absorbancia máxima de 0.5 a 510 nm; y
El método fotométrico es sencillo y confiable,
la última la podemos verificar a través de la
además permite evaluar simultáneamente el
medición de la absorbancia de soluciones de
uso correcto, la precisión y la exactitud de las
dicromato de potasio a diferentes
micropipetas.
concentraciones conocidas cada una.
Para la verificación de precisión se utilizan 20
Si el instrumento da una absorbancia menor a
tubos a los cuales se le adiciona el dicromato
la esperada, con la solución de cloruro de
de potasio con la pipeta que se desea analizar
cobalto, se puede decir que el aparato no tiene
en una proporción de 10µ de dicromato por
la sensibilidad adecuada.
cada mL de agua, se realizan las lecturas de
Si la longitud de onda a la que se obtiene la cada tubo a 500 nm y se calcula el coeficiente
absorbancia máxima de la misma solución de de variación (CV) con la formula siguiente:
cloruro de cobalto es diferente a la indicada,
S × 100
podemos decir que el instrumento esta CV =
X
descalibrado.
Dónde: S es la desviación estándar y X es la
Si el instrumento no se incrementa la media.
absorbancia en la misma magnitud en que se
Si la CV es menor o igual al 2% la micropipeta
aumenta la concentración, podemos decir que
funciona correctamente. Si es mayor del 2%
el instrumento no tiene linealidad y no cumple
puede deberse a un mal manejo o al
con la ley de Beer.
incorrecto funcionamiento de la misma, o
Verificación del uso y funcionamiento ambos.
adecuado de micropipetas.
Para verificar con exactitud se utiliza un o la muestra de la prueba realizada

estándar relativo que está compuesto de 5 mL previamente no han sido bien eliminada e
de solución de dicromato de potasio al 8% interfiere con la siguiente determinación.
mas 500 mL de agua destilada, se lee
El efecto de acarreo puede manifestarse
absorbancia del estándar relativo
también en equipos semiatomizados o
simultáneamente con los tubos con los que se
manuales, sino se tiene el cuidado requerido.
determinó la imprecisión.
Mediante un procedimiento muy sencillo
Calcular el volumen que la pipeta está
donde empleamos soluciones coloridas de
midiendo con la siguiente fórmula:
dos diferentes concentraciones se podrá
𝑉olumen de la pipeta en µL determinar si un sistema analítico o equipo
absorbancia promedio × VNP presenta o no el efecto de acarreo.
=
absorbancia del estándar relativo
Dónde: VNP es el valor mínimo de la

micropipeta.
El porcentaje de error se calcula con la

siguiente fórmula:
(Vobs − Vesp) × 100

Porcentaje de error:
Vesp
Dónde: Vosb es el volumen de la micropipeta,

determinado con la primera fórmula y Vesp es
el valor nominal de la micropipeta.
El porcentaje de error de la micropipeta debe

ser menor al 2%. En caso de ser mayor la
micropipeta debe calibrarse de acuerdo con el
instructivo del fabricante.
Estudio del efecto de acarreo.
Uno de los factores que contribuyen

frecuentemente a que se tengan coeficientes
de variación (CV) elevados, es la interferencia
de una medición con otra, es decir el reactivo
2. REGLAMENTO INTERNO DE LA Artículo 117. Los usuarios del laboratorio

FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA deberán observar lo siguiente:
BIOLÓGICA. LEGISLACIÓN
I. Utilizar bata blanca abotonada de manga
UNIVERSITARIA. H. CONSEJO
larga;
UNIVERSITARIO GENERAL, 2018.
II. Utilizar el material de seguridad personal
Capítulo II
necesario como mascarilla, lentes de
De los laboratorios seguridad, guantes, cubre bocas, gorra, entre
otros;
Artículo 115. Los laboratorios son los espacios
en donde se realizan prácticas para III. En caso de que se realicen pruebas o
desarrollar habilidades técnico-científicas que experimentos de larga duración y cuando sea
integren los conocimientos teóricos adquiridos necesario dejar encendido el equipo e
en el aula. El uso de las instalaciones y de los instrumentos como estufas u hornos durante
servicios prestados por los laboratorios está largos periodos de tiempo, el usuario deberá
reservado exclusivamente para los usuarios. comunicarlo al Técnico Académico o personal
académico de tiempo completo con carga
Artículo 116. Son usuarios de los laboratorios,
académica diversificada y asignada al
de la Facultad de Química Farmacéutica
laboratorio y colocar las etiquetas
Biológica los siguientes:
correspondientes a los equipos en uso;
I. El personal académico;
IV. Hacerse responsable del buen uso y
II. Los alumnos con inscripción vigente, de manejo de los instrumentos y equipos del
licenciatura o posgrado; laboratorio y disponiendo para tal fin de los
manuales correspondientes;
III. El personal académico y alumnos de otras
instituciones de educación superior con las V. Notificar al personal del laboratorio
que se haya acordado un convenio de cualquier desperfecto observado en los
colaboración; y equipos e instrumentos que se le otorgaron;
IV. Las personas ajenas a la Facultad que VI. Devolver el equipo e instrumentos con
requieran el uso de los laboratorios deberán todos los accesorios que recibió al solicitarlos;
solicitar autorización por escrito al Director de
VII. Al término de la práctica, deben dejar
la Facultad.
limpias y libres de desechos las mesas de
trabajo;
VIII. Queda estrictamente prohibido arrojar a) El adeudo deberá cubrirse a más tardar en
desechos sólidos a coladeras de las mesas de la última semana del periodo de clases. En
trabajo y áreas destinadas al lavado de tanto no se cubra este adeudo no se podrá
material dentro del laboratorio; disponer de otros préstamos; y
IX. Se prohíbe fumar y jugar en los b) En caso de incumplimiento de la reposición

laboratorios; del bien dañado, el adeudo correspondiente
se turnará al encargado del almacén general
X. Las actividades como correr e ingerir
de la Unidad de Ingeniería y Ciencias
alimentos o bebidas serán permitidas única y
Químicas, quien informará al Director de la
exclusivamente si lo justifica la práctica a
Facultad para la aplicación de la sanción que
realizar;
corresponda en términos de la legislación
XI. Para el préstamo de equipo, instrumentos universitaria.
o material, el usuario deberá llenar el vale
Artículo 118. El personal académico
correspondiente y dejar al responsable del
responsable de la experiencia educativa debe
laboratorio, su credencial vigente que lo
cumplir con lo siguiente:
acredita como miembro de la Facultad o una
identificación oficial vigente con fotografía; I. Entregar al técnico académico del
para el caso de personas ajenas a la Facultad, laboratorio o personal académico de tiempo
además de los requisitos anteriores deberá completocon carga académica diversificada y
tener el visto bueno del Director de la asignada al laboratorio el Programa de
Facultad; actividades de las prácticas a realizar; e
XII. Reparar o reponer los materiales y II. Informar los reactivos, materiales,
equipos de laboratorio concedidos en equipos e instrumentos que requerirá por
préstamo que hayan sido dañados o sección, promedio de 30 alumnos, a fin de que
extraviados, de acuerdo con las éstos sean adquiridos o preparados
características que indique el técnico oportunamente; esta información se entregará
académico o personal de tiempo completo con en un formato establecido que proporcionará
carga académica diversificada y asignada al el técnico académico o personal académico
laboratorio, quedando retenida la credencial de tiempo completo con anticipación de por lo
del usuario involucrado hasta que se cubra el menos 5 días hábiles previos al desarrollo de
adeudo, observando lo siguiente: la práctica.
Artículo 119. Además de las obligaciones IV. Organizar y supervisar las actividades
establecidas en el Estatuto del Personal diarias que se tienen planeadas, como es la
Académico el técnico académico en turno o preparación de soluciones, reactivos, equipos
personal académico de tiempo completo con e instrumentos a emplear, inóculo, limpieza de
carga académica diversificada y asignada al las áreas de trabajo, retiro de residuos
laboratorio, es el responsable del buen químicos peligrosos o residuos peligrosos
funcionamiento del mismo, así como del uso y biológico infecciosos, entre otros.
conservación de los equipos, materiales y
Artículo 120. El personal académico titular de
espacios físicos que le hayan sido asignados.
la experiencia educativa es responsable en
Sus funciones serán las siguientes:
los laboratorios de lo siguiente:
I. Gestionar ante la Coordinación de
I. Respetar la hora de entrada y salida, con la
Laboratorios, la adquisición de los materiales,
finalidad de optimizar los tiempos que se
consumibles y equipos necesarios para la
requieren para dar continuidad a las prácticas
realización de las prácticas programadas en el
de otras experiencias educativas;
semestre inmediato, de acuerdo con los
recursos disponibles; II. Capacitar adecuadamente a los alumnos
para el uso y manejo de reactivos, equipos y
II. Garantizar que el académico cuente con el
materiales de laboratorio que se vayan a
equipo y material necesario para realizar su
requerir, pero también serán apoyados por el
práctica y deberá estar al pendiente del
técnico académico en cuanto al uso de los
seguimiento de la misma, fungiendo como
mismos;
apoyo en su realización, sobre todo en lo
relacionado al manejo de los equipos. En caso III. Verificar al menos con 5 días hábiles de
de que el personal de apoyo falte, el Técnico anticipación con el técnico académico o
Académico deberá comprometerse a suplir las personal académico con carga académica
funciones que éste realice con la finalidad de diversificada y asignada al laboratorio, que
no atrasar las prácticas programadas; estén disponibles los requerimientos para la
realización de la práctica, siempre basados en
III. Tener el material y reactivos listos antes de
la “Guía de Prácticas” de la experiencia
iniciada la sesión y de no contar con los
educativa aprobado por la academia del
insumos requeridos, deberá notificar al
programa educativo;
académico en la sesión anterior a fin de que
éste pueda, en caso necesario, cambiar la
práctica a realizar; y
IV. Supervisar las prácticas de laboratorio y solicitud estará supeditada a la disponibilidad

demás actividades que deban realizar los de horarios y de recursos humanos y
alumnos; materiales.
V. Estar presente en las prácticas de la Artículo 121. Los usuarios o encargados de

experiencia educativa o en su ausencia, el los laboratorios que incurran en una falta
Técnico Académico o personal académico de establecida en este Reglamento se harán
tiempo completo con carga académica acreedores a la sanción correspondiente de
diversificada y asignada al laboratorio en caso acuerdo con lo
eventual de que el académico responsable de
que establece la legislación universitaria.
la práctica deba atender alguna comisión
académica avalada por la Dirección de la Artículo 122. Para el manejo de residuos
Facultad, en cuyo caso deberá dejar con peligrosos biológico-infecciosos (RPBI) y
antelación las indicaciones necesarias para químicos, la Facultad cuenta con un programa
realizar la sesión experimental; institucional a cargo de la coordinación de
laboratorios y sustentado en las Normas
VI. Notificar en caso de que los alumnos
Oficiales Mexicanas NOM-087-ECOL-SSA1-
tengan que realizar preparaciones u
2002 y de la NOM-052-SEMARNAT-2005.
observaciones para iniciar, continuar o
concluir una práctica, en horario diferente al Artículo 123. El responsable de llevar a cabo
establecido para la experiencia educativa, al el programa para cada tipo de residuos es el
técnico académico o personal académico con técnico académico designado por el Director
carga académica diversificada y asignada al de la Facultad.
laboratorio con al menos dos días de
Artículo 124. Para el manejo de los residuos
anticipación, y respetando los horarios de
químicos peligrosos se observará lo siguiente:
trabajo y actividades ya programadas; y
I. Se depositarán en recipientes identificados
VII. Solicitar con una semana de anticipación
por grupos funcionales, solventes, ácidos
por escrito al técnico académico del
orgánicos, compuestos halogenados y no
laboratorio correspondiente o personal
halogenados, entre otros, los cuales serán
académico con carga académica diversificada
proporcionados por el Técnico Académico, el
y asignada al laboratorio, en el formato que
personal académico de tiempo completo con
para tal efecto éste le proporcione al
carga académica diversificada y asignada al
académico responsable de la experiencia
laboratorio o el preparador, desde el inicio del
educativa, la aprobación de la realización de
semestre; y
prácticas de laboratorio extraclase, esta
II. Los residuos químicos deberán ser tratados

por los alumnos y los académicos de la
experiencia educativa de acuerdo con la
normatividad en materia.
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Dra. Yolanda Cocotle Ronzón

Dra. Minerva Hernández Lozano

M.C. Marcos Fernando Ocaña Sánchez

Dr. Alberto Sánchez Medina

M.C. Gabriel Arturo Soto Ojeda

Dra. Alma Vázquez Luna

Xalapa de Enríquez, Veracruz 2020

Academia de Bioquímica y Biología Molecular

EFECTO DE LOS INHIBIDORES ENZIMÁTICOS SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA

Corresponde al 40 % del curso teórico 100 %

INVESTIGACIÓN POR PRÁCTICA:

Incluirá una investigación documental para el marco teórico acompañada del

Deberá incluir parte de la investigación realizada previamente. Si existen dos o más

ACTIVIDADES DURANTE LA PRÁCTICA:

Comprende la realización de la práctica de acuerdo con el diagrama de trabajo

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La estructura del agua, con la • Disolvente de moléculas

De acuerdo con el concepto de Bronsted- La ionizacion del agua pura produce

Porque la masa de 1 L de agua es 1000 g pH = −log [H + ]

y la masa de 1 mol de agua es de 18 g, el

Keq(55.5 M) = [H+][OH] ecuación de Henderson- Hasselbach:

La constante de equilibrio para la log [A− ]

Objetivo: biológicas diferentes, es importante poder

[H + ][A] Los aminoácidos tienen un grupo amino que

las proteínas sirven de amortiguadores y 4. Repita el paso 3 hasta llegar a un pH de

20 ml por equipo de los siguientes

exactamente en la bureta (1 mL). iguales (1 mL) y anote los valores de

Nombre: Grupo: Fecha:

mL de NaOH agregados pH obtenido

2. Realice una gráfica de los resultados (pH contra mL de NaOH gastados).

Procedimiento: pH mayores a 6 usar la sal di básica de

los volúmenes adecuados y disuelva.

Nombre: Grupo: Fecha:

a) Preparación de soluciones amortiguadoras:

fibrosos constituyen la pared Por sus propiedades químicas se clasifican

tienen un grupo cetona que se denominan Reductor

Todos los monosacáridos simples tienen lineal: el primero o el segundo tiene la

Evaluación Realización de la práctica

Objetivo: Fehling) o en la reducción de Ag1+, Bi2+ u otros

NOMBRE: ________________________________GRUPO: ________FECHA:______________

1.- Completa la siguiente tabla comparativa de resultados obtenidos en cada prueba.

Evaluación Realización de la práctica

Objetivo: Los azúcares son retenidos o la fase

cámara de cromatografía, se evapora y se Ver preparación de reactivos en la sección

color morado que permitirán la

Nombre: Grupo: Fecha:

1. Realizar un esquema de los resultados observados:

Objetivo: hidróxido, en la solución de Fehling se

propiedad, lo que nos permite cuantificar Solución estándar de lactosa (2mg/mL).

2. Añadir 6 mL de solución saturada de 8 0.7 0.3

2. ¿Qué métodos se utilizan para la determinación de azúcares reductores además del

3. De acuerdo con la naturaleza química de los carbohidratos a que clasificación pertenecen

Los aminoácidos son moléculas Todos los aminoácidos proteicos

COOH laterales de naturaleza hidrocarbonada,

El carbono α es asimétrico, tiene cuatro leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina,

sustituyentes distintos, salvo que el triptofano y metionina. El aminoácido es

aminoácido glicina. Lo que caracteriza a la cadena lateral.

NOMBRE: __________________GRUPO: FECHA: