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Manual Pract Bioquimica

Manual Pract Bioquimica

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  • INTRODUCCIÓN
  • ENCUADRE DEL SISTEMA DE PRÁCTICAS
  • Introducción
  • Niveles de Desempeño
  • Programa del sistema de prácticas
  • Contenido de cada Práctica en particular
  • 1.1. Difusión
  • 1.2. Ósmosis y presión osmótica
  • 1.3. Disociación electrolítica
  • 1.4 Determinación de la acidez general de las disoluciones
  • 1.5 Determinación del pH
  • 1.6 Preparación de las disoluciones amortiguadoras
  • 2. Carbohidratos
  • 2.1. Reacciones de reconocimiento de los hidratos de carbono
  • 2.2. Prueba con naftorresorcina
  • 2.3. Monosacáridos
  • Aldohexosas
  • Prueba con el hidróxido cúprico (II), reacción de Trommer
  • 2.5. Reacción con el licor de Fehling
  • 2.6. Reacción con las sales de bismuto
  • 2.7. Reacción con fenilhidrazina
  • 2.8. Reacción de reconocimiento de la sacarosa
  • 2.9. Reacciones de fermentación de los hidratos de carbono
  • 2.10. Reacciones coloreadas del almidón
  • 2.11 Hidrólisis acida escalonada del almidón
  • 2.12. Hidrólisis enzimática del almidón
  • 2.13 Reacción del glicógeno con el iodo
  • Reconocimiento del glicógeno en los tejidos animales
  • 3. Los lípidos y su metabolismo
  • Los lípidos y sus metabolitos
  • Glicéridos (grasas)3
  • Reacciones de reconocimiento de las grasas
  • 3.1. Reacción de la grasa y el aceite con el Sudán III
  • 3.2. Determinación de la glicerina en las grasas
  • 3.4. Solubilidad de las grasas
  • 3.5. Determinación de la temperatura de fusión
  • 3.6. Determinación del número acídico
  • 3.7. Determinación del índice de iodo
  • 3.8. Determinación del número (índice) de saponificación
  • 3.9. Determinación cuantitativa de la grasa en el hígado y los músculos
  • 4.1 La labilidad térmica de las enzimas
  • 4.2 Influencia del pH sobre la actividad de las enzimas
  • 4.3 Especificidad de las enzimas
  • 4.4 Influencia de los activadores e inhibidores
  • BIBLIOGRAFIA
  • ANEXOS
  • NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD E HIGIENE

Manual de Prácticas de Bioquímica

Dr. Claudio Arzola M.C. Celia Holguín Licón Responsables de la elaboración Del manual de Bioquímica

Mauricio Ramírez Ruano, D.I. Coordinador de la elaboración de Manuales de Prácticas

MC. Javier Martínez Nevarez Presidente del H. Consejo Técnico

i

Directorio
C.P. Raúl Chávez Espinoza.
Rector de la Universidad Autónoma de Chihuahua

Ing. Heriberto Altes Médina
Secretario General de la Universidad Autónoma de Chihuahua

Dr. Alfredo de la Torre Hernández.
Director Secretario Académico de la Universidad Autónoma de Chihuahua

M.C. Javier Martínez Nevarez
Director de la Facultad de Zootecnia

M.C. Josefina Domínguez Holguín
Secretaria Académica de la Facultad de Zootecnia

Ph.D. Claudio Arzola, M.C. Celia Holguín Licón
Catedraticos de la Materia de Bioquímica

ii

Tabla de contenido
INTRODUCCIÓN ....................................................................................1 ENCUADRE DEL SISTEMA DE PRÁCTICAS .............................................2 Introducción ..................................................................................... 2 Competencias a las que contribuye, y su ubicación dentro del mapa curricular vigente. ................................................................................4 Niveles de Desempeño ...................................................................... 4 Programa del sistema de prácticas ......................................................6 Tema ....................................................................................................6 Práctica o prácticas programadas ........................................................6 Contenido de cada Práctica en particular ............................................9 1.1. Difusión ...................................................................................... 9 1.2. Ósmosis y presión osmótica ...................................................... 13 1.3. Disociación electrolítica ........................................................... 15 1.4 Determinación de la acidez general de las disoluciones .......... 17 1.5 Determinación del pH ............................................................... 18 1.6 Preparación de las disoluciones amortiguadoras ..................... 21 2. Carbohidratos ........................................................................... 24 2.1. Reacciones de reconocimiento de los hidratos de carbono .... 26 2.2. Prueba con naftorresorcina...................................................... 26 2.3. Monosacáridos ......................................................................... 27 Aldohexosas .................................................................................... 28 2.4. Reacciones de reconocimiento le los hidratos de carbono reductores....................................................................................... 28 Prueba con el hidróxido cúprico (II), reacción de Trommer........ 28 2.5. Reacción con el licor de Fehling .............................................. 29 2.6. Reacción con las sales de bismuto.......................................... 30 2.7. Reacción con fenilhidrazina ..................................................... 31 2.8. Reacción de reconocimiento de la sacarosa .......................... 32 2.9. Reacciones de fermentación de los hidratos de carbono ..... 33 2.10. Reacciones coloreadas del almidón ....................................... 34 2.11 Hidrólisis acida escalonada del almidón ................................ 35

Página iii

...................9..... 62 iv ................... 47 3............... 38 3.. Reacción de la grasa y el aceite con el Sudán III ......... 59 BIBLIOGRAFIA .................... Determinación de la glicerina en las grasas..............4 Influencia de los activadores e inhibidores ....... Los lípidos y su metabolismo..................................... 38 Reconocimiento del glicógeno en los tejidos animales ........................................... 37 2. 46 3..............................4.......................... Hidrólisis enzimática del almidón ....... 48 3..... Determinación del número (índice) de saponificación ....8......... 61 ANEXOS .................2.................. 44 3.... Determinación del número acídico ...... 44 3......................................................... Enzimas................... 43 3..................................3 Especificidad de las enzimas......... Determinación de la temperatura de fusión .......................... 56 4.................................... 41 Los lípidos y sus metabolitos .....2 Influencia del pH sobre la actividad de las enzimas.... 57 4....... 43 3..............................................................................12..........................13 Reacción del glicógeno con el iodo.............................................................................................................. 62 NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD E HIGIENE............................ Determinación del índice de iodo ................ Determinación cuantitativa de la grasa en el hígado .............6.......................................................... 49 4.............................. Solubilidad de las grasas ................................1...7.... 45 3........ 52 4............................................ 42 Reacciones de reconocimiento de las grasas.................. 58 4..........5............................................5 Determinación de la actividad de la dehidrogenasa de ácido succínico ........2....... 55 4.................. 42 Glicéridos (grasas) .....................1 La labilidad térmica de las enzimas .............................

C. mediante adaptaciones y modificaciones leves. Claudio Arzola Alvarez. pudiendo también ser usado por otros técnicos. ser usado en cualquier carrera afín. M. pero podrá. Dr. Esta destinado a servir de complemento a la materia de bioquímica de la carrera de Ingeniero Zootecnista en Sistemas de Producción de la Facultad de Zootecnia de la Universidad de Chihuahua.INTRODUCCIÓN Este manual esta diseñado para estudiantes de zootecnia y veterinaria. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 1 .

Junto con otras cosas. Dr.C. se enfatiza en la enseñanza y práctica de mediciones cuantitativas. y el uso de PCR en el campo forense. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 2 . pero por lo general están dirigidos a profesionales de la química. es necesario que adquieras una proeficiencia en el uso de los conceptos bioquímicos que soportan los trabajos teórico-prácticos de esta disciplina. este manual se dirige a estudiantes de zootecnia y veterinaria. Lo anterior seguramente propiciará una educación de profesionistas que puedan resolver problemas. Generalmente esto solo puede ser logrado mediante el incremento del número de cabezas. Claudio Arzola Alvarez. Existen numerosos manuales de laboratorio para esta materia. Dado que en lo general el conocimiento de la bioquímica prepara al estudiante para tener competencias en el área de la alimentación animal. Es sabido que el incremento de la producción pecuaria solo puede ser basado en prácticas de producción intensiva. la introducción de tecnología moderna. por las competencias que ésta promueva en los estudiantes. los cuales tienen en su curricula la materia de bioquímica. manipulación de ADN recombinante. mejor genética o selección. es necesario que los zootecnistas tengan una mayor especialización en relación a otras carreras que usan la bioquímica. La experiencia de muchos años en la docencia de la bioquímica en la Facultad de Zootecnia de la Universidad Autónoma de Chihuahua me ha demostrado que dicho enfoque no es el óptimo para un profesional de la zootecnia. uso de mayor mecanización y sobre todo. ensayo de reacciones enzimáticas. seguramente debes de tener en cuenta que la producción pecuaria en México tiene que ser competitiva y sustentable. Por lo general. aislamiento y separación de proteínas. con miras a lograr una mayor productividad por cabeza con aplicación económica de insumos. M. También es necesario tener en cuenta que las unidades de producción cuentan con laboratorios cada vez mas equipados.ENCUADRE DEL SISTEMA DE PRÁCTICAS Introducción Como estudiante de zootecnia. Por lo tanto.

y te da herramientas docentes. Se da un enfoque acerca de la finalidad del análisis. y facilitar el desarrollo de competencias en el mismo. El plan general del manual contempla la referencia a los fundamentos teóricos de la química y metabolismo de las sustancias en estudio.Manual del laboratorio de Bioquimica Encuadre…. Claudio Arzola Alvarez. M. dejando vacíos en campos emergentes de la bioquímica como lo es la biotecnología. sino que también puede usarse en labores de investigación en asignaturas diferentes a la bioquímica. se describe el análisis en una manera lo más completa posible. con lo que se pretende reforzar la enseñanza de la materia. Es por eso que el presente manual se ha diseñado con el propósito de fomentar no solo el conocimiento inherente al quehacer de la bioquímica. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Dr. existe una tendencia a enmarcar dichos conocimientos solamente en aspectos solamente en aspectos tales como el análisis de alimentos.C. Pagina 3 Sin embargo. Otra de las variantes es que contiene materiales relativos a físico-química y química coloidal. con el ánimo de que el estudiante tenga un margen amplio de independencia. amen de prepararte para eventuales empleos en laboratorios comerciales o de certificación o trazabilidad de productos pecuarios. determinación de tóxicos y conocimientos afines. Dado que el estudiante deberá presentar un protocolo y un informe para cada práctica. lo cual esta ausente en este tipo de publicaciones.

a saber “Nivel 4. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 4 ..C. lo que requiere de la participación armónica de los elementos. así como la utilización de herramientas computacionales. 2. La elaboración de un protocolo y un informe por práctica requiere de disciplina y laboriosidad. Niveles de Desempeño El conjunto de prácticas del presente manual te permitirá llegar a un desempeño de nivel 4 de acuerdo la clasificación de CONOCER. La realización de las prácticas en forma y tiempo presupone el dominio de diferentes habilidades y conocimientos. Dr. Se debe tener habilidad para motivar y dirigir grupos de trabajo”. en las que se tiene que mostrar creatividad y recursos para conciliar intereses.Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa. 3. y su ubicación dentro del mapa curricular vigente. M. Las prácticas deberán ser realizadas en equipo. Las razones por las que asumimos que obtendrás un nivel de desempeño tan alto son: 1.Competencias a las que contribuye. Claudio Arzola Alvarez. La capacidad de liderazgo deberá ser usada en forma óptima para realizar los diversos pasos de la práctica.

DE ORIGEN ANIMAL 3-3-0 SEGURIDAD E HIGIENE INDUSTRIAL 3-3-0 6 CREDITOS 726 TECNOLOGIA DE SUBPRODUCTOS DE ORIGEN ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 437 IMPACTO AMBIENTAL Y RESIDUOS 3-3-0 6 CREDITOS 627 6 CREDITOS 508 TECNOLOGÍA Y PROCESADO DE LA LECHE 3-3-0 6 CREDITOS 831 ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES I 3 CREDITOS ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES II 4 CREDITOS ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES III 4 CREDITOS ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES IV 4 CREDITOS SISTEMAS DE CONTROL SANITARIO 3-2-0 5 CREDITOS 512 DISEÑO HIGIENICO Y NORMATIVIDAD DE PLANTAS 2-3-0 5 CREDITOS 710 ANALISIS DE RIESGO 3-3-0 6 CREDITOS 725 .SOCIEDAD Y CULTURA 3-2-0 5 CREDITOS 203 UNIVERSIDAD Y CONOCIMIENTO 3-2-0 5 CREDITOS 210 SOCIOLOGIA Y DESARROLLO 2-2-0 4 CREDITOS SEMINARIO DE INVESTIGACION 3-2-0 5 CREDITOS 457 FORMACION DE EMPRENDEDORES 3-2-0 5 CREDITOS 303 FORMULACION Y EVALUACION DE PROYECTOS 2-2-0 4 CREDITOS 856 PRACTICAS PROFESIONALES 10 CREDITOS SERVICIO SOCIAL 30 CREDITOS ECONOMIA AGROPECUARIA 4-0-0 4CREDITOS 266 MATEMATICAS 3-2-0 5 CREDITOS 101 LENGUAJE Y COMUNICACIÓN 3-2-0 5 CREDITOS 209 CONTABILIDAD AGROPECUARIA 3-1-0 4 CREDITOS 332 TECNICAS DE MUESTREO 4-1-0 5 CREDITOS 502 ADMINISTRACIÓN DE EMPRESAS AGROPECUARIAS 3-2-0 5 CREDITOS 433 ADMINISTRACION ESTRATEGICA 3-1-0 4 CREDITOS 503 MERCADEO DE PRODUCTOS PECUARIOS 3-2-0 5 CREDITOS 633 DIRECCION DE AGRONEGOCIOS 3-3-0 6 CREDITOS 802 ESTADISTICA 3-0-1 4 CREDITOS 201 TECNOLOGIAS Y MANEJO DE LA INFORMACION 3-2-0 5 CREDITOS 136 ANATOMIA FUNCIONAL 4-0-2 6 CREDITOS 106 MANEJO DE BASE DE DATOS 0-4-0 4 CREDITOS 206 CONTROL DE CALIDAD 2-2-0 4 CREDITOS 607 REPRODUCCION ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 501 GENETICA GENERAL 3-1-0 4 CREDITOS 556 ADMINISTRACION DE RECURSOS HUMANOS 3-1-0 4 CREDITOS 702 MEJORAMIENTO ANIMAL 3-2-0 5 CREDITOS 431 SISTEMAS DE PRODUCCION OVI-CAPRINO 3-3-0 6 CREDITOS 614 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE CARNE I 3-3-0 6 CREDITOS 603 SISTEMAS DE PRODUCCION DE ESPECIES MENORES 3-3-0 6 CREDITOS 605 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE LECHE I 3-3-0 6 CREDITOS 631 SISTEMA DE PRODUCCION AVICOLA 3-3-0 6 CREDITOS 801 FISIOGIA DE LOS PROCESOS PRODUCTIVOS 4-0-2 6 CREDITOS 235 FISIOLOGIA DE LA REPRODUCCION 3-3-0 6 CREDITOS 356 INGENIERIA EN SISTEMAS DE PRODUCCION 3-3-0 6 CREDITOS 507 SISTEMA DE PRODUCCION DE PORCINOS 3-3-0 6 CREDITOS 805 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE CARNE II 3-3-0 6 CREDITOS 733 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE LECHE II 3-3-0 6 CREDITOS 701 INTRODUCCION A LOS SISTEMAS DE PRODUCCION 2-3-0 5 CREDITOS 104 MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA 4-2-0 6 CREDITOS 335 SANIDAD ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 465 SISTEMAS DE PRODUCCION EQUINA 3-1-0 4 CREDITOS 735 QUIMICA ORGANICA 4-0-2 6 CREDITOS 234 BIOQUIMICA 4-0-2 6 CREDITOS 334 ECOLOGIA VEGETAL 3-3-0 4 CREDITOS 225 NUTRICION ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 506 ALIMENTACION DE NO RUMIANTES 3-2-0 5 CREDITOS 544 ALIMENTACION DE RUMIANTES 3-2-0 5 CREDITOS 634 ECOLOGIA BASICA 3-1-0 4 CREDITOS 105 ECOLOGIA ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 305 TOPOGRAFIA 3-3-0 6 CREDITOS 461 MANEJO DE PASTIZALES 3-3-0 6 CREDITOS 434 HIDRAULICA APLICADA A LA PRODUCCION 3-2-0 5 CREDITOS 661 MANEJO DE FAUNA SILVESTRE 3-3-0 6 CREDITOS 834 CLIMA Y AMBIENTE 4-2-0 6 CREDITOS 223 BOTANICA SISTEMATICA 3-3-0 6 CREEDITOS 126 AGROSTOLOGIA 3-3-0 6 CREDITOS 302 CONSERVACION DE SUELO Y AGUA 3-3-0 6 CREDITOS 452 PERCEPCION REMOTA Y CARTOGRAFIA 3-3-0 6 CREDITOS 325 MANEJO DE RECURSOS FORRAJEROS 3-3-0 6 CREDITOS 652 TECNOLOGIA Y PROCESADO DE LA CARNE 3-3-0 6 CREDITOS 753 ANALISIS SENSORIAL 3-3-0 6 CREDITOS 709 VALORES DEL EJERCICIO PROFECIONAL 4-0-0 4 CREDITOS 806 ORIGEN Y CRECIMIENTO DE ANIMALES DOMESTICOS 3-3-0 6 CREDITOS 208 BIOQUIMICA DE LOS ALIMENTOS DE ORIGEN ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 308 MICROBIOLOGIA Y DETERIORO DE PRODUC.

Resistividad osmótica de eritrocitos 1.2. Reconocimiento de la sacarosa 2.1. Carbohidratos reductores 2. Ósmosis y presión osmótica 1.4. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Página 6 . Reconocimiento de carbohidratos 2.5. Determinación de la acidez general 1.3.1.5. Disociación electrolítica 1. Preparación de soluciones amortiguadoras 2.3.5.2. Carbohidratos 2. y semana del semestre en que se realizará 1. Determinación del pH 1.4. reconocimiento de glucógeno en tejidos Laboratorio Laboratorio 6 horas 1-3 semana 6 horas 4-6 semana Dr. Difusión 1.6. Fermentación 2. Claudio Arzola Alvarez. Introducción y agua 1. Hidrólisis del almidón 2. M.Programa del sistema de prácticas Tema Práctica o prácticas programadas Ámbitos de desarrollo Duración en horas para cada práctica.6.C.

Determinación de glicerina 3. Cuantificación de las grasas 3.C.4.2.4 Influencia de los activadores e inhibidores Determinación de la actividad de las enzimas Oxidorreductasas 4.5 Determinación de la actividad de la dehidrogenasa de ácido succínico Prácticas Pagina 7 6 horas 7-9 semana 6 horas 10-11 semana Dr. Lípidos 3. Constantes de las grasas 3.3.2 Influencia del pH sobre la actividad de las enzimas 4.Manual del laboratorio de Bioquimica 3. Claudio Arzola Alvarez.3 Especificidad de las enzimas 4.5. Enzimas 4. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . M.1. Reacciones del colesterol 4.1 La labilidad térmica de las enzimas 4. Reconocimiento de grasas 3.

Arzola.8 Serie de Prácticas 1 Química Física C. Holguín Facultad de Zootecnia. C. UACh 8 Febrero 2006 .

Difusión Facultad de Zootecnia.C. el cual deberá ser individual. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos. Al terminar. además de ser un instrumento de comunicación adecuada con colaboradores y colegas. Claudio Arzola Álvarez Número de alumnos por práctica: Tres Propósito de la práctica: Al terminar esta práctica. Claudio Arzola Alvarez. lo que te capacitará para planear adecuadamente dicho tipo de acciones. Al mismo tiempo. puesto que la práctica se llevará a cabo en grupo. M. Universidad Autónoma de Chihuahua Responsable: Dr. con actitudes de respeto a tus compañeros y maestros. deberás de observar una conducta adecuada durante la misma. Dr. La pulcritud y el orden será un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades. deberás entregar un informe del desarrollo y resultados de la práctica. lo que te permitirá tener una visión integradora y real de las características funcionales de las mezclas. obtendrás menor calificación. el protocolo deberá ser entregado en forma individual para su evaluación.1. Sin embargo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 9 . tendrás la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemático de un fenómeno complejo. con miras a que tu posterior desempeño profesional sea de alto nivel. serás capaz de entender el concepto de difusión química. y relacionarlo con los diversos aspectos de la práctica profesional de la zootecnia. Este concepto es fundamental para entender los principios del movimiento de las moléculas en disolución.Contenido de cada Práctica en particular 1. Puesto que el desarrollo de esta práctica se considera una actividad integradora.

Cristales de permanganato potásico u otra sustancia coloreada. Editorial MIR. colocados sobre soportes blancos. Hornillo eléctrico. por lo común. 1984. Influencia de la temperatura sobre la velocidad de difusión La causa de la difusión es el movimiento térmico de las moléculas. CHECHETKIN et. Tal fenómeno obtuvo el nombre de difusión. Tubos do vidrio con diámetro de 3 a 5 mm y longitud de 30 a 40 mm. A medida que el vidrio soluble se disuelve. Vidrio soluble. Marcha dé los trabajos. Moscú. la velocidad de difusión. La velocidad de difusión en este proceso es inversamente proporcional a las dimensiones sustancia disuelta. Vasos químicos de 250 ó 500 ml. Reactivos: Cristales grandes de permanganato potásico. Pinzas.V. Este proceso se realiza a través del movimiento térmico de las moléculas de sustancia disuelta y de disolvente. Marcha de los trabajos. Ella puede observarse si sumergimos cristales de sustancias coloreadas en un disolvente puro. al. Instrumentos. En dos vasos se vierten de 250 a 300 ml de agua en cada uno. 1 . Reactivos. A. que conduce a la penetración mutua de las moléculas. Con el crecimiento de la temperatura de la disolución. se introducen los tubos de de la molécula de la Adaptado de PRACTICAS DE BIOQUÍMICA DEL GANADO Y AVES DE CORRAL. coloreando uniformemente la disolución del color correspondiente.Manual del laboratorio de Bioquimica Química física Quimica Fisica… Pagina 10 Propiedades cinético-moleculares de las disoluciones diluidas Difusión1 Las disoluciones diluidas poseen capacidad de nivelar la concentración en todo su volumen. cristal violeta o de otras sustancias coloreadas. luego se traslada a un cilindro con agua. aumenta. las partículas de la sustancia se difunden paulatinamente en el cilindro por todo el volumen del disolvente. Luego ambos vasos. Un cristal de sustancia coloreada se sumerge y se mantiene durante varios segundos en vidrio soluble. Soporte con sujetadores. Un vaso se coloca sobre hornillo eléctrico y se calienta hasta la ebullición. Instrumentos: Cilindros de vidrio incoloro de 250 ml. Soportes blancos para los vasos. bicromato potásico.

Los tubos se sujetan en el soporte y a través de ellos se dejan caer simultáneamente en cada vaso (con agua caliente y fría) los cristales de KMnO4. Claudio Arzola Alvarez. lo que hace la difusión más pronunciada.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 11 vidrio de tal modo que éstos se sitúen en centro del vaso sin llegar al fondo en unos 10 ó 12 mm. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . bata? ¿Preparaste los reactivos en forma anticipada? ¿Limpiaste el equipo y material una vez finalizada la práctica? ¿Dispusiste de los desechos de cómo indica el manual? ¿Entregaste el reporte de la práctica pasada? Evaluación alumno Evaluación instructor Final Observaciones Dr. En el vaso con agua fría la difusión transcurre lentamente. lentes. M. En el vaso con agua caliente KMnO4 se disuelve. se revisará tu desempeño mediante la revisión de los siguientes puntos: Actividad ¿Trajiste el protocolo de tu práctica en forma completa? ¿Utilizaste material de protección. formando muy rápidamente una disolución uniformemente coloreada. guantes de asbesto.C. muy Sistema de evaluación Al final de cada práctica. El experimento sirve de prueba del movimiento térmico de las moléculas en que se basa la difusión e ilustra claramente que la velocidad de movimiento de las moléculas crece considerablemente con el aumento de la temperatura de disolución.

Reporte 3. En cada práctica se deberá elaborar un reporte escrito. Método de asignación de calificaciones. Claudio Arzola Alvarez. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Tu calificación será resultado de los siguientes factores: 1.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 12 Reporte escrito. M. Sin embargo. para el cálculo de la calificación final se tomará en cuenta el total de las prácticas. Dr. El informe deberá ser elaborado en forma individual y presentado en forma impreso y digital. Protocolo 2. el alumno deberá presentar cuando menos el 80% de las prácticas realizadas. el cual deberá entregarse a la fecha siguiente de la práctica. Desempeño en el laboratorio Total 30% 30% 40% 100% Para aprobar la asignatura.C.

2. de colodión) y lo atraviesan libremente.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 13 1. Determinación de la resistividad osmótica de eritrocitos (ROE) Por resistividad osmótica de los eritrocitos so entiende la estabilidad de los eritrocitos contra la hemólisis bajo la acción de disoluciones hipotónicas de cloruro sódico. La magnitud de la presión osmótica se expresa en pascales (Pa) *). Sólo en las condiciones de isotonía en la sangre. chocan contra él. M. Es conocido que en la formación de la envoltura de los eritrocitos participan. En la envoltura de los eritrocitos jóvenes prevalece la lecitina. En su movimiento. Sin embargo. Tal presión se denomina osmótica. la lecitina y el colesterol. se empeora considerablemente el suministro de agua a las plantas y éstas se secan rápidamente y perecen. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . lo atraviesan libremente. dan contra el tabique semipermeable. creando así cierta presión. los líquidos intertisulares y las células pueden verificarse normalmente los procesos bioquímicos y fisiológicos. La presión osmótica se combina como la suma de los choques que le tocan a una superficie determinada del tabique semipermeable en la unidad de tiempo. el Dr. si entre el disolvente puro y la disolución está puesto el así llamado tabique semipermeable. el corazón. En el caso de la difusión indirecta las partículas de soluto y del disolvente encuentran un tabique orgánico permeable (por ejemplo. La elevación de la presión osmótica en los tejidos conduce a los edemas. Claudio Arzola Alvarez. la disminución de la presión osmótica en la sangre trae como resultado la hemólisis de los eritrocitos. mientras que en la envoltura de los eritrocitos viejos. las moléculas del disolvente al encontrar un tabique semipermeable. Muchas enfermedades de los órganos internos (los riñones. junto con otras sustancias.C. La presión osmótica juega un papel importante en los procesos fisiológicos de los organismos vegetales y animales. entonces a través de este último pueden penetrar sólo las moléculas del disolvente. los pulmones) están acompañadas por el aumento de la presión osmótica en la sangre. mientras que las moléculas del soluto encontrándose en estado de movimiento térmico. Al crecer la presión osmótica en las aguas del suelo. Ósmosis y presión osmótica La difusión en las disoluciones puede ser directa o indirecta. La difusión unilateral del disolvente a través del tabique semipermeable se denomina osmosis.

entonces en la determinación de la ROE de la sangre de tal organismo el inicio y el final de la hemólisis son muy extendidos. Claudio Arzola Alvarez. Se preparan previamente disoluciones de cloruro sódico de distintas concentraciones.2 ml de sangre. De indicador del inicio de la hemólisis sirve la coloración roja del líquido sobre el precipitado en presencia de un sedimento de eritrocitos no hemolizados.m. se detectan las probetas en las cuales la hemólisis acaba de iniciarse. En probetas de centrífuga. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Cuando la formación de la sangre está perturbada y los eritrocitos jóvenes no se suministran a la sangre. Centrífuga. Las probetas se agitan y se dejan durante 10 min en el soporte. M. Por lo tanto los eritrocitos jóvenes son más propensos a la hemólisis que los viejos. Instrumentos. Al terminar la centrifugación. Si los procesos de formación de la sangre transcurren en el organismo normalmente y los eritrocitos no se destruyen prematuramente.6%). y aquellas donde ésta se realizó hasta el final.C. es decir. la hemólisis de tal sangre empieza y termina a concentraciones relativamente altas de cloruro sódico en la disolución 0. Probetas de centrífuga. entonces la hemólisis de tal sangre empieza con concentraciones de las disoluciones de cloruro sódico relativamente bajas. Sangro tratada con citrato. Pipeta graduada de 1 ml. La hemólisis completa se Dr. Disolución de cloruro sódico al 1%. numeradas de antemano se mezcla una disolución de cloruro sódico al 1% con agua según el esquema siguiente: (de Luego en cada probeta se agrega 0.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 14 colesterol. Marcha de los trabajos.7 a 0. la sangre contiene solamente eritrocitos jóvenes. luego se centrifugan durante un tiempo de 5 a 10 min a 15 mil r. Si los eritrocitos en el organismo por alguna razón se destruyen rápidamente. Reactivos.p. Pipeta de 5 ml.

es decir. Por grado de disociación electrolítica se entiende la proporción entre las moléculas disociadas y no disociadas. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . el disolvente puede disminuir con la mayor fuerza la interacción entre las partículas de cargas opuestas (iones). En consecuencia. es decir.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 15 detecta en las probetas donde el líquido está coloreado de un color rojo en ausencia del sedimento de eritrocitos. en el agua la disociación electrolítica se verifica en el mayor grado. los iones comunican a las disoluciones una actividad química más alta y las dotan de una actividad biológica. El agua es tal disolvente. M. Los iones que se forman en el proceso de disociación electrolítica aumentan la concentración general de las partículas del soluto y con esto elevan el efecto osmótico de las disoluciones. temperatura. La disociación electrolítica se expresa de una manera más pronunciada en aquella disolución en que el disolvente posee la mayor constante dieléctrica.3. de la concentración de la disolución. presencia en la disolución de otros electrólitos con ion análogo. El grado de disociación depende de la naturaleza del disolvente y del soluto. en partículas con cargas eléctricas (iones). Además.C. las disoluciones de los Dr. 1. Claudio Arzola Alvarez. Disociación electrolítica La disociación electrolítica es la descomposición espontánea del electrolito en la disolución.

de Ringer—Lokk o de Ringer— Tirrode (tabla 2). Disoluciones isotónicas que contienen sales de metales mono y bivalentes tomadas en una proporción determinada y que no poseen acción tóxica sobre el organismo obtuvieron el nombre de disoluciones equilibradas o fisiológicas. Así. Las disoluciones fisiológicas se utilizan en los experimentos con los cultivos de órganos y tejidos para el estudio de los procesos bioquímicos y fisiológicos en estos cultivos.C. los iones surgidos en la disociación de las sales de calcio y magnesio opresan las funciones de las células y en el caso de acción prolongada. Como ejemplo de tales disoluciones puede servir la disolución de Ringer.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 16 electrólitos al actuar sobre las células. los iones formados durante la disociación de las sales potásicas y sódicas causan una fuerte excitación de las células y su muerte posterior a consecuencia de la hiperexcitación. Claudio Arzola Alvarez. Dr. En tal mezcla tiene lugar la supresión mutua de la acción tóxica de los iones debido al antagonismo iónico. pueden elevar o disminuir su actividad fisiológica. La acción aislada de ciertos iones sobre los organismos unicelulares tiene comúnmente como resultado la muerte rápida de los últimos debido a su hiperexcitación o depresión excesiva. M. causan su muerte. La mezcla de iones monovalentes y bivalentes tomados en una proporción estrictamente determinada no provoca desviaciones en el estado fisiológico de la célula. como también para la preparación de los medios nutritivos en la práctica bacteriológica y para las inyecciones intravenosas. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . órganos y organismos enteros.

M. Matraces de 50 ó 100 ml.1 N. 0.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 17 1. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . con una disolución de álcali hasta la aparición de una coloración rosa.1 N. equivalentes en concentración. Claudio Arzola Alvarez. Hidróxido sódico. tienen la misma acidez general. Acido clorhídrico. Instrumentos.C.4 Determinación de la acidez general de las disoluciones La acidez general de una disolución se expresa por el número de equivalentes gramo de álcali consumidos para la valoración de un litro de disolución a investigar. Ella indica la cantidad sumaria de sustancias que reaccionan como ácidos presentes en la disolución. Acido acético. Pipetas de 5 y 10 ml. se toma el valor promedio Dr. y no depende del grado de su disociación. Se miden exactamente 5 ó 10 ml de ácido clorhídrico. Bureta Reactivos. 0. Marcha de los trabajos. Las disoluciones de cualesquiera ácidos. para el cálculo. La valoración se repite y. Fenolftaleina. se añaden 2 ó 3 gotas de fenolftaleína y la disolución se valora de una bureta graduada.1 N. se vierten en un matraz. 0.

Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . En el curso de determinación de la acidez general de dos disoluciones con concentraciones equivalentes. Determinación potenciométrica del pH de las disoluciones El método potenciométrico de determinación del pH se basa en la medición de las fuerzas electromotrices de las pilas voltaicas. de la sangre. en primer término. El cálculo de la acidez general se realiza según la fórmula x = Nalc*Valc/Va partiendo de la ecuación Nalc*Valc = Na*Va. es decir. Va es el volumen del ácido. una de ácido fuerte y otra de ácido débil. se cercioran de que la acidez general no depende de la naturaleza del ácido sino de su concentración en la disolución. el medio ambiente que los rodea.C. para los organismos protozoarios. contenido del protoplasma celular y. Na es la cantidad de ácido 1.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 18 aritmético. preparadas a partir de las disoluciones Dr. donde Nalc es el número de equivalentes gramo de álcali. el colorimétrico y potenciométrico. M. en equivalentes gramo. La acidez activa depende del grado de disociación de los ácidos presentes en la disolución u otras sustancias que reaccionan como ácidos y se caracteriza por la magnitud del pH.5 Determinación del pH Por acidez activa se entiende la acidez condicionada por la concentración de iones hidrógeno libre en la disolución. De la misma manera se determina la acidez general de la disolución del ácido acético. Para los procesos fisiológicos tiene importancia. Las diferencias entre los resultados de la valoración no deben sobrepasar 0. La acidez activa se determina por dos métodos (que pueden tener variaciones). Valc es el volumen del álcali. del líquido tisular. La acidez general se determina corrientemente junto con la determinación de la acidez activa de una disolución.1 ml. Claudio Arzola Alvarez. la acidez activa del medio en que se verifican unos u otros procesos bioquímicos.

Una parte de las moléculas de hidrógeno que se encuentran en la placa de platino. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua el acetato es ácido acético/ acetato sódico. se disocia en la disolución suministrándola cationes hidrógeno. como también durante la dilución. ejemplo.101 MPa.e. de calomelano y de quinhidrona. Electrodo de hidrógeno. entonces tal electrodo de hidrógeno se denomina normal. Para la determinación de los potenciales de electrodo o la concentración de iones en la disolución se emplean los electrodos estándar con una magnitud conocida del potencial de electrodo. cuyo papel puede ser desempeñado por las mezclas que constan de: 1) ácidos débiles y sales muy disociables de estos ácidos.C. El electrodo de hidrógeno consta de una placa de platino saturada de hidrógeno molecular y sumergida en una disolución que contiene iones de hidrogeno: (Pt) H2/h+. Disoluciones amortiguadoras Las disoluciones capaces de mantener firmemente la estabilidad de la concentración de los iones hidrógeno (pH) cuando sobre ellas actúan cantidades relativamente pequeñas de ácido o álcali fuertes. M. En este sistema el platino desempeña el papel de conductor de electrones y de portador del hidrógeno. Una condición necesaria para los electrodos de la pila voltaica es la posibilidad de verificarse en su superficie el proceso de oxido-reducción. Se denomina fuerza electromotriz (f. el amortiguador de . En función de tales electrodos de referencia se usan los electrodos de hidrógeno. El potencial de un electrodo normal de hidrógeno es igual a cero.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 19 a investigar y de electrodos especiales. Esta capacidad las disoluciones la adquieren gracias a la presencia en su composición de sustancias amortiguadoras. Si la concentración de iones hidrógeno en la disolución es igual a 1 ión-g/1 y la presión del hidrógeno molecular es igual 0. se denominan disoluciones amortiguadoras. amortiguador de Dr.) la máxima diferencia de potenciales entre los electrodos de una pila voltaica en las condiciones reversibles de su trabajo.m. Se denomina pila voltaica el aparato en que la energía química se convierte en eléctrica. El método se caracteriza por una gran precisión en la determinación del pH de cualesquiera líquidos. Claudio Arzola Alvarez.

por ejemplo. Claudio Arzola Alvarez. De aquí que. 2) bases débiles y sales muy disociables de estas bases. Csal es la concentración de la sal. el amortiguador amónico es hidróxido amóni-oriiro amónico. ya que la proporción do los componentes que constituyen la mezcla amortiguadora se queda en este caso invariable. es posible preparar disoluciones con diferentes pH dentro de los límites determinados por la constante de disociación de los ácidos (bases). K K es la constante de disociación electrolítica del ácido (base). CbasP es la concentración de la base. La calidad amortiguadora de las disoluciones depende de su concentración absoluta y con la dilución disminuye de una manera directamente proporcional al dilución. La capacidad amortiguadora la poseen también los electrolitos anfóteros. por ejemplo el amortiguador de fosfato es NaH2PO4/Na2HPO4. ejemplo. El pH de las disoluciones amortiguadoras depende de la proporción en éstas entre ácido y sal. deben ser agregados a 1 l de disolución amortiguadora para desplazar su pH en una unidad. Esta capacidad es la medida de la acción amortiguadora de la disolución y se esa por el número de equivalentes gramo de ácido o de base que. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . grado de la Dr. los aminoácidos.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 20 bicarbonato es ácido careo/bicarbonato sódico.C. cuando se preparan las disoluciones amortiguadoras se puede calcular teóricamente según fórmula ¡e (-'ácido es la concentración del ácido. De la fórmula citada se deduce que cambiando la proporción entre las concentraciones de los componentes de la mezcla amortiguadora. Cada disolución amortiguadora se caracteriza por una capacidad amortiguadora determinada. proteínas y algunas otras sustancias. 3) sales mono y bisustituidas de ácidos polibásicos. La dilución do las disoluciones amortiguadoras no trae consigo la variación de su pH. M. el amortiguador de borato es ácido bórico/borato sódico. y a una proporción dada siempre invariable.

pero conocidos pH.15 N.C. Reactivos. fosfato sódico disustituido. Pipetas graduadas 10 ml. 1.1 acetato sódico.6 Preparación de las disoluciones amortiguadoras Anteriormente fue indicado que el pll de las disolución amortiguadoras depende de la naturaleza de las sustanci químicas que constituyen la mezcla amortiguadora y de proporción entre estas sustancias en la disolución. puede ser preparada una serie de disolución amortiguadoras con diferentes.1 N. ácido acético 0. 2.15 M de KH2P04 en las siguientes proporciones Dr. Claudio Arzola Alvarez. Instrumentos. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Se numeran ocho tubos de ensayo y se vierten en caí uno de ellos disoluciones 0. Partiendo de estos hechos. se determina el pH de las mezclas preparadas por el método potenciometrico. Fosfato potásico monosustituido. En caso de disponer de un potenciómetro. disolución 0. cuentagotas. M. En seis tubos de ensayo previamente numerados se vierten las disoluciones de ácido acético y acetato sódico en las siguientes proporciones: Pipeta A las mezclas preparadas se añaden 2 gotas de indicador universal y por el carácter de la coloración se determina pH de cada mezcla. disolución 0. disolución 0. Soporte con tubos de ensayo. Marcha de los trabajos.15 M.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 21 1. Indicador universal.

so determina el pH de cada disolución amortiguadora. M. utilizando para ello los patrones estándar con los mismos indicadores. Se añade 1 ml de indicador en cada uno de los ocho tubos de ensayo que contienen 6 mi do mezclas amortiguadoras preparadas.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 22 El contenido de cada tubo de ensayo se mezcla cuidadosamente. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . para la determinación exacta del pH de las disoi liciones amortiguadoras preparadas. Claudio Arzola Alvarez. El contenido de los tubos de ensayo se mezcla cuidadosamente y. partiendo del color que se desarrolla en el líquido.C. Los resultados de la determinación del pH se anotan en la tabla indicada más arriba. Dr. En otros ocho tubos de ensayo numerados previamente se vierten G ml de disoluciones amortiguadoras respectivamente preparadas. Las disoluciones que se quedan en los tubos de ensayo 1 y cS se utilizan para la determinación aproximada del p 11 con ayuda de mi indicador universal y a base de esta determinación se selecciona un indicador unicolor apropiado del grupo de nitrofenoles.

UACh febrero 2006 .Serie de Prácticas 2 Carbohidratos C. Arzola. C. Holguín Facultad de Zootecnia.

Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Página 24 . con miras a que tu posterior desempeño profesional sea de alto nivel. incluyendo la determinación cualitativa y cuantitativa de algunos de los mas importantes. tendrás la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemático de un grupo de sustancias que constituyen la mayor parte de la dieta de los rumiantes. serás capaz de entender la naturaleza de los carbohidratos y la importancia práctica del conocimiento de los mismos. el cual deberá ser individual. deberás de observar una conducta adecuada durante la misma.2. Al mismo tiempo. Dr. el protocolo deberá ser entregado en forma individual para su evaluación. deberás entregar un informe del desarrollo y resultados de la práctica. Claudio Arzola Alvarez Número de alumnos por práctica: Tres Propósito de la práctica: Al terminar esta práctica. Claudio Arzola Alvarez. La pulcritud y el orden será un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades.C. Sin embargo. M. siendo dicho protocolo además un instrumento de comunicación adecuada con colaboradores y colegas. Universidad Autónoma de Chihuahua Responsable: Dr. puesto que la práctica se llevará a cabo en grupo. Carbohidratos Facultad de Zootecnia. Al terminar. obtendrás menor calificación. con actitudes de respeto a tus compañeros y maestros. Puesto que el desarrollo de esta práctica se considera una actividad integradora. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos.

Los hidratos de carbono entran en la composición de los ácidos nucleicos.).Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 25 Carbohidratos2 Los hidratos de carbono pertenecen a los compuestos poli-funcionales que contienen grupos carbonilo (aldehilico o cetónico) y grupos hidroxilo alcohólicos. Ellos constituyen los productos finales de la síntesis fotoquímica en las plantas verdes. tetrosas. tres. Los animales. etc. Editorial MIR. al. etc. se desintegran en monosacáridos. CHECHETKIN et. ellos poseen simultáneamente propiedades de aldehidos o catonas y de alcoholes polihidroxílicos. Los monosacáridos. Los polisacáridos forman mediante la hidrólisis un gran número de moléculas de monosacáridos. sirven de material para la biosíntesis de los compuestos de otras clases y juegan un papel importante en la bioenergética de la célula. son insolubles en agua o forman disoluciones coloidales. Ellos poseen una masa molecular muy elevada. Los hidratos de carbono participan en la construcción de las estructuras del organismo vivo.V. La fórmula genérica de los monosacáridos es CnH2nOn. se clasifican en triosas. pentosas. sobre todo en el reino vegetal. cuatro. para los tetrasacáridos. las glicoproteínas. según el número de átomos de carbono en la molécula. en el caso de disacáridos. Todos los monosacáridos naturales. Los hidratos de carbono están muy difundidos en la naturaleza. los oligosacáridos se desintegran formando varias moléculas de monosacáridos (dos. Moscú. Entonces. Por lo tanto. en el caso de trisacáridos. hexosas. 1984. son ópticamente activos y giran el plano de la luz polarizada. los glicolípidos y en algunas vitaminas y coenzimas. aprovechan las sustancias acumuladas por las plantas. teniendo en sus moléculas átomos de carbono asimétricos. A. Los oligosacáridos y polisacáridos son hidratos de carbono complejos y al ser calentados con ácidos diluidos o hidrolizados por enzimas. Adaptado de PRACTICAS DE BIOQUÍMICA DEL GANADO Y AVES DE CORRAL. no aptos a tal acumulación de energía solar. heptosas. oligosacáridos y polisacáridos. 2 . Los hidratos de carbono comprenden un grupo amplio de compuestos naturales que se dividen en monosacáridos.

En ambos tubos de ensayo se vierten con cuidado. En dos tubos de ensayo se vierten 2 ml de disolución de sacarosa en cada uno. Marcha de los trabajos. 1 ó 2 ml de ácido sulfúrico concentrado sin mezclarlo con la capa acuosa. a partir de las Instrumentos. igual cantidad de disolución de timol. Soporte con tubos de ensayo. disolución al 0. Así. disolución al 1% en alcohol etílico.2.1. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . En el primer tubo de ensayo se añaden de 4 a 6 gotas de disolución de α-náftol y en otro. los hidratos de carbono participan en la formación de la capa exterior adyacente a la membrana. En el contacto de las capas aparece una coloración violeta (en el caso de a-naftol) y roja (en el caso de timol). Reactivos. El quimismo de la reacción se reduce al hecho de que mediante la acción del ácido sulfúrico concentrado se forma furfural a partir de las pentosas. Acido sulfúrico concentrado. a.2%. Claudio Arzola Alvarez.C. Sacarosa. el ácido Dr. por la pared. disolución al 1%. 2. que desempeña un papel importante en la protección de las células contra la penetración en ellas de microorganismos y virus. 2. 5-hidro-ximetilfurfural hexosas. Timol.Naftol. formando sustancias coloreadas. M. Prueba con naftorresorcina La reacción se basa en la capacidad de los hidratos de carbono de condensarse con los sistemas aromáticos. Reacciones de reconocimiento de los hidratos de carbono Reacción con α-naftol Esta reacción es general para los hidratos de carbono y se aplica para detectar la presencia de éstos en los materiales biológicos. Con tales hidratos de carbono están relacionadas las propiedades inmunoquímicas de los tejidos.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 26 Como componentes integrantes de las glicoproteínas.

Glucosa. disolución alcohólica al 1%. Benceno. Marcha de los trabajos. disolución al 5%. se le añade de 1 a 2 mi de éter o benceno y agita. M. se añade 1 mi de disolución de naftorresorcina y 1 mi de ácido clorhídrico concentrado.3. Naftorresorcina. La mezcla se calienta con cuidado y se hierve durante 1 min. Soporte con tubos de ensayo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . mientras que la xilosa y la arabinosa proporcionan una coloración azul oscura y los ácidos urónicos. Luego se enfría. 2. Claudio Arzola Alvarez.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 27 glucurónico al condensarse con naftorresorcina. Ácido clorhídrico concentrado. Reactivos. La capa etérica (bencénica) se tiñe de color verde azulado. una coloración violeta. forma derivados de dinaftil-metano o xantina: Instrumentos. En un tubo de ensayo se vierten de 5 a 6 mi de disolución de glucosa. entre las cuales se establece un equilibrio dinámico: Dr. Monosacáridos Los monosacáridos en disoluciones acuosas.C. se encuentran en diferentes formas tautoméricas. Éter. Igual coloración dan la galactosa y la mañosa.

M. hasta bismuto metálico. reduciendo a su vez las sales de óxido cúprico (valencia +2) a sales de óxido cuproso (valencia +1) a sales de plata. las sales de óxido de bismuto. Estos azúcares en medio alcalino tienen la capacidad de oxidarse. 2. Reacciones de reconocimiento le los hidratos de carbono reductores Los hidratos de carbono cuya molécula contiene un grupo carbonilo libre. Prueba con el hidróxido cúprico (II). Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Claudio Arzola Alvarez. reacción de Trommer En disolución alcalina los mono y disacáridos reductores reducen el hidróxido cúprico (II) a óxido cuproso (I): Dr.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 28 Aldohexosas En los organismos de los animales y del hombre la glucosa la galactosa se encuentran con mayor frecuencia. hasta plata metálica. se denominan reductores.C.4.

Hidróxido sódico. el precipitado de hidroxido cúprico (II) formado se disuelve. Se forma un precipitado de hidróxido cúprico de color azul claro. Claudio Arzola Alvarez. gota a gota. El licor de fehling representa un compuesto complejo de cobre con tartrato de sodio y potasio de color azul. Disolución de glucosa no se añade. 2. agitándolo. Soporte con tubos de ensayo. disolución al 1%. disolución al 1%.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 29 Instrumentos. En su composición ion cobre en estado de oxidación « + 2» se encuentra forma de un compuesto complejo con Dr. Glucosa. La diferencia consiste en que en las reacciones no se emplea hidróxido cúprico libre. Reactivos. coloreando el líquido de color azul claro. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Este último se encuentra en estado combinado y forma parte del reactivo de Fehling. disolución al 10%. En presencia de la glucosa. La capa superior del líquido se calienta hasta la ebullición. En un tubo de ensayo se vierten de 1 a 2 ml de disolución de glucosa. ya que la reacción entre el hidrato de carbono reductor y el hidróxido cúprico transcurre cuantitativamente. la disolución de sulfato cúprico.C. en la reacción de Trommer debe evitarse el exceso de sulfato cúprico. El exceso del último durante el calentamiento pierde agua y se transforma en óxido cúprico negro. M. Por lo tanto. Reacción con el licor de Fehling La reacción con el licor o reactivo de Fehling se basa en mismo principio que la reacción de Trommer.5. Al calentar esta disolución. se forma un precipitado negro de óxido cúprico. un volumen igual de disolución de hidróxido sódico y. La aparición de un precipitado amarillo (hidróxido cuproso (I)) y luego rojo (óxido cuproso) indica que la reacción de Trommer es positiva. Sulfato cúprico. lo que oscurece la reacción principal y constituye un defecto del método: Cu (OH)2→ CuO + H2O. Marcha de los trabajos. En otro tubo de ensayo se mezclan 2 ó 3 ml de disolución de hidróxido sódico con varias gotas de disolución de sulfato cúprico. se añade.

Dr. Reacción con las sales de bismuto Para detectar los azúcares reductores se emplean frecúentemente las sales de bismuto. Por eso durante el calentamiento. Reactivos. disolución al 1%. La capa superior del líquido se calienta hasta la ebullición.5H2O). disolución al 1%.6. Claudio Arzola Alvarez. incluso con exceso del reactivo dado. En un matraz de 500 ml se disuelven 34. un precipitado amarillo de hidróxido cuproso CuOH o bien precipitado rojo de óxido cuproso Cu2O. Este último se encuentra en estado combinado con el tartrato sodo-potásico.65 g de cristales no aireados de vitriolo azul (CuSO4. Instrumentos. Reactivo de Nylander (preparación: 2 g de nitrato dibásico de bismuto y 4 g de tartrato sodo-potásico (sal de Rochelle) se disuelven en 100 ml de sosa cáustica al 10% y se hierven hasta disolverse la mayor parte de la sal de bismuto. Instrumentos. forma hidrodróxido de bismuto. En la composición del reactivo Nylander. análogo al de Fehling. Reactivos. se mezcla bien y el volumen se lleva hasta la raya de enrase. 2. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Reactivo de Fehling (preparación: disolución 1. primero en una pequeña cantidad de agua destilada y al disolverse los cristales. al igual que en la reacción de Trommér.5 g de sosa caústica disuelta en 100 ml de agua destilada. en pequeña cantidad de agua destilada. El precipitado formado se enfría y se separa por filtración). Glucosa. En un matraz de 500 ml se disuelven. A 1 ó 2 ml de disolución de glucosa se añade igual volumen de reactivo de Fehling y se agita. Glucosa. Marcha de los trabajos. en presencia de hidróxido sódico. 173 g sal de Rochelle (tartrato sodico-potásico). el volumen se lleva hasta la raya de enrase. Disolución 2.C. se añaden 62. Soporte con tubos de ensayo. M. entra nitrato dibásico de bismuto que. Antes de utilizarse las disoluciones 1 y 2 se mezclan en proporciones iguales). Aparece. Al reaccionar con la glucosa. Soporte con tubos de ensayo.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 30 tartratos. el hidróxido de bismuto se reduce a bismuto metálico y el líquido adquiere color negro. no se forma el precipitado negro de CuO y no oscurece la reacción con pequeñas cantidades de glucosa.

La forma de los cristales de osazonas es variable y depende de la estructura de los monosacáridos. Al reaccionar los monosacáridos con la fenilhidrazina. Las osazonas de diferentes monosacáridos se distinguen por la forma de los cristales. Claudio Arzola Alvarez. lo que conduce a la formación de compuestos poco solubles en agua: osazonas. La tercera molécula de fenilhidrazina entra en reacción de sustitución con el grupo carbonilo recién formado. como también para distinguir unos azúcares de otros (fig. de forma característica. de los cuales se forman las osazonas. Reacción con fenilhidrazina Una particularidad importante de los monosacáridos consiste en su capacidad de entrar en reacción con la fenilhidrazina y formar fenilhidrazonas y osazonas.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 31 Marcha de los trabajos. Por eso. El líquido oscurece debido a la formación de un precipitado negro de bismuto metálico. punto de fusión. estas propiedades se utilizan para aislar los monosacáridos de la disolución. En la segunda etapa. Dr.7. A 2 ml de disolución de glucosa se añade 1 ml de reactivo de Nylander y se hierve durante 2 ó 3 min. transforma el grupo hidroxilo en grupo carbonilo. La reacción de formación de osazonas transcurre en tres etapas. 10). con la fenilhidrazonas solubles en agua (reacción de sustitución). oxidándola. que producen cristales de color amarillo.C. 2. M. con la fenilhidrazona formada reacciona otra molécula de fenilhidrazina y. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . en la primera etapa se forman fenilhidrazonas solubles en agua (reacción de sustitución). solubilidad y actividad óptica. En la segunda etapa.

M. Claudio Arzola Alvarez.8. Reacción de reconocimiento de la sacarosa La sacarosa es un disacárido no reductor y durante la hidrólisis (por ácido o enzimáticos) su molécula se descompone en glucosa y fructosa: Sacarosa Dr. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .C.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 32 2.

Sulfato de cobalto. propiónica. etc. En las levaduras están presentes las enzimas maltasa y sacarasa. Esto se aprovecha para distinguir las hexosas de las pentosas. La maltosa y la sacarosa se fermentan fácilmente con las levaduras. La fermentación metánica produce la timpanitis (distensión) en los rumiantes. Hidróxido sódico. Sacarosa. la fermentación láctica.La fermentación conduce. Marcha de los trabajos. Dr.). Al añadir exceso de hidróxido sódico (1 mi) el líquido adquiere un color violeta. disolución al 2%. al fin y al cabo. La fermentación alcohólica se utiliza en la industria con el fin de obtener alcohol etílico. Claudio Arzola Alvarez. disolución al 1%. H2. etc.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 33 La sacarosa da con el sulfato de cobalto en un medio alcalino un complejo de color violeta. ácido láctico.C. En la mayoría de los casos este proceso va acompañado con el desprendimiento de productos gaseosos (CO2. a la formación de productos tales como alcohol etílico. En un tubo de ensayo se vierten de 2 a 3 ml de disolución de sacarosa. se añaden varias gotas de disolución de sulfato de cobalto. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Reactivos. puede someterse a la fermentación alcohólica. Soporte con tubos de ensayo. de las pentosas. láctica y butírica. Instrumentos. La fermentación acética. butírica. A la fermentación alcohólica se someten solamente las hexosas a diferencia de otros monosacáridos.9. Según los tipos de microorganismos y de los productos finales se distinguen varias formas de fermentación. Reacciones de fermentación de los hidratos de carbono La fermentación es un proceso complejo de descomposición de los hidratos de carbono bajo la acción de las enzimas producidas por diferentes microorganismos. en la industria alimenticia para la obtención de diferentes productos lácteos y en la ganadería en el proceso de ensiláje. M. por ejemplo. La lactosa bajo la acción de las bacterias que la desdoblan. láctica tienen lugar en el rumen de los rumiantes. mientras que la lactosa no se fermenta. pero no tienen la enzima lactasa. 2. disolución al 10%.

Para el organismo de los animales el almidón constituye una sustancia nutritiva importante. en particular del almidón. un polisacárido de reserva. Almidón El almidón es el producto final de la síntesis fotoquímica que se verifica en las hojas verdes. Está compuesto de dos fracciones: la amilosa (de 10 a 20%) y la amilopectina (de 80 a 90%). Claudio Arzola Alvarez. Las cadenas poliglicosídicas que forman las moléculas de los polisacáridos pueden ser no ramificadas celulosa) o ramificadas (glicógeno).10. Por lo tanto. Cada resto del monosacárido á unido con los restos vecinos por enlaces glicosídicos.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 34 Polisacáridos Éstos son hidratos de carbono de elevado peso molecular e mediante la hidrólisis se desdoblan en gran número restos de monosacáridos. Este proceso Dr. La celulosa. Ella tiene forma de molécula alargada lineal no ramificada. La amilopectina también está compuesta de un gran número de unidades de a-Dglucosa unidas. 2. M. En el curso de la reacción se forma un complejo del polisacárido con iodo. como en la amilosa. el almidón y el glicógeno son homopolisacáridos típicos. los polisacáridos pueden considerarse como glicosídicos. Las unidades de los inosacáridos que forman parte de la composición de la molécula del polisacárido pueden ser iguales (homopolisácárídos) ó diferentes (heteropolisacáridos). con iodo es un proceso complejo. Sin embargo. es soluble en agua. El almidón es una sustancia heterogénea. La coloración que aparece depende de la estructura de polisacárido. La amilosa incluye de 1000 a 6000 unidades de a-D-glocosa unidas por enlaces glucosídicos 1-4. En el agua la amilopectina se hincha y produce un engrudo.C. Reacciones coloreadas del almidón Una reacción característica para reconocer el almidón es la aparición de una coloración azul al combinarse con la disolución de iodo en ioduro potásico. La reacción de los polisacáridos. las cadenas de amilopectina son muy ramificadas y tienen en los puntos de ramificación enlaces glucosídicos 1-6. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . por enlaces glucosídicos 1-4.

Éstas se distinguen entre sí en cuanto a la masa molecular y al carácter de la coloración que surge al tratarlas con la disolución de iodo. Soporte con tubos de ensayo. tiene gran importancia también el proceso de adsorción de iodo sobre la superficie de las moléculas ramificadas. Claudio Arzola Alvarez. En un tubo de ensayo se vierten 2 ó 3 ml de disolución de almidón y se añade 1 gota de disolución de Lugol. M.C. Instrumentos. al calentamiento y a la acción de los álcalis con los cuales el iodo forma hipoioditos. Reactivos. El líquido se colorea de azul. la amilopectina y el glicógeno. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . 2 ó 3 ml de alcohol etílico. Almidón. Más abajo se da el esquema de la hidrólisis acida del almidón: Dr.11 Hidrólisis acida escalonada del almidón En el curso del calentamiento del almidón con ácido clorhídrico diluido. El contenido del tubo de ensayó se divide en tres partes: a la primera parte se le añade 1 ó 2 ml de disolución de hidróxido sódico. Para la reacción con el almidón la disolución obtenida sé diluye con agua destilada en proporción 1:5). En el caso de los polisacáridos de cadenas ramificadas. Hidróxido sódico. junto con el proceso de formación del complejo. disolución al 10% Alcohol etílico. por ejemplo. la tercera parte se calienta. él se descompone con la formación de los fragmentos de diferente tamaño llamados dextrinas. Marcha de los trabajos. a la segunda.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 35 es bien expresado en el caso de la amilosa. La coloración desaparece siempre. Esto indica que la prueba con iodo debe realizarse sólo con disolución de almidón fría. 2. disolución al 1 %. esta reacción es sensible a la presencia de alcohol. Disolución de Lugol (preparación: en 100 ml de agua se disuelven 20 g de ioduro potásico y 10 g de iodo. Debido a la inestabilidad del complejo de adsorción entre iodo y almidón. En la tercera muestra la coloración vuelve a aparecer después del enfriamiento. Se ha demostrado la relación entre la longitud de las cadenas laterales y la coloración resultante de la reacción con yodo.

Pipetas. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Para esto se extraen varias gotas de disolución una pipeta y se vierten en un tubo de ensayo que contenga 5 ó 6 ml de agua destilada. Ácido clorhídrico concentrado. Claudio Arzola Alvarez. Marcha de los trabajos. Disolución de Lugol. se añaden 1 ó 2 gotas de disolución de Lugol. La coloración violeta azul aparecida indica presencia de las amilodextrinas en disolución. Soporte con tubos de ensayo. aparece una coloración rojiparda condicionada Dr. Reactivos. M. Luego de 1 ó 2 min iniciada la ebullición se toma una muestra para la reacción con iodo. disolución al 1%.C. En un tubo de ensayo se vierten de 3 a 5 ml de disolución de almidón y se añaden varias gotas de ácido clorhídrico concentrado. Licor de Fehling. El tubo de ensayo con la disolución de almidón se hierve 1 ó 2 min mas y se repite la misma prueba con iodo.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 36 Instrumentos. Almidón. Papel de tornasol. disolución al 10%. Hidróxido sódico. Se mezcla cuidadosamente y se hierve a fuego abierto.

la ausencia de coloración característica demuestra que la hidrólisis ha finalizado. de óxido cuproso que indica la presencia en la disolución de productos de la hidrólisis que poseen propiedades reductoras. Baño maría con Glicógeno El glicógeno sirve de reserva principal de hidratos de rbono en el organismo de los animales. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . En un tubo de ensayo se vierten 3 a 5 ml de disolución de almidón y se añaden 0. produciendo como productos intermedios acrodextrinas. Instrumentos. según un papel de tornasol. se añade licor de Fehling y se calienta. Se forma un precipitado amarillo de hidróxido cuproso. Se hierve nuevamente la disolución y pasados 2 ó 3 min se repiten las pruebas con iodo. Soporte con tubos de ensayo. o rojo. Hidrólisis enzimática del almidón Bajo la influencia de la enzima amilasa el almidón se desdobla con la formación de un disacárido. M. maltodextrinas y maltosa. la maltosa. Él se deposita casi en todos los órganos y tejidos. Reactivos. El hidrolizado de almidón se neutraliza. con disolución de hidróxido sódico. Claudio Arzola Alvarez. termómetro. 2.5 ó 1 ml de saliva.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 37 por la presencia de las en dextrinas. Marcha de los trabajos. se mezcla cuidadosamente y se pone en ei baño maría durante 10 ó 15 min a una temperatura de 37 a 40° C. Se hacen repetidamente las pruebas con iodo.12. Preparado de saliva (1 ó 2 ml de saliva se coloca en un vaso y se diluyen 5 veces con agua destilada. El depósito principal Dr. Pipetas. La reacción con iodo será negativa: el líquido adquiere un color amarillo a cuenta de la coloración de la disolución de Lugol.C. La presencia de la glucosa se confirma por la reacción positiva con el licor de Fehling. El almidón se desintegra al final hasta la glucosa. luego se descompone por la maltasa hasta la glucosa. se mezclan cuidadosamente). Los demás reactivos son los mismos que en el experimento anterior.

C. Se extrae el líquido. disolución al 10%. En una probeta centrífuga se ponen 1. Al añadir iodo. en el curso de la hidrólisis el glicógeno da una serie de productos intermedios. el precipitado se disuelve en 2 ml de Dr. Etanol.5 a 2%) en los cuales esta acumulado hasta 60% de su contenido en el organismo. Claudio Arzola Alvarez. disolución al 1%. la disolución de glicógeno adquiere una coloración rojiparda de diferentes intensidades y matices. Luego la probeta se quita del baño. Hidróxido potásico. Reactivos. Hidróxido sódico. disoluciones al 15% y al 60%. Licor de Fehling. La probeta se coloca en el baño maría hirviendo.5 ó 2 g de hígado y se vierten 2 ml de disolución de hidróxido potásico al 60%. Marcha de los trabajos. Ácido clorhídrico. Soporte con probetas de centrífuga y tubos de ensayo corrientes. Varillas de vidrio. Éste se separa mediante la centrifugación durante 5 ó 10 min a 3000 r. finalmente. Igual que el almidón. Muestra pesada de hígado (de 1. Reactivos.5%. La probeta se pone en el vaso con hielo donde se mantiene durante 20 ó 30 min. disolución al 2. el monosacárido la glucosa. disolución al 10%. Hidróxido sódico. Centrífuga. Se sedimenta el precipitado del glicógeno.p.13 Reacción del glicógeno con el iodo Instrumentos. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . las dextrinas. Disolución de Lugol. Pipetas. Vaso con hielo. luego el disacárido la maltosa y. Baño María. que se encuentra encima del precipitado. Soporte con tubos de ensayo. M. Glicógeno. 2. el contenido de la probeta se remueve frecuentemente con una varilla de vidrio. lo que depende de la estructura del glicógeno que difiere para distintas especies de animales y se determina según al grado de ramificación de la macromolécula. Reconocimiento del glicógeno en los tejidos animales Instrumentos.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 38 de glicógeno son el hígado (de 2 a 5%) y los músculos (de 0.5 a 2 g).m. por su constitución química el glicógeno se asemeja a la amilopectina. Cloruro sódico cristalino. El glicógeno es un polímero de a-D-glucosa en que las unidades de glucosa están unidas entre sí por los enlaces glicosídicos 1-4 y 1-6. se enfría y se le añaden de 8 a 10 ml de etanol.

Luego el precipitado del glicógeno se hidroliza y se demuestra la presencia de la glucosa en su composición. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . se añaden 8 ó 10 ml de etanol y la mezcla obtenida se enfría. Acto seguido. el contenido se enfría. El precipitado formado del glicógeno se separa mediante la centrifugación. se neutraliza con la disolución de hidróxido sódico. se le añade igual volumen de licor de Fehling y la mezcla se hierve. Claudio Arzola Alvarez.C. Para ello se añaden al precipitado 3 ó 4 ml de disolución de ácido clorhídrico y se hierve durante 15 ó 20 min en el baño de María. M. Se forma un precipitado rojo de óxido cuproso .Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 39 disolución de hidróxido potásico al 15%. Dr.

Holguín Facultad de Zootecnia. Arzola. C. UACh febrero 2006 .Serie de Prácticas 3 Lípidos C.

Universidad Autónoma de Chihuahua Responsable: Dr. Podras constatar algunos fenómenos de importancia en cuanto a la respuesta física de los lípidos y relacionar esta con fenómenos de producción agropecuaria. Sin embargo. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos. el cual deberá ser individual. Al mismo tiempo. con actitudes de respeto a tus compañeros y maestros. serás capaz de manejar con propiedad el análisis de los lípidos y sustancias afines.C. Claudio Arzola Alvarez. obtendrás menor calificación. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 41 .3. deberás de observar una conducta adecuada durante la misma. Los lípidos y su metabolismo Facultad de Zootecnia. M. Puesto que el desarrollo de esta práctica se considera una actividad integradora. tendrás la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemático del grupo de sustancias alimenticias que contribuyen significativamente con la aportación energética de las dietas de los animales con lo que lograrás una eficiente comunicación con colaboradores y colegas. puesto que la práctica se llevará a cabo en grupo. Dr. con miras a que tu posterior desempeño profesional sea de alto nivel. Al terminar. La pulcritud y el orden será un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades. Claudio Arzola Alvarez Número de alumnos por práctica: Tres Propósito de la práctica: Al terminar esta práctica. el protocolo deberá ser entregado en forma individual para su evaluación. deberás entregar un informe del desarrollo y resultados de la práctica.

gangliósidos). fosfolípidos y glicolípidos (cerebrosidos. CHECHETKIN et. Editorial MIR. son ricas en lipoproteínas las mitocondrias. 1984. Los lípidos desempeñan un papel muy importante en calidad de componentes estructurales de las membranas celulares. los hidratos de carbono y otras sustancias. las ceras. A ellos pertenecen los glicéridos (grasas). disolvente para las sustancias orgánicas y como precursores de otros componentes de la célula (vitaminas del grupo D. Moscú. A los complejos se les atribuye una gran significación en el cumplimiento de una serie de funciones importantes.V. En el organismo de los animales casi todos los lípidos se encuentran en complejo con las proteínas. en los cuales se verifican los procesos de oxidación libre y conjugada con la fosforilación. al.Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 42 Los lípidos y sus metabolitos Glicéridos (grasas)3 Se denomina lípidos un grupo numeroso de sustancias constituidas como los esteres y caracterizadas por su solubilidad en disolventes orgánicos y por su insolubilidad en agua. A. Las grasas son esteres de un alcohol trivalente (la glicerina y los restos de ácidos grasos de cadena larga que tienen la estructura general siguiente: Adaptado de PRACTICAS DE BIOQUÍMICA DEL GANADO Y AVES DE CORRAL. como fuente de energía. los esteróles (estearinas). como también una parte considerable de los procesos de metabolismo intermedio. Así. ácidos biliares y hormonas de naturaleza de esteroides). 3 . que son elementos estructurales de las células.

y sólo un 2 ó 3% de ellos son glicéridos simples (tripalmitato. son necesarios parí regulación de los procesos de oxidación-redución en las células. nervios y vasos los deterioros mecánicos. Reactivos.C. Las grasas tienen gran importancia para el organismo como una de las fuentes de energía (grasa de reserva). Aceite vegetal. y de otras sustancias biológicamente activas. araquidónico. vitaminas. Como regla. participan en la termorregulación del organismo. los aceites.) constituyen una mezcla compleja de varios glicéridos. favorecen la asimilación de vitaminas liposolubles A. se mezcla y se deja en reposo durante 24 h por lo menos). corrientemente. linoleico. linolénico. Sobre el vidrio de reloj se aplica una gota de aceite. los restos de ácidos grasos saturados y no saturados (palmítico. oleico. Vidrio de reloj o placas de vidrio. Se observa la aparición de una coloración naranja de la mezcla. A más. etc. En el organismo de los animales los glicéridos son en su mayoría mixtos. ácidos grasos libres. todas las grasas naturales (el sebo de res. Los ácidos grasos no saturados presentes en las grasas linoleico.Manual del laboratorio de Bioquimica En la composición de la molécula Lípidos… de una grasa Pagina 43 natural entran. trioleato). Reacción de la grasa y el aceite con el Sudán III Instrumentos. D. Marcha de los trabajos. disolución al 0. ellas sirven de componentes estructurales del protoplasma celular (grasa estructural). como también para la biosíntesis de las prostaglandinas que constituyen un gran grupo de hormonas de gran actividad biológica.1. protegen los órganos. la manteca de cerdo. Dr. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Reacciones de reconocimiento de las grasas. esteárico. E y K. El colorante Sudan III se aplica en las investigaciones histológicas para localizar las grasas en los tejidos. 3.2% (preparación: en 200 mg de Sudán III se añaden 100 ml de alcohol etílico al 70% calentado en un baño maría. triestearato. M. proteínas. se añade una gota de Sudán III y se mezcla. Claudio Arzola Alvarez. Sudán III. etc. carotinoides y pigmentos.

En un tubo de ensayo se vierte ó 10 gotas de aceite. Benceno. en particular. Hidrosulfato potásico (sódico). En ambos tubos se añade aproximadamente 1 g de hidrosulfato potásico. Marcha de los trabajos. que es un aldehido no saturado. Claudio Arzola Alvarez.2. en el otro se pone de 0. Grasa o aceite vegetal. Cloroformo Marcha de tos trabajos. Solubilidad de las grasas El trabajo se realiza con el aceite vegetal y diferentes solventes. en el Dr. La reacción de formación de la acroleína se hace con el propósito de reconocer la glicerina libre o ligada en la molécula de grasa. Cera. Soporte con tubos de ensayo. en el segundo 2 ml de alcohol. La mezcla en los tubos de ensayo se calienta con cuidado pero fuertemente. cristalino. Reactivos. 3. mezcla en los tubos de ensayo se agita enérgicamente. esterinas. Soporte con tubos de ensayo. acre intenso.5 g de aceite.3 a 0.Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 44 3. La formación de la acroleina en el tubo de ensayo con la grasa se reconoce por la aparición de un olor característico. de hidrosulfatos de potasio o sodio se desprenden fácilmente de la glicerina dos moléculas de agua. Énel otro tubo de sayo no se forma acroleína. Los lípidos que no contienen glicerina (ceras. En el primer tubo añaden 2 ml de agua. M.C. En cuatro tubos de ensayo se vierten de 5 a 7 gotas de aceite dé girasol. Ractivos. Instrumentos. El experimento debe realísarze en la campana de humos. Determinación de la glicerina en las grasas En el curso del calentamiento de una grasa en presencia de agentes deshidratantes. Alcohol etílico.4. Instrumentos. y ella se convierte en acroleína. inositolfosfolípidos y esfingolípidos) dan reacción de acroleína negativa. en el tercero 2 ml de benceno y en el cuarto 2 ml de cloroformo. Mechero de gas o infer-nilla. Se observan los siguientes cambios: en el primer tubo se forma una emulsión inestable que se separa rápidamente. Aceito de girasol. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .

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segundo una disolución turbia, que indica la mala solubilidad del aceite en alcohol; en el tercero y el cuarto tubos de ensayo se forman disoluciones transparentes debido a una buena solubilidad del aceite en benceno y cloroformo.

3.5. Determinación de la temperatura de fusión
La temperatura de fusión de una grasa es uno de los indicadores que permite, en cierta medida, juzgar sobre su asimilación. Las grasas que funden a baja temperatura se emulsifican más fácilmente y, en consecuencia, se asimilan con mayor facilidad. La temperatura de fusión de los glicéridos es condicionada por sus ácidos grasos constituyentes. Como regla, el punto de fusión de la grasa es tanto más bajo cuanto más alto es el contenido de los ácidos de cadena corta o no saturados. A la temperatura ambiente las grasas de origen vegetal son líquidos, puesto que en su composición la cantidad de ácidos grasos no saturados alcanza un 95 ó 97%. En la composición de las grasas sólidas poco fusibles de origen animal prevalecen los ácidos grasos de cadenas de carbono largas. Las grasas naturales no poseen un punto de fusión determinado, ya que no son sustancias químicas individuales, sino mezcla de diferentes glicéridos, ácidos grasos libres, pigmentos, vitaminas y otras sustancias. La temperatura de fusión de las grasas depende de la especie del animal y oscila dentro de límites siguientes en °C: ovejas 49—54, venados 48—52, ganado vacuno 48—50, cabras 46—48, camellos 36-48, cerdos37— 45, caballos28—32,perros23—27, conejos 22- 25. Instrumentos. Capilar de vidrio de 1.5 ó 2 mm en diámetro. Termómetro. Tubo de ensayo. Vaso químico. Lupa. Reactivos. Grasa de origen animal (fundida y filtrada). Marcha de los trabajos. El capilar limpio y seco se llena de grasa a una altura de unos 2 cm y se mantiene durante 1 h sobre hielo o en agua corriente fría. Terminado el enfriamiento, la parte del capilar llenada de grasa se corta, dejando la columna de grasa de 0.5 cm de altura. El capilar se ajusta mediante un anillo de goma en la parte inferior del termómetro de tal manera que su punta llena de grasa Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua

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sea dirigida hacia arriba y su otro extremo libre de grasa, hacia abajo. El termómetro con capilar se mete en el tubo de ensayo donde se ajusta con ayuda de un tapón. El tubo de ensayo se sumerge en el vaso con agua y se sujeta en la patilla del soporte en posición vertical. El nivel de agua en el vaso debe ser más alto que el término superior del capilar. El agua se calienta poco a poco, removiéndola frecuentemente, y a través de la lupa. Se observa el aumento de la temperatura y el estado columna de grasa en los capilares. La indicación del termómetro en el momento cuando la grasa empiece a fluir por el capilar y en la parte superior de este último se forme un espació libre, se anota como la temperatura de fusión. Entre el inicio y el final de la transición de la grasa desde el estado sólido al líquido transcurre cierto tiempo. Por lo tanto, para evitar errores, la temperatura de fusión grasa se determina por lo menos dos veces, y el resultado se calcula como promedio.

3.6. Determinación del número acídico
El número acídico caracteriza la presencia de ácidos grasos libres en la grasa. El número acídico se expresa en cantidad de miligramos de hidróxido potásico necesarios para neutralizar los ácidos grasos libres en 1 g de grasa. Este índice es uno de los indicadores más importantes la calidad de la grasa. El número acídico de la grasa fresca de distintos tipos no sobrepasa, comúnmente, una magnitud de 1.2 a 3.5. En el curso de almacenaje de la grasa tiene lugar la hidrólisis de los glicéridos y acumulación de los ácidos grasos libres. Una elevada acidez de una grasa indica la pérdida de su calidad. Instrumentos. Matraz Erlenmeyer. Bureta. Pipetas de 1 y 10 ml. Reactivos. Aceite de girasol. Mezcla neutralizada de alcohol con éter (mezcla de alcohol con éter 1:2 que se neutraliza con disolución 0.1 N de hidróxido potásico según la fenolftaleina). Hidróxido potásico, disolución 0.1 N. Fenolftaleina, disolución 0.1%. Marcha de los trabajos. En el matraz Erlenmeyer se vierte 1 g de aceite de girasol, se añaden 10 ml de mezcla de alcohol con éter, el contenido se agita cuidadosamente. Se agregan 2 ó 3 gotas de Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua

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fenolftaleína, y la disolución se valora rápidamente con la disolución de hidróxido potásico 0,1 N, con agitación, hasta la aparición de una coloración rosa que persista más de 1 min. El número acídico se calcula según la fórmula

donde x es el número acídico, en mg; a es el volumen de disolución de hidróxido potásico de 0.1 N consumido para la valoración de la prueba a investigar, en ml; 5.6 es la cantidad de hidróxido potásico (mg) que se contiene en 1 ml de disolución dé hidróxido potásico 0.1 N; K es el coeficiente de corrección dé la disolución de 0.1 N de hidróxido potásico; c es la muestra pesada de aceite, en g.

3.7. Determinación del índice de iodo
Se denomina índice de iodo la cantidad de gramos de iodo que pueden combinarse con 100 g de grasa. Este número permite evaluar el grado de insaturación de la grasa provocado por la presencia de glicéridos con ácidos grasos de dobles enlaces, la capacidad de la grasa para la oxidación, para la reducción y otras reacciones. Cuanto mayor es el contenido de ácidos grasos no saturados en la grasa, tanto mayor es su índice de iodo. El índice de iodo dé algunas grasas y aceites oscila dentro de los siguientes límites: de res, 27—47;de carnero,31—46; de cerdo, 46—66;de perro, 56—67; aceite de girasol, 129—136; aceite de cáñamo, 145—162; aceite de linaza, 175—201. El principio del método. La determinación del índice de iodo se basa en la reacción de adición del iodo al lugar de ruptura de los dobles enlaces en las moléculas de ácidos grasos, que se verifica cuantitativamente según el esquema:

El iodo que no ha reaccionado se valora con tiosulfato. Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua

disolución 0. El número de saponificación de algunos aceite de buena calidad tiene los valores siguientes: grasa de res. y luego al añadir 1 ml de disolución de almidón al 1% desaparición de la coloración azul. manteca de vaca. manteca de cerdo. agitando permanentemente. y los se dejan en la oscuridad.8. el contenido se remueve agitándolo. y se añaden de la bureta 5 ml de cloroformo en cada uno.1 N.g) se calcula según la fórmula: donde b es el volumen de disolución de tiosulfato sódico 0. c es la muestra pesada de grasa.1 mi de agua. Pipeta de 10 ml. Cuando la muestra de aceite sea disuelta. en ml. disolución al 1%. disolución 0.1 N de tiosulfato sódico. Dr.1 N en alcohol (la preparación: 12. en los matraces se añaden con la pipeta 10 ml (¡exactamente!) de disolución 0. 0. primero hasta que la coloración se ponga amarilla clara.1 N. Iodo.01269 es la cantidad de iodo (g) equivalente a 1 ml de disolución de tiosulfato sódico 0. 100 es el coeficiente de recuento para los 100 g de grasa. Al cabo de 5 min las pruebas se evalúan. Marcha de los trabajos. Almidón. los matraces se cierran con tapones. 212—247. en el otro (prueba de control) 0.Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 48 Instrumentos.1 N. 3. K es el coeficiente de corrección del título de la disolución 0. Tiosulfato sódico.691 g de iodo recién sublimado se disuelven en 1 l de alcohol etílico al 96%). Claudio Arzola Alvarez. a es el volumen de la disolución de tiosulfato sódico 0.1 g de aceite de girasol (se pesa en una balanza analítica). 200. Determinación del número (índice) de saponificación Número de saponificación se denomina el núnero de miligramos de hidróxido potásico que se necesitan para neutralizar todos los ácidos grasos (libres y ligados en forma de glicéridos) que se contienen en 1 g de grasa. 190—200. 187-195. Reactivos. Aceite de girasol. En un matraz (prueba experimental) se pone 0. g. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Cloroformo. con disolución de tiosulfato sódico 0.1 N de iodo en alcohol. M.C. consumido en la valoración de lá prueba de control en ml. 192—198. El índice de iodo (x. Bureta. Matraces Erlenmeyer de 50 ml con tapones. aceite de linaza.1 N.1 N consumido en la valoración de la prueba experimental. grasa de carnero.

Reactivos. Mortero de porcelans Vidrios de reloj. disolución 0. Matraces Erlenmeyer refrigerantes de reflujo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Dr. Se toman muestras pesadas de hígado y músculos (hasta 3 g de cada tejido).Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 49 Instrumentos. Determinación cuantitativa de la grasa en el hígado y los músculos El contenido de la grasa se determina mediante la extracción de una muestra pesada de los tejidos a investigar en el aparato Soxhlet. a 106 °C. Fenolftaleína. Tijeras curvas. Las muestras secadas se trituran en el mortero y se trasladan en cartuchitos de papel de filtro. se ponen en los pesafiltros se secan en el armario secador a una temperatura de 102 106 °C hasta una masa constante. El aparato consiste de tres partes: matra (7). Hidróxido potásico alcohólica 0. Claudio Arzola Alvarez. se pesa y se guardan en el desecador). y el volumen se lleva a 1l con alcohol etílico al 96%. extractor (2) y refrigerante de reflujo (3) unidos ajuste damente mediante conexiones esmeriladas (fig. Ácido clorhídrico. Éter dietílico. Estufa.C. Principio del método. Reactivos.1%. Se deja pasar el agua por el refrigerante. Marcha de los trabajos. Instrumentos.5 N (la preparación: 30 g de hidróxido de potasio quimicamente puro se disuelven en 30 ml de agua destilada. al cabo de 24 h se filtra). Baño de maría. Balanza analítica. Aparato Soxhlet.9. M. Todas las partes del aparato se unen herméticamente.5 N. 3. Pipetas graduadas de 1 ml. A través de la boca superior del refrigerante el extractor y el matraz se llenan de éter en una cantidad igual a dos volúmenes del extractor. disolución al 0. Hígado y músculos frescos. Aceite de girasol. Pesafiltros. 11). éste se coloca en el baño maría. Bureta. Cartuchitos para extracción hechos d papel de filtro denso desgrasado (los cartuchitos se secan. El método se basa en la determinación de la masa de los tejidos antes y después de la extracción de las grasas con disolvente. se desmenuzan con tijeras sobre un vidrio de reloj. Los cartuchitos con el material a investigar se pesan y se meten en el extractor del aparato Soxhlet. Baño maría. y el matraz se calienta en el baño de María.

La plenitud de la extracción de la grasa desde los tejidos se establece por la ausencia de manchas grasosas sobré papel de filtro tras la evaporación de varias gotas de éter tomado del extractor. al vaporizarse el éter. Después de la extracción los cartuchitos con el material se quitan del aparto Soxhlet y se secan primero en la campana de humos y. Claudio Arzola Alvarez. Los cartuchitos se pesan en la balanza analítica y a partir de la diferencia entre la masa del cartuchito antes y después de la extracción se determina la cantidad de la grasa en las muestras pesadas. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 50 Durante la extracción se observa que la cantidad del disolvente en el matraz no sobrepase 2/3 de su capacidad y que Aparato Soxhlet el disolvente que se condensa no suba demasiado en el refrigerante.C. en el armario secador a una tempetarura de 102 a 106° C durante 4 ó 5 h hasta la masa constante. La cantidad de la grasa x (en se calcula según la fórmula %) Dr. M. La extracción se prolonga durante 5 ó 6 h.

en g. M. 100 es el coeficiente porcentual de recuento. c es la muestra pesada del material a investigar. Dr. b es la masa del cartuchito con la muestra después de la extracción. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 51 donde a es la masa del cartuchito con la muestra antes de la extracción. en g. Claudio Arzola Alvarez.C. en g.

UACh febrero 2006 . C. Holguín Facultad de Zootecnia. Arzola.Serie de Prácticas 5 Enzimas C.

obtendrás menor calificación. tendrás la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemático del grupo de moléculas mas represenativas de la bioquímica. Enzimas4 Facultad de Zootecnia. Al terminar. deberás de observar una conducta adecuada durante la misma. La pulcritud y el orden será un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos. al.V. Claudio Arzola Alvarez Número de alumnos por práctica: Tres Propósito de la práctica: Al terminar esta práctica. Podrás constatar algunos fenómenos de importancia en cuanto a la respuesta física de las enzimas y relacionar esta con fenómenos de producción agropecuaria. puesto que la práctica se llevará a cabo en grupo. 4 . Moscú. con lo que lograrás una eficiente comunicación con colaboradores y colegas. CHECHETKIN et. con actitudes de respeto a tus compañeros y maestros. Adaptado de PRACTICAS DE BIOQUÍMICA DEL GANADO Y AVES DE CORRAL. Universidad Autónoma de Chihuahua Responsable: Dr. Al mismo tiempo. el protocolo deberá ser entregado en forma individual para su evaluación. el cual deberá ser individual.4. con miras a que tu posterior desempeño profesional sea de alto nivel. serás capaz de manejar con propiedad las enzimas. 1984. A. Editorial MIR. Sin embargo. Puesto que el desarrollo de esta práctica se considera una actividad integradora. deberás entregar un informe del desarrollo y resultados de la práctica.

los catalizadores biológicos poseen una eficiencia mayor en la disminución de la energía de activación y. como regla general. Dr. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . su especificidad. La actividad catalítica de la enzima está relacionada con a presencia en su molécula de unas regiones especiales responsables de la fijación y la activación del sustrato: el centro de sustrato y el centro activo. presión baja y unos valores de pH cercanos al neutro. el conjunto de los cuales constituye la esencia del metabolismo.C. las enzimas son capaces de regular efectivamente los procesos de vitalidad. desempeñan su función a una temperatura moderada. sensibilidad al cambio de la temperatura y el pH del medio así como también a la presencia de los activadores e inhibidores. Claudio Arzola Alvarez. M. las enzimas son sensibles a las variaciones de las condiciones del medio en que están funcionando y tienen una serie de particularidades relacionadas a su naturaleza proteínica. Influyendo en la velocidad de las reacciones metabólicas. Semejantemente a los catalizadores inorgánicos. las enzimas aumentan la velocidad de las reacciones químicas a cuenta de la disminución de la energía de activación. Con participación de las enzimas se verifican numerosos procesos químicos. Sin embargo. Propiedades generales de las enzimas Las particularidades características de las enzimas. Al mismo tiempo. son condicionadas por la naturaleza proteínica de los catalizadores biológicos.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 54 Se llaman enzimas las proteínas específicas que poseen función catalítica. Ellos consisten en una combinación única do los restos de aminoácidos situados en la cadena polipéptida a larga distancia uno del otro.

al tomar en la boca de 20 a 25 ml de agua. incluso un aumento pequeño de la temperatura conduce al debilitamiento de los enlaces que mantienen la conformación de la molécula de enzima. Termostato (37 °C). Con cierto aumento de la temperatura del medio ocurre aceleración de la reacción a consecuencia de la activación de las moléculas de sustrato. en la formación del centro catalítico participan también los componentes no proteínicos directamente afines a la región activa del glóbulo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . que son proteínas conjugadas. la colectan en un vasito). disolución al 0. 4. la desnaturalización de la enzima que se acelera bruscamente a la temperatura que sobrepase 50°C. Se investiga la influencia del camino de Ja temperatura del medio exterior sobre la actividad de la enzima amilasa de la saliva. al formarse una estructura terciaria de la molécula. disolución al 1% en disolución do cloruro sódico al 0. El mecanismo de este proceso no está claro. En tres tubos de ensayo se vierten de 2 a 3 ml de saliva diluida (amilasa) en cada uno. La temperatura óptima para la acción de enzimas es Ja temperatura de cuerpo de los animales que oscila en el intervalo de 36 a 41 °C. el enfriamiento no causa desnaturalización de la enzima y por lo tanto su inactivación puede ser reversible. Al bajar la temperatura la enzima disminuye su actividad también.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 55 Acercándose. A la vez. Principio del método.1 La labilidad térmica de las enzimas La temperatura del medio influye mucho en la actividad de las enzimas.C. Sin embargo. M. Luego en todos los tubos de ensayo se añaden 4 ml de disolución Dr. gradualmente. ellos dan lugar a un centro catalítico. Vaso con hielo. Vaso do 50 ml. Reactivos.3%. Marcha de los trabajos. Claudio Arzola Alvarez. Cloruro sódico. La inactivación de la enzima con aumento de la temperatura del medio es irreversible. Soporte con tubos de ensayo. Infernilla. Reactivo do Lugol. Cualquier influencia exterior que altera la conformación nativa de la molécula proteínica conduce a la inactivación de la enzima. Saliva diluida (se enjuaga la boca con agua destilada y luego. Almidón. Instrumentos.3%. La saliva en el tubo de ensayo 1 se hierve durante 1 min. necesaria para la manifestación de su actividad catalítica. Empieza. En cuanto a las enzimas.

Los resultados del experimento se anotan en la tabla de lab] térmica de las enzimas y se sacan conclusiones: Número Enzima del tubo de ensayo j 1 Condiciones del experimento Coloracion con iodo Sustrato Incubación. Pipetas. M.0. 37°€ la min. 37°C-10 min. Termostato (37 °C). y como resultado sse rompen los enlaces que aseguran la formación de los centro catalíticos. Al transcurrir este tiempo. El tubo de ensayo 3 se sumerge en hielo y se tiene durante 10 min. Disoluciones amortiguadoras (pH 5. disolución 0. A los valores de pH muy altos o muy bajos las enzimas se desnaturalizan. Claudio Arzola Alvarez.1 M (B). Se investiga la actividad diferentes magnitudes de pH del medio. Los grupos amino y carboxilo de los restos de aminoácidos ionizados a una magnitud de pH determinada. Forsfato sódico disustituido. Reactivos. pH 6.8: se mezclan 772. Soporte con tubos de ensayo. en el tubo de ensayo se añade 1 gota de reactivo de Lugo. participan en el mantenimiento de la conformación de la molécula proteínica necesaria para la formación de los centros catalíticos de enzima y favorecen también a su ligación con el sustrato.2 Influencia del pH sobre la actividad de las enzimas Para cada enzima existe un óptimo del pH a que crean las condiciones más favorables para el mantenimienato de la conformación funcionalmente activa de la molécula.5 ml de disolución A con Dr. Instrumentos. 0°C 4. se mezclan 515 ml de disolución A con 485 ml de disolución B. Acido cítrico (CeH8O7H2O). Los tubos de ensayo 1 y 2 si colocan en el termostato (37 DC). donde se mantienen 10 mín.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 56 de almidón. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua de la amilasa de la saliva a . A una magnitud de pH distinta se altera la ionización de los grupos correspondientes.2 M (A). disolución 0. Principio del método.C. y la enzima se inactiva. 2 3 Amilas Enzima desnaturalizada a Amilasa Enzima Amilas nativa Enzima a ti Conclusiones: Almid ón Almidó n Almidó 10 miB.

Infemilla.8 8. Almidón.8.0 6.0). disolución al 1%.3 Especificidad de las enzimas Las enzimas se distinguen de los catalizadores inorgánicos por su especificidad excepcionalmente alta. Termos (37 °C). la esencia de la especificidad de enzimas consiste en el hecho de que el sustrato le corresponde a la enzima. 6.0 Almidó Almidó Almidó 10 1 10 min min min 37° C 37° C 37° C 4. Reactivo de Fehling. se mezcla y se incuba durante 10 min en el termostato (37°C). Do tal modo. disolución (10 g levadura se homogeneiza en 100 ml de agua). pH 8. disolucion al 2%. M.5 mi de disolución A con 27. Los resultados de la observación se anotan en una tabla que indica la influencia del pH sobre la actividad de la amilasa de la saliva: Número de tubo de ensayo 1 Enzima pH del medio Sustrato Incubació n Coloració n con iodo Amilasa 2 Amilasa 3 Amilasa Conclusiones: 5. Instrumentos. disolución al 1%. en cada tubo de ensayo se añade 1 gota de reactivo de Lugol. Reactivos. se mezclan 972. La etapa inicial del acto catalítico consiste en la formación del complejo enzima-sustrato.0. En todos los tubos de ensayo se añaden de 2 a 3 ml de saliva diluida (amilasa) y de 4 a 5 ml de disolución de almidón. Marcha de los trabajos. Luego. Reactivo de Lugol. Solamente en este caso es posible la formación del complejo enzima-sustrato y el cumplimiento de la función catalítica de la enzima. Reactivo de Dr. 8.5 ml de disolución B). como una llave a cerradura.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 57 227. Claudio Arzola Alvarez. La conformación espacial del centro de sustrato debe estar en la correspondencia geométrica exacta con la estructura de la molécula de sustrato. es decir. Sacarosa.0. Se investiga la influencia de enzimas amilasa y sacarasa sobre diferentes sustratos: el almidón y la sacarosa. Pipetas. En tres tubos de ensayo se vierten de 2 a 3 ml de disoluciones amortiguadoras de distintos pH (5. Sacarasa. Soporte con tubos de ensayo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Saliva diluida. Principio del método. la ligación del sustrato con el centro catalítico de la enzima. Saliva diluida. Lugol. Almidón.5 ml de disolución B.C.

mediante la fijación sobre la molécula de enzima de una serie de sustancias d bajo peso molecular. Tales sustancias pueden causar efecto Determinación de la actividad de las enzimas Según la clasificación elaborada por la Comisión Internacional de Enzimas. de 2 a 3 ml de disolución de sacarasa. y en los tubos de ensayo 2 y 4. liasas. 0°C 4. El contenido de los tubos de ensayo mezcla y se incuba durante 10 min en el termostato (37°( Luego en los tubos de ensayo 1 y 2 se añade 1 gota de reactivo de Lugol. 37°C-10 min. en tubos ensayo 3 y 4.C. En los tubos de ensayo 1 y 2 vierten de 4 a 5 ml de disolución de almidón. Las observación se anotan en la tabla de especificidad de las enzimas amila y sacarasa: Número Enzima del tubo de ensayo j 1 Condiciones del experimento Coloracion con yodo Sustrato Incubación. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Dr. trans-ferasas. Oxidorreductasas Las oxidorreductasas son una clase de enzimas que catalizan las reacciones de oxidación-reducción. isomerasas y ligasas (sintetasas). 37°€ la min. todas las enzimas se subdividen en seis clases principales en correspondencia con el carácter de la reacción catalizada por ellas: oxidorreductasas.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 58 Marcha de los trabajos. M. hidrolasas. 2 3 Amilas Enzima desnaturalizada a Amilasa Enzima Amilas nativa Enzima a ti Conclusiones: Almid ón Almidó n Almidó 10 miB. Claudio Arzola Alvarez. En tubos de ensayo 1 y 3 se añaden de 2 a 3 ml de saliva diluída (amilasa).4 Influencia de los activadores e inhibidores La regulación de la actividad de las enzimas se realiza tanto en la célula como fuera de ella. de 1 a 2 ml de reactivo de Fehling y se calienta. de 4 a 5 ml de disolución de sacarosa. en cada una y en los tubos de ensayo 3 y 4.

En las células la enzima está unida establemente con la membrana de mitocondrias. La masa homogeneizada obtenida se reparte en dos porciones iguales que se ponen en dos tubos de Dr. Aceite de vaselina o vegetal. disolución al 20%. Baño de María (50 °C). Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . La enzima redunda devuelve fácilmente el hidrógeno cuyo aceptor pueden ser los colorantes aptos para la reducción.4 según el papel indicador). Acido succínico.5 Determinación de la actividad de la dehidrogenasa de ácido succínico La dehidrogenasa de ácido succínico (succinato dehidrogenasa) es una enzima que cataliza la oxidación del ácido succínico. Acido tricloroacético.001%. disolución al 3% (3 g de ácido succínico se disuelven en 97 ml de agua y se neutraliza con disolución de hidróxido sódico al 10% hasta el pH 7.C. añadiendo de 3 a 4 ml de disolución de ácido succínico. De coenzima sirve el dinucleótido de flavina-adenina (FAD). Músculo fresco (desmenuzado en picadora de carne). disolución acuosa al 0. con la arena de vidrio.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 59 4. Azul de metileno. Claudio Arzola Alvarez. Termómetro. Instrumentos. Mortero con machaca. El hidrógeno que se desprende del ácido succínico bajo la influencia de la enzima dehidro-fenasa. Hidróxido sódico. disolución al 10%. aproximadamente 1 g de tejido de músculo desmenuzado. Pipetas. M. reduce el azul de metileno (AM) transformándolo en un compuesto incoloro (AMH 2). Soporte con tubos de ensayo. Reactivos. Principio del método. En el mortero se tritura cuidadosamente. Marcha de los trabajos. Arena de vidrio.

Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . En el tubo de ensayo 1 (de control) se añade 1 ml de disolución de ácido tricloroacético para destruir la enzima.C.5 a 1 ml de aceite para aislar del oxígeno de aire. Ambos tubos de ensayo se incuban en el baño maría (50°C) durante 10 min. Claudio Arzola Alvarez. en el tubo de ensayo 2 se observa la descoloración del azul de metileno. Dr. se mezcla. En el tubo de ensayo 2 (experimental) la enzima es activa. Al pasar este tiempo. y sobre la superficie de líquido se vierte de 0. M.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 60 ensayo. En ambos tubos de ensayo se añade 1 ó 2 gotas de disolución de azul de metileno.

REVERTE. Dr. 3a. WORTH PUBLISHERS.A. S. S. DE C. REIMPRESION 1983 PRINCIPLES OF BIOCHEMISTRY ALBERT LEHNINGER AD. ALBERT LEHNINGER EDICIONES OMEGA. M.V.A. MANUAL MODERNO. S.A. PRENTICE HALL HISPANOAMERICANA.R. 1993 BIOQUIMICA. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 61 . HORTON et al DE. S. 7a. INC. J. INTERAMERICANA Mc.C.HILL 1989 BIOQUIMICA LUBERT STRYER AD. Claudio Arzola Alvarez. 1994 BIOQUIMICA: LAS BASES MOLECULARES DE LA ESTRUCTURA Y FUNCION CELULAR. EN ESPAÑOL 1993 BIOQUIMICA DE HARPER ROBERT K MURRAY AD. 1980. GRAW . DE.A.BIBLIOGRAFIA BIOQUIMICA H. DAVID RAWN AD.

Sí un producto químico te salpica los ojos. 2. 4. El uso de bata es obligatorio. ya que hay la posibilidad de que los alimentos o bebidas se hayan contaminado con productos químicos. 3. El uso de bata (preferentemente de algodón) es obligatorio. No dirijas una corriente de alta presión de agua de un grifo directamente al ojo porque podrías lesionarlo.C. utiliza inmediatamente una ducha de ojos y lava completamente el ojo afectado durante 15 minutos sin interrupción. 6. Así mismo se recomienda llevar zapatos cerrados y no sandalias. Es obligatorio usar gafas de seguridad siempre que se esté en el laboratorio. en menos de 10 segundos. 9. Actúa siempre con urgencia. ya que por mucho cuidado que se tenga al trabajar. Dr. Es necesario localizar las salidas principales y de emergencia por si se diese el caso de una evacuación por fuego o por cualquier otro incidente. Antes de empezar el trabajo en el laboratorio tienes que familiarizarte con los elementos de seguridad disponibles. Informa al encargado del laboratorio de lo que ha sucedido y si es necesario pide asistencia médica. No usar lentes de contacto en el laboratorio. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 62 . ya que en caso de accidente las salpicaduras de productos químicos o sus vapores pueden pasar detrás de las lentes y provocar lesiones en los ojos antes de poder retirar las lentes. 7. No comer ni beber en el laboratorio. 8. M. las salpicaduras de productos químicos son inevitables.ANEXOS NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD E HIGIENE 1. En estos casos es recomendable el uso de gafas graduadas o de gafas de seguridad cerradas. así como conocer la localización exacta de extintores. 5. duchas de seguridad y duchas de ojos. Claudio Arzola Alvarez.

El área de trabajo tiene que mantenerse siempre limpia y ordenada. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Todos los productos químicos tienen que ser manejados con mucho cuidado de acuerdo con las Hojas de Seguridad de cada una de las sustancias. 13. 24. No utilices material de cristal en mal estado ya que aumenta el riesgo de accidentes. Para pipetear los líquidos utilice siempre una bombilla pipeteadora. nunca por la boca de la botella. tenga cuidado con las botellas. 20. Dr. sin libros. Cuando caliente tubos de ensaye hágalo siempre en la parte superior del líquido y con agitación suave. y debe estar inclinado y no apuntar hacia ninguna persona. 12. sin correr. No inhales. La conducta en el laboratorio debe ser seria. No utilices nunca un equipo o aparato sin conocer perfectamente su funcionamiento. productos químicos vertidos. nunca por el fondo del tubo. 11. Claudio Arzola Alvarez. abrigos. Procure quitarse la bata hasta que salga del laboratorio. 23. tampoco las neveras u otras instalaciones destinadas al empleo en los laboratorios. 19. pruebes o huelas productos químicos si no estás debidamente informado. empujar. las cuales deben ser siempre transportadas cogiéndolas por el fondo. 15. Lavarse siempre las manos después de hacer cualquier análisis y antes de salir del laboratorio. 16. bolsas. Cerrar herméticamente los frascos de productos químicos después de utilizarlos. Sí tuviese que hacerlo. 17. etc. 25. El material y los aparatos utilizados tienen que dejarse siempre limpios y en perfecto estado de uso. Está prohibido fumar en el laboratorio por razones higiénicas y de seguridad. M.C. 21. gritar. no absorber directamente con la boca. No deben transportarse innecesariamente los reactivos de un sitio para otro del laboratorio.Manual del laboratorio de Bioquimica Seguridad… Pagina 63 10. 14. sin bromas. No se puede hacer ningún experimento no autorizado. Los recipientes del laboratorio nunca deben utilizarse para el consumo y conservación de alimentos y bebidas. 22. 18. jugar.

MEDIDAS GENERALES EN CASO DE ACCIDENTE PLAN GENERAL DE EMERGENCIA: • Dar la alarma.C. Claudio Arzola Alvarez. • Avisar al responsable del departamento. FUEGO EN EL LABORATORIO: Dr. corrosivos o lacrimógenos.Manual del laboratorio de Bioquimica Seguridad… Pagina 64 26. especialmente cuando manipules productos tóxicos. • Evacuación del edificio en caso necesario. bomberos. • Ayudar a las personas. irritantes. • Avisar a ambulancias. M. • Luchar contra el fuego. No inhales los vapores de productos químicos y trabaja siempre en vitrinas extractoras. • Ponerse a salvo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .

apagarlo utilizando un extintor adecuado. arena o cubriendo el fuego con un recipiente de tamaño adecuado que lo ahogue. • Una vez apagado el fuego. hazle rodar por el suelo.. QUEMADURAS: • Las pequeñas quemaduras producidas por material caliente. procurando que no coja frío y proporciónale asistencia médica. Claudio Arzola Alvarez. • Para fuegos grandes aislar el fuego. • Avisar a todos los compañeros de trabajo sin que se extienda el pánico y conservando siempre la calma. por pequeño que sea el fuego.Manual del laboratorio de Bioquimica Seguridad… Pagina 65 • Evacuar el laboratorio. se tratarán lavando la zona afectada con agua fría durante 10-15 minutos. placas. FUEGO EN EL CUERPO: • Sí se te incendia la ropa. Dr. cúbrele con una manta antifuego. • Las quemaduras más graves requieren atención médica inmediata. sí el fuego no se puede controlar rápidamente accionar la alarma de fuego. • Es tu responsabilidad ayudar a alguien que se está quemando. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . • Sí el fuego es pequeño y localizado. por la salida principal o por la salida de emergencia. • Retirar los productos químicos inflamables que estén cerca del fuego. pide inmediatamente ayuda. baños. M. avisar al servicio de extinción de incendios y evacuar el edificio. mantén a la persona tendida. sí la principal está bloqueada. • Estírate en el suelo y rueda sobre ti mismo para apagar las llamas. etc. no utilices nunca un extintor sobre una persona. condúcele hasta la ducha de seguridad. si está cerca. utilizar los extintores adecuados. • No corras ni intentes llegar a la ducha de seguridad si no es que está muy cerca de ti. No utilices nunca agua para extinguir un fuego provocado por la inflamación de un disolvente. • No utilices cremas y pomadas grasas en las quemaduras graves.C.

• Las duchas de seguridad instaladas en los laboratorios serán utilizadas en aquellos casos en que la zona afectada del cuerpo sea grande y no sea suficiente el lavado en una pila. • Es necesario sacar toda la ropa contaminada de la persona afectada lo antes posible mientras esté bajo la ducha. • Recuerda que la rapidez en el lavado es muy importante para reducir la gravedad y la extensión de la herida. durante 10 minutos como mínimo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . • Las cortadas se tienen que lavar bien. requiere de asistencia médica inmediata. corta lo más rápidamente posible la ropa. • Proporcionar asistencia médica a la persona afectada. • Sí la cortada es grande y no deja de sangrar. lave con agua abundantemente la zona afectada. neutralice la acidez con bicarbonato de sodio durante 15-20 minutos. • Sí la cortada es pequeña y deja de sangrar en poco tiempo. seca y cubra la parte afectada con linimento óleo-calcáreo o parecido. DERRAME DE PRODUCTOS QUÍMICOS SOBRE LA PIEL: • Los productos químicos que se hayan vertido sobre la piel han de ser lavados inmediatamente con agua corriente abundantemente. Claudio Arzola Alvarez. M.Manual del laboratorio de Bioquimica CORTES: Seguridad… Pagina 66 • Los cortes producidos por la rotura de material de cristal son un riesgo común en el laboratorio. lávala con agua y jabón y tápala con una venda.C. como mínimo durante 15 minutos. CORROSIONES EN LA PIEL POR ÁCIDOS Y ÁLCALIS: • Cuando ocurre una corrosión por ácidos. sacar el exceso de pasta formada. con abundante agua corriente. Dr.

• Es necesario recibir asistencia médica. • Es necesario mantener los ojos abiertos con la ayuda de los dedos para facilitar el lavado debajo de los párpados. • Lava los dos ojos con agua corriente abundantemente durante 15 minutos como mínimo en una ducha de ojos. cuanto antes se lave el ojo.C. menos grave será el daño producido. CORROSIONES EN LOS OJOS: • En este caso el tiempo es esencial (menos de 10 segundos). y estirarle la lengua hacia fuera. • Sí el paciente está inconsciente. ponerlo en posición lateral de seguridad. M. Claudio Arzola Alvarez. y. con un frasco de lavar los ojos. si no hay. con la cabeza de lado. Dr. INGESTIÓN DE PRODUCTOS QUÍMICOS: • Antes de cualquier actuación pide asistencia médica. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . por pequeña que parezca la lesión.Manual del laboratorio de Bioquimica Seguridad… Pagina 67 • Cuando se produce una corrosión por álcalis. lave la zona afectada abundantemente con agua corriente y aclárala con una disolución de ácido acético al 1%. seca y cubre la zona afectada con una pomada de ácido tánico.

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