Manual de Prácticas de Bioquímica

Dr. Claudio Arzola M.C. Celia Holguín Licón Responsables de la elaboración Del manual de Bioquímica

Mauricio Ramírez Ruano, D.I. Coordinador de la elaboración de Manuales de Prácticas

MC. Javier Martínez Nevarez Presidente del H. Consejo Técnico

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Directorio
C.P. Raúl Chávez Espinoza.
Rector de la Universidad Autónoma de Chihuahua

Ing. Heriberto Altes Médina
Secretario General de la Universidad Autónoma de Chihuahua

Dr. Alfredo de la Torre Hernández.
Director Secretario Académico de la Universidad Autónoma de Chihuahua

M.C. Javier Martínez Nevarez
Director de la Facultad de Zootecnia

M.C. Josefina Domínguez Holguín
Secretaria Académica de la Facultad de Zootecnia

Ph.D. Claudio Arzola, M.C. Celia Holguín Licón
Catedraticos de la Materia de Bioquímica

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Tabla de contenido
INTRODUCCIÓN ....................................................................................1 ENCUADRE DEL SISTEMA DE PRÁCTICAS .............................................2 Introducción ..................................................................................... 2 Competencias a las que contribuye, y su ubicación dentro del mapa curricular vigente. ................................................................................4 Niveles de Desempeño ...................................................................... 4 Programa del sistema de prácticas ......................................................6 Tema ....................................................................................................6 Práctica o prácticas programadas ........................................................6 Contenido de cada Práctica en particular ............................................9 1.1. Difusión ...................................................................................... 9 1.2. Ósmosis y presión osmótica ...................................................... 13 1.3. Disociación electrolítica ........................................................... 15 1.4 Determinación de la acidez general de las disoluciones .......... 17 1.5 Determinación del pH ............................................................... 18 1.6 Preparación de las disoluciones amortiguadoras ..................... 21 2. Carbohidratos ........................................................................... 24 2.1. Reacciones de reconocimiento de los hidratos de carbono .... 26 2.2. Prueba con naftorresorcina...................................................... 26 2.3. Monosacáridos ......................................................................... 27 Aldohexosas .................................................................................... 28 2.4. Reacciones de reconocimiento le los hidratos de carbono reductores....................................................................................... 28 Prueba con el hidróxido cúprico (II), reacción de Trommer........ 28 2.5. Reacción con el licor de Fehling .............................................. 29 2.6. Reacción con las sales de bismuto.......................................... 30 2.7. Reacción con fenilhidrazina ..................................................... 31 2.8. Reacción de reconocimiento de la sacarosa .......................... 32 2.9. Reacciones de fermentación de los hidratos de carbono ..... 33 2.10. Reacciones coloreadas del almidón ....................................... 34 2.11 Hidrólisis acida escalonada del almidón ................................ 35

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..................8.......... 45 3....................... Los lípidos y su metabolismo............ 55 4...... Determinación de la glicerina en las grasas... 41 Los lípidos y sus metabolitos .....5 Determinación de la actividad de la dehidrogenasa de ácido succínico ................... 48 3..........................12.4.......................................4 Influencia de los activadores e inhibidores .... 44 3.........6................ Enzimas...................2 Influencia del pH sobre la actividad de las enzimas............ 62 iv ... Solubilidad de las grasas .....2........... 62 NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD E HIGIENE............1 La labilidad térmica de las enzimas ............................ 38 Reconocimiento del glicógeno en los tejidos animales ....... 37 2............................................................................. 47 3..... Determinación de la temperatura de fusión .................................... 52 4.3 Especificidad de las enzimas............................7............................9.............................. 42 Reacciones de reconocimiento de las grasas.... 43 3.... 59 BIBLIOGRAFIA ............. 46 3.. Determinación cuantitativa de la grasa en el hígado .......13 Reacción del glicógeno con el iodo............................................................................................... 49 4..1................................... Hidrólisis enzimática del almidón ................................................................................................................. Determinación del número acídico .......................... 43 3............. Determinación del número (índice) de saponificación ................................... 56 4.....5............. 42 Glicéridos (grasas) ........ 57 4............................................... 58 4..... Determinación del índice de iodo ..................................... Reacción de la grasa y el aceite con el Sudán III ....................2.................................................................... 61 ANEXOS ....... 44 3....................... 38 3............................................

C. pudiendo también ser usado por otros técnicos.INTRODUCCIÓN Este manual esta diseñado para estudiantes de zootecnia y veterinaria. Claudio Arzola Alvarez. Dr. Esta destinado a servir de complemento a la materia de bioquímica de la carrera de Ingeniero Zootecnista en Sistemas de Producción de la Facultad de Zootecnia de la Universidad de Chihuahua. mediante adaptaciones y modificaciones leves. ser usado en cualquier carrera afín. M. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 1 . pero podrá.

con miras a lograr una mayor productividad por cabeza con aplicación económica de insumos. aislamiento y separación de proteínas. y el uso de PCR en el campo forense. Junto con otras cosas. es necesario que los zootecnistas tengan una mayor especialización en relación a otras carreras que usan la bioquímica. Existen numerosos manuales de laboratorio para esta materia. Claudio Arzola Alvarez. Es sabido que el incremento de la producción pecuaria solo puede ser basado en prácticas de producción intensiva. uso de mayor mecanización y sobre todo. seguramente debes de tener en cuenta que la producción pecuaria en México tiene que ser competitiva y sustentable. Dr. manipulación de ADN recombinante. se enfatiza en la enseñanza y práctica de mediciones cuantitativas. mejor genética o selección. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 2 . La experiencia de muchos años en la docencia de la bioquímica en la Facultad de Zootecnia de la Universidad Autónoma de Chihuahua me ha demostrado que dicho enfoque no es el óptimo para un profesional de la zootecnia. es necesario que adquieras una proeficiencia en el uso de los conceptos bioquímicos que soportan los trabajos teórico-prácticos de esta disciplina. Por lo general. por las competencias que ésta promueva en los estudiantes. Por lo tanto. este manual se dirige a estudiantes de zootecnia y veterinaria. M. la introducción de tecnología moderna. los cuales tienen en su curricula la materia de bioquímica.C. Dado que en lo general el conocimiento de la bioquímica prepara al estudiante para tener competencias en el área de la alimentación animal. Lo anterior seguramente propiciará una educación de profesionistas que puedan resolver problemas. Generalmente esto solo puede ser logrado mediante el incremento del número de cabezas. También es necesario tener en cuenta que las unidades de producción cuentan con laboratorios cada vez mas equipados. pero por lo general están dirigidos a profesionales de la química.ENCUADRE DEL SISTEMA DE PRÁCTICAS Introducción Como estudiante de zootecnia. ensayo de reacciones enzimáticas.

El plan general del manual contempla la referencia a los fundamentos teóricos de la química y metabolismo de las sustancias en estudio. con el ánimo de que el estudiante tenga un margen amplio de independencia. y te da herramientas docentes.C. lo cual esta ausente en este tipo de publicaciones. Otra de las variantes es que contiene materiales relativos a físico-química y química coloidal. amen de prepararte para eventuales empleos en laboratorios comerciales o de certificación o trazabilidad de productos pecuarios. Se da un enfoque acerca de la finalidad del análisis. existe una tendencia a enmarcar dichos conocimientos solamente en aspectos solamente en aspectos tales como el análisis de alimentos. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Dado que el estudiante deberá presentar un protocolo y un informe para cada práctica. con lo que se pretende reforzar la enseñanza de la materia. Es por eso que el presente manual se ha diseñado con el propósito de fomentar no solo el conocimiento inherente al quehacer de la bioquímica. sino que también puede usarse en labores de investigación en asignaturas diferentes a la bioquímica. se describe el análisis en una manera lo más completa posible. Claudio Arzola Alvarez. determinación de tóxicos y conocimientos afines. dejando vacíos en campos emergentes de la bioquímica como lo es la biotecnología. Pagina 3 Sin embargo.Manual del laboratorio de Bioquimica Encuadre…. Dr. M. y facilitar el desarrollo de competencias en el mismo.

así como la utilización de herramientas computacionales.C.Competencias a las que contribuye. La realización de las prácticas en forma y tiempo presupone el dominio de diferentes habilidades y conocimientos.. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 4 . Las prácticas deberán ser realizadas en equipo. La elaboración de un protocolo y un informe por práctica requiere de disciplina y laboriosidad. M. lo que requiere de la participación armónica de los elementos. y su ubicación dentro del mapa curricular vigente. 2. Se debe tener habilidad para motivar y dirigir grupos de trabajo”. Niveles de Desempeño El conjunto de prácticas del presente manual te permitirá llegar a un desempeño de nivel 4 de acuerdo la clasificación de CONOCER. en las que se tiene que mostrar creatividad y recursos para conciliar intereses. a saber “Nivel 4. Dr. La capacidad de liderazgo deberá ser usada en forma óptima para realizar los diversos pasos de la práctica.Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa. Claudio Arzola Alvarez. 3. Las razones por las que asumimos que obtendrás un nivel de desempeño tan alto son: 1.

DE ORIGEN ANIMAL 3-3-0 SEGURIDAD E HIGIENE INDUSTRIAL 3-3-0 6 CREDITOS 726 TECNOLOGIA DE SUBPRODUCTOS DE ORIGEN ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 437 IMPACTO AMBIENTAL Y RESIDUOS 3-3-0 6 CREDITOS 627 6 CREDITOS 508 TECNOLOGÍA Y PROCESADO DE LA LECHE 3-3-0 6 CREDITOS 831 ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES I 3 CREDITOS ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES II 4 CREDITOS ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES III 4 CREDITOS ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES IV 4 CREDITOS SISTEMAS DE CONTROL SANITARIO 3-2-0 5 CREDITOS 512 DISEÑO HIGIENICO Y NORMATIVIDAD DE PLANTAS 2-3-0 5 CREDITOS 710 ANALISIS DE RIESGO 3-3-0 6 CREDITOS 725 .SOCIEDAD Y CULTURA 3-2-0 5 CREDITOS 203 UNIVERSIDAD Y CONOCIMIENTO 3-2-0 5 CREDITOS 210 SOCIOLOGIA Y DESARROLLO 2-2-0 4 CREDITOS SEMINARIO DE INVESTIGACION 3-2-0 5 CREDITOS 457 FORMACION DE EMPRENDEDORES 3-2-0 5 CREDITOS 303 FORMULACION Y EVALUACION DE PROYECTOS 2-2-0 4 CREDITOS 856 PRACTICAS PROFESIONALES 10 CREDITOS SERVICIO SOCIAL 30 CREDITOS ECONOMIA AGROPECUARIA 4-0-0 4CREDITOS 266 MATEMATICAS 3-2-0 5 CREDITOS 101 LENGUAJE Y COMUNICACIÓN 3-2-0 5 CREDITOS 209 CONTABILIDAD AGROPECUARIA 3-1-0 4 CREDITOS 332 TECNICAS DE MUESTREO 4-1-0 5 CREDITOS 502 ADMINISTRACIÓN DE EMPRESAS AGROPECUARIAS 3-2-0 5 CREDITOS 433 ADMINISTRACION ESTRATEGICA 3-1-0 4 CREDITOS 503 MERCADEO DE PRODUCTOS PECUARIOS 3-2-0 5 CREDITOS 633 DIRECCION DE AGRONEGOCIOS 3-3-0 6 CREDITOS 802 ESTADISTICA 3-0-1 4 CREDITOS 201 TECNOLOGIAS Y MANEJO DE LA INFORMACION 3-2-0 5 CREDITOS 136 ANATOMIA FUNCIONAL 4-0-2 6 CREDITOS 106 MANEJO DE BASE DE DATOS 0-4-0 4 CREDITOS 206 CONTROL DE CALIDAD 2-2-0 4 CREDITOS 607 REPRODUCCION ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 501 GENETICA GENERAL 3-1-0 4 CREDITOS 556 ADMINISTRACION DE RECURSOS HUMANOS 3-1-0 4 CREDITOS 702 MEJORAMIENTO ANIMAL 3-2-0 5 CREDITOS 431 SISTEMAS DE PRODUCCION OVI-CAPRINO 3-3-0 6 CREDITOS 614 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE CARNE I 3-3-0 6 CREDITOS 603 SISTEMAS DE PRODUCCION DE ESPECIES MENORES 3-3-0 6 CREDITOS 605 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE LECHE I 3-3-0 6 CREDITOS 631 SISTEMA DE PRODUCCION AVICOLA 3-3-0 6 CREDITOS 801 FISIOGIA DE LOS PROCESOS PRODUCTIVOS 4-0-2 6 CREDITOS 235 FISIOLOGIA DE LA REPRODUCCION 3-3-0 6 CREDITOS 356 INGENIERIA EN SISTEMAS DE PRODUCCION 3-3-0 6 CREDITOS 507 SISTEMA DE PRODUCCION DE PORCINOS 3-3-0 6 CREDITOS 805 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE CARNE II 3-3-0 6 CREDITOS 733 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE LECHE II 3-3-0 6 CREDITOS 701 INTRODUCCION A LOS SISTEMAS DE PRODUCCION 2-3-0 5 CREDITOS 104 MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA 4-2-0 6 CREDITOS 335 SANIDAD ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 465 SISTEMAS DE PRODUCCION EQUINA 3-1-0 4 CREDITOS 735 QUIMICA ORGANICA 4-0-2 6 CREDITOS 234 BIOQUIMICA 4-0-2 6 CREDITOS 334 ECOLOGIA VEGETAL 3-3-0 4 CREDITOS 225 NUTRICION ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 506 ALIMENTACION DE NO RUMIANTES 3-2-0 5 CREDITOS 544 ALIMENTACION DE RUMIANTES 3-2-0 5 CREDITOS 634 ECOLOGIA BASICA 3-1-0 4 CREDITOS 105 ECOLOGIA ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 305 TOPOGRAFIA 3-3-0 6 CREDITOS 461 MANEJO DE PASTIZALES 3-3-0 6 CREDITOS 434 HIDRAULICA APLICADA A LA PRODUCCION 3-2-0 5 CREDITOS 661 MANEJO DE FAUNA SILVESTRE 3-3-0 6 CREDITOS 834 CLIMA Y AMBIENTE 4-2-0 6 CREDITOS 223 BOTANICA SISTEMATICA 3-3-0 6 CREEDITOS 126 AGROSTOLOGIA 3-3-0 6 CREDITOS 302 CONSERVACION DE SUELO Y AGUA 3-3-0 6 CREDITOS 452 PERCEPCION REMOTA Y CARTOGRAFIA 3-3-0 6 CREDITOS 325 MANEJO DE RECURSOS FORRAJEROS 3-3-0 6 CREDITOS 652 TECNOLOGIA Y PROCESADO DE LA CARNE 3-3-0 6 CREDITOS 753 ANALISIS SENSORIAL 3-3-0 6 CREDITOS 709 VALORES DEL EJERCICIO PROFECIONAL 4-0-0 4 CREDITOS 806 ORIGEN Y CRECIMIENTO DE ANIMALES DOMESTICOS 3-3-0 6 CREDITOS 208 BIOQUIMICA DE LOS ALIMENTOS DE ORIGEN ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 308 MICROBIOLOGIA Y DETERIORO DE PRODUC.

1. Fermentación 2. Determinación de la acidez general 1. Reconocimiento de carbohidratos 2.3.6. y semana del semestre en que se realizará 1. M. Carbohidratos 2. Preparación de soluciones amortiguadoras 2. Reconocimiento de la sacarosa 2. Hidrólisis del almidón 2. Determinación del pH 1.1.4.5.6. Introducción y agua 1. Disociación electrolítica 1.3.Programa del sistema de prácticas Tema Práctica o prácticas programadas Ámbitos de desarrollo Duración en horas para cada práctica. Resistividad osmótica de eritrocitos 1.C. Ósmosis y presión osmótica 1. reconocimiento de glucógeno en tejidos Laboratorio Laboratorio 6 horas 1-3 semana 6 horas 4-6 semana Dr. Carbohidratos reductores 2.5. Claudio Arzola Alvarez. Difusión 1.4.2. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Página 6 .2.5.

Manual del laboratorio de Bioquimica 3. M.2. Lípidos 3. Reacciones del colesterol 4. Cuantificación de las grasas 3. Reconocimiento de grasas 3.2 Influencia del pH sobre la actividad de las enzimas 4.1.5.5 Determinación de la actividad de la dehidrogenasa de ácido succínico Prácticas Pagina 7 6 horas 7-9 semana 6 horas 10-11 semana Dr. Enzimas 4.4. Claudio Arzola Alvarez.4 Influencia de los activadores e inhibidores Determinación de la actividad de las enzimas Oxidorreductasas 4.C. Determinación de glicerina 3. Constantes de las grasas 3.3. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .1 La labilidad térmica de las enzimas 4.3 Especificidad de las enzimas 4.

Arzola.8 Serie de Prácticas 1 Química Física C. UACh 8 Febrero 2006 . Holguín Facultad de Zootecnia. C.

Puesto que el desarrollo de esta práctica se considera una actividad integradora. Claudio Arzola Alvarez. Al mismo tiempo. y relacionarlo con los diversos aspectos de la práctica profesional de la zootecnia. tendrás la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemático de un fenómeno complejo. M.Contenido de cada Práctica en particular 1. deberás de observar una conducta adecuada durante la misma. lo que te capacitará para planear adecuadamente dicho tipo de acciones. Al terminar. deberás entregar un informe del desarrollo y resultados de la práctica.1. el cual deberá ser individual. serás capaz de entender el concepto de difusión química. el protocolo deberá ser entregado en forma individual para su evaluación. Sin embargo. Dr.C. Este concepto es fundamental para entender los principios del movimiento de las moléculas en disolución. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos. Claudio Arzola Álvarez Número de alumnos por práctica: Tres Propósito de la práctica: Al terminar esta práctica. Difusión Facultad de Zootecnia. obtendrás menor calificación. con actitudes de respeto a tus compañeros y maestros. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 9 . La pulcritud y el orden será un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades. Universidad Autónoma de Chihuahua Responsable: Dr. con miras a que tu posterior desempeño profesional sea de alto nivel. lo que te permitirá tener una visión integradora y real de las características funcionales de las mezclas. puesto que la práctica se llevará a cabo en grupo. además de ser un instrumento de comunicación adecuada con colaboradores y colegas.

Vidrio soluble. Tal fenómeno obtuvo el nombre de difusión.V. La velocidad de difusión en este proceso es inversamente proporcional a las dimensiones sustancia disuelta. Tubos do vidrio con diámetro de 3 a 5 mm y longitud de 30 a 40 mm. al. la velocidad de difusión. Marcha de los trabajos. Vasos químicos de 250 ó 500 ml. cristal violeta o de otras sustancias coloreadas. CHECHETKIN et. Soportes blancos para los vasos. Reactivos. Soporte con sujetadores. aumenta. Luego ambos vasos. En dos vasos se vierten de 250 a 300 ml de agua en cada uno. Editorial MIR. Un cristal de sustancia coloreada se sumerge y se mantiene durante varios segundos en vidrio soluble. Reactivos: Cristales grandes de permanganato potásico. Instrumentos. Con el crecimiento de la temperatura de la disolución. Un vaso se coloca sobre hornillo eléctrico y se calienta hasta la ebullición. coloreando uniformemente la disolución del color correspondiente. colocados sobre soportes blancos. las partículas de la sustancia se difunden paulatinamente en el cilindro por todo el volumen del disolvente. luego se traslada a un cilindro con agua. Influencia de la temperatura sobre la velocidad de difusión La causa de la difusión es el movimiento térmico de las moléculas. 1 . Moscú. Marcha dé los trabajos. A medida que el vidrio soluble se disuelve. Cristales de permanganato potásico u otra sustancia coloreada. 1984.Manual del laboratorio de Bioquimica Química física Quimica Fisica… Pagina 10 Propiedades cinético-moleculares de las disoluciones diluidas Difusión1 Las disoluciones diluidas poseen capacidad de nivelar la concentración en todo su volumen. por lo común. Este proceso se realiza a través del movimiento térmico de las moléculas de sustancia disuelta y de disolvente. Hornillo eléctrico. Pinzas. Instrumentos: Cilindros de vidrio incoloro de 250 ml. A. bicromato potásico. que conduce a la penetración mutua de las moléculas. se introducen los tubos de de la molécula de la Adaptado de PRACTICAS DE BIOQUÍMICA DEL GANADO Y AVES DE CORRAL. Ella puede observarse si sumergimos cristales de sustancias coloreadas en un disolvente puro.

Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . muy Sistema de evaluación Al final de cada práctica. formando muy rápidamente una disolución uniformemente coloreada. lo que hace la difusión más pronunciada. El experimento sirve de prueba del movimiento térmico de las moléculas en que se basa la difusión e ilustra claramente que la velocidad de movimiento de las moléculas crece considerablemente con el aumento de la temperatura de disolución. Los tubos se sujetan en el soporte y a través de ellos se dejan caer simultáneamente en cada vaso (con agua caliente y fría) los cristales de KMnO4. M. En el vaso con agua caliente KMnO4 se disuelve. Claudio Arzola Alvarez. En el vaso con agua fría la difusión transcurre lentamente.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 11 vidrio de tal modo que éstos se sitúen en centro del vaso sin llegar al fondo en unos 10 ó 12 mm.C. lentes. se revisará tu desempeño mediante la revisión de los siguientes puntos: Actividad ¿Trajiste el protocolo de tu práctica en forma completa? ¿Utilizaste material de protección. bata? ¿Preparaste los reactivos en forma anticipada? ¿Limpiaste el equipo y material una vez finalizada la práctica? ¿Dispusiste de los desechos de cómo indica el manual? ¿Entregaste el reporte de la práctica pasada? Evaluación alumno Evaluación instructor Final Observaciones Dr. guantes de asbesto.

C. M. Método de asignación de calificaciones.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 12 Reporte escrito. el alumno deberá presentar cuando menos el 80% de las prácticas realizadas. El informe deberá ser elaborado en forma individual y presentado en forma impreso y digital. En cada práctica se deberá elaborar un reporte escrito. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Desempeño en el laboratorio Total 30% 30% 40% 100% Para aprobar la asignatura. el cual deberá entregarse a la fecha siguiente de la práctica. Claudio Arzola Alvarez. Dr. Protocolo 2. Reporte 3. Tu calificación será resultado de los siguientes factores: 1. Sin embargo. para el cálculo de la calificación final se tomará en cuenta el total de las prácticas.

Determinación de la resistividad osmótica de eritrocitos (ROE) Por resistividad osmótica de los eritrocitos so entiende la estabilidad de los eritrocitos contra la hemólisis bajo la acción de disoluciones hipotónicas de cloruro sódico. En la envoltura de los eritrocitos jóvenes prevalece la lecitina. Es conocido que en la formación de la envoltura de los eritrocitos participan. La elevación de la presión osmótica en los tejidos conduce a los edemas. si entre el disolvente puro y la disolución está puesto el así llamado tabique semipermeable.C. M. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . En su movimiento. los pulmones) están acompañadas por el aumento de la presión osmótica en la sangre. Claudio Arzola Alvarez. el Dr. Sólo en las condiciones de isotonía en la sangre. La presión osmótica juega un papel importante en los procesos fisiológicos de los organismos vegetales y animales. La magnitud de la presión osmótica se expresa en pascales (Pa) *). Sin embargo. Tal presión se denomina osmótica. entonces a través de este último pueden penetrar sólo las moléculas del disolvente. mientras que en la envoltura de los eritrocitos viejos. junto con otras sustancias. las moléculas del disolvente al encontrar un tabique semipermeable. Ósmosis y presión osmótica La difusión en las disoluciones puede ser directa o indirecta. lo atraviesan libremente. mientras que las moléculas del soluto encontrándose en estado de movimiento térmico.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 13 1. el corazón. de colodión) y lo atraviesan libremente. creando así cierta presión. la disminución de la presión osmótica en la sangre trae como resultado la hemólisis de los eritrocitos. Muchas enfermedades de los órganos internos (los riñones. la lecitina y el colesterol. Al crecer la presión osmótica en las aguas del suelo. se empeora considerablemente el suministro de agua a las plantas y éstas se secan rápidamente y perecen. chocan contra él.2. los líquidos intertisulares y las células pueden verificarse normalmente los procesos bioquímicos y fisiológicos. La presión osmótica se combina como la suma de los choques que le tocan a una superficie determinada del tabique semipermeable en la unidad de tiempo. En el caso de la difusión indirecta las partículas de soluto y del disolvente encuentran un tabique orgánico permeable (por ejemplo. dan contra el tabique semipermeable. La difusión unilateral del disolvente a través del tabique semipermeable se denomina osmosis.

Centrífuga. y aquellas donde ésta se realizó hasta el final. La hemólisis completa se Dr. Pipeta de 5 ml. Disolución de cloruro sódico al 1%.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 14 colesterol. Instrumentos. entonces la hemólisis de tal sangre empieza con concentraciones de las disoluciones de cloruro sódico relativamente bajas. Pipeta graduada de 1 ml. Por lo tanto los eritrocitos jóvenes son más propensos a la hemólisis que los viejos. la sangre contiene solamente eritrocitos jóvenes. numeradas de antemano se mezcla una disolución de cloruro sódico al 1% con agua según el esquema siguiente: (de Luego en cada probeta se agrega 0. Si los procesos de formación de la sangre transcurren en el organismo normalmente y los eritrocitos no se destruyen prematuramente. la hemólisis de tal sangre empieza y termina a concentraciones relativamente altas de cloruro sódico en la disolución 0.C. Reactivos. Al terminar la centrifugación. Las probetas se agitan y se dejan durante 10 min en el soporte. Cuando la formación de la sangre está perturbada y los eritrocitos jóvenes no se suministran a la sangre.p.7 a 0. es decir.m. se detectan las probetas en las cuales la hemólisis acaba de iniciarse. De indicador del inicio de la hemólisis sirve la coloración roja del líquido sobre el precipitado en presencia de un sedimento de eritrocitos no hemolizados. Claudio Arzola Alvarez.6%). entonces en la determinación de la ROE de la sangre de tal organismo el inicio y el final de la hemólisis son muy extendidos. Si los eritrocitos en el organismo por alguna razón se destruyen rápidamente. M. Se preparan previamente disoluciones de cloruro sódico de distintas concentraciones. Sangro tratada con citrato. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . En probetas de centrífuga. Marcha de los trabajos.2 ml de sangre. Probetas de centrífuga. luego se centrifugan durante un tiempo de 5 a 10 min a 15 mil r.

Claudio Arzola Alvarez. Disociación electrolítica La disociación electrolítica es la descomposición espontánea del electrolito en la disolución. Los iones que se forman en el proceso de disociación electrolítica aumentan la concentración general de las partículas del soluto y con esto elevan el efecto osmótico de las disoluciones.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 15 detecta en las probetas donde el líquido está coloreado de un color rojo en ausencia del sedimento de eritrocitos. presencia en la disolución de otros electrólitos con ion análogo. los iones comunican a las disoluciones una actividad química más alta y las dotan de una actividad biológica. En consecuencia. La disociación electrolítica se expresa de una manera más pronunciada en aquella disolución en que el disolvente posee la mayor constante dieléctrica. en partículas con cargas eléctricas (iones). temperatura. es decir. Por grado de disociación electrolítica se entiende la proporción entre las moléculas disociadas y no disociadas. Además. 1. el disolvente puede disminuir con la mayor fuerza la interacción entre las partículas de cargas opuestas (iones). las disoluciones de los Dr.3.C. El agua es tal disolvente. de la concentración de la disolución. es decir. en el agua la disociación electrolítica se verifica en el mayor grado. M. El grado de disociación depende de la naturaleza del disolvente y del soluto. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .

órganos y organismos enteros. como también para la preparación de los medios nutritivos en la práctica bacteriológica y para las inyecciones intravenosas. Disoluciones isotónicas que contienen sales de metales mono y bivalentes tomadas en una proporción determinada y que no poseen acción tóxica sobre el organismo obtuvieron el nombre de disoluciones equilibradas o fisiológicas. Como ejemplo de tales disoluciones puede servir la disolución de Ringer. M. Claudio Arzola Alvarez. La acción aislada de ciertos iones sobre los organismos unicelulares tiene comúnmente como resultado la muerte rápida de los últimos debido a su hiperexcitación o depresión excesiva. La mezcla de iones monovalentes y bivalentes tomados en una proporción estrictamente determinada no provoca desviaciones en el estado fisiológico de la célula. En tal mezcla tiene lugar la supresión mutua de la acción tóxica de los iones debido al antagonismo iónico.C. Así. causan su muerte.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 16 electrólitos al actuar sobre las células. Dr. los iones formados durante la disociación de las sales potásicas y sódicas causan una fuerte excitación de las células y su muerte posterior a consecuencia de la hiperexcitación. de Ringer—Lokk o de Ringer— Tirrode (tabla 2). Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . pueden elevar o disminuir su actividad fisiológica. los iones surgidos en la disociación de las sales de calcio y magnesio opresan las funciones de las células y en el caso de acción prolongada. Las disoluciones fisiológicas se utilizan en los experimentos con los cultivos de órganos y tejidos para el estudio de los procesos bioquímicos y fisiológicos en estos cultivos.

para el cálculo. tienen la misma acidez general. Pipetas de 5 y 10 ml. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . M. 0.C. se vierten en un matraz. Ella indica la cantidad sumaria de sustancias que reaccionan como ácidos presentes en la disolución. con una disolución de álcali hasta la aparición de una coloración rosa.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 17 1. Hidróxido sódico. se añaden 2 ó 3 gotas de fenolftaleína y la disolución se valora de una bureta graduada. 0. Marcha de los trabajos. Acido acético. Acido clorhídrico.1 N. Las disoluciones de cualesquiera ácidos. La valoración se repite y. Claudio Arzola Alvarez. Matraces de 50 ó 100 ml. Fenolftaleina.1 N.4 Determinación de la acidez general de las disoluciones La acidez general de una disolución se expresa por el número de equivalentes gramo de álcali consumidos para la valoración de un litro de disolución a investigar. Se miden exactamente 5 ó 10 ml de ácido clorhídrico. y no depende del grado de su disociación. Instrumentos.1 N. Bureta Reactivos. se toma el valor promedio Dr. equivalentes en concentración. 0.

el colorimétrico y potenciométrico. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . en equivalentes gramo.C. contenido del protoplasma celular y. Va es el volumen del ácido. Determinación potenciométrica del pH de las disoluciones El método potenciométrico de determinación del pH se basa en la medición de las fuerzas electromotrices de las pilas voltaicas. Valc es el volumen del álcali.5 Determinación del pH Por acidez activa se entiende la acidez condicionada por la concentración de iones hidrógeno libre en la disolución. en primer término. se cercioran de que la acidez general no depende de la naturaleza del ácido sino de su concentración en la disolución. donde Nalc es el número de equivalentes gramo de álcali. preparadas a partir de las disoluciones Dr. del líquido tisular. La acidez activa depende del grado de disociación de los ácidos presentes en la disolución u otras sustancias que reaccionan como ácidos y se caracteriza por la magnitud del pH. La acidez activa se determina por dos métodos (que pueden tener variaciones). una de ácido fuerte y otra de ácido débil. M. El cálculo de la acidez general se realiza según la fórmula x = Nalc*Valc/Va partiendo de la ecuación Nalc*Valc = Na*Va. De la misma manera se determina la acidez general de la disolución del ácido acético. Na es la cantidad de ácido 1.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 18 aritmético. Claudio Arzola Alvarez. En el curso de determinación de la acidez general de dos disoluciones con concentraciones equivalentes. Las diferencias entre los resultados de la valoración no deben sobrepasar 0. la acidez activa del medio en que se verifican unos u otros procesos bioquímicos. Para los procesos fisiológicos tiene importancia. el medio ambiente que los rodea.1 ml. es decir. de la sangre. La acidez general se determina corrientemente junto con la determinación de la acidez activa de una disolución. para los organismos protozoarios.

C. cuyo papel puede ser desempeñado por las mezclas que constan de: 1) ácidos débiles y sales muy disociables de estos ácidos. se denominan disoluciones amortiguadoras. de calomelano y de quinhidrona. En este sistema el platino desempeña el papel de conductor de electrones y de portador del hidrógeno. Disoluciones amortiguadoras Las disoluciones capaces de mantener firmemente la estabilidad de la concentración de los iones hidrógeno (pH) cuando sobre ellas actúan cantidades relativamente pequeñas de ácido o álcali fuertes. se disocia en la disolución suministrándola cationes hidrógeno. Se denomina pila voltaica el aparato en que la energía química se convierte en eléctrica. como también durante la dilución. entonces tal electrodo de hidrógeno se denomina normal. Una condición necesaria para los electrodos de la pila voltaica es la posibilidad de verificarse en su superficie el proceso de oxido-reducción.m. Esta capacidad las disoluciones la adquieren gracias a la presencia en su composición de sustancias amortiguadoras. El electrodo de hidrógeno consta de una placa de platino saturada de hidrógeno molecular y sumergida en una disolución que contiene iones de hidrogeno: (Pt) H2/h+. Una parte de las moléculas de hidrógeno que se encuentran en la placa de platino. Para la determinación de los potenciales de electrodo o la concentración de iones en la disolución se emplean los electrodos estándar con una magnitud conocida del potencial de electrodo.) la máxima diferencia de potenciales entre los electrodos de una pila voltaica en las condiciones reversibles de su trabajo. Electrodo de hidrógeno. ejemplo. Claudio Arzola Alvarez. M. Se denomina fuerza electromotriz (f.e. amortiguador de Dr.101 MPa. el amortiguador de . El método se caracteriza por una gran precisión en la determinación del pH de cualesquiera líquidos. En función de tales electrodos de referencia se usan los electrodos de hidrógeno. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua el acetato es ácido acético/ acetato sódico.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 19 a investigar y de electrodos especiales. El potencial de un electrodo normal de hidrógeno es igual a cero. Si la concentración de iones hidrógeno en la disolución es igual a 1 ión-g/1 y la presión del hidrógeno molecular es igual 0.

el amortiguador de borato es ácido bórico/borato sódico.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 20 bicarbonato es ácido careo/bicarbonato sódico. y a una proporción dada siempre invariable. De la fórmula citada se deduce que cambiando la proporción entre las concentraciones de los componentes de la mezcla amortiguadora. 2) bases débiles y sales muy disociables de estas bases. CbasP es la concentración de la base. Cada disolución amortiguadora se caracteriza por una capacidad amortiguadora determinada. El pH de las disoluciones amortiguadoras depende de la proporción en éstas entre ácido y sal. Csal es la concentración de la sal. por ejemplo. proteínas y algunas otras sustancias. deben ser agregados a 1 l de disolución amortiguadora para desplazar su pH en una unidad. Claudio Arzola Alvarez. La capacidad amortiguadora la poseen también los electrolitos anfóteros. K K es la constante de disociación electrolítica del ácido (base). De aquí que. ya que la proporción do los componentes que constituyen la mezcla amortiguadora se queda en este caso invariable. el amortiguador amónico es hidróxido amóni-oriiro amónico. cuando se preparan las disoluciones amortiguadoras se puede calcular teóricamente según fórmula ¡e (-'ácido es la concentración del ácido. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . los aminoácidos. grado de la Dr. es posible preparar disoluciones con diferentes pH dentro de los límites determinados por la constante de disociación de los ácidos (bases). La dilución do las disoluciones amortiguadoras no trae consigo la variación de su pH. Esta capacidad es la medida de la acción amortiguadora de la disolución y se esa por el número de equivalentes gramo de ácido o de base que. 3) sales mono y bisustituidas de ácidos polibásicos. La calidad amortiguadora de las disoluciones depende de su concentración absoluta y con la dilución disminuye de una manera directamente proporcional al dilución. M. ejemplo.C. por ejemplo el amortiguador de fosfato es NaH2PO4/Na2HPO4.

Pipetas graduadas 10 ml. Partiendo de estos hechos.6 Preparación de las disoluciones amortiguadoras Anteriormente fue indicado que el pll de las disolución amortiguadoras depende de la naturaleza de las sustanci químicas que constituyen la mezcla amortiguadora y de proporción entre estas sustancias en la disolución. fosfato sódico disustituido.1 acetato sódico.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 21 1. 2. ácido acético 0. disolución 0. Indicador universal. disolución 0.15 M de KH2P04 en las siguientes proporciones Dr. se determina el pH de las mezclas preparadas por el método potenciometrico. Reactivos. En caso de disponer de un potenciómetro. Marcha de los trabajos.15 N. Instrumentos.1 N. En seis tubos de ensayo previamente numerados se vierten las disoluciones de ácido acético y acetato sódico en las siguientes proporciones: Pipeta A las mezclas preparadas se añaden 2 gotas de indicador universal y por el carácter de la coloración se determina pH de cada mezcla.15 M. M. pero conocidos pH. cuentagotas. Se numeran ocho tubos de ensayo y se vierten en caí uno de ellos disoluciones 0. puede ser preparada una serie de disolución amortiguadoras con diferentes. Fosfato potásico monosustituido. 1. Claudio Arzola Alvarez.C. Soporte con tubos de ensayo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . disolución 0.

Claudio Arzola Alvarez. Se añade 1 ml de indicador en cada uno de los ocho tubos de ensayo que contienen 6 mi do mezclas amortiguadoras preparadas. En otros ocho tubos de ensayo numerados previamente se vierten G ml de disoluciones amortiguadoras respectivamente preparadas.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 22 El contenido de cada tubo de ensayo se mezcla cuidadosamente. M. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . utilizando para ello los patrones estándar con los mismos indicadores. para la determinación exacta del pH de las disoi liciones amortiguadoras preparadas. so determina el pH de cada disolución amortiguadora. partiendo del color que se desarrolla en el líquido. El contenido de los tubos de ensayo se mezcla cuidadosamente y. Las disoluciones que se quedan en los tubos de ensayo 1 y cS se utilizan para la determinación aproximada del p 11 con ayuda de mi indicador universal y a base de esta determinación se selecciona un indicador unicolor apropiado del grupo de nitrofenoles. Los resultados de la determinación del pH se anotan en la tabla indicada más arriba. Dr.C.

C. Holguín Facultad de Zootecnia.Serie de Prácticas 2 Carbohidratos C. UACh febrero 2006 . Arzola.

Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Página 24 . La pulcritud y el orden será un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades. siendo dicho protocolo además un instrumento de comunicación adecuada con colaboradores y colegas.C. tendrás la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemático de un grupo de sustancias que constituyen la mayor parte de la dieta de los rumiantes. Claudio Arzola Alvarez. Sin embargo. el protocolo deberá ser entregado en forma individual para su evaluación. con actitudes de respeto a tus compañeros y maestros. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos. serás capaz de entender la naturaleza de los carbohidratos y la importancia práctica del conocimiento de los mismos. puesto que la práctica se llevará a cabo en grupo. Universidad Autónoma de Chihuahua Responsable: Dr. Dr. incluyendo la determinación cualitativa y cuantitativa de algunos de los mas importantes.2. Al terminar. M. deberás de observar una conducta adecuada durante la misma. deberás entregar un informe del desarrollo y resultados de la práctica. con miras a que tu posterior desempeño profesional sea de alto nivel. Claudio Arzola Alvarez Número de alumnos por práctica: Tres Propósito de la práctica: Al terminar esta práctica. el cual deberá ser individual. Carbohidratos Facultad de Zootecnia. Al mismo tiempo. obtendrás menor calificación. Puesto que el desarrollo de esta práctica se considera una actividad integradora.

Los polisacáridos forman mediante la hidrólisis un gran número de moléculas de monosacáridos. en el caso de trisacáridos.V. sirven de material para la biosíntesis de los compuestos de otras clases y juegan un papel importante en la bioenergética de la célula. al. Los hidratos de carbono participan en la construcción de las estructuras del organismo vivo. se desintegran en monosacáridos. Los oligosacáridos y polisacáridos son hidratos de carbono complejos y al ser calentados con ácidos diluidos o hidrolizados por enzimas. Moscú. Ellos constituyen los productos finales de la síntesis fotoquímica en las plantas verdes. Editorial MIR. son ópticamente activos y giran el plano de la luz polarizada. hexosas. teniendo en sus moléculas átomos de carbono asimétricos. Ellos poseen una masa molecular muy elevada. se clasifican en triosas. los oligosacáridos se desintegran formando varias moléculas de monosacáridos (dos. para los tetrasacáridos. Entonces. etc. Adaptado de PRACTICAS DE BIOQUÍMICA DEL GANADO Y AVES DE CORRAL. La fórmula genérica de los monosacáridos es CnH2nOn. Los monosacáridos. 1984. Los hidratos de carbono entran en la composición de los ácidos nucleicos. oligosacáridos y polisacáridos. tres. en el caso de disacáridos. son insolubles en agua o forman disoluciones coloidales. Los hidratos de carbono comprenden un grupo amplio de compuestos naturales que se dividen en monosacáridos. sobre todo en el reino vegetal. según el número de átomos de carbono en la molécula. cuatro.). Por lo tanto. no aptos a tal acumulación de energía solar. pentosas. los glicolípidos y en algunas vitaminas y coenzimas. ellos poseen simultáneamente propiedades de aldehidos o catonas y de alcoholes polihidroxílicos. 2 . Los animales. las glicoproteínas. Los hidratos de carbono están muy difundidos en la naturaleza. etc. tetrosas. CHECHETKIN et.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 25 Carbohidratos2 Los hidratos de carbono pertenecen a los compuestos poli-funcionales que contienen grupos carbonilo (aldehilico o cetónico) y grupos hidroxilo alcohólicos. aprovechan las sustancias acumuladas por las plantas. heptosas. Todos los monosacáridos naturales. A.

Con tales hidratos de carbono están relacionadas las propiedades inmunoquímicas de los tejidos. 1 ó 2 ml de ácido sulfúrico concentrado sin mezclarlo con la capa acuosa. Prueba con naftorresorcina La reacción se basa en la capacidad de los hidratos de carbono de condensarse con los sistemas aromáticos. por la pared. disolución al 0. Así.2. Timol. que desempeña un papel importante en la protección de las células contra la penetración en ellas de microorganismos y virus. igual cantidad de disolución de timol. a.1.Naftol. En dos tubos de ensayo se vierten 2 ml de disolución de sacarosa en cada uno. En el primer tubo de ensayo se añaden de 4 a 6 gotas de disolución de α-náftol y en otro. Claudio Arzola Alvarez. 2. Reactivos. el ácido Dr. los hidratos de carbono participan en la formación de la capa exterior adyacente a la membrana. M.C. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Reacciones de reconocimiento de los hidratos de carbono Reacción con α-naftol Esta reacción es general para los hidratos de carbono y se aplica para detectar la presencia de éstos en los materiales biológicos. a partir de las Instrumentos. 5-hidro-ximetilfurfural hexosas. Soporte con tubos de ensayo. Marcha de los trabajos. En el contacto de las capas aparece una coloración violeta (en el caso de a-naftol) y roja (en el caso de timol). Acido sulfúrico concentrado. El quimismo de la reacción se reduce al hecho de que mediante la acción del ácido sulfúrico concentrado se forma furfural a partir de las pentosas. En ambos tubos de ensayo se vierten con cuidado. 2.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 26 Como componentes integrantes de las glicoproteínas. Sacarosa. formando sustancias coloreadas.2%. disolución al 1% en alcohol etílico. disolución al 1%.

M. forma derivados de dinaftil-metano o xantina: Instrumentos. entre las cuales se establece un equilibrio dinámico: Dr. Soporte con tubos de ensayo. Marcha de los trabajos. Glucosa. se le añade de 1 a 2 mi de éter o benceno y agita. Monosacáridos Los monosacáridos en disoluciones acuosas. La mezcla se calienta con cuidado y se hierve durante 1 min. La capa etérica (bencénica) se tiñe de color verde azulado. Luego se enfría. En un tubo de ensayo se vierten de 5 a 6 mi de disolución de glucosa.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 27 glucurónico al condensarse con naftorresorcina. disolución al 5%.C. disolución alcohólica al 1%. 2. Naftorresorcina. mientras que la xilosa y la arabinosa proporcionan una coloración azul oscura y los ácidos urónicos. Ácido clorhídrico concentrado. Claudio Arzola Alvarez. Éter. una coloración violeta. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Igual coloración dan la galactosa y la mañosa. se encuentran en diferentes formas tautoméricas. Reactivos. se añade 1 mi de disolución de naftorresorcina y 1 mi de ácido clorhídrico concentrado. Benceno.3.

Prueba con el hidróxido cúprico (II).4. hasta bismuto metálico.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 28 Aldohexosas En los organismos de los animales y del hombre la glucosa la galactosa se encuentran con mayor frecuencia. Reacciones de reconocimiento le los hidratos de carbono reductores Los hidratos de carbono cuya molécula contiene un grupo carbonilo libre. M. reacción de Trommer En disolución alcalina los mono y disacáridos reductores reducen el hidróxido cúprico (II) a óxido cuproso (I): Dr. Estos azúcares en medio alcalino tienen la capacidad de oxidarse. Claudio Arzola Alvarez. reduciendo a su vez las sales de óxido cúprico (valencia +2) a sales de óxido cuproso (valencia +1) a sales de plata. hasta plata metálica. las sales de óxido de bismuto. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . 2.C. se denominan reductores.

lo que oscurece la reacción principal y constituye un defecto del método: Cu (OH)2→ CuO + H2O. Al calentar esta disolución. Sulfato cúprico. El licor de fehling representa un compuesto complejo de cobre con tartrato de sodio y potasio de color azul. gota a gota. disolución al 1%. en la reacción de Trommer debe evitarse el exceso de sulfato cúprico. ya que la reacción entre el hidrato de carbono reductor y el hidróxido cúprico transcurre cuantitativamente. En su composición ion cobre en estado de oxidación « + 2» se encuentra forma de un compuesto complejo con Dr. Hidróxido sódico. se añade. Reacción con el licor de Fehling La reacción con el licor o reactivo de Fehling se basa en mismo principio que la reacción de Trommer. el precipitado de hidroxido cúprico (II) formado se disuelve. La capa superior del líquido se calienta hasta la ebullición. Soporte con tubos de ensayo. En un tubo de ensayo se vierten de 1 a 2 ml de disolución de glucosa. Claudio Arzola Alvarez. disolución al 10%. Glucosa. Disolución de glucosa no se añade. la disolución de sulfato cúprico. M. agitándolo. Marcha de los trabajos. Reactivos. Este último se encuentra en estado combinado y forma parte del reactivo de Fehling. El exceso del último durante el calentamiento pierde agua y se transforma en óxido cúprico negro. Se forma un precipitado de hidróxido cúprico de color azul claro.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 29 Instrumentos. La aparición de un precipitado amarillo (hidróxido cuproso (I)) y luego rojo (óxido cuproso) indica que la reacción de Trommer es positiva.5. coloreando el líquido de color azul claro. Por lo tanto. 2.C. un volumen igual de disolución de hidróxido sódico y. La diferencia consiste en que en las reacciones no se emplea hidróxido cúprico libre. En presencia de la glucosa. disolución al 1%. se forma un precipitado negro de óxido cúprico. En otro tubo de ensayo se mezclan 2 ó 3 ml de disolución de hidróxido sódico con varias gotas de disolución de sulfato cúprico. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .

el hidróxido de bismuto se reduce a bismuto metálico y el líquido adquiere color negro. Instrumentos. se mezcla bien y el volumen se lleva hasta la raya de enrase. incluso con exceso del reactivo dado. Reactivos.5H2O). En un matraz de 500 ml se disuelven 34. disolución al 1%.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 30 tartratos. M. En la composición del reactivo Nylander. forma hidrodróxido de bismuto.6. se añaden 62. Reactivo de Nylander (preparación: 2 g de nitrato dibásico de bismuto y 4 g de tartrato sodo-potásico (sal de Rochelle) se disuelven en 100 ml de sosa cáustica al 10% y se hierven hasta disolverse la mayor parte de la sal de bismuto. La capa superior del líquido se calienta hasta la ebullición. Soporte con tubos de ensayo. Este último se encuentra en estado combinado con el tartrato sodo-potásico.5 g de sosa caústica disuelta en 100 ml de agua destilada. un precipitado amarillo de hidróxido cuproso CuOH o bien precipitado rojo de óxido cuproso Cu2O. Marcha de los trabajos. Soporte con tubos de ensayo. en presencia de hidróxido sódico. 2. 173 g sal de Rochelle (tartrato sodico-potásico). entra nitrato dibásico de bismuto que. disolución al 1%. Disolución 2. Instrumentos. En un matraz de 500 ml se disuelven. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . al igual que en la reacción de Trommér. no se forma el precipitado negro de CuO y no oscurece la reacción con pequeñas cantidades de glucosa. primero en una pequeña cantidad de agua destilada y al disolverse los cristales. Reacción con las sales de bismuto Para detectar los azúcares reductores se emplean frecúentemente las sales de bismuto. Reactivos. Claudio Arzola Alvarez. en pequeña cantidad de agua destilada. El precipitado formado se enfría y se separa por filtración). Aparece. Reactivo de Fehling (preparación: disolución 1. análogo al de Fehling. Por eso durante el calentamiento.C. Al reaccionar con la glucosa. Glucosa.65 g de cristales no aireados de vitriolo azul (CuSO4. el volumen se lleva hasta la raya de enrase. Glucosa. Dr. A 1 ó 2 ml de disolución de glucosa se añade igual volumen de reactivo de Fehling y se agita. Antes de utilizarse las disoluciones 1 y 2 se mezclan en proporciones iguales).

oxidándola. 2.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 31 Marcha de los trabajos. Claudio Arzola Alvarez. lo que conduce a la formación de compuestos poco solubles en agua: osazonas. Reacción con fenilhidrazina Una particularidad importante de los monosacáridos consiste en su capacidad de entrar en reacción con la fenilhidrazina y formar fenilhidrazonas y osazonas. En la segunda etapa. La reacción de formación de osazonas transcurre en tres etapas. estas propiedades se utilizan para aislar los monosacáridos de la disolución. Al reaccionar los monosacáridos con la fenilhidrazina. Dr. en la primera etapa se forman fenilhidrazonas solubles en agua (reacción de sustitución).7. A 2 ml de disolución de glucosa se añade 1 ml de reactivo de Nylander y se hierve durante 2 ó 3 min. como también para distinguir unos azúcares de otros (fig. 10). solubilidad y actividad óptica. con la fenilhidrazonas solubles en agua (reacción de sustitución). Por eso. El líquido oscurece debido a la formación de un precipitado negro de bismuto metálico.C. M. de forma característica. transforma el grupo hidroxilo en grupo carbonilo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . que producen cristales de color amarillo. con la fenilhidrazona formada reacciona otra molécula de fenilhidrazina y. En la segunda etapa. La forma de los cristales de osazonas es variable y depende de la estructura de los monosacáridos. punto de fusión. de los cuales se forman las osazonas. La tercera molécula de fenilhidrazina entra en reacción de sustitución con el grupo carbonilo recién formado. Las osazonas de diferentes monosacáridos se distinguen por la forma de los cristales.

C.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 32 2. Claudio Arzola Alvarez. M.8. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Reacción de reconocimiento de la sacarosa La sacarosa es un disacárido no reductor y durante la hidrólisis (por ácido o enzimáticos) su molécula se descompone en glucosa y fructosa: Sacarosa Dr.

Hidróxido sódico. propiónica. Soporte con tubos de ensayo. La lactosa bajo la acción de las bacterias que la desdoblan. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . etc. Sacarosa. 2. M.9.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 33 La sacarosa da con el sulfato de cobalto en un medio alcalino un complejo de color violeta. la fermentación láctica. a la formación de productos tales como alcohol etílico. de las pentosas. etc. se añaden varias gotas de disolución de sulfato de cobalto. Reactivos. A la fermentación alcohólica se someten solamente las hexosas a diferencia de otros monosacáridos. La maltosa y la sacarosa se fermentan fácilmente con las levaduras. En la mayoría de los casos este proceso va acompañado con el desprendimiento de productos gaseosos (CO2. La fermentación metánica produce la timpanitis (distensión) en los rumiantes. disolución al 1%. pero no tienen la enzima lactasa.La fermentación conduce. En un tubo de ensayo se vierten de 2 a 3 ml de disolución de sacarosa. Sulfato de cobalto. en la industria alimenticia para la obtención de diferentes productos lácteos y en la ganadería en el proceso de ensiláje. disolución al 2%. Reacciones de fermentación de los hidratos de carbono La fermentación es un proceso complejo de descomposición de los hidratos de carbono bajo la acción de las enzimas producidas por diferentes microorganismos. láctica tienen lugar en el rumen de los rumiantes. Según los tipos de microorganismos y de los productos finales se distinguen varias formas de fermentación.C. Marcha de los trabajos. La fermentación alcohólica se utiliza en la industria con el fin de obtener alcohol etílico. puede someterse a la fermentación alcohólica. Instrumentos. En las levaduras están presentes las enzimas maltasa y sacarasa. mientras que la lactosa no se fermenta. Dr. H2. láctica y butírica. butírica. por ejemplo. al fin y al cabo. Esto se aprovecha para distinguir las hexosas de las pentosas. La fermentación acética. Al añadir exceso de hidróxido sódico (1 mi) el líquido adquiere un color violeta.). disolución al 10%. Claudio Arzola Alvarez. ácido láctico.

C. En el agua la amilopectina se hincha y produce un engrudo.10. Claudio Arzola Alvarez. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . un polisacárido de reserva. En el curso de la reacción se forma un complejo del polisacárido con iodo. con iodo es un proceso complejo. 2. los polisacáridos pueden considerarse como glicosídicos. La reacción de los polisacáridos. La coloración que aparece depende de la estructura de polisacárido. las cadenas de amilopectina son muy ramificadas y tienen en los puntos de ramificación enlaces glucosídicos 1-6. el almidón y el glicógeno son homopolisacáridos típicos. Almidón El almidón es el producto final de la síntesis fotoquímica que se verifica en las hojas verdes. Está compuesto de dos fracciones: la amilosa (de 10 a 20%) y la amilopectina (de 80 a 90%). Reacciones coloreadas del almidón Una reacción característica para reconocer el almidón es la aparición de una coloración azul al combinarse con la disolución de iodo en ioduro potásico. Para el organismo de los animales el almidón constituye una sustancia nutritiva importante. La celulosa. Ella tiene forma de molécula alargada lineal no ramificada. como en la amilosa. es soluble en agua. El almidón es una sustancia heterogénea. en particular del almidón. Cada resto del monosacárido á unido con los restos vecinos por enlaces glicosídicos.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 34 Polisacáridos Éstos son hidratos de carbono de elevado peso molecular e mediante la hidrólisis se desdoblan en gran número restos de monosacáridos. Las unidades de los inosacáridos que forman parte de la composición de la molécula del polisacárido pueden ser iguales (homopolisácárídos) ó diferentes (heteropolisacáridos). Por lo tanto. La amilopectina también está compuesta de un gran número de unidades de a-Dglucosa unidas. Las cadenas poliglicosídicas que forman las moléculas de los polisacáridos pueden ser no ramificadas celulosa) o ramificadas (glicógeno). Este proceso Dr. M. La amilosa incluye de 1000 a 6000 unidades de a-D-glocosa unidas por enlaces glucosídicos 1-4. por enlaces glucosídicos 1-4. Sin embargo.

El líquido se colorea de azul. 2 ó 3 ml de alcohol etílico. Hidróxido sódico. Para la reacción con el almidón la disolución obtenida sé diluye con agua destilada en proporción 1:5). Marcha de los trabajos. 2. Esto indica que la prueba con iodo debe realizarse sólo con disolución de almidón fría. Más abajo se da el esquema de la hidrólisis acida del almidón: Dr. disolución al 1 %. él se descompone con la formación de los fragmentos de diferente tamaño llamados dextrinas. Soporte con tubos de ensayo. disolución al 10% Alcohol etílico.C. Claudio Arzola Alvarez. esta reacción es sensible a la presencia de alcohol. Disolución de Lugol (preparación: en 100 ml de agua se disuelven 20 g de ioduro potásico y 10 g de iodo. M. a la segunda. Instrumentos. Debido a la inestabilidad del complejo de adsorción entre iodo y almidón. la amilopectina y el glicógeno. Reactivos. la tercera parte se calienta. tiene gran importancia también el proceso de adsorción de iodo sobre la superficie de las moléculas ramificadas. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . al calentamiento y a la acción de los álcalis con los cuales el iodo forma hipoioditos.11 Hidrólisis acida escalonada del almidón En el curso del calentamiento del almidón con ácido clorhídrico diluido. En el caso de los polisacáridos de cadenas ramificadas. En la tercera muestra la coloración vuelve a aparecer después del enfriamiento. En un tubo de ensayo se vierten 2 ó 3 ml de disolución de almidón y se añade 1 gota de disolución de Lugol. Éstas se distinguen entre sí en cuanto a la masa molecular y al carácter de la coloración que surge al tratarlas con la disolución de iodo. La coloración desaparece siempre. junto con el proceso de formación del complejo. El contenido del tubo de ensayó se divide en tres partes: a la primera parte se le añade 1 ó 2 ml de disolución de hidróxido sódico. Se ha demostrado la relación entre la longitud de las cadenas laterales y la coloración resultante de la reacción con yodo.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 35 es bien expresado en el caso de la amilosa. por ejemplo. Almidón.

Licor de Fehling. Hidróxido sódico. Para esto se extraen varias gotas de disolución una pipeta y se vierten en un tubo de ensayo que contenga 5 ó 6 ml de agua destilada. La coloración violeta azul aparecida indica presencia de las amilodextrinas en disolución. El tubo de ensayo con la disolución de almidón se hierve 1 ó 2 min mas y se repite la misma prueba con iodo.C. Ácido clorhídrico concentrado. Papel de tornasol. aparece una coloración rojiparda condicionada Dr. M.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 36 Instrumentos. Claudio Arzola Alvarez. Reactivos. Luego de 1 ó 2 min iniciada la ebullición se toma una muestra para la reacción con iodo. Soporte con tubos de ensayo. Se mezcla cuidadosamente y se hierve a fuego abierto. Disolución de Lugol. disolución al 10%. Marcha de los trabajos. Pipetas. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . disolución al 1%. Almidón. se añaden 1 ó 2 gotas de disolución de Lugol. En un tubo de ensayo se vierten de 3 a 5 ml de disolución de almidón y se añaden varias gotas de ácido clorhídrico concentrado.

termómetro. o rojo. maltodextrinas y maltosa. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Él se deposita casi en todos los órganos y tejidos. Reactivos. Soporte con tubos de ensayo. Pipetas. se mezclan cuidadosamente). Claudio Arzola Alvarez. El depósito principal Dr. la maltosa. luego se descompone por la maltasa hasta la glucosa. La reacción con iodo será negativa: el líquido adquiere un color amarillo a cuenta de la coloración de la disolución de Lugol. Baño maría con Glicógeno El glicógeno sirve de reserva principal de hidratos de rbono en el organismo de los animales. de óxido cuproso que indica la presencia en la disolución de productos de la hidrólisis que poseen propiedades reductoras.C. según un papel de tornasol. Se hierve nuevamente la disolución y pasados 2 ó 3 min se repiten las pruebas con iodo. Se forma un precipitado amarillo de hidróxido cuproso. la ausencia de coloración característica demuestra que la hidrólisis ha finalizado. M. se mezcla cuidadosamente y se pone en ei baño maría durante 10 ó 15 min a una temperatura de 37 a 40° C. produciendo como productos intermedios acrodextrinas. Marcha de los trabajos. Hidrólisis enzimática del almidón Bajo la influencia de la enzima amilasa el almidón se desdobla con la formación de un disacárido. El hidrolizado de almidón se neutraliza. La presencia de la glucosa se confirma por la reacción positiva con el licor de Fehling. Los demás reactivos son los mismos que en el experimento anterior.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 37 por la presencia de las en dextrinas. se añade licor de Fehling y se calienta. Instrumentos. El almidón se desintegra al final hasta la glucosa. con disolución de hidróxido sódico. En un tubo de ensayo se vierten 3 a 5 ml de disolución de almidón y se añaden 0. 2.12. Preparado de saliva (1 ó 2 ml de saliva se coloca en un vaso y se diluyen 5 veces con agua destilada. Se hacen repetidamente las pruebas con iodo.5 ó 1 ml de saliva.

C. Muestra pesada de hígado (de 1.m. La probeta se pone en el vaso con hielo donde se mantiene durante 20 ó 30 min. Se sedimenta el precipitado del glicógeno.5 a 2 g). disoluciones al 15% y al 60%. Reactivos. lo que depende de la estructura del glicógeno que difiere para distintas especies de animales y se determina según al grado de ramificación de la macromolécula. Ácido clorhídrico. Reactivos. el monosacárido la glucosa. La probeta se coloca en el baño maría hirviendo. Soporte con tubos de ensayo. Soporte con probetas de centrífuga y tubos de ensayo corrientes. Pipetas. Etanol. En una probeta centrífuga se ponen 1. Centrífuga. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . M. la disolución de glicógeno adquiere una coloración rojiparda de diferentes intensidades y matices. Marcha de los trabajos. el precipitado se disuelve en 2 ml de Dr.13 Reacción del glicógeno con el iodo Instrumentos.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 38 de glicógeno son el hígado (de 2 a 5%) y los músculos (de 0. Hidróxido sódico. Hidróxido potásico. luego el disacárido la maltosa y. Se extrae el líquido. El glicógeno es un polímero de a-D-glucosa en que las unidades de glucosa están unidas entre sí por los enlaces glicosídicos 1-4 y 1-6. finalmente. Baño María. Cloruro sódico cristalino. Reconocimiento del glicógeno en los tejidos animales Instrumentos. Disolución de Lugol. Varillas de vidrio. Al añadir iodo.p. las dextrinas. Claudio Arzola Alvarez. disolución al 2.5 a 2%) en los cuales esta acumulado hasta 60% de su contenido en el organismo. Licor de Fehling. Hidróxido sódico. disolución al 1%. que se encuentra encima del precipitado. disolución al 10%. 2.5 ó 2 g de hígado y se vierten 2 ml de disolución de hidróxido potásico al 60%. se enfría y se le añaden de 8 a 10 ml de etanol. Glicógeno. Éste se separa mediante la centrifugación durante 5 ó 10 min a 3000 r. por su constitución química el glicógeno se asemeja a la amilopectina. el contenido de la probeta se remueve frecuentemente con una varilla de vidrio.5%. Luego la probeta se quita del baño. disolución al 10%. en el curso de la hidrólisis el glicógeno da una serie de productos intermedios. Igual que el almidón. Vaso con hielo.

Para ello se añaden al precipitado 3 ó 4 ml de disolución de ácido clorhídrico y se hierve durante 15 ó 20 min en el baño de María. Se forma un precipitado rojo de óxido cuproso . Luego el precipitado del glicógeno se hidroliza y se demuestra la presencia de la glucosa en su composición. Acto seguido. se neutraliza con la disolución de hidróxido sódico. M.C. Claudio Arzola Alvarez. el contenido se enfría. se le añade igual volumen de licor de Fehling y la mezcla se hierve. Dr. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . se añaden 8 ó 10 ml de etanol y la mezcla obtenida se enfría. El precipitado formado del glicógeno se separa mediante la centrifugación.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 39 disolución de hidróxido potásico al 15%.

UACh febrero 2006 . C. Arzola.Serie de Prácticas 3 Lípidos C. Holguín Facultad de Zootecnia.

Al terminar. serás capaz de manejar con propiedad el análisis de los lípidos y sustancias afines. con miras a que tu posterior desempeño profesional sea de alto nivel. Dr. tendrás la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemático del grupo de sustancias alimenticias que contribuyen significativamente con la aportación energética de las dietas de los animales con lo que lograrás una eficiente comunicación con colaboradores y colegas. Claudio Arzola Alvarez Número de alumnos por práctica: Tres Propósito de la práctica: Al terminar esta práctica. Los lípidos y su metabolismo Facultad de Zootecnia. Al mismo tiempo. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos. el protocolo deberá ser entregado en forma individual para su evaluación.C. Sin embargo. obtendrás menor calificación. puesto que la práctica se llevará a cabo en grupo. Claudio Arzola Alvarez. deberás entregar un informe del desarrollo y resultados de la práctica.3. Puesto que el desarrollo de esta práctica se considera una actividad integradora. el cual deberá ser individual. Universidad Autónoma de Chihuahua Responsable: Dr. La pulcritud y el orden será un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades. deberás de observar una conducta adecuada durante la misma. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 41 . Podras constatar algunos fenómenos de importancia en cuanto a la respuesta física de los lípidos y relacionar esta con fenómenos de producción agropecuaria. con actitudes de respeto a tus compañeros y maestros. M.

Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 42 Los lípidos y sus metabolitos Glicéridos (grasas)3 Se denomina lípidos un grupo numeroso de sustancias constituidas como los esteres y caracterizadas por su solubilidad en disolventes orgánicos y por su insolubilidad en agua. Moscú. disolvente para las sustancias orgánicas y como precursores de otros componentes de la célula (vitaminas del grupo D.V. como también una parte considerable de los procesos de metabolismo intermedio. los hidratos de carbono y otras sustancias. Los lípidos desempeñan un papel muy importante en calidad de componentes estructurales de las membranas celulares. En el organismo de los animales casi todos los lípidos se encuentran en complejo con las proteínas. al. Las grasas son esteres de un alcohol trivalente (la glicerina y los restos de ácidos grasos de cadena larga que tienen la estructura general siguiente: Adaptado de PRACTICAS DE BIOQUÍMICA DEL GANADO Y AVES DE CORRAL. Así. las ceras. 3 . Editorial MIR. los esteróles (estearinas). CHECHETKIN et. A los complejos se les atribuye una gran significación en el cumplimiento de una serie de funciones importantes. que son elementos estructurales de las células. fosfolípidos y glicolípidos (cerebrosidos. A. como fuente de energía. ácidos biliares y hormonas de naturaleza de esteroides). 1984. A ellos pertenecen los glicéridos (grasas). en los cuales se verifican los procesos de oxidación libre y conjugada con la fosforilación. gangliósidos). son ricas en lipoproteínas las mitocondrias.

participan en la termorregulación del organismo. M. El colorante Sudan III se aplica en las investigaciones histológicas para localizar las grasas en los tejidos. carotinoides y pigmentos.C. etc. y de otras sustancias biológicamente activas. favorecen la asimilación de vitaminas liposolubles A. ellas sirven de componentes estructurales del protoplasma celular (grasa estructural). Aceite vegetal. oleico. los aceites. Sudán III. como también para la biosíntesis de las prostaglandinas que constituyen un gran grupo de hormonas de gran actividad biológica. proteínas. vitaminas.Manual del laboratorio de Bioquimica En la composición de la molécula Lípidos… de una grasa Pagina 43 natural entran. son necesarios parí regulación de los procesos de oxidación-redución en las células. protegen los órganos. la manteca de cerdo. se añade una gota de Sudán III y se mezcla. linoleico. esteárico. trioleato). Como regla. Reacciones de reconocimiento de las grasas. disolución al 0. E y K. Dr.2% (preparación: en 200 mg de Sudán III se añaden 100 ml de alcohol etílico al 70% calentado en un baño maría. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . 3. Vidrio de reloj o placas de vidrio. Sobre el vidrio de reloj se aplica una gota de aceite. nervios y vasos los deterioros mecánicos. A más. Se observa la aparición de una coloración naranja de la mezcla. linolénico. y sólo un 2 ó 3% de ellos son glicéridos simples (tripalmitato.) constituyen una mezcla compleja de varios glicéridos. Claudio Arzola Alvarez. triestearato. todas las grasas naturales (el sebo de res. Los ácidos grasos no saturados presentes en las grasas linoleico. se mezcla y se deja en reposo durante 24 h por lo menos). Las grasas tienen gran importancia para el organismo como una de las fuentes de energía (grasa de reserva). Reacción de la grasa y el aceite con el Sudán III Instrumentos. corrientemente. Marcha de los trabajos. araquidónico. En el organismo de los animales los glicéridos son en su mayoría mixtos. Reactivos. etc. D. ácidos grasos libres. los restos de ácidos grasos saturados y no saturados (palmítico.1.

acre intenso. La mezcla en los tubos de ensayo se calienta con cuidado pero fuertemente. Grasa o aceite vegetal. de hidrosulfatos de potasio o sodio se desprenden fácilmente de la glicerina dos moléculas de agua. M. Soporte con tubos de ensayo. La reacción de formación de la acroleína se hace con el propósito de reconocer la glicerina libre o ligada en la molécula de grasa. Mechero de gas o infer-nilla.4. Alcohol etílico. Cera. Instrumentos. en el Dr. La formación de la acroleina en el tubo de ensayo con la grasa se reconoce por la aparición de un olor característico. Benceno. en particular.5 g de aceite. inositolfosfolípidos y esfingolípidos) dan reacción de acroleína negativa. que es un aldehido no saturado. Hidrosulfato potásico (sódico). Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Marcha de los trabajos.C. Claudio Arzola Alvarez. Determinación de la glicerina en las grasas En el curso del calentamiento de una grasa en presencia de agentes deshidratantes. esterinas. mezcla en los tubos de ensayo se agita enérgicamente.3 a 0. cristalino. en el otro se pone de 0. Solubilidad de las grasas El trabajo se realiza con el aceite vegetal y diferentes solventes. En ambos tubos se añade aproximadamente 1 g de hidrosulfato potásico. Cloroformo Marcha de tos trabajos. Reactivos.2. En el primer tubo añaden 2 ml de agua.Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 44 3. Se observan los siguientes cambios: en el primer tubo se forma una emulsión inestable que se separa rápidamente. Énel otro tubo de sayo no se forma acroleína. En un tubo de ensayo se vierte ó 10 gotas de aceite. Los lípidos que no contienen glicerina (ceras. y ella se convierte en acroleína. en el segundo 2 ml de alcohol. en el tercero 2 ml de benceno y en el cuarto 2 ml de cloroformo. Aceito de girasol. Ractivos. Soporte con tubos de ensayo. El experimento debe realísarze en la campana de humos. 3. En cuatro tubos de ensayo se vierten de 5 a 7 gotas de aceite dé girasol. Instrumentos.

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segundo una disolución turbia, que indica la mala solubilidad del aceite en alcohol; en el tercero y el cuarto tubos de ensayo se forman disoluciones transparentes debido a una buena solubilidad del aceite en benceno y cloroformo.

3.5. Determinación de la temperatura de fusión
La temperatura de fusión de una grasa es uno de los indicadores que permite, en cierta medida, juzgar sobre su asimilación. Las grasas que funden a baja temperatura se emulsifican más fácilmente y, en consecuencia, se asimilan con mayor facilidad. La temperatura de fusión de los glicéridos es condicionada por sus ácidos grasos constituyentes. Como regla, el punto de fusión de la grasa es tanto más bajo cuanto más alto es el contenido de los ácidos de cadena corta o no saturados. A la temperatura ambiente las grasas de origen vegetal son líquidos, puesto que en su composición la cantidad de ácidos grasos no saturados alcanza un 95 ó 97%. En la composición de las grasas sólidas poco fusibles de origen animal prevalecen los ácidos grasos de cadenas de carbono largas. Las grasas naturales no poseen un punto de fusión determinado, ya que no son sustancias químicas individuales, sino mezcla de diferentes glicéridos, ácidos grasos libres, pigmentos, vitaminas y otras sustancias. La temperatura de fusión de las grasas depende de la especie del animal y oscila dentro de límites siguientes en °C: ovejas 49—54, venados 48—52, ganado vacuno 48—50, cabras 46—48, camellos 36-48, cerdos37— 45, caballos28—32,perros23—27, conejos 22- 25. Instrumentos. Capilar de vidrio de 1.5 ó 2 mm en diámetro. Termómetro. Tubo de ensayo. Vaso químico. Lupa. Reactivos. Grasa de origen animal (fundida y filtrada). Marcha de los trabajos. El capilar limpio y seco se llena de grasa a una altura de unos 2 cm y se mantiene durante 1 h sobre hielo o en agua corriente fría. Terminado el enfriamiento, la parte del capilar llenada de grasa se corta, dejando la columna de grasa de 0.5 cm de altura. El capilar se ajusta mediante un anillo de goma en la parte inferior del termómetro de tal manera que su punta llena de grasa Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua

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sea dirigida hacia arriba y su otro extremo libre de grasa, hacia abajo. El termómetro con capilar se mete en el tubo de ensayo donde se ajusta con ayuda de un tapón. El tubo de ensayo se sumerge en el vaso con agua y se sujeta en la patilla del soporte en posición vertical. El nivel de agua en el vaso debe ser más alto que el término superior del capilar. El agua se calienta poco a poco, removiéndola frecuentemente, y a través de la lupa. Se observa el aumento de la temperatura y el estado columna de grasa en los capilares. La indicación del termómetro en el momento cuando la grasa empiece a fluir por el capilar y en la parte superior de este último se forme un espació libre, se anota como la temperatura de fusión. Entre el inicio y el final de la transición de la grasa desde el estado sólido al líquido transcurre cierto tiempo. Por lo tanto, para evitar errores, la temperatura de fusión grasa se determina por lo menos dos veces, y el resultado se calcula como promedio.

3.6. Determinación del número acídico
El número acídico caracteriza la presencia de ácidos grasos libres en la grasa. El número acídico se expresa en cantidad de miligramos de hidróxido potásico necesarios para neutralizar los ácidos grasos libres en 1 g de grasa. Este índice es uno de los indicadores más importantes la calidad de la grasa. El número acídico de la grasa fresca de distintos tipos no sobrepasa, comúnmente, una magnitud de 1.2 a 3.5. En el curso de almacenaje de la grasa tiene lugar la hidrólisis de los glicéridos y acumulación de los ácidos grasos libres. Una elevada acidez de una grasa indica la pérdida de su calidad. Instrumentos. Matraz Erlenmeyer. Bureta. Pipetas de 1 y 10 ml. Reactivos. Aceite de girasol. Mezcla neutralizada de alcohol con éter (mezcla de alcohol con éter 1:2 que se neutraliza con disolución 0.1 N de hidróxido potásico según la fenolftaleina). Hidróxido potásico, disolución 0.1 N. Fenolftaleina, disolución 0.1%. Marcha de los trabajos. En el matraz Erlenmeyer se vierte 1 g de aceite de girasol, se añaden 10 ml de mezcla de alcohol con éter, el contenido se agita cuidadosamente. Se agregan 2 ó 3 gotas de Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua

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fenolftaleína, y la disolución se valora rápidamente con la disolución de hidróxido potásico 0,1 N, con agitación, hasta la aparición de una coloración rosa que persista más de 1 min. El número acídico se calcula según la fórmula

donde x es el número acídico, en mg; a es el volumen de disolución de hidróxido potásico de 0.1 N consumido para la valoración de la prueba a investigar, en ml; 5.6 es la cantidad de hidróxido potásico (mg) que se contiene en 1 ml de disolución dé hidróxido potásico 0.1 N; K es el coeficiente de corrección dé la disolución de 0.1 N de hidróxido potásico; c es la muestra pesada de aceite, en g.

3.7. Determinación del índice de iodo
Se denomina índice de iodo la cantidad de gramos de iodo que pueden combinarse con 100 g de grasa. Este número permite evaluar el grado de insaturación de la grasa provocado por la presencia de glicéridos con ácidos grasos de dobles enlaces, la capacidad de la grasa para la oxidación, para la reducción y otras reacciones. Cuanto mayor es el contenido de ácidos grasos no saturados en la grasa, tanto mayor es su índice de iodo. El índice de iodo dé algunas grasas y aceites oscila dentro de los siguientes límites: de res, 27—47;de carnero,31—46; de cerdo, 46—66;de perro, 56—67; aceite de girasol, 129—136; aceite de cáñamo, 145—162; aceite de linaza, 175—201. El principio del método. La determinación del índice de iodo se basa en la reacción de adición del iodo al lugar de ruptura de los dobles enlaces en las moléculas de ácidos grasos, que se verifica cuantitativamente según el esquema:

El iodo que no ha reaccionado se valora con tiosulfato. Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua

y luego al añadir 1 ml de disolución de almidón al 1% desaparición de la coloración azul.1 N.Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 48 Instrumentos. disolución al 1%. y se añaden de la bureta 5 ml de cloroformo en cada uno.1 N en alcohol (la preparación: 12. 190—200. disolución 0.1 N consumido en la valoración de la prueba experimental.C. Matraces Erlenmeyer de 50 ml con tapones. 3. Tiosulfato sódico.1 N de iodo en alcohol.g) se calcula según la fórmula: donde b es el volumen de disolución de tiosulfato sódico 0.1 N de tiosulfato sódico. Marcha de los trabajos.1 N. aceite de linaza. 212—247. a es el volumen de la disolución de tiosulfato sódico 0. Claudio Arzola Alvarez. Al cabo de 5 min las pruebas se evalúan. El índice de iodo (x. agitando permanentemente. 0. g. 100 es el coeficiente de recuento para los 100 g de grasa. los matraces se cierran con tapones. Aceite de girasol. manteca de cerdo.8. El número de saponificación de algunos aceite de buena calidad tiene los valores siguientes: grasa de res. 200. manteca de vaca. en ml.1 mi de agua. Dr. grasa de carnero. Pipeta de 10 ml. 192—198. con disolución de tiosulfato sódico 0.1 N. K es el coeficiente de corrección del título de la disolución 0. Determinación del número (índice) de saponificación Número de saponificación se denomina el núnero de miligramos de hidróxido potásico que se necesitan para neutralizar todos los ácidos grasos (libres y ligados en forma de glicéridos) que se contienen en 1 g de grasa. Iodo.01269 es la cantidad de iodo (g) equivalente a 1 ml de disolución de tiosulfato sódico 0. consumido en la valoración de lá prueba de control en ml. Reactivos. c es la muestra pesada de grasa. en los matraces se añaden con la pipeta 10 ml (¡exactamente!) de disolución 0. Cloroformo. el contenido se remueve agitándolo. En un matraz (prueba experimental) se pone 0. y los se dejan en la oscuridad. Bureta. Cuando la muestra de aceite sea disuelta. 187-195. primero hasta que la coloración se ponga amarilla clara.1 N. disolución 0. M.1 g de aceite de girasol (se pesa en una balanza analítica). Almidón.691 g de iodo recién sublimado se disuelven en 1 l de alcohol etílico al 96%). en el otro (prueba de control) 0. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .

disolución al 0. Pesafiltros. Estufa. al cabo de 24 h se filtra). Los cartuchitos con el material a investigar se pesan y se meten en el extractor del aparato Soxhlet. M. 11).9. Dr. Se toman muestras pesadas de hígado y músculos (hasta 3 g de cada tejido). se desmenuzan con tijeras sobre un vidrio de reloj. disolución 0. Bureta. Hidróxido potásico alcohólica 0. 3. Tijeras curvas. Instrumentos. Todas las partes del aparato se unen herméticamente. Claudio Arzola Alvarez. a 106 °C. Matraces Erlenmeyer refrigerantes de reflujo. Determinación cuantitativa de la grasa en el hígado y los músculos El contenido de la grasa se determina mediante la extracción de una muestra pesada de los tejidos a investigar en el aparato Soxhlet. Mortero de porcelans Vidrios de reloj. Cartuchitos para extracción hechos d papel de filtro denso desgrasado (los cartuchitos se secan. Baño de maría. Pipetas graduadas de 1 ml. y el matraz se calienta en el baño de María. Balanza analítica. Se deja pasar el agua por el refrigerante. Marcha de los trabajos. se pesa y se guardan en el desecador). El método se basa en la determinación de la masa de los tejidos antes y después de la extracción de las grasas con disolvente. extractor (2) y refrigerante de reflujo (3) unidos ajuste damente mediante conexiones esmeriladas (fig. Aceite de girasol. Éter dietílico. Las muestras secadas se trituran en el mortero y se trasladan en cartuchitos de papel de filtro. éste se coloca en el baño maría. Fenolftaleína. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Ácido clorhídrico. El aparato consiste de tres partes: matra (7). A través de la boca superior del refrigerante el extractor y el matraz se llenan de éter en una cantidad igual a dos volúmenes del extractor. se ponen en los pesafiltros se secan en el armario secador a una temperatura de 102 106 °C hasta una masa constante. Principio del método.C. Reactivos. Baño maría.5 N (la preparación: 30 g de hidróxido de potasio quimicamente puro se disuelven en 30 ml de agua destilada. Aparato Soxhlet.Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 49 Instrumentos. Hígado y músculos frescos.5 N.1%. y el volumen se lleva a 1l con alcohol etílico al 96%. Reactivos.

en el armario secador a una tempetarura de 102 a 106° C durante 4 ó 5 h hasta la masa constante. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 50 Durante la extracción se observa que la cantidad del disolvente en el matraz no sobrepase 2/3 de su capacidad y que Aparato Soxhlet el disolvente que se condensa no suba demasiado en el refrigerante. M. Los cartuchitos se pesan en la balanza analítica y a partir de la diferencia entre la masa del cartuchito antes y después de la extracción se determina la cantidad de la grasa en las muestras pesadas. La plenitud de la extracción de la grasa desde los tejidos se establece por la ausencia de manchas grasosas sobré papel de filtro tras la evaporación de varias gotas de éter tomado del extractor. Después de la extracción los cartuchitos con el material se quitan del aparto Soxhlet y se secan primero en la campana de humos y. La extracción se prolonga durante 5 ó 6 h.C. Claudio Arzola Alvarez. La cantidad de la grasa x (en se calcula según la fórmula %) Dr. al vaporizarse el éter.

Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . en g.C. Dr. b es la masa del cartuchito con la muestra después de la extracción. en g. c es la muestra pesada del material a investigar. Claudio Arzola Alvarez.Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 51 donde a es la masa del cartuchito con la muestra antes de la extracción. en g. M. 100 es el coeficiente porcentual de recuento.

Serie de Prácticas 5 Enzimas C. Arzola. UACh febrero 2006 . Holguín Facultad de Zootecnia. C.

Puesto que el desarrollo de esta práctica se considera una actividad integradora. Sin embargo. Editorial MIR. 4 . CHECHETKIN et. A. con miras a que tu posterior desempeño profesional sea de alto nivel. Claudio Arzola Alvarez Número de alumnos por práctica: Tres Propósito de la práctica: Al terminar esta práctica. Adaptado de PRACTICAS DE BIOQUÍMICA DEL GANADO Y AVES DE CORRAL. Podrás constatar algunos fenómenos de importancia en cuanto a la respuesta física de las enzimas y relacionar esta con fenómenos de producción agropecuaria. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos. serás capaz de manejar con propiedad las enzimas. 1984.V. al. puesto que la práctica se llevará a cabo en grupo.4. el cual deberá ser individual. obtendrás menor calificación. con lo que lograrás una eficiente comunicación con colaboradores y colegas. La pulcritud y el orden será un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades. el protocolo deberá ser entregado en forma individual para su evaluación. Al terminar. Universidad Autónoma de Chihuahua Responsable: Dr. deberás de observar una conducta adecuada durante la misma. con actitudes de respeto a tus compañeros y maestros. deberás entregar un informe del desarrollo y resultados de la práctica. Moscú. Enzimas4 Facultad de Zootecnia. tendrás la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemático del grupo de moléculas mas represenativas de la bioquímica. Al mismo tiempo.

los catalizadores biológicos poseen una eficiencia mayor en la disminución de la energía de activación y. Propiedades generales de las enzimas Las particularidades características de las enzimas. Sin embargo. Claudio Arzola Alvarez. Con participación de las enzimas se verifican numerosos procesos químicos. presión baja y unos valores de pH cercanos al neutro. desempeñan su función a una temperatura moderada. su especificidad.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 54 Se llaman enzimas las proteínas específicas que poseen función catalítica. Ellos consisten en una combinación única do los restos de aminoácidos situados en la cadena polipéptida a larga distancia uno del otro. Semejantemente a los catalizadores inorgánicos. las enzimas son capaces de regular efectivamente los procesos de vitalidad. el conjunto de los cuales constituye la esencia del metabolismo. Dr. Al mismo tiempo. las enzimas son sensibles a las variaciones de las condiciones del medio en que están funcionando y tienen una serie de particularidades relacionadas a su naturaleza proteínica. son condicionadas por la naturaleza proteínica de los catalizadores biológicos. las enzimas aumentan la velocidad de las reacciones químicas a cuenta de la disminución de la energía de activación. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Influyendo en la velocidad de las reacciones metabólicas. La actividad catalítica de la enzima está relacionada con a presencia en su molécula de unas regiones especiales responsables de la fijación y la activación del sustrato: el centro de sustrato y el centro activo. sensibilidad al cambio de la temperatura y el pH del medio así como también a la presencia de los activadores e inhibidores. como regla general. M.C.

Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 55 Acercándose. Cloruro sódico.3%. Soporte con tubos de ensayo.1 La labilidad térmica de las enzimas La temperatura del medio influye mucho en la actividad de las enzimas.3%. En cuanto a las enzimas. Claudio Arzola Alvarez. La inactivación de la enzima con aumento de la temperatura del medio es irreversible. que son proteínas conjugadas. Con cierto aumento de la temperatura del medio ocurre aceleración de la reacción a consecuencia de la activación de las moléculas de sustrato. la colectan en un vasito). incluso un aumento pequeño de la temperatura conduce al debilitamiento de los enlaces que mantienen la conformación de la molécula de enzima. La saliva en el tubo de ensayo 1 se hierve durante 1 min. 4. necesaria para la manifestación de su actividad catalítica. al tomar en la boca de 20 a 25 ml de agua. Reactivos. Al bajar la temperatura la enzima disminuye su actividad también. Saliva diluida (se enjuaga la boca con agua destilada y luego. Sin embargo. gradualmente. En tres tubos de ensayo se vierten de 2 a 3 ml de saliva diluida (amilasa) en cada uno. la desnaturalización de la enzima que se acelera bruscamente a la temperatura que sobrepase 50°C. M. La temperatura óptima para la acción de enzimas es Ja temperatura de cuerpo de los animales que oscila en el intervalo de 36 a 41 °C. Empieza. ellos dan lugar a un centro catalítico. Cualquier influencia exterior que altera la conformación nativa de la molécula proteínica conduce a la inactivación de la enzima. Vaso con hielo. Almidón. Principio del método. en la formación del centro catalítico participan también los componentes no proteínicos directamente afines a la región activa del glóbulo. Instrumentos. disolución al 1% en disolución do cloruro sódico al 0. Termostato (37 °C). Infernilla. el enfriamiento no causa desnaturalización de la enzima y por lo tanto su inactivación puede ser reversible. Se investiga la influencia del camino de Ja temperatura del medio exterior sobre la actividad de la enzima amilasa de la saliva. Marcha de los trabajos. al formarse una estructura terciaria de la molécula. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Vaso do 50 ml. disolución al 0. A la vez. El mecanismo de este proceso no está claro.C. Reactivo do Lugol. Luego en todos los tubos de ensayo se añaden 4 ml de disolución Dr.

Forsfato sódico disustituido. Al transcurrir este tiempo. participan en el mantenimiento de la conformación de la molécula proteínica necesaria para la formación de los centros catalíticos de enzima y favorecen también a su ligación con el sustrato.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 56 de almidón. M. Reactivos. Disoluciones amortiguadoras (pH 5.1 M (B). El tubo de ensayo 3 se sumerge en hielo y se tiene durante 10 min. Los tubos de ensayo 1 y 2 si colocan en el termostato (37 DC). y la enzima se inactiva. donde se mantienen 10 mín. A una magnitud de pH distinta se altera la ionización de los grupos correspondientes. Instrumentos. Se investiga la actividad diferentes magnitudes de pH del medio. 2 3 Amilas Enzima desnaturalizada a Amilasa Enzima Amilas nativa Enzima a ti Conclusiones: Almid ón Almidó n Almidó 10 miB.C. disolución 0.0. 37°€ la min. Los resultados del experimento se anotan en la tabla de lab] térmica de las enzimas y se sacan conclusiones: Número Enzima del tubo de ensayo j 1 Condiciones del experimento Coloracion con iodo Sustrato Incubación. en el tubo de ensayo se añade 1 gota de reactivo de Lugo.2 Influencia del pH sobre la actividad de las enzimas Para cada enzima existe un óptimo del pH a que crean las condiciones más favorables para el mantenimienato de la conformación funcionalmente activa de la molécula. Pipetas. Termostato (37 °C). Principio del método.5 ml de disolución A con Dr. Soporte con tubos de ensayo. se mezclan 515 ml de disolución A con 485 ml de disolución B. 37°C-10 min. Claudio Arzola Alvarez. Acido cítrico (CeH8O7H2O). A los valores de pH muy altos o muy bajos las enzimas se desnaturalizan. y como resultado sse rompen los enlaces que aseguran la formación de los centro catalíticos. disolución 0. Los grupos amino y carboxilo de los restos de aminoácidos ionizados a una magnitud de pH determinada. pH 6.8: se mezclan 772. 0°C 4.2 M (A). Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua de la amilasa de la saliva a .

0 6.5 mi de disolución A con 27. Saliva diluida. como una llave a cerradura.3 Especificidad de las enzimas Las enzimas se distinguen de los catalizadores inorgánicos por su especificidad excepcionalmente alta. Claudio Arzola Alvarez. Do tal modo. la esencia de la especificidad de enzimas consiste en el hecho de que el sustrato le corresponde a la enzima. Instrumentos. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Sacarosa.5 ml de disolución B). Infemilla. Almidón. Saliva diluida.0. Sacarasa.5 ml de disolución B. Almidón. Principio del método. Lugol. disolucion al 2%. Solamente en este caso es posible la formación del complejo enzima-sustrato y el cumplimiento de la función catalítica de la enzima. en cada tubo de ensayo se añade 1 gota de reactivo de Lugol. Marcha de los trabajos. Soporte con tubos de ensayo. En todos los tubos de ensayo se añaden de 2 a 3 ml de saliva diluida (amilasa) y de 4 a 5 ml de disolución de almidón.8 8. la ligación del sustrato con el centro catalítico de la enzima. M. Se investiga la influencia de enzimas amilasa y sacarasa sobre diferentes sustratos: el almidón y la sacarosa. Los resultados de la observación se anotan en una tabla que indica la influencia del pH sobre la actividad de la amilasa de la saliva: Número de tubo de ensayo 1 Enzima pH del medio Sustrato Incubació n Coloració n con iodo Amilasa 2 Amilasa 3 Amilasa Conclusiones: 5. La etapa inicial del acto catalítico consiste en la formación del complejo enzima-sustrato. disolución al 1%. Reactivo de Lugol. Luego. Reactivo de Fehling. En tres tubos de ensayo se vierten de 2 a 3 ml de disoluciones amortiguadoras de distintos pH (5.C. 6. Pipetas.0).8. La conformación espacial del centro de sustrato debe estar en la correspondencia geométrica exacta con la estructura de la molécula de sustrato.0. disolución al 1%. es decir. Reactivo de Dr. 8.0 Almidó Almidó Almidó 10 1 10 min min min 37° C 37° C 37° C 4.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 57 227. pH 8. Termos (37 °C). se mezcla y se incuba durante 10 min en el termostato (37°C). disolución (10 g levadura se homogeneiza en 100 ml de agua). se mezclan 972. Reactivos.

en cada una y en los tubos de ensayo 3 y 4.4 Influencia de los activadores e inhibidores La regulación de la actividad de las enzimas se realiza tanto en la célula como fuera de ella. 37°C-10 min. Tales sustancias pueden causar efecto Determinación de la actividad de las enzimas Según la clasificación elaborada por la Comisión Internacional de Enzimas. hidrolasas. Las observación se anotan en la tabla de especificidad de las enzimas amila y sacarasa: Número Enzima del tubo de ensayo j 1 Condiciones del experimento Coloracion con yodo Sustrato Incubación. 2 3 Amilas Enzima desnaturalizada a Amilasa Enzima Amilas nativa Enzima a ti Conclusiones: Almid ón Almidó n Almidó 10 miB. M. en tubos ensayo 3 y 4. mediante la fijación sobre la molécula de enzima de una serie de sustancias d bajo peso molecular. y en los tubos de ensayo 2 y 4. trans-ferasas. todas las enzimas se subdividen en seis clases principales en correspondencia con el carácter de la reacción catalizada por ellas: oxidorreductasas. Oxidorreductasas Las oxidorreductasas son una clase de enzimas que catalizan las reacciones de oxidación-reducción. de 2 a 3 ml de disolución de sacarasa. 0°C 4.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 58 Marcha de los trabajos. liasas. Claudio Arzola Alvarez.C. Dr. de 4 a 5 ml de disolución de sacarosa. En los tubos de ensayo 1 y 2 vierten de 4 a 5 ml de disolución de almidón. isomerasas y ligasas (sintetasas). En tubos de ensayo 1 y 3 se añaden de 2 a 3 ml de saliva diluída (amilasa). Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . de 1 a 2 ml de reactivo de Fehling y se calienta. 37°€ la min. El contenido de los tubos de ensayo mezcla y se incuba durante 10 min en el termostato (37°( Luego en los tubos de ensayo 1 y 2 se añade 1 gota de reactivo de Lugol.

Instrumentos. En el mortero se tritura cuidadosamente. Baño de María (50 °C). Azul de metileno. Claudio Arzola Alvarez. disolución al 20%. con la arena de vidrio.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 59 4. La masa homogeneizada obtenida se reparte en dos porciones iguales que se ponen en dos tubos de Dr. Acido succínico. El hidrógeno que se desprende del ácido succínico bajo la influencia de la enzima dehidro-fenasa.C. aproximadamente 1 g de tejido de músculo desmenuzado. disolución al 10%. La enzima redunda devuelve fácilmente el hidrógeno cuyo aceptor pueden ser los colorantes aptos para la reducción. En las células la enzima está unida establemente con la membrana de mitocondrias. Pipetas. Mortero con machaca. Aceite de vaselina o vegetal. Músculo fresco (desmenuzado en picadora de carne). Termómetro.001%. añadiendo de 3 a 4 ml de disolución de ácido succínico. Hidróxido sódico. M. reduce el azul de metileno (AM) transformándolo en un compuesto incoloro (AMH 2). Soporte con tubos de ensayo. Reactivos.4 según el papel indicador). disolución acuosa al 0. De coenzima sirve el dinucleótido de flavina-adenina (FAD). Marcha de los trabajos. Principio del método. Acido tricloroacético. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Arena de vidrio.5 Determinación de la actividad de la dehidrogenasa de ácido succínico La dehidrogenasa de ácido succínico (succinato dehidrogenasa) es una enzima que cataliza la oxidación del ácido succínico. disolución al 3% (3 g de ácido succínico se disuelven en 97 ml de agua y se neutraliza con disolución de hidróxido sódico al 10% hasta el pH 7.

se mezcla. Ambos tubos de ensayo se incuban en el baño maría (50°C) durante 10 min. Al pasar este tiempo. en el tubo de ensayo 2 se observa la descoloración del azul de metileno. En el tubo de ensayo 2 (experimental) la enzima es activa. Claudio Arzola Alvarez. y sobre la superficie de líquido se vierte de 0. En el tubo de ensayo 1 (de control) se añade 1 ml de disolución de ácido tricloroacético para destruir la enzima. En ambos tubos de ensayo se añade 1 ó 2 gotas de disolución de azul de metileno. M. Dr.C. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 60 ensayo.5 a 1 ml de aceite para aislar del oxígeno de aire.

Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 61 . Dr.A. GRAW .BIBLIOGRAFIA BIOQUIMICA H. REIMPRESION 1983 PRINCIPLES OF BIOCHEMISTRY ALBERT LEHNINGER AD.A. WORTH PUBLISHERS.HILL 1989 BIOQUIMICA LUBERT STRYER AD. EN ESPAÑOL 1993 BIOQUIMICA DE HARPER ROBERT K MURRAY AD. ALBERT LEHNINGER EDICIONES OMEGA. DE C. INC. PRENTICE HALL HISPANOAMERICANA.A.V.R. REVERTE. DE. 7a. 1980. INTERAMERICANA Mc. 1993 BIOQUIMICA. Claudio Arzola Alvarez. J. S. S. 3a.A. M. DAVID RAWN AD. 1994 BIOQUIMICA: LAS BASES MOLECULARES DE LA ESTRUCTURA Y FUNCION CELULAR. S. MANUAL MODERNO. S. HORTON et al DE.C.

utiliza inmediatamente una ducha de ojos y lava completamente el ojo afectado durante 15 minutos sin interrupción. duchas de seguridad y duchas de ojos. M. Es obligatorio usar gafas de seguridad siempre que se esté en el laboratorio. Sí un producto químico te salpica los ojos. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 62 . Dr. Antes de empezar el trabajo en el laboratorio tienes que familiarizarte con los elementos de seguridad disponibles. así como conocer la localización exacta de extintores. Así mismo se recomienda llevar zapatos cerrados y no sandalias. No comer ni beber en el laboratorio. El uso de bata es obligatorio. 2. El uso de bata (preferentemente de algodón) es obligatorio. 9. Es necesario localizar las salidas principales y de emergencia por si se diese el caso de una evacuación por fuego o por cualquier otro incidente. En estos casos es recomendable el uso de gafas graduadas o de gafas de seguridad cerradas. Informa al encargado del laboratorio de lo que ha sucedido y si es necesario pide asistencia médica.C. No usar lentes de contacto en el laboratorio. 6. Claudio Arzola Alvarez. 4. 7. en menos de 10 segundos. ya que hay la posibilidad de que los alimentos o bebidas se hayan contaminado con productos químicos. No dirijas una corriente de alta presión de agua de un grifo directamente al ojo porque podrías lesionarlo.ANEXOS NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD E HIGIENE 1. 5. las salpicaduras de productos químicos son inevitables. 3. 8. ya que por mucho cuidado que se tenga al trabajar. Actúa siempre con urgencia. ya que en caso de accidente las salpicaduras de productos químicos o sus vapores pueden pasar detrás de las lentes y provocar lesiones en los ojos antes de poder retirar las lentes.

El área de trabajo tiene que mantenerse siempre limpia y ordenada. tampoco las neveras u otras instalaciones destinadas al empleo en los laboratorios. sin bromas. 23. no absorber directamente con la boca. Lavarse siempre las manos después de hacer cualquier análisis y antes de salir del laboratorio. Está prohibido fumar en el laboratorio por razones higiénicas y de seguridad. productos químicos vertidos. 11. No se puede hacer ningún experimento no autorizado. 17. nunca por la boca de la botella. 24. La conducta en el laboratorio debe ser seria. 19. etc. Todos los productos químicos tienen que ser manejados con mucho cuidado de acuerdo con las Hojas de Seguridad de cada una de las sustancias. No utilices material de cristal en mal estado ya que aumenta el riesgo de accidentes. bolsas. sin correr. 18. tenga cuidado con las botellas.C. nunca por el fondo del tubo. Sí tuviese que hacerlo. 25. y debe estar inclinado y no apuntar hacia ninguna persona. 16. abrigos. No inhales. las cuales deben ser siempre transportadas cogiéndolas por el fondo. Los recipientes del laboratorio nunca deben utilizarse para el consumo y conservación de alimentos y bebidas. pruebes o huelas productos químicos si no estás debidamente informado. Para pipetear los líquidos utilice siempre una bombilla pipeteadora. M. El material y los aparatos utilizados tienen que dejarse siempre limpios y en perfecto estado de uso. Procure quitarse la bata hasta que salga del laboratorio. jugar. Claudio Arzola Alvarez.Manual del laboratorio de Bioquimica Seguridad… Pagina 63 10. 22. Dr. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . 13. empujar. No deben transportarse innecesariamente los reactivos de un sitio para otro del laboratorio. No utilices nunca un equipo o aparato sin conocer perfectamente su funcionamiento. Cuando caliente tubos de ensaye hágalo siempre en la parte superior del líquido y con agitación suave. gritar. Cerrar herméticamente los frascos de productos químicos después de utilizarlos. 21. sin libros. 20. 15. 14. 12.

FUEGO EN EL LABORATORIO: Dr. • Avisar al responsable del departamento.Manual del laboratorio de Bioquimica Seguridad… Pagina 64 26. • Luchar contra el fuego. • Ayudar a las personas. bomberos. • Evacuación del edificio en caso necesario. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Claudio Arzola Alvarez. especialmente cuando manipules productos tóxicos. No inhales los vapores de productos químicos y trabaja siempre en vitrinas extractoras. corrosivos o lacrimógenos. M. MEDIDAS GENERALES EN CASO DE ACCIDENTE PLAN GENERAL DE EMERGENCIA: • Dar la alarma.C. • Avisar a ambulancias. irritantes. • Ponerse a salvo.

• No corras ni intentes llegar a la ducha de seguridad si no es que está muy cerca de ti. FUEGO EN EL CUERPO: • Sí se te incendia la ropa. M. placas. se tratarán lavando la zona afectada con agua fría durante 10-15 minutos.. apagarlo utilizando un extintor adecuado. utilizar los extintores adecuados. • Para fuegos grandes aislar el fuego.C. • Es tu responsabilidad ayudar a alguien que se está quemando. hazle rodar por el suelo. • Retirar los productos químicos inflamables que estén cerca del fuego. • Estírate en el suelo y rueda sobre ti mismo para apagar las llamas. si está cerca. mantén a la persona tendida. pide inmediatamente ayuda.Manual del laboratorio de Bioquimica Seguridad… Pagina 65 • Evacuar el laboratorio. • Una vez apagado el fuego. No utilices nunca agua para extinguir un fuego provocado por la inflamación de un disolvente. Claudio Arzola Alvarez. cúbrele con una manta antifuego. no utilices nunca un extintor sobre una persona. • Avisar a todos los compañeros de trabajo sin que se extienda el pánico y conservando siempre la calma. QUEMADURAS: • Las pequeñas quemaduras producidas por material caliente. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Dr. etc. condúcele hasta la ducha de seguridad. • Sí el fuego es pequeño y localizado. • No utilices cremas y pomadas grasas en las quemaduras graves. procurando que no coja frío y proporciónale asistencia médica. arena o cubriendo el fuego con un recipiente de tamaño adecuado que lo ahogue. sí el fuego no se puede controlar rápidamente accionar la alarma de fuego. sí la principal está bloqueada. avisar al servicio de extinción de incendios y evacuar el edificio. • Las quemaduras más graves requieren atención médica inmediata. por pequeño que sea el fuego. baños. por la salida principal o por la salida de emergencia.

• Proporcionar asistencia médica a la persona afectada.Manual del laboratorio de Bioquimica CORTES: Seguridad… Pagina 66 • Los cortes producidos por la rotura de material de cristal son un riesgo común en el laboratorio. lave con agua abundantemente la zona afectada. • Sí la cortada es pequeña y deja de sangrar en poco tiempo.C. sacar el exceso de pasta formada. Claudio Arzola Alvarez. con abundante agua corriente. corta lo más rápidamente posible la ropa. como mínimo durante 15 minutos. • Sí la cortada es grande y no deja de sangrar. requiere de asistencia médica inmediata. • Las cortadas se tienen que lavar bien. • Las duchas de seguridad instaladas en los laboratorios serán utilizadas en aquellos casos en que la zona afectada del cuerpo sea grande y no sea suficiente el lavado en una pila. M. Dr. lávala con agua y jabón y tápala con una venda. • Es necesario sacar toda la ropa contaminada de la persona afectada lo antes posible mientras esté bajo la ducha. DERRAME DE PRODUCTOS QUÍMICOS SOBRE LA PIEL: • Los productos químicos que se hayan vertido sobre la piel han de ser lavados inmediatamente con agua corriente abundantemente. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . durante 10 minutos como mínimo. CORROSIONES EN LA PIEL POR ÁCIDOS Y ÁLCALIS: • Cuando ocurre una corrosión por ácidos. neutralice la acidez con bicarbonato de sodio durante 15-20 minutos. seca y cubra la parte afectada con linimento óleo-calcáreo o parecido. • Recuerda que la rapidez en el lavado es muy importante para reducir la gravedad y la extensión de la herida.

seca y cubre la zona afectada con una pomada de ácido tánico. con la cabeza de lado. ponerlo en posición lateral de seguridad. y estirarle la lengua hacia fuera. por pequeña que parezca la lesión.C.Manual del laboratorio de Bioquimica Seguridad… Pagina 67 • Cuando se produce una corrosión por álcalis. si no hay. M. cuanto antes se lave el ojo. • Es necesario mantener los ojos abiertos con la ayuda de los dedos para facilitar el lavado debajo de los párpados. con un frasco de lavar los ojos. INGESTIÓN DE PRODUCTOS QUÍMICOS: • Antes de cualquier actuación pide asistencia médica. menos grave será el daño producido. • Lava los dos ojos con agua corriente abundantemente durante 15 minutos como mínimo en una ducha de ojos. • Es necesario recibir asistencia médica. Dr. lave la zona afectada abundantemente con agua corriente y aclárala con una disolución de ácido acético al 1%. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . CORROSIONES EN LOS OJOS: • En este caso el tiempo es esencial (menos de 10 segundos). y. Claudio Arzola Alvarez. • Sí el paciente está inconsciente.

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