Manual de Prácticas de Bioquímica

Dr. Claudio Arzola M.C. Celia Holguín Licón Responsables de la elaboración Del manual de Bioquímica

Mauricio Ramírez Ruano, D.I. Coordinador de la elaboración de Manuales de Prácticas

MC. Javier Martínez Nevarez Presidente del H. Consejo Técnico

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Directorio
C.P. Raúl Chávez Espinoza.
Rector de la Universidad Autónoma de Chihuahua

Ing. Heriberto Altes Médina
Secretario General de la Universidad Autónoma de Chihuahua

Dr. Alfredo de la Torre Hernández.
Director Secretario Académico de la Universidad Autónoma de Chihuahua

M.C. Javier Martínez Nevarez
Director de la Facultad de Zootecnia

M.C. Josefina Domínguez Holguín
Secretaria Académica de la Facultad de Zootecnia

Ph.D. Claudio Arzola, M.C. Celia Holguín Licón
Catedraticos de la Materia de Bioquímica

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Tabla de contenido
INTRODUCCIÓN ....................................................................................1 ENCUADRE DEL SISTEMA DE PRÁCTICAS .............................................2 Introducción ..................................................................................... 2 Competencias a las que contribuye, y su ubicación dentro del mapa curricular vigente. ................................................................................4 Niveles de Desempeño ...................................................................... 4 Programa del sistema de prácticas ......................................................6 Tema ....................................................................................................6 Práctica o prácticas programadas ........................................................6 Contenido de cada Práctica en particular ............................................9 1.1. Difusión ...................................................................................... 9 1.2. Ósmosis y presión osmótica ...................................................... 13 1.3. Disociación electrolítica ........................................................... 15 1.4 Determinación de la acidez general de las disoluciones .......... 17 1.5 Determinación del pH ............................................................... 18 1.6 Preparación de las disoluciones amortiguadoras ..................... 21 2. Carbohidratos ........................................................................... 24 2.1. Reacciones de reconocimiento de los hidratos de carbono .... 26 2.2. Prueba con naftorresorcina...................................................... 26 2.3. Monosacáridos ......................................................................... 27 Aldohexosas .................................................................................... 28 2.4. Reacciones de reconocimiento le los hidratos de carbono reductores....................................................................................... 28 Prueba con el hidróxido cúprico (II), reacción de Trommer........ 28 2.5. Reacción con el licor de Fehling .............................................. 29 2.6. Reacción con las sales de bismuto.......................................... 30 2.7. Reacción con fenilhidrazina ..................................................... 31 2.8. Reacción de reconocimiento de la sacarosa .......................... 32 2.9. Reacciones de fermentación de los hidratos de carbono ..... 33 2.10. Reacciones coloreadas del almidón ....................................... 34 2.11 Hidrólisis acida escalonada del almidón ................................ 35

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......................... 46 3............................ Enzimas.......................... 48 3.......9........................................................ 44 3............................ 41 Los lípidos y sus metabolitos ....................... Determinación del número acídico ................................... Hidrólisis enzimática del almidón ........4............... 57 4......... 42 Glicéridos (grasas) ............... 37 2................ 56 4.............4 Influencia de los activadores e inhibidores ...................................6. Determinación de la glicerina en las grasas........................12.......13 Reacción del glicógeno con el iodo....... 47 3......................................................................... 58 4........... 43 3.......................................... 44 3............................................................................. Determinación del índice de iodo ...................................2........... 61 ANEXOS .................2.... 42 Reacciones de reconocimiento de las grasas...... 45 3................... 38 3........... Solubilidad de las grasas ........ 49 4........ 38 Reconocimiento del glicógeno en los tejidos animales ................................................ 62 NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD E HIGIENE.8................................. 55 4.......................................3 Especificidad de las enzimas...............1 La labilidad térmica de las enzimas ............. 43 3.................................... Los lípidos y su metabolismo.................. 52 4............. 62 iv ............5 Determinación de la actividad de la dehidrogenasa de ácido succínico .......................... Determinación cuantitativa de la grasa en el hígado .............7. Determinación de la temperatura de fusión ............. Reacción de la grasa y el aceite con el Sudán III .............5...........................2 Influencia del pH sobre la actividad de las enzimas.................................. 59 BIBLIOGRAFIA .. Determinación del número (índice) de saponificación ...........................................................1...

Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 1 . M. Dr. Esta destinado a servir de complemento a la materia de bioquímica de la carrera de Ingeniero Zootecnista en Sistemas de Producción de la Facultad de Zootecnia de la Universidad de Chihuahua.C. pudiendo también ser usado por otros técnicos. ser usado en cualquier carrera afín. mediante adaptaciones y modificaciones leves. pero podrá.INTRODUCCIÓN Este manual esta diseñado para estudiantes de zootecnia y veterinaria. Claudio Arzola Alvarez.

Junto con otras cosas. los cuales tienen en su curricula la materia de bioquímica. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 2 . M. uso de mayor mecanización y sobre todo. Claudio Arzola Alvarez. ensayo de reacciones enzimáticas. con miras a lograr una mayor productividad por cabeza con aplicación económica de insumos. Es sabido que el incremento de la producción pecuaria solo puede ser basado en prácticas de producción intensiva. También es necesario tener en cuenta que las unidades de producción cuentan con laboratorios cada vez mas equipados. manipulación de ADN recombinante. Lo anterior seguramente propiciará una educación de profesionistas que puedan resolver problemas. seguramente debes de tener en cuenta que la producción pecuaria en México tiene que ser competitiva y sustentable. la introducción de tecnología moderna. La experiencia de muchos años en la docencia de la bioquímica en la Facultad de Zootecnia de la Universidad Autónoma de Chihuahua me ha demostrado que dicho enfoque no es el óptimo para un profesional de la zootecnia. Por lo tanto. Dr. este manual se dirige a estudiantes de zootecnia y veterinaria. por las competencias que ésta promueva en los estudiantes.ENCUADRE DEL SISTEMA DE PRÁCTICAS Introducción Como estudiante de zootecnia. aislamiento y separación de proteínas. es necesario que los zootecnistas tengan una mayor especialización en relación a otras carreras que usan la bioquímica. se enfatiza en la enseñanza y práctica de mediciones cuantitativas.C. es necesario que adquieras una proeficiencia en el uso de los conceptos bioquímicos que soportan los trabajos teórico-prácticos de esta disciplina. Por lo general. Dado que en lo general el conocimiento de la bioquímica prepara al estudiante para tener competencias en el área de la alimentación animal. Generalmente esto solo puede ser logrado mediante el incremento del número de cabezas. Existen numerosos manuales de laboratorio para esta materia. mejor genética o selección. pero por lo general están dirigidos a profesionales de la química. y el uso de PCR en el campo forense.

y te da herramientas docentes. amen de prepararte para eventuales empleos en laboratorios comerciales o de certificación o trazabilidad de productos pecuarios.Manual del laboratorio de Bioquimica Encuadre…. dejando vacíos en campos emergentes de la bioquímica como lo es la biotecnología. Claudio Arzola Alvarez. con el ánimo de que el estudiante tenga un margen amplio de independencia. lo cual esta ausente en este tipo de publicaciones. con lo que se pretende reforzar la enseñanza de la materia. Dado que el estudiante deberá presentar un protocolo y un informe para cada práctica. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Se da un enfoque acerca de la finalidad del análisis. Pagina 3 Sin embargo. y facilitar el desarrollo de competencias en el mismo. Es por eso que el presente manual se ha diseñado con el propósito de fomentar no solo el conocimiento inherente al quehacer de la bioquímica. M. determinación de tóxicos y conocimientos afines. Dr. existe una tendencia a enmarcar dichos conocimientos solamente en aspectos solamente en aspectos tales como el análisis de alimentos. sino que también puede usarse en labores de investigación en asignaturas diferentes a la bioquímica. El plan general del manual contempla la referencia a los fundamentos teóricos de la química y metabolismo de las sustancias en estudio. Otra de las variantes es que contiene materiales relativos a físico-química y química coloidal.C. se describe el análisis en una manera lo más completa posible.

C. Dr.Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa. Las razones por las que asumimos que obtendrás un nivel de desempeño tan alto son: 1. en las que se tiene que mostrar creatividad y recursos para conciliar intereses. Se debe tener habilidad para motivar y dirigir grupos de trabajo”. Las prácticas deberán ser realizadas en equipo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 4 . Niveles de Desempeño El conjunto de prácticas del presente manual te permitirá llegar a un desempeño de nivel 4 de acuerdo la clasificación de CONOCER. 2. lo que requiere de la participación armónica de los elementos. La realización de las prácticas en forma y tiempo presupone el dominio de diferentes habilidades y conocimientos. así como la utilización de herramientas computacionales.Competencias a las que contribuye. 3. M. Claudio Arzola Alvarez. a saber “Nivel 4. La capacidad de liderazgo deberá ser usada en forma óptima para realizar los diversos pasos de la práctica.. La elaboración de un protocolo y un informe por práctica requiere de disciplina y laboriosidad. y su ubicación dentro del mapa curricular vigente.

DE ORIGEN ANIMAL 3-3-0 SEGURIDAD E HIGIENE INDUSTRIAL 3-3-0 6 CREDITOS 726 TECNOLOGIA DE SUBPRODUCTOS DE ORIGEN ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 437 IMPACTO AMBIENTAL Y RESIDUOS 3-3-0 6 CREDITOS 627 6 CREDITOS 508 TECNOLOGÍA Y PROCESADO DE LA LECHE 3-3-0 6 CREDITOS 831 ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES I 3 CREDITOS ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES II 4 CREDITOS ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES III 4 CREDITOS ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES IV 4 CREDITOS SISTEMAS DE CONTROL SANITARIO 3-2-0 5 CREDITOS 512 DISEÑO HIGIENICO Y NORMATIVIDAD DE PLANTAS 2-3-0 5 CREDITOS 710 ANALISIS DE RIESGO 3-3-0 6 CREDITOS 725 .SOCIEDAD Y CULTURA 3-2-0 5 CREDITOS 203 UNIVERSIDAD Y CONOCIMIENTO 3-2-0 5 CREDITOS 210 SOCIOLOGIA Y DESARROLLO 2-2-0 4 CREDITOS SEMINARIO DE INVESTIGACION 3-2-0 5 CREDITOS 457 FORMACION DE EMPRENDEDORES 3-2-0 5 CREDITOS 303 FORMULACION Y EVALUACION DE PROYECTOS 2-2-0 4 CREDITOS 856 PRACTICAS PROFESIONALES 10 CREDITOS SERVICIO SOCIAL 30 CREDITOS ECONOMIA AGROPECUARIA 4-0-0 4CREDITOS 266 MATEMATICAS 3-2-0 5 CREDITOS 101 LENGUAJE Y COMUNICACIÓN 3-2-0 5 CREDITOS 209 CONTABILIDAD AGROPECUARIA 3-1-0 4 CREDITOS 332 TECNICAS DE MUESTREO 4-1-0 5 CREDITOS 502 ADMINISTRACIÓN DE EMPRESAS AGROPECUARIAS 3-2-0 5 CREDITOS 433 ADMINISTRACION ESTRATEGICA 3-1-0 4 CREDITOS 503 MERCADEO DE PRODUCTOS PECUARIOS 3-2-0 5 CREDITOS 633 DIRECCION DE AGRONEGOCIOS 3-3-0 6 CREDITOS 802 ESTADISTICA 3-0-1 4 CREDITOS 201 TECNOLOGIAS Y MANEJO DE LA INFORMACION 3-2-0 5 CREDITOS 136 ANATOMIA FUNCIONAL 4-0-2 6 CREDITOS 106 MANEJO DE BASE DE DATOS 0-4-0 4 CREDITOS 206 CONTROL DE CALIDAD 2-2-0 4 CREDITOS 607 REPRODUCCION ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 501 GENETICA GENERAL 3-1-0 4 CREDITOS 556 ADMINISTRACION DE RECURSOS HUMANOS 3-1-0 4 CREDITOS 702 MEJORAMIENTO ANIMAL 3-2-0 5 CREDITOS 431 SISTEMAS DE PRODUCCION OVI-CAPRINO 3-3-0 6 CREDITOS 614 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE CARNE I 3-3-0 6 CREDITOS 603 SISTEMAS DE PRODUCCION DE ESPECIES MENORES 3-3-0 6 CREDITOS 605 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE LECHE I 3-3-0 6 CREDITOS 631 SISTEMA DE PRODUCCION AVICOLA 3-3-0 6 CREDITOS 801 FISIOGIA DE LOS PROCESOS PRODUCTIVOS 4-0-2 6 CREDITOS 235 FISIOLOGIA DE LA REPRODUCCION 3-3-0 6 CREDITOS 356 INGENIERIA EN SISTEMAS DE PRODUCCION 3-3-0 6 CREDITOS 507 SISTEMA DE PRODUCCION DE PORCINOS 3-3-0 6 CREDITOS 805 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE CARNE II 3-3-0 6 CREDITOS 733 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE LECHE II 3-3-0 6 CREDITOS 701 INTRODUCCION A LOS SISTEMAS DE PRODUCCION 2-3-0 5 CREDITOS 104 MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA 4-2-0 6 CREDITOS 335 SANIDAD ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 465 SISTEMAS DE PRODUCCION EQUINA 3-1-0 4 CREDITOS 735 QUIMICA ORGANICA 4-0-2 6 CREDITOS 234 BIOQUIMICA 4-0-2 6 CREDITOS 334 ECOLOGIA VEGETAL 3-3-0 4 CREDITOS 225 NUTRICION ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 506 ALIMENTACION DE NO RUMIANTES 3-2-0 5 CREDITOS 544 ALIMENTACION DE RUMIANTES 3-2-0 5 CREDITOS 634 ECOLOGIA BASICA 3-1-0 4 CREDITOS 105 ECOLOGIA ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 305 TOPOGRAFIA 3-3-0 6 CREDITOS 461 MANEJO DE PASTIZALES 3-3-0 6 CREDITOS 434 HIDRAULICA APLICADA A LA PRODUCCION 3-2-0 5 CREDITOS 661 MANEJO DE FAUNA SILVESTRE 3-3-0 6 CREDITOS 834 CLIMA Y AMBIENTE 4-2-0 6 CREDITOS 223 BOTANICA SISTEMATICA 3-3-0 6 CREEDITOS 126 AGROSTOLOGIA 3-3-0 6 CREDITOS 302 CONSERVACION DE SUELO Y AGUA 3-3-0 6 CREDITOS 452 PERCEPCION REMOTA Y CARTOGRAFIA 3-3-0 6 CREDITOS 325 MANEJO DE RECURSOS FORRAJEROS 3-3-0 6 CREDITOS 652 TECNOLOGIA Y PROCESADO DE LA CARNE 3-3-0 6 CREDITOS 753 ANALISIS SENSORIAL 3-3-0 6 CREDITOS 709 VALORES DEL EJERCICIO PROFECIONAL 4-0-0 4 CREDITOS 806 ORIGEN Y CRECIMIENTO DE ANIMALES DOMESTICOS 3-3-0 6 CREDITOS 208 BIOQUIMICA DE LOS ALIMENTOS DE ORIGEN ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 308 MICROBIOLOGIA Y DETERIORO DE PRODUC.

1.5.4.5. y semana del semestre en que se realizará 1. Reconocimiento de la sacarosa 2.2.1. Determinación de la acidez general 1.3. Carbohidratos reductores 2. Difusión 1.3. M. Preparación de soluciones amortiguadoras 2. reconocimiento de glucógeno en tejidos Laboratorio Laboratorio 6 horas 1-3 semana 6 horas 4-6 semana Dr. Carbohidratos 2. Claudio Arzola Alvarez.6. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Página 6 .4. Hidrólisis del almidón 2. Determinación del pH 1.5.C. Introducción y agua 1. Fermentación 2.6. Ósmosis y presión osmótica 1. Disociación electrolítica 1.Programa del sistema de prácticas Tema Práctica o prácticas programadas Ámbitos de desarrollo Duración en horas para cada práctica. Resistividad osmótica de eritrocitos 1.2. Reconocimiento de carbohidratos 2.

Cuantificación de las grasas 3.4 Influencia de los activadores e inhibidores Determinación de la actividad de las enzimas Oxidorreductasas 4.C. Determinación de glicerina 3.2. Constantes de las grasas 3.1.3 Especificidad de las enzimas 4.5. M.4. Claudio Arzola Alvarez.3.1 La labilidad térmica de las enzimas 4.2 Influencia del pH sobre la actividad de las enzimas 4.5 Determinación de la actividad de la dehidrogenasa de ácido succínico Prácticas Pagina 7 6 horas 7-9 semana 6 horas 10-11 semana Dr. Lípidos 3. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .Manual del laboratorio de Bioquimica 3. Reconocimiento de grasas 3. Reacciones del colesterol 4. Enzimas 4.

C. UACh 8 Febrero 2006 .8 Serie de Prácticas 1 Química Física C. Arzola. Holguín Facultad de Zootecnia.

1. lo que te permitirá tener una visión integradora y real de las características funcionales de las mezclas. Universidad Autónoma de Chihuahua Responsable: Dr. obtendrás menor calificación. con actitudes de respeto a tus compañeros y maestros. además de ser un instrumento de comunicación adecuada con colaboradores y colegas. M. Sin embargo. Claudio Arzola Alvarez. La pulcritud y el orden será un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades.Contenido de cada Práctica en particular 1. Este concepto es fundamental para entender los principios del movimiento de las moléculas en disolución. Claudio Arzola Álvarez Número de alumnos por práctica: Tres Propósito de la práctica: Al terminar esta práctica. deberás de observar una conducta adecuada durante la misma. Dr. Difusión Facultad de Zootecnia. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos. Al terminar. el protocolo deberá ser entregado en forma individual para su evaluación. Puesto que el desarrollo de esta práctica se considera una actividad integradora. lo que te capacitará para planear adecuadamente dicho tipo de acciones.C. tendrás la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemático de un fenómeno complejo. deberás entregar un informe del desarrollo y resultados de la práctica. y relacionarlo con los diversos aspectos de la práctica profesional de la zootecnia. puesto que la práctica se llevará a cabo en grupo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 9 . Al mismo tiempo. con miras a que tu posterior desempeño profesional sea de alto nivel. el cual deberá ser individual. serás capaz de entender el concepto de difusión química.

1 . se introducen los tubos de de la molécula de la Adaptado de PRACTICAS DE BIOQUÍMICA DEL GANADO Y AVES DE CORRAL. Tal fenómeno obtuvo el nombre de difusión. En dos vasos se vierten de 250 a 300 ml de agua en cada uno. Vasos químicos de 250 ó 500 ml. La velocidad de difusión en este proceso es inversamente proporcional a las dimensiones sustancia disuelta. aumenta. Hornillo eléctrico. Tubos do vidrio con diámetro de 3 a 5 mm y longitud de 30 a 40 mm. Con el crecimiento de la temperatura de la disolución. cristal violeta o de otras sustancias coloreadas. Un cristal de sustancia coloreada se sumerge y se mantiene durante varios segundos en vidrio soluble. Reactivos. coloreando uniformemente la disolución del color correspondiente. 1984. al. Moscú. Un vaso se coloca sobre hornillo eléctrico y se calienta hasta la ebullición. Cristales de permanganato potásico u otra sustancia coloreada. colocados sobre soportes blancos. Marcha de los trabajos.V. Editorial MIR. Soporte con sujetadores. Reactivos: Cristales grandes de permanganato potásico. las partículas de la sustancia se difunden paulatinamente en el cilindro por todo el volumen del disolvente. Pinzas. bicromato potásico.Manual del laboratorio de Bioquimica Química física Quimica Fisica… Pagina 10 Propiedades cinético-moleculares de las disoluciones diluidas Difusión1 Las disoluciones diluidas poseen capacidad de nivelar la concentración en todo su volumen. CHECHETKIN et. por lo común. Marcha dé los trabajos. Influencia de la temperatura sobre la velocidad de difusión La causa de la difusión es el movimiento térmico de las moléculas. Este proceso se realiza a través del movimiento térmico de las moléculas de sustancia disuelta y de disolvente. A. Soportes blancos para los vasos. luego se traslada a un cilindro con agua. Vidrio soluble. Instrumentos: Cilindros de vidrio incoloro de 250 ml. A medida que el vidrio soluble se disuelve. la velocidad de difusión. que conduce a la penetración mutua de las moléculas. Ella puede observarse si sumergimos cristales de sustancias coloreadas en un disolvente puro. Luego ambos vasos. Instrumentos.

C. En el vaso con agua caliente KMnO4 se disuelve. Los tubos se sujetan en el soporte y a través de ellos se dejan caer simultáneamente en cada vaso (con agua caliente y fría) los cristales de KMnO4. lo que hace la difusión más pronunciada. Claudio Arzola Alvarez. se revisará tu desempeño mediante la revisión de los siguientes puntos: Actividad ¿Trajiste el protocolo de tu práctica en forma completa? ¿Utilizaste material de protección. bata? ¿Preparaste los reactivos en forma anticipada? ¿Limpiaste el equipo y material una vez finalizada la práctica? ¿Dispusiste de los desechos de cómo indica el manual? ¿Entregaste el reporte de la práctica pasada? Evaluación alumno Evaluación instructor Final Observaciones Dr. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . formando muy rápidamente una disolución uniformemente coloreada. M. En el vaso con agua fría la difusión transcurre lentamente. muy Sistema de evaluación Al final de cada práctica. guantes de asbesto. El experimento sirve de prueba del movimiento térmico de las moléculas en que se basa la difusión e ilustra claramente que la velocidad de movimiento de las moléculas crece considerablemente con el aumento de la temperatura de disolución. lentes.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 11 vidrio de tal modo que éstos se sitúen en centro del vaso sin llegar al fondo en unos 10 ó 12 mm.

C.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 12 Reporte escrito. Protocolo 2. Método de asignación de calificaciones. para el cálculo de la calificación final se tomará en cuenta el total de las prácticas. M. Dr. Claudio Arzola Alvarez. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Tu calificación será resultado de los siguientes factores: 1. Reporte 3. el cual deberá entregarse a la fecha siguiente de la práctica. En cada práctica se deberá elaborar un reporte escrito. Sin embargo. Desempeño en el laboratorio Total 30% 30% 40% 100% Para aprobar la asignatura. El informe deberá ser elaborado en forma individual y presentado en forma impreso y digital. el alumno deberá presentar cuando menos el 80% de las prácticas realizadas.

entonces a través de este último pueden penetrar sólo las moléculas del disolvente. Claudio Arzola Alvarez. se empeora considerablemente el suministro de agua a las plantas y éstas se secan rápidamente y perecen. Determinación de la resistividad osmótica de eritrocitos (ROE) Por resistividad osmótica de los eritrocitos so entiende la estabilidad de los eritrocitos contra la hemólisis bajo la acción de disoluciones hipotónicas de cloruro sódico. En su movimiento.2. La difusión unilateral del disolvente a través del tabique semipermeable se denomina osmosis. chocan contra él. La elevación de la presión osmótica en los tejidos conduce a los edemas. los pulmones) están acompañadas por el aumento de la presión osmótica en la sangre.C. la disminución de la presión osmótica en la sangre trae como resultado la hemólisis de los eritrocitos. En el caso de la difusión indirecta las partículas de soluto y del disolvente encuentran un tabique orgánico permeable (por ejemplo. la lecitina y el colesterol. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . lo atraviesan libremente. los líquidos intertisulares y las células pueden verificarse normalmente los procesos bioquímicos y fisiológicos. el Dr. La magnitud de la presión osmótica se expresa en pascales (Pa) *). mientras que en la envoltura de los eritrocitos viejos. Sólo en las condiciones de isotonía en la sangre. Sin embargo. M. La presión osmótica juega un papel importante en los procesos fisiológicos de los organismos vegetales y animales. Es conocido que en la formación de la envoltura de los eritrocitos participan. mientras que las moléculas del soluto encontrándose en estado de movimiento térmico. junto con otras sustancias. de colodión) y lo atraviesan libremente. Muchas enfermedades de los órganos internos (los riñones. el corazón. creando así cierta presión. las moléculas del disolvente al encontrar un tabique semipermeable. Tal presión se denomina osmótica. dan contra el tabique semipermeable. Al crecer la presión osmótica en las aguas del suelo. En la envoltura de los eritrocitos jóvenes prevalece la lecitina. La presión osmótica se combina como la suma de los choques que le tocan a una superficie determinada del tabique semipermeable en la unidad de tiempo. Ósmosis y presión osmótica La difusión en las disoluciones puede ser directa o indirecta.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 13 1. si entre el disolvente puro y la disolución está puesto el así llamado tabique semipermeable.

Si los eritrocitos en el organismo por alguna razón se destruyen rápidamente.7 a 0. Al terminar la centrifugación. es decir. Sangro tratada con citrato. Reactivos. Marcha de los trabajos. Si los procesos de formación de la sangre transcurren en el organismo normalmente y los eritrocitos no se destruyen prematuramente.m. la hemólisis de tal sangre empieza y termina a concentraciones relativamente altas de cloruro sódico en la disolución 0. Pipeta de 5 ml. La hemólisis completa se Dr.C. Por lo tanto los eritrocitos jóvenes son más propensos a la hemólisis que los viejos. Cuando la formación de la sangre está perturbada y los eritrocitos jóvenes no se suministran a la sangre. Pipeta graduada de 1 ml. Probetas de centrífuga. entonces en la determinación de la ROE de la sangre de tal organismo el inicio y el final de la hemólisis son muy extendidos. entonces la hemólisis de tal sangre empieza con concentraciones de las disoluciones de cloruro sódico relativamente bajas. Disolución de cloruro sódico al 1%. M.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 14 colesterol.2 ml de sangre. se detectan las probetas en las cuales la hemólisis acaba de iniciarse. Se preparan previamente disoluciones de cloruro sódico de distintas concentraciones. numeradas de antemano se mezcla una disolución de cloruro sódico al 1% con agua según el esquema siguiente: (de Luego en cada probeta se agrega 0. la sangre contiene solamente eritrocitos jóvenes.p. Centrífuga. De indicador del inicio de la hemólisis sirve la coloración roja del líquido sobre el precipitado en presencia de un sedimento de eritrocitos no hemolizados. Claudio Arzola Alvarez. luego se centrifugan durante un tiempo de 5 a 10 min a 15 mil r. Las probetas se agitan y se dejan durante 10 min en el soporte. y aquellas donde ésta se realizó hasta el final. Instrumentos.6%). Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . En probetas de centrífuga.

Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 15 detecta en las probetas donde el líquido está coloreado de un color rojo en ausencia del sedimento de eritrocitos. el disolvente puede disminuir con la mayor fuerza la interacción entre las partículas de cargas opuestas (iones). Los iones que se forman en el proceso de disociación electrolítica aumentan la concentración general de las partículas del soluto y con esto elevan el efecto osmótico de las disoluciones. en partículas con cargas eléctricas (iones). En consecuencia. Además. presencia en la disolución de otros electrólitos con ion análogo. M. de la concentración de la disolución. La disociación electrolítica se expresa de una manera más pronunciada en aquella disolución en que el disolvente posee la mayor constante dieléctrica. El grado de disociación depende de la naturaleza del disolvente y del soluto. Disociación electrolítica La disociación electrolítica es la descomposición espontánea del electrolito en la disolución. El agua es tal disolvente.3. es decir.C. es decir. 1. Claudio Arzola Alvarez. temperatura. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . los iones comunican a las disoluciones una actividad química más alta y las dotan de una actividad biológica. Por grado de disociación electrolítica se entiende la proporción entre las moléculas disociadas y no disociadas. las disoluciones de los Dr. en el agua la disociación electrolítica se verifica en el mayor grado.

pueden elevar o disminuir su actividad fisiológica. La acción aislada de ciertos iones sobre los organismos unicelulares tiene comúnmente como resultado la muerte rápida de los últimos debido a su hiperexcitación o depresión excesiva. Dr. Disoluciones isotónicas que contienen sales de metales mono y bivalentes tomadas en una proporción determinada y que no poseen acción tóxica sobre el organismo obtuvieron el nombre de disoluciones equilibradas o fisiológicas.C. La mezcla de iones monovalentes y bivalentes tomados en una proporción estrictamente determinada no provoca desviaciones en el estado fisiológico de la célula. los iones surgidos en la disociación de las sales de calcio y magnesio opresan las funciones de las células y en el caso de acción prolongada. Así. M. los iones formados durante la disociación de las sales potásicas y sódicas causan una fuerte excitación de las células y su muerte posterior a consecuencia de la hiperexcitación. de Ringer—Lokk o de Ringer— Tirrode (tabla 2). Claudio Arzola Alvarez. Las disoluciones fisiológicas se utilizan en los experimentos con los cultivos de órganos y tejidos para el estudio de los procesos bioquímicos y fisiológicos en estos cultivos. En tal mezcla tiene lugar la supresión mutua de la acción tóxica de los iones debido al antagonismo iónico. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . como también para la preparación de los medios nutritivos en la práctica bacteriológica y para las inyecciones intravenosas. órganos y organismos enteros. causan su muerte. Como ejemplo de tales disoluciones puede servir la disolución de Ringer.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 16 electrólitos al actuar sobre las células.

equivalentes en concentración.1 N.4 Determinación de la acidez general de las disoluciones La acidez general de una disolución se expresa por el número de equivalentes gramo de álcali consumidos para la valoración de un litro de disolución a investigar. se añaden 2 ó 3 gotas de fenolftaleína y la disolución se valora de una bureta graduada. Fenolftaleina. Marcha de los trabajos. 0.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 17 1. se vierten en un matraz. tienen la misma acidez general. Matraces de 50 ó 100 ml.1 N. Las disoluciones de cualesquiera ácidos. se toma el valor promedio Dr. La valoración se repite y. Acido clorhídrico. para el cálculo.C. Se miden exactamente 5 ó 10 ml de ácido clorhídrico. M. Pipetas de 5 y 10 ml. con una disolución de álcali hasta la aparición de una coloración rosa. Claudio Arzola Alvarez. Bureta Reactivos. 0. Instrumentos. Hidróxido sódico. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Acido acético. Ella indica la cantidad sumaria de sustancias que reaccionan como ácidos presentes en la disolución.1 N. 0. y no depende del grado de su disociación.

M. Determinación potenciométrica del pH de las disoluciones El método potenciométrico de determinación del pH se basa en la medición de las fuerzas electromotrices de las pilas voltaicas. en primer término. Valc es el volumen del álcali. el medio ambiente que los rodea. Claudio Arzola Alvarez.5 Determinación del pH Por acidez activa se entiende la acidez condicionada por la concentración de iones hidrógeno libre en la disolución. En el curso de determinación de la acidez general de dos disoluciones con concentraciones equivalentes. La acidez activa depende del grado de disociación de los ácidos presentes en la disolución u otras sustancias que reaccionan como ácidos y se caracteriza por la magnitud del pH.1 ml.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 18 aritmético. el colorimétrico y potenciométrico. en equivalentes gramo. El cálculo de la acidez general se realiza según la fórmula x = Nalc*Valc/Va partiendo de la ecuación Nalc*Valc = Na*Va. donde Nalc es el número de equivalentes gramo de álcali. preparadas a partir de las disoluciones Dr. contenido del protoplasma celular y. de la sangre. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . se cercioran de que la acidez general no depende de la naturaleza del ácido sino de su concentración en la disolución. una de ácido fuerte y otra de ácido débil. La acidez general se determina corrientemente junto con la determinación de la acidez activa de una disolución. Para los procesos fisiológicos tiene importancia. del líquido tisular. Na es la cantidad de ácido 1. para los organismos protozoarios. Va es el volumen del ácido. Las diferencias entre los resultados de la valoración no deben sobrepasar 0. De la misma manera se determina la acidez general de la disolución del ácido acético. La acidez activa se determina por dos métodos (que pueden tener variaciones). la acidez activa del medio en que se verifican unos u otros procesos bioquímicos. es decir.C.

Se denomina fuerza electromotriz (f. Esta capacidad las disoluciones la adquieren gracias a la presencia en su composición de sustancias amortiguadoras.101 MPa. El método se caracteriza por una gran precisión en la determinación del pH de cualesquiera líquidos. El potencial de un electrodo normal de hidrógeno es igual a cero. M. de calomelano y de quinhidrona.) la máxima diferencia de potenciales entre los electrodos de una pila voltaica en las condiciones reversibles de su trabajo. se disocia en la disolución suministrándola cationes hidrógeno. Electrodo de hidrógeno. Para la determinación de los potenciales de electrodo o la concentración de iones en la disolución se emplean los electrodos estándar con una magnitud conocida del potencial de electrodo.C. se denominan disoluciones amortiguadoras. En este sistema el platino desempeña el papel de conductor de electrones y de portador del hidrógeno. Se denomina pila voltaica el aparato en que la energía química se convierte en eléctrica. como también durante la dilución. el amortiguador de . El electrodo de hidrógeno consta de una placa de platino saturada de hidrógeno molecular y sumergida en una disolución que contiene iones de hidrogeno: (Pt) H2/h+.e. entonces tal electrodo de hidrógeno se denomina normal. Una condición necesaria para los electrodos de la pila voltaica es la posibilidad de verificarse en su superficie el proceso de oxido-reducción. Una parte de las moléculas de hidrógeno que se encuentran en la placa de platino. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua el acetato es ácido acético/ acetato sódico. amortiguador de Dr. En función de tales electrodos de referencia se usan los electrodos de hidrógeno. cuyo papel puede ser desempeñado por las mezclas que constan de: 1) ácidos débiles y sales muy disociables de estos ácidos.m. Disoluciones amortiguadoras Las disoluciones capaces de mantener firmemente la estabilidad de la concentración de los iones hidrógeno (pH) cuando sobre ellas actúan cantidades relativamente pequeñas de ácido o álcali fuertes. ejemplo. Claudio Arzola Alvarez. Si la concentración de iones hidrógeno en la disolución es igual a 1 ión-g/1 y la presión del hidrógeno molecular es igual 0.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 19 a investigar y de electrodos especiales.

proteínas y algunas otras sustancias. La dilución do las disoluciones amortiguadoras no trae consigo la variación de su pH. por ejemplo. M. 2) bases débiles y sales muy disociables de estas bases. El pH de las disoluciones amortiguadoras depende de la proporción en éstas entre ácido y sal. K K es la constante de disociación electrolítica del ácido (base). el amortiguador de borato es ácido bórico/borato sódico. los aminoácidos. La capacidad amortiguadora la poseen también los electrolitos anfóteros. el amortiguador amónico es hidróxido amóni-oriiro amónico. 3) sales mono y bisustituidas de ácidos polibásicos.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 20 bicarbonato es ácido careo/bicarbonato sódico. deben ser agregados a 1 l de disolución amortiguadora para desplazar su pH en una unidad. Csal es la concentración de la sal. es posible preparar disoluciones con diferentes pH dentro de los límites determinados por la constante de disociación de los ácidos (bases).C. Claudio Arzola Alvarez. y a una proporción dada siempre invariable. Cada disolución amortiguadora se caracteriza por una capacidad amortiguadora determinada. por ejemplo el amortiguador de fosfato es NaH2PO4/Na2HPO4. De la fórmula citada se deduce que cambiando la proporción entre las concentraciones de los componentes de la mezcla amortiguadora. Esta capacidad es la medida de la acción amortiguadora de la disolución y se esa por el número de equivalentes gramo de ácido o de base que. La calidad amortiguadora de las disoluciones depende de su concentración absoluta y con la dilución disminuye de una manera directamente proporcional al dilución. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . grado de la Dr. ya que la proporción do los componentes que constituyen la mezcla amortiguadora se queda en este caso invariable. CbasP es la concentración de la base. ejemplo. cuando se preparan las disoluciones amortiguadoras se puede calcular teóricamente según fórmula ¡e (-'ácido es la concentración del ácido. De aquí que.

disolución 0. 1. Claudio Arzola Alvarez. Se numeran ocho tubos de ensayo y se vierten en caí uno de ellos disoluciones 0. 2. Marcha de los trabajos.15 N. fosfato sódico disustituido. cuentagotas. puede ser preparada una serie de disolución amortiguadoras con diferentes.6 Preparación de las disoluciones amortiguadoras Anteriormente fue indicado que el pll de las disolución amortiguadoras depende de la naturaleza de las sustanci químicas que constituyen la mezcla amortiguadora y de proporción entre estas sustancias en la disolución. En caso de disponer de un potenciómetro. En seis tubos de ensayo previamente numerados se vierten las disoluciones de ácido acético y acetato sódico en las siguientes proporciones: Pipeta A las mezclas preparadas se añaden 2 gotas de indicador universal y por el carácter de la coloración se determina pH de cada mezcla. ácido acético 0.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 21 1. disolución 0.1 N. Soporte con tubos de ensayo. se determina el pH de las mezclas preparadas por el método potenciometrico. Pipetas graduadas 10 ml. M. Partiendo de estos hechos. Reactivos. disolución 0.15 M.C. Fosfato potásico monosustituido. Instrumentos.1 acetato sódico. Indicador universal. pero conocidos pH. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .15 M de KH2P04 en las siguientes proporciones Dr.

utilizando para ello los patrones estándar con los mismos indicadores. Se añade 1 ml de indicador en cada uno de los ocho tubos de ensayo que contienen 6 mi do mezclas amortiguadoras preparadas. Los resultados de la determinación del pH se anotan en la tabla indicada más arriba. M. El contenido de los tubos de ensayo se mezcla cuidadosamente y.C. Las disoluciones que se quedan en los tubos de ensayo 1 y cS se utilizan para la determinación aproximada del p 11 con ayuda de mi indicador universal y a base de esta determinación se selecciona un indicador unicolor apropiado del grupo de nitrofenoles.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 22 El contenido de cada tubo de ensayo se mezcla cuidadosamente. partiendo del color que se desarrolla en el líquido. Dr. Claudio Arzola Alvarez. so determina el pH de cada disolución amortiguadora. para la determinación exacta del pH de las disoi liciones amortiguadoras preparadas. En otros ocho tubos de ensayo numerados previamente se vierten G ml de disoluciones amortiguadoras respectivamente preparadas. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .

UACh febrero 2006 . Arzola.Serie de Prácticas 2 Carbohidratos C. C. Holguín Facultad de Zootecnia.

tendrás la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemático de un grupo de sustancias que constituyen la mayor parte de la dieta de los rumiantes. M. Puesto que el desarrollo de esta práctica se considera una actividad integradora. Al mismo tiempo. deberás entregar un informe del desarrollo y resultados de la práctica. el cual deberá ser individual. Al terminar. Universidad Autónoma de Chihuahua Responsable: Dr. Claudio Arzola Alvarez. con miras a que tu posterior desempeño profesional sea de alto nivel. Claudio Arzola Alvarez Número de alumnos por práctica: Tres Propósito de la práctica: Al terminar esta práctica. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Página 24 . La pulcritud y el orden será un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades. Dr. siendo dicho protocolo además un instrumento de comunicación adecuada con colaboradores y colegas. deberás de observar una conducta adecuada durante la misma. Sin embargo. el protocolo deberá ser entregado en forma individual para su evaluación. con actitudes de respeto a tus compañeros y maestros. puesto que la práctica se llevará a cabo en grupo. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos. incluyendo la determinación cualitativa y cuantitativa de algunos de los mas importantes. serás capaz de entender la naturaleza de los carbohidratos y la importancia práctica del conocimiento de los mismos. Carbohidratos Facultad de Zootecnia. obtendrás menor calificación.C.2.

sirven de material para la biosíntesis de los compuestos de otras clases y juegan un papel importante en la bioenergética de la célula. en el caso de trisacáridos. Entonces.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 25 Carbohidratos2 Los hidratos de carbono pertenecen a los compuestos poli-funcionales que contienen grupos carbonilo (aldehilico o cetónico) y grupos hidroxilo alcohólicos. Los monosacáridos. se clasifican en triosas. los oligosacáridos se desintegran formando varias moléculas de monosacáridos (dos. Los hidratos de carbono están muy difundidos en la naturaleza. Los animales. Editorial MIR.V. Los oligosacáridos y polisacáridos son hidratos de carbono complejos y al ser calentados con ácidos diluidos o hidrolizados por enzimas. CHECHETKIN et. son insolubles en agua o forman disoluciones coloidales. los glicolípidos y en algunas vitaminas y coenzimas. 2 . hexosas. A. Los hidratos de carbono entran en la composición de los ácidos nucleicos. según el número de átomos de carbono en la molécula. pentosas. Por lo tanto. teniendo en sus moléculas átomos de carbono asimétricos. aprovechan las sustancias acumuladas por las plantas. etc. ellos poseen simultáneamente propiedades de aldehidos o catonas y de alcoholes polihidroxílicos. Los hidratos de carbono participan en la construcción de las estructuras del organismo vivo. las glicoproteínas. oligosacáridos y polisacáridos. se desintegran en monosacáridos.). sobre todo en el reino vegetal. Los hidratos de carbono comprenden un grupo amplio de compuestos naturales que se dividen en monosacáridos. tres. no aptos a tal acumulación de energía solar. Los polisacáridos forman mediante la hidrólisis un gran número de moléculas de monosacáridos. 1984. Todos los monosacáridos naturales. Ellos poseen una masa molecular muy elevada. al. para los tetrasacáridos. La fórmula genérica de los monosacáridos es CnH2nOn. heptosas. Ellos constituyen los productos finales de la síntesis fotoquímica en las plantas verdes. Moscú. tetrosas. cuatro. en el caso de disacáridos. son ópticamente activos y giran el plano de la luz polarizada. etc. Adaptado de PRACTICAS DE BIOQUÍMICA DEL GANADO Y AVES DE CORRAL.

El quimismo de la reacción se reduce al hecho de que mediante la acción del ácido sulfúrico concentrado se forma furfural a partir de las pentosas. igual cantidad de disolución de timol. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Reacciones de reconocimiento de los hidratos de carbono Reacción con α-naftol Esta reacción es general para los hidratos de carbono y se aplica para detectar la presencia de éstos en los materiales biológicos. que desempeña un papel importante en la protección de las células contra la penetración en ellas de microorganismos y virus. Con tales hidratos de carbono están relacionadas las propiedades inmunoquímicas de los tejidos. 2.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 26 Como componentes integrantes de las glicoproteínas. a partir de las Instrumentos. 2. En el primer tubo de ensayo se añaden de 4 a 6 gotas de disolución de α-náftol y en otro. Prueba con naftorresorcina La reacción se basa en la capacidad de los hidratos de carbono de condensarse con los sistemas aromáticos.2%. Sacarosa. Claudio Arzola Alvarez. M.C. En dos tubos de ensayo se vierten 2 ml de disolución de sacarosa en cada uno.2. Timol. por la pared. disolución al 1% en alcohol etílico. los hidratos de carbono participan en la formación de la capa exterior adyacente a la membrana. 5-hidro-ximetilfurfural hexosas. 1 ó 2 ml de ácido sulfúrico concentrado sin mezclarlo con la capa acuosa. Marcha de los trabajos. a. En ambos tubos de ensayo se vierten con cuidado.Naftol. el ácido Dr. Soporte con tubos de ensayo.1. Así. Reactivos. disolución al 0. En el contacto de las capas aparece una coloración violeta (en el caso de a-naftol) y roja (en el caso de timol). Acido sulfúrico concentrado. formando sustancias coloreadas. disolución al 1%.

Naftorresorcina. Soporte con tubos de ensayo. Ácido clorhídrico concentrado. Reactivos. La capa etérica (bencénica) se tiñe de color verde azulado. M. se añade 1 mi de disolución de naftorresorcina y 1 mi de ácido clorhídrico concentrado. Claudio Arzola Alvarez. disolución alcohólica al 1%. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Marcha de los trabajos.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 27 glucurónico al condensarse con naftorresorcina. 2. Luego se enfría. se encuentran en diferentes formas tautoméricas. se le añade de 1 a 2 mi de éter o benceno y agita. Benceno. disolución al 5%. La mezcla se calienta con cuidado y se hierve durante 1 min. Monosacáridos Los monosacáridos en disoluciones acuosas.C. entre las cuales se establece un equilibrio dinámico: Dr. Éter.3. una coloración violeta. En un tubo de ensayo se vierten de 5 a 6 mi de disolución de glucosa. mientras que la xilosa y la arabinosa proporcionan una coloración azul oscura y los ácidos urónicos. forma derivados de dinaftil-metano o xantina: Instrumentos. Igual coloración dan la galactosa y la mañosa. Glucosa.

reduciendo a su vez las sales de óxido cúprico (valencia +2) a sales de óxido cuproso (valencia +1) a sales de plata. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Prueba con el hidróxido cúprico (II). M.C. se denominan reductores. Claudio Arzola Alvarez. hasta plata metálica. reacción de Trommer En disolución alcalina los mono y disacáridos reductores reducen el hidróxido cúprico (II) a óxido cuproso (I): Dr. Reacciones de reconocimiento le los hidratos de carbono reductores Los hidratos de carbono cuya molécula contiene un grupo carbonilo libre. 2. Estos azúcares en medio alcalino tienen la capacidad de oxidarse. hasta bismuto metálico. las sales de óxido de bismuto.4.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 28 Aldohexosas En los organismos de los animales y del hombre la glucosa la galactosa se encuentran con mayor frecuencia.

se forma un precipitado negro de óxido cúprico. agitándolo. Claudio Arzola Alvarez. 2. En un tubo de ensayo se vierten de 1 a 2 ml de disolución de glucosa. Glucosa.5. Al calentar esta disolución. La diferencia consiste en que en las reacciones no se emplea hidróxido cúprico libre. Se forma un precipitado de hidróxido cúprico de color azul claro. el precipitado de hidroxido cúprico (II) formado se disuelve. coloreando el líquido de color azul claro. la disolución de sulfato cúprico. en la reacción de Trommer debe evitarse el exceso de sulfato cúprico. En presencia de la glucosa. Este último se encuentra en estado combinado y forma parte del reactivo de Fehling. La capa superior del líquido se calienta hasta la ebullición. El licor de fehling representa un compuesto complejo de cobre con tartrato de sodio y potasio de color azul. Por lo tanto. Hidróxido sódico. Sulfato cúprico. El exceso del último durante el calentamiento pierde agua y se transforma en óxido cúprico negro. disolución al 10%. M. se añade. Marcha de los trabajos. disolución al 1%. lo que oscurece la reacción principal y constituye un defecto del método: Cu (OH)2→ CuO + H2O. En otro tubo de ensayo se mezclan 2 ó 3 ml de disolución de hidróxido sódico con varias gotas de disolución de sulfato cúprico.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 29 Instrumentos. Reacción con el licor de Fehling La reacción con el licor o reactivo de Fehling se basa en mismo principio que la reacción de Trommer. En su composición ion cobre en estado de oxidación « + 2» se encuentra forma de un compuesto complejo con Dr. La aparición de un precipitado amarillo (hidróxido cuproso (I)) y luego rojo (óxido cuproso) indica que la reacción de Trommer es positiva. disolución al 1%. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . gota a gota. Soporte con tubos de ensayo. Disolución de glucosa no se añade. un volumen igual de disolución de hidróxido sódico y. Reactivos.C. ya que la reacción entre el hidrato de carbono reductor y el hidróxido cúprico transcurre cuantitativamente.

A 1 ó 2 ml de disolución de glucosa se añade igual volumen de reactivo de Fehling y se agita.5 g de sosa caústica disuelta en 100 ml de agua destilada. Reacción con las sales de bismuto Para detectar los azúcares reductores se emplean frecúentemente las sales de bismuto.65 g de cristales no aireados de vitriolo azul (CuSO4. incluso con exceso del reactivo dado.C. Reactivo de Nylander (preparación: 2 g de nitrato dibásico de bismuto y 4 g de tartrato sodo-potásico (sal de Rochelle) se disuelven en 100 ml de sosa cáustica al 10% y se hierven hasta disolverse la mayor parte de la sal de bismuto. Reactivo de Fehling (preparación: disolución 1. entra nitrato dibásico de bismuto que. Glucosa. El precipitado formado se enfría y se separa por filtración). Al reaccionar con la glucosa. En un matraz de 500 ml se disuelven. En la composición del reactivo Nylander. Por eso durante el calentamiento. Marcha de los trabajos. Glucosa. se mezcla bien y el volumen se lleva hasta la raya de enrase. Claudio Arzola Alvarez. Reactivos. no se forma el precipitado negro de CuO y no oscurece la reacción con pequeñas cantidades de glucosa. el hidróxido de bismuto se reduce a bismuto metálico y el líquido adquiere color negro.6. Dr. Disolución 2.5H2O).Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 30 tartratos. forma hidrodróxido de bismuto. disolución al 1%. Soporte con tubos de ensayo. análogo al de Fehling. un precipitado amarillo de hidróxido cuproso CuOH o bien precipitado rojo de óxido cuproso Cu2O. 2. Aparece. el volumen se lleva hasta la raya de enrase. M. Instrumentos. En un matraz de 500 ml se disuelven 34. Antes de utilizarse las disoluciones 1 y 2 se mezclan en proporciones iguales). La capa superior del líquido se calienta hasta la ebullición. Soporte con tubos de ensayo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . disolución al 1%. primero en una pequeña cantidad de agua destilada y al disolverse los cristales. Este último se encuentra en estado combinado con el tartrato sodo-potásico. en pequeña cantidad de agua destilada. al igual que en la reacción de Trommér. Instrumentos. en presencia de hidróxido sódico. se añaden 62. 173 g sal de Rochelle (tartrato sodico-potásico). Reactivos.

2. Reacción con fenilhidrazina Una particularidad importante de los monosacáridos consiste en su capacidad de entrar en reacción con la fenilhidrazina y formar fenilhidrazonas y osazonas. con la fenilhidrazona formada reacciona otra molécula de fenilhidrazina y. 10).C. Por eso. de forma característica. Al reaccionar los monosacáridos con la fenilhidrazina. oxidándola. lo que conduce a la formación de compuestos poco solubles en agua: osazonas. M. Dr. de los cuales se forman las osazonas. La reacción de formación de osazonas transcurre en tres etapas. La forma de los cristales de osazonas es variable y depende de la estructura de los monosacáridos. Claudio Arzola Alvarez. que producen cristales de color amarillo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 31 Marcha de los trabajos. como también para distinguir unos azúcares de otros (fig. El líquido oscurece debido a la formación de un precipitado negro de bismuto metálico. en la primera etapa se forman fenilhidrazonas solubles en agua (reacción de sustitución). A 2 ml de disolución de glucosa se añade 1 ml de reactivo de Nylander y se hierve durante 2 ó 3 min. Las osazonas de diferentes monosacáridos se distinguen por la forma de los cristales. punto de fusión. estas propiedades se utilizan para aislar los monosacáridos de la disolución. La tercera molécula de fenilhidrazina entra en reacción de sustitución con el grupo carbonilo recién formado.7. con la fenilhidrazonas solubles en agua (reacción de sustitución). En la segunda etapa. solubilidad y actividad óptica. transforma el grupo hidroxilo en grupo carbonilo. En la segunda etapa.

Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 32 2. Claudio Arzola Alvarez. M.8. Reacción de reconocimiento de la sacarosa La sacarosa es un disacárido no reductor y durante la hidrólisis (por ácido o enzimáticos) su molécula se descompone en glucosa y fructosa: Sacarosa Dr. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .C.

La fermentación acética. butírica. láctica tienen lugar en el rumen de los rumiantes. etc. Marcha de los trabajos. Esto se aprovecha para distinguir las hexosas de las pentosas. Al añadir exceso de hidróxido sódico (1 mi) el líquido adquiere un color violeta. La maltosa y la sacarosa se fermentan fácilmente con las levaduras.). disolución al 10%. En las levaduras están presentes las enzimas maltasa y sacarasa. propiónica. La fermentación alcohólica se utiliza en la industria con el fin de obtener alcohol etílico. En la mayoría de los casos este proceso va acompañado con el desprendimiento de productos gaseosos (CO2. En un tubo de ensayo se vierten de 2 a 3 ml de disolución de sacarosa. de las pentosas. disolución al 2%. Instrumentos. Dr. al fin y al cabo. mientras que la lactosa no se fermenta. puede someterse a la fermentación alcohólica.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 33 La sacarosa da con el sulfato de cobalto en un medio alcalino un complejo de color violeta. disolución al 1%. Sulfato de cobalto. la fermentación láctica. Hidróxido sódico. M. H2. se añaden varias gotas de disolución de sulfato de cobalto. pero no tienen la enzima lactasa. Claudio Arzola Alvarez. La fermentación metánica produce la timpanitis (distensión) en los rumiantes. 2. Reacciones de fermentación de los hidratos de carbono La fermentación es un proceso complejo de descomposición de los hidratos de carbono bajo la acción de las enzimas producidas por diferentes microorganismos. en la industria alimenticia para la obtención de diferentes productos lácteos y en la ganadería en el proceso de ensiláje. Sacarosa. Según los tipos de microorganismos y de los productos finales se distinguen varias formas de fermentación. etc. por ejemplo.C. a la formación de productos tales como alcohol etílico.La fermentación conduce. ácido láctico. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . La lactosa bajo la acción de las bacterias que la desdoblan.9. láctica y butírica. A la fermentación alcohólica se someten solamente las hexosas a diferencia de otros monosacáridos. Reactivos. Soporte con tubos de ensayo.

los polisacáridos pueden considerarse como glicosídicos. las cadenas de amilopectina son muy ramificadas y tienen en los puntos de ramificación enlaces glucosídicos 1-6. Claudio Arzola Alvarez. Almidón El almidón es el producto final de la síntesis fotoquímica que se verifica en las hojas verdes.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 34 Polisacáridos Éstos son hidratos de carbono de elevado peso molecular e mediante la hidrólisis se desdoblan en gran número restos de monosacáridos. La celulosa. Reacciones coloreadas del almidón Una reacción característica para reconocer el almidón es la aparición de una coloración azul al combinarse con la disolución de iodo en ioduro potásico. Cada resto del monosacárido á unido con los restos vecinos por enlaces glicosídicos. El almidón es una sustancia heterogénea. en particular del almidón.10. M. por enlaces glucosídicos 1-4. La amilopectina también está compuesta de un gran número de unidades de a-Dglucosa unidas. con iodo es un proceso complejo. La amilosa incluye de 1000 a 6000 unidades de a-D-glocosa unidas por enlaces glucosídicos 1-4. Ella tiene forma de molécula alargada lineal no ramificada. Este proceso Dr. Las cadenas poliglicosídicas que forman las moléculas de los polisacáridos pueden ser no ramificadas celulosa) o ramificadas (glicógeno). Sin embargo. Está compuesto de dos fracciones: la amilosa (de 10 a 20%) y la amilopectina (de 80 a 90%). Por lo tanto. 2. el almidón y el glicógeno son homopolisacáridos típicos. como en la amilosa. En el curso de la reacción se forma un complejo del polisacárido con iodo. Las unidades de los inosacáridos que forman parte de la composición de la molécula del polisacárido pueden ser iguales (homopolisácárídos) ó diferentes (heteropolisacáridos). En el agua la amilopectina se hincha y produce un engrudo. Para el organismo de los animales el almidón constituye una sustancia nutritiva importante. La reacción de los polisacáridos. La coloración que aparece depende de la estructura de polisacárido. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . es soluble en agua.C. un polisacárido de reserva.

Debido a la inestabilidad del complejo de adsorción entre iodo y almidón. Claudio Arzola Alvarez. Almidón. En un tubo de ensayo se vierten 2 ó 3 ml de disolución de almidón y se añade 1 gota de disolución de Lugol. la amilopectina y el glicógeno. 2 ó 3 ml de alcohol etílico. 2. Para la reacción con el almidón la disolución obtenida sé diluye con agua destilada en proporción 1:5). él se descompone con la formación de los fragmentos de diferente tamaño llamados dextrinas. Éstas se distinguen entre sí en cuanto a la masa molecular y al carácter de la coloración que surge al tratarlas con la disolución de iodo. por ejemplo. la tercera parte se calienta. disolución al 10% Alcohol etílico.C. El líquido se colorea de azul. Soporte con tubos de ensayo. al calentamiento y a la acción de los álcalis con los cuales el iodo forma hipoioditos. Reactivos. En la tercera muestra la coloración vuelve a aparecer después del enfriamiento. M. En el caso de los polisacáridos de cadenas ramificadas. Hidróxido sódico. junto con el proceso de formación del complejo.11 Hidrólisis acida escalonada del almidón En el curso del calentamiento del almidón con ácido clorhídrico diluido. a la segunda. esta reacción es sensible a la presencia de alcohol. Más abajo se da el esquema de la hidrólisis acida del almidón: Dr. Se ha demostrado la relación entre la longitud de las cadenas laterales y la coloración resultante de la reacción con yodo. El contenido del tubo de ensayó se divide en tres partes: a la primera parte se le añade 1 ó 2 ml de disolución de hidróxido sódico. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Instrumentos. Disolución de Lugol (preparación: en 100 ml de agua se disuelven 20 g de ioduro potásico y 10 g de iodo. La coloración desaparece siempre. Esto indica que la prueba con iodo debe realizarse sólo con disolución de almidón fría. disolución al 1 %. Marcha de los trabajos. tiene gran importancia también el proceso de adsorción de iodo sobre la superficie de las moléculas ramificadas.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 35 es bien expresado en el caso de la amilosa.

Se mezcla cuidadosamente y se hierve a fuego abierto. Licor de Fehling. Pipetas. La coloración violeta azul aparecida indica presencia de las amilodextrinas en disolución. Soporte con tubos de ensayo. Ácido clorhídrico concentrado. M. Papel de tornasol.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 36 Instrumentos. En un tubo de ensayo se vierten de 3 a 5 ml de disolución de almidón y se añaden varias gotas de ácido clorhídrico concentrado. Claudio Arzola Alvarez. Almidón. aparece una coloración rojiparda condicionada Dr. Disolución de Lugol. Hidróxido sódico. disolución al 10%.C. Para esto se extraen varias gotas de disolución una pipeta y se vierten en un tubo de ensayo que contenga 5 ó 6 ml de agua destilada. El tubo de ensayo con la disolución de almidón se hierve 1 ó 2 min mas y se repite la misma prueba con iodo. Reactivos. se añaden 1 ó 2 gotas de disolución de Lugol. disolución al 1%. Marcha de los trabajos. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Luego de 1 ó 2 min iniciada la ebullición se toma una muestra para la reacción con iodo.

12. Instrumentos. La reacción con iodo será negativa: el líquido adquiere un color amarillo a cuenta de la coloración de la disolución de Lugol. El almidón se desintegra al final hasta la glucosa. Marcha de los trabajos.5 ó 1 ml de saliva. Hidrólisis enzimática del almidón Bajo la influencia de la enzima amilasa el almidón se desdobla con la formación de un disacárido. se añade licor de Fehling y se calienta. Claudio Arzola Alvarez. Soporte con tubos de ensayo. produciendo como productos intermedios acrodextrinas. Se forma un precipitado amarillo de hidróxido cuproso. se mezcla cuidadosamente y se pone en ei baño maría durante 10 ó 15 min a una temperatura de 37 a 40° C.C. la ausencia de coloración característica demuestra que la hidrólisis ha finalizado. Reactivos. M. Preparado de saliva (1 ó 2 ml de saliva se coloca en un vaso y se diluyen 5 veces con agua destilada. se mezclan cuidadosamente). 2. Se hierve nuevamente la disolución y pasados 2 ó 3 min se repiten las pruebas con iodo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . de óxido cuproso que indica la presencia en la disolución de productos de la hidrólisis que poseen propiedades reductoras. Pipetas. según un papel de tornasol. termómetro. La presencia de la glucosa se confirma por la reacción positiva con el licor de Fehling. con disolución de hidróxido sódico. maltodextrinas y maltosa. Él se deposita casi en todos los órganos y tejidos.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 37 por la presencia de las en dextrinas. En un tubo de ensayo se vierten 3 a 5 ml de disolución de almidón y se añaden 0. Los demás reactivos son los mismos que en el experimento anterior. o rojo. la maltosa. Baño maría con Glicógeno El glicógeno sirve de reserva principal de hidratos de rbono en el organismo de los animales. Se hacen repetidamente las pruebas con iodo. El hidrolizado de almidón se neutraliza. El depósito principal Dr. luego se descompone por la maltasa hasta la glucosa.

por su constitución química el glicógeno se asemeja a la amilopectina. Hidróxido sódico. Marcha de los trabajos. Se extrae el líquido.p. disolución al 2. el precipitado se disuelve en 2 ml de Dr. M. Cloruro sódico cristalino. Etanol. en el curso de la hidrólisis el glicógeno da una serie de productos intermedios. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . La probeta se coloca en el baño maría hirviendo. la disolución de glicógeno adquiere una coloración rojiparda de diferentes intensidades y matices.m. Claudio Arzola Alvarez. Vaso con hielo. disolución al 10%. Hidróxido potásico. Se sedimenta el precipitado del glicógeno. En una probeta centrífuga se ponen 1. luego el disacárido la maltosa y.5 ó 2 g de hígado y se vierten 2 ml de disolución de hidróxido potásico al 60%. El glicógeno es un polímero de a-D-glucosa en que las unidades de glucosa están unidas entre sí por los enlaces glicosídicos 1-4 y 1-6. Reactivos. Al añadir iodo. se enfría y se le añaden de 8 a 10 ml de etanol. Reactivos.5%.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 38 de glicógeno son el hígado (de 2 a 5%) y los músculos (de 0. Ácido clorhídrico. Soporte con tubos de ensayo. Muestra pesada de hígado (de 1. 2. el monosacárido la glucosa. Luego la probeta se quita del baño. Pipetas. disoluciones al 15% y al 60%.5 a 2%) en los cuales esta acumulado hasta 60% de su contenido en el organismo. Licor de Fehling. Varillas de vidrio. Disolución de Lugol. que se encuentra encima del precipitado. el contenido de la probeta se remueve frecuentemente con una varilla de vidrio.5 a 2 g). disolución al 10%. Éste se separa mediante la centrifugación durante 5 ó 10 min a 3000 r. Igual que el almidón. Soporte con probetas de centrífuga y tubos de ensayo corrientes. La probeta se pone en el vaso con hielo donde se mantiene durante 20 ó 30 min. Hidróxido sódico. las dextrinas.13 Reacción del glicógeno con el iodo Instrumentos. lo que depende de la estructura del glicógeno que difiere para distintas especies de animales y se determina según al grado de ramificación de la macromolécula.C. Baño María. Glicógeno. finalmente. disolución al 1%. Centrífuga. Reconocimiento del glicógeno en los tejidos animales Instrumentos.

Acto seguido. Luego el precipitado del glicógeno se hidroliza y se demuestra la presencia de la glucosa en su composición. Dr.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 39 disolución de hidróxido potásico al 15%. se le añade igual volumen de licor de Fehling y la mezcla se hierve. M. Claudio Arzola Alvarez. el contenido se enfría. El precipitado formado del glicógeno se separa mediante la centrifugación. se añaden 8 ó 10 ml de etanol y la mezcla obtenida se enfría. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . se neutraliza con la disolución de hidróxido sódico. Para ello se añaden al precipitado 3 ó 4 ml de disolución de ácido clorhídrico y se hierve durante 15 ó 20 min en el baño de María. Se forma un precipitado rojo de óxido cuproso .C.

Holguín Facultad de Zootecnia. UACh febrero 2006 . C.Serie de Prácticas 3 Lípidos C. Arzola.

Universidad Autónoma de Chihuahua Responsable: Dr. Puesto que el desarrollo de esta práctica se considera una actividad integradora. serás capaz de manejar con propiedad el análisis de los lípidos y sustancias afines.C. Claudio Arzola Alvarez. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos. tendrás la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemático del grupo de sustancias alimenticias que contribuyen significativamente con la aportación energética de las dietas de los animales con lo que lograrás una eficiente comunicación con colaboradores y colegas. con actitudes de respeto a tus compañeros y maestros. Al mismo tiempo. el protocolo deberá ser entregado en forma individual para su evaluación. La pulcritud y el orden será un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades. puesto que la práctica se llevará a cabo en grupo. deberás entregar un informe del desarrollo y resultados de la práctica. obtendrás menor calificación. Sin embargo. deberás de observar una conducta adecuada durante la misma. Podras constatar algunos fenómenos de importancia en cuanto a la respuesta física de los lípidos y relacionar esta con fenómenos de producción agropecuaria. con miras a que tu posterior desempeño profesional sea de alto nivel. Claudio Arzola Alvarez Número de alumnos por práctica: Tres Propósito de la práctica: Al terminar esta práctica. M. Al terminar. el cual deberá ser individual. Los lípidos y su metabolismo Facultad de Zootecnia. Dr. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 41 .3.

A. los esteróles (estearinas). CHECHETKIN et. disolvente para las sustancias orgánicas y como precursores de otros componentes de la célula (vitaminas del grupo D. En el organismo de los animales casi todos los lípidos se encuentran en complejo con las proteínas. los hidratos de carbono y otras sustancias. A los complejos se les atribuye una gran significación en el cumplimiento de una serie de funciones importantes. 1984. gangliósidos). Editorial MIR. como también una parte considerable de los procesos de metabolismo intermedio. 3 .Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 42 Los lípidos y sus metabolitos Glicéridos (grasas)3 Se denomina lípidos un grupo numeroso de sustancias constituidas como los esteres y caracterizadas por su solubilidad en disolventes orgánicos y por su insolubilidad en agua. que son elementos estructurales de las células. las ceras. Así. son ricas en lipoproteínas las mitocondrias. en los cuales se verifican los procesos de oxidación libre y conjugada con la fosforilación. fosfolípidos y glicolípidos (cerebrosidos. Moscú. al. Los lípidos desempeñan un papel muy importante en calidad de componentes estructurales de las membranas celulares.V. Las grasas son esteres de un alcohol trivalente (la glicerina y los restos de ácidos grasos de cadena larga que tienen la estructura general siguiente: Adaptado de PRACTICAS DE BIOQUÍMICA DEL GANADO Y AVES DE CORRAL. ácidos biliares y hormonas de naturaleza de esteroides). A ellos pertenecen los glicéridos (grasas). como fuente de energía.

etc. y sólo un 2 ó 3% de ellos son glicéridos simples (tripalmitato. favorecen la asimilación de vitaminas liposolubles A. Aceite vegetal. A más. D. Reactivos. Claudio Arzola Alvarez. Dr. araquidónico. etc. Marcha de los trabajos. E y K. ácidos grasos libres. los aceites. Sobre el vidrio de reloj se aplica una gota de aceite. Como regla. como también para la biosíntesis de las prostaglandinas que constituyen un gran grupo de hormonas de gran actividad biológica.C. Los ácidos grasos no saturados presentes en las grasas linoleico. En el organismo de los animales los glicéridos son en su mayoría mixtos.Manual del laboratorio de Bioquimica En la composición de la molécula Lípidos… de una grasa Pagina 43 natural entran. son necesarios parí regulación de los procesos de oxidación-redución en las células.1. vitaminas. M. se añade una gota de Sudán III y se mezcla. Las grasas tienen gran importancia para el organismo como una de las fuentes de energía (grasa de reserva). linolénico. corrientemente. Vidrio de reloj o placas de vidrio. disolución al 0. El colorante Sudan III se aplica en las investigaciones histológicas para localizar las grasas en los tejidos. ellas sirven de componentes estructurales del protoplasma celular (grasa estructural). 3.) constituyen una mezcla compleja de varios glicéridos. y de otras sustancias biológicamente activas. esteárico. se mezcla y se deja en reposo durante 24 h por lo menos). protegen los órganos. oleico. proteínas.2% (preparación: en 200 mg de Sudán III se añaden 100 ml de alcohol etílico al 70% calentado en un baño maría. Sudán III. todas las grasas naturales (el sebo de res. Reacción de la grasa y el aceite con el Sudán III Instrumentos. los restos de ácidos grasos saturados y no saturados (palmítico. Se observa la aparición de una coloración naranja de la mezcla. la manteca de cerdo. Reacciones de reconocimiento de las grasas. linoleico. participan en la termorregulación del organismo. triestearato. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . nervios y vasos los deterioros mecánicos. carotinoides y pigmentos. trioleato).

esterinas. La formación de la acroleina en el tubo de ensayo con la grasa se reconoce por la aparición de un olor característico. Marcha de los trabajos. que es un aldehido no saturado. mezcla en los tubos de ensayo se agita enérgicamente. en particular. Énel otro tubo de sayo no se forma acroleína. Cloroformo Marcha de tos trabajos. En un tubo de ensayo se vierte ó 10 gotas de aceite. Reactivos. en el Dr.2. en el tercero 2 ml de benceno y en el cuarto 2 ml de cloroformo. El experimento debe realísarze en la campana de humos. Grasa o aceite vegetal. Mechero de gas o infer-nilla.3 a 0.Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 44 3. Claudio Arzola Alvarez. Aceito de girasol. Instrumentos. Instrumentos. En el primer tubo añaden 2 ml de agua. Benceno. Determinación de la glicerina en las grasas En el curso del calentamiento de una grasa en presencia de agentes deshidratantes. en el segundo 2 ml de alcohol. M. Alcohol etílico. En cuatro tubos de ensayo se vierten de 5 a 7 gotas de aceite dé girasol.C. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . La reacción de formación de la acroleína se hace con el propósito de reconocer la glicerina libre o ligada en la molécula de grasa. acre intenso. Solubilidad de las grasas El trabajo se realiza con el aceite vegetal y diferentes solventes. Soporte con tubos de ensayo. La mezcla en los tubos de ensayo se calienta con cuidado pero fuertemente. Soporte con tubos de ensayo. Ractivos. Se observan los siguientes cambios: en el primer tubo se forma una emulsión inestable que se separa rápidamente. 3.5 g de aceite.4. y ella se convierte en acroleína. En ambos tubos se añade aproximadamente 1 g de hidrosulfato potásico. Cera. Hidrosulfato potásico (sódico). en el otro se pone de 0. inositolfosfolípidos y esfingolípidos) dan reacción de acroleína negativa. Los lípidos que no contienen glicerina (ceras. cristalino. de hidrosulfatos de potasio o sodio se desprenden fácilmente de la glicerina dos moléculas de agua.

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segundo una disolución turbia, que indica la mala solubilidad del aceite en alcohol; en el tercero y el cuarto tubos de ensayo se forman disoluciones transparentes debido a una buena solubilidad del aceite en benceno y cloroformo.

3.5. Determinación de la temperatura de fusión
La temperatura de fusión de una grasa es uno de los indicadores que permite, en cierta medida, juzgar sobre su asimilación. Las grasas que funden a baja temperatura se emulsifican más fácilmente y, en consecuencia, se asimilan con mayor facilidad. La temperatura de fusión de los glicéridos es condicionada por sus ácidos grasos constituyentes. Como regla, el punto de fusión de la grasa es tanto más bajo cuanto más alto es el contenido de los ácidos de cadena corta o no saturados. A la temperatura ambiente las grasas de origen vegetal son líquidos, puesto que en su composición la cantidad de ácidos grasos no saturados alcanza un 95 ó 97%. En la composición de las grasas sólidas poco fusibles de origen animal prevalecen los ácidos grasos de cadenas de carbono largas. Las grasas naturales no poseen un punto de fusión determinado, ya que no son sustancias químicas individuales, sino mezcla de diferentes glicéridos, ácidos grasos libres, pigmentos, vitaminas y otras sustancias. La temperatura de fusión de las grasas depende de la especie del animal y oscila dentro de límites siguientes en °C: ovejas 49—54, venados 48—52, ganado vacuno 48—50, cabras 46—48, camellos 36-48, cerdos37— 45, caballos28—32,perros23—27, conejos 22- 25. Instrumentos. Capilar de vidrio de 1.5 ó 2 mm en diámetro. Termómetro. Tubo de ensayo. Vaso químico. Lupa. Reactivos. Grasa de origen animal (fundida y filtrada). Marcha de los trabajos. El capilar limpio y seco se llena de grasa a una altura de unos 2 cm y se mantiene durante 1 h sobre hielo o en agua corriente fría. Terminado el enfriamiento, la parte del capilar llenada de grasa se corta, dejando la columna de grasa de 0.5 cm de altura. El capilar se ajusta mediante un anillo de goma en la parte inferior del termómetro de tal manera que su punta llena de grasa Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua

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sea dirigida hacia arriba y su otro extremo libre de grasa, hacia abajo. El termómetro con capilar se mete en el tubo de ensayo donde se ajusta con ayuda de un tapón. El tubo de ensayo se sumerge en el vaso con agua y se sujeta en la patilla del soporte en posición vertical. El nivel de agua en el vaso debe ser más alto que el término superior del capilar. El agua se calienta poco a poco, removiéndola frecuentemente, y a través de la lupa. Se observa el aumento de la temperatura y el estado columna de grasa en los capilares. La indicación del termómetro en el momento cuando la grasa empiece a fluir por el capilar y en la parte superior de este último se forme un espació libre, se anota como la temperatura de fusión. Entre el inicio y el final de la transición de la grasa desde el estado sólido al líquido transcurre cierto tiempo. Por lo tanto, para evitar errores, la temperatura de fusión grasa se determina por lo menos dos veces, y el resultado se calcula como promedio.

3.6. Determinación del número acídico
El número acídico caracteriza la presencia de ácidos grasos libres en la grasa. El número acídico se expresa en cantidad de miligramos de hidróxido potásico necesarios para neutralizar los ácidos grasos libres en 1 g de grasa. Este índice es uno de los indicadores más importantes la calidad de la grasa. El número acídico de la grasa fresca de distintos tipos no sobrepasa, comúnmente, una magnitud de 1.2 a 3.5. En el curso de almacenaje de la grasa tiene lugar la hidrólisis de los glicéridos y acumulación de los ácidos grasos libres. Una elevada acidez de una grasa indica la pérdida de su calidad. Instrumentos. Matraz Erlenmeyer. Bureta. Pipetas de 1 y 10 ml. Reactivos. Aceite de girasol. Mezcla neutralizada de alcohol con éter (mezcla de alcohol con éter 1:2 que se neutraliza con disolución 0.1 N de hidróxido potásico según la fenolftaleina). Hidróxido potásico, disolución 0.1 N. Fenolftaleina, disolución 0.1%. Marcha de los trabajos. En el matraz Erlenmeyer se vierte 1 g de aceite de girasol, se añaden 10 ml de mezcla de alcohol con éter, el contenido se agita cuidadosamente. Se agregan 2 ó 3 gotas de Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua

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fenolftaleína, y la disolución se valora rápidamente con la disolución de hidróxido potásico 0,1 N, con agitación, hasta la aparición de una coloración rosa que persista más de 1 min. El número acídico se calcula según la fórmula

donde x es el número acídico, en mg; a es el volumen de disolución de hidróxido potásico de 0.1 N consumido para la valoración de la prueba a investigar, en ml; 5.6 es la cantidad de hidróxido potásico (mg) que se contiene en 1 ml de disolución dé hidróxido potásico 0.1 N; K es el coeficiente de corrección dé la disolución de 0.1 N de hidróxido potásico; c es la muestra pesada de aceite, en g.

3.7. Determinación del índice de iodo
Se denomina índice de iodo la cantidad de gramos de iodo que pueden combinarse con 100 g de grasa. Este número permite evaluar el grado de insaturación de la grasa provocado por la presencia de glicéridos con ácidos grasos de dobles enlaces, la capacidad de la grasa para la oxidación, para la reducción y otras reacciones. Cuanto mayor es el contenido de ácidos grasos no saturados en la grasa, tanto mayor es su índice de iodo. El índice de iodo dé algunas grasas y aceites oscila dentro de los siguientes límites: de res, 27—47;de carnero,31—46; de cerdo, 46—66;de perro, 56—67; aceite de girasol, 129—136; aceite de cáñamo, 145—162; aceite de linaza, 175—201. El principio del método. La determinación del índice de iodo se basa en la reacción de adición del iodo al lugar de ruptura de los dobles enlaces en las moléculas de ácidos grasos, que se verifica cuantitativamente según el esquema:

El iodo que no ha reaccionado se valora con tiosulfato. Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua

c es la muestra pesada de grasa. Almidón.8. en ml. 200. En un matraz (prueba experimental) se pone 0. manteca de vaca. Aceite de girasol. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Reactivos. Bureta.1 N de iodo en alcohol.g) se calcula según la fórmula: donde b es el volumen de disolución de tiosulfato sódico 0. Claudio Arzola Alvarez. 3. Iodo. en el otro (prueba de control) 0. 187-195. disolución 0.01269 es la cantidad de iodo (g) equivalente a 1 ml de disolución de tiosulfato sódico 0. Dr. primero hasta que la coloración se ponga amarilla clara. g.1 g de aceite de girasol (se pesa en una balanza analítica). manteca de cerdo.1 N. Pipeta de 10 ml. Cuando la muestra de aceite sea disuelta. con disolución de tiosulfato sódico 0. Determinación del número (índice) de saponificación Número de saponificación se denomina el núnero de miligramos de hidróxido potásico que se necesitan para neutralizar todos los ácidos grasos (libres y ligados en forma de glicéridos) que se contienen en 1 g de grasa. a es el volumen de la disolución de tiosulfato sódico 0. disolución al 1%. el contenido se remueve agitándolo. El índice de iodo (x. agitando permanentemente. Tiosulfato sódico. Cloroformo. los matraces se cierran con tapones. 212—247. grasa de carnero.1 mi de agua. 192—198.1 N. M. Marcha de los trabajos. disolución 0. aceite de linaza.691 g de iodo recién sublimado se disuelven en 1 l de alcohol etílico al 96%). 0. y los se dejan en la oscuridad. 190—200. El número de saponificación de algunos aceite de buena calidad tiene los valores siguientes: grasa de res. y luego al añadir 1 ml de disolución de almidón al 1% desaparición de la coloración azul.1 N de tiosulfato sódico.1 N.1 N consumido en la valoración de la prueba experimental. K es el coeficiente de corrección del título de la disolución 0.1 N.Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 48 Instrumentos. 100 es el coeficiente de recuento para los 100 g de grasa. Al cabo de 5 min las pruebas se evalúan. Matraces Erlenmeyer de 50 ml con tapones. en los matraces se añaden con la pipeta 10 ml (¡exactamente!) de disolución 0.1 N en alcohol (la preparación: 12. y se añaden de la bureta 5 ml de cloroformo en cada uno. consumido en la valoración de lá prueba de control en ml.C.

Hígado y músculos frescos. Tijeras curvas. Claudio Arzola Alvarez. Las muestras secadas se trituran en el mortero y se trasladan en cartuchitos de papel de filtro. Baño maría. Pipetas graduadas de 1 ml. Estufa. M. Reactivos. Los cartuchitos con el material a investigar se pesan y se meten en el extractor del aparato Soxhlet. Éter dietílico. El aparato consiste de tres partes: matra (7). Todas las partes del aparato se unen herméticamente. Reactivos. Hidróxido potásico alcohólica 0. disolución al 0. al cabo de 24 h se filtra). Se deja pasar el agua por el refrigerante. Marcha de los trabajos.5 N.5 N (la preparación: 30 g de hidróxido de potasio quimicamente puro se disuelven en 30 ml de agua destilada.C. se desmenuzan con tijeras sobre un vidrio de reloj. Instrumentos. El método se basa en la determinación de la masa de los tejidos antes y después de la extracción de las grasas con disolvente. Pesafiltros. a 106 °C. Matraces Erlenmeyer refrigerantes de reflujo.Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 49 Instrumentos. Fenolftaleína. se pesa y se guardan en el desecador). Determinación cuantitativa de la grasa en el hígado y los músculos El contenido de la grasa se determina mediante la extracción de una muestra pesada de los tejidos a investigar en el aparato Soxhlet. disolución 0. Principio del método.9. A través de la boca superior del refrigerante el extractor y el matraz se llenan de éter en una cantidad igual a dos volúmenes del extractor. Bureta. éste se coloca en el baño maría. Aceite de girasol. 11). Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Dr. se ponen en los pesafiltros se secan en el armario secador a una temperatura de 102 106 °C hasta una masa constante. Baño de maría. Aparato Soxhlet.1%. Se toman muestras pesadas de hígado y músculos (hasta 3 g de cada tejido). 3. Cartuchitos para extracción hechos d papel de filtro denso desgrasado (los cartuchitos se secan. extractor (2) y refrigerante de reflujo (3) unidos ajuste damente mediante conexiones esmeriladas (fig. y el matraz se calienta en el baño de María. Ácido clorhídrico. Balanza analítica. y el volumen se lleva a 1l con alcohol etílico al 96%. Mortero de porcelans Vidrios de reloj.

La plenitud de la extracción de la grasa desde los tejidos se establece por la ausencia de manchas grasosas sobré papel de filtro tras la evaporación de varias gotas de éter tomado del extractor. M. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Los cartuchitos se pesan en la balanza analítica y a partir de la diferencia entre la masa del cartuchito antes y después de la extracción se determina la cantidad de la grasa en las muestras pesadas.C. Después de la extracción los cartuchitos con el material se quitan del aparto Soxhlet y se secan primero en la campana de humos y.Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 50 Durante la extracción se observa que la cantidad del disolvente en el matraz no sobrepase 2/3 de su capacidad y que Aparato Soxhlet el disolvente que se condensa no suba demasiado en el refrigerante. en el armario secador a una tempetarura de 102 a 106° C durante 4 ó 5 h hasta la masa constante. Claudio Arzola Alvarez. al vaporizarse el éter. La cantidad de la grasa x (en se calcula según la fórmula %) Dr. La extracción se prolonga durante 5 ó 6 h.

Dr. Claudio Arzola Alvarez.C. c es la muestra pesada del material a investigar. en g. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . en g. M. b es la masa del cartuchito con la muestra después de la extracción.Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 51 donde a es la masa del cartuchito con la muestra antes de la extracción. en g. 100 es el coeficiente porcentual de recuento.

Serie de Prácticas 5 Enzimas C. Arzola. UACh febrero 2006 . Holguín Facultad de Zootecnia. C.

Enzimas4 Facultad de Zootecnia. Universidad Autónoma de Chihuahua Responsable: Dr.V. Sin embargo. Moscú. Puesto que el desarrollo de esta práctica se considera una actividad integradora. tendrás la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemático del grupo de moléculas mas represenativas de la bioquímica. al. con lo que lograrás una eficiente comunicación con colaboradores y colegas. Editorial MIR. La pulcritud y el orden será un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades. con miras a que tu posterior desempeño profesional sea de alto nivel. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos. deberás de observar una conducta adecuada durante la misma. Al mismo tiempo. el cual deberá ser individual. Adaptado de PRACTICAS DE BIOQUÍMICA DEL GANADO Y AVES DE CORRAL. el protocolo deberá ser entregado en forma individual para su evaluación. con actitudes de respeto a tus compañeros y maestros. deberás entregar un informe del desarrollo y resultados de la práctica. serás capaz de manejar con propiedad las enzimas. 1984. Claudio Arzola Alvarez Número de alumnos por práctica: Tres Propósito de la práctica: Al terminar esta práctica. 4 . obtendrás menor calificación. puesto que la práctica se llevará a cabo en grupo.4. Podrás constatar algunos fenómenos de importancia en cuanto a la respuesta física de las enzimas y relacionar esta con fenómenos de producción agropecuaria. CHECHETKIN et. Al terminar. A.

Claudio Arzola Alvarez. Influyendo en la velocidad de las reacciones metabólicas. las enzimas son capaces de regular efectivamente los procesos de vitalidad. La actividad catalítica de la enzima está relacionada con a presencia en su molécula de unas regiones especiales responsables de la fijación y la activación del sustrato: el centro de sustrato y el centro activo. como regla general.C. Sin embargo. Semejantemente a los catalizadores inorgánicos. las enzimas son sensibles a las variaciones de las condiciones del medio en que están funcionando y tienen una serie de particularidades relacionadas a su naturaleza proteínica. M. sensibilidad al cambio de la temperatura y el pH del medio así como también a la presencia de los activadores e inhibidores. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . su especificidad. los catalizadores biológicos poseen una eficiencia mayor en la disminución de la energía de activación y. las enzimas aumentan la velocidad de las reacciones químicas a cuenta de la disminución de la energía de activación. son condicionadas por la naturaleza proteínica de los catalizadores biológicos. presión baja y unos valores de pH cercanos al neutro. Al mismo tiempo. Con participación de las enzimas se verifican numerosos procesos químicos. desempeñan su función a una temperatura moderada. Dr. Propiedades generales de las enzimas Las particularidades características de las enzimas. Ellos consisten en una combinación única do los restos de aminoácidos situados en la cadena polipéptida a larga distancia uno del otro. el conjunto de los cuales constituye la esencia del metabolismo.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 54 Se llaman enzimas las proteínas específicas que poseen función catalítica.

Almidón. ellos dan lugar a un centro catalítico. La inactivación de la enzima con aumento de la temperatura del medio es irreversible. 4. que son proteínas conjugadas. M. La temperatura óptima para la acción de enzimas es Ja temperatura de cuerpo de los animales que oscila en el intervalo de 36 a 41 °C. A la vez. Vaso con hielo.3%. al tomar en la boca de 20 a 25 ml de agua.C. Cualquier influencia exterior que altera la conformación nativa de la molécula proteínica conduce a la inactivación de la enzima. Luego en todos los tubos de ensayo se añaden 4 ml de disolución Dr. Se investiga la influencia del camino de Ja temperatura del medio exterior sobre la actividad de la enzima amilasa de la saliva. Empieza. gradualmente.1 La labilidad térmica de las enzimas La temperatura del medio influye mucho en la actividad de las enzimas. Claudio Arzola Alvarez. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 55 Acercándose. En tres tubos de ensayo se vierten de 2 a 3 ml de saliva diluida (amilasa) en cada uno. Vaso do 50 ml. Soporte con tubos de ensayo. la desnaturalización de la enzima que se acelera bruscamente a la temperatura que sobrepase 50°C. Al bajar la temperatura la enzima disminuye su actividad también. Reactivos. disolución al 0. Instrumentos. en la formación del centro catalítico participan también los componentes no proteínicos directamente afines a la región activa del glóbulo. necesaria para la manifestación de su actividad catalítica. Saliva diluida (se enjuaga la boca con agua destilada y luego. al formarse una estructura terciaria de la molécula. El mecanismo de este proceso no está claro. Principio del método. incluso un aumento pequeño de la temperatura conduce al debilitamiento de los enlaces que mantienen la conformación de la molécula de enzima. Termostato (37 °C). Infernilla. La saliva en el tubo de ensayo 1 se hierve durante 1 min. la colectan en un vasito). Reactivo do Lugol. Marcha de los trabajos. el enfriamiento no causa desnaturalización de la enzima y por lo tanto su inactivación puede ser reversible. disolución al 1% en disolución do cloruro sódico al 0.3%. Sin embargo. Cloruro sódico. Con cierto aumento de la temperatura del medio ocurre aceleración de la reacción a consecuencia de la activación de las moléculas de sustrato. En cuanto a las enzimas.

A los valores de pH muy altos o muy bajos las enzimas se desnaturalizan. y la enzima se inactiva. Los tubos de ensayo 1 y 2 si colocan en el termostato (37 DC).Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 56 de almidón.2 Influencia del pH sobre la actividad de las enzimas Para cada enzima existe un óptimo del pH a que crean las condiciones más favorables para el mantenimienato de la conformación funcionalmente activa de la molécula.C. Al transcurrir este tiempo. donde se mantienen 10 mín. Se investiga la actividad diferentes magnitudes de pH del medio. disolución 0. Pipetas. pH 6. Claudio Arzola Alvarez. disolución 0. Reactivos. Principio del método.2 M (A). Los grupos amino y carboxilo de los restos de aminoácidos ionizados a una magnitud de pH determinada. Disoluciones amortiguadoras (pH 5. A una magnitud de pH distinta se altera la ionización de los grupos correspondientes.0. Instrumentos. 37°C-10 min. El tubo de ensayo 3 se sumerge en hielo y se tiene durante 10 min.8: se mezclan 772. y como resultado sse rompen los enlaces que aseguran la formación de los centro catalíticos. 0°C 4. 37°€ la min. Forsfato sódico disustituido. 2 3 Amilas Enzima desnaturalizada a Amilasa Enzima Amilas nativa Enzima a ti Conclusiones: Almid ón Almidó n Almidó 10 miB. en el tubo de ensayo se añade 1 gota de reactivo de Lugo. se mezclan 515 ml de disolución A con 485 ml de disolución B. participan en el mantenimiento de la conformación de la molécula proteínica necesaria para la formación de los centros catalíticos de enzima y favorecen también a su ligación con el sustrato. Los resultados del experimento se anotan en la tabla de lab] térmica de las enzimas y se sacan conclusiones: Número Enzima del tubo de ensayo j 1 Condiciones del experimento Coloracion con iodo Sustrato Incubación. Soporte con tubos de ensayo.5 ml de disolución A con Dr. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua de la amilasa de la saliva a . M. Termostato (37 °C). Acido cítrico (CeH8O7H2O).1 M (B).

en cada tubo de ensayo se añade 1 gota de reactivo de Lugol. La conformación espacial del centro de sustrato debe estar en la correspondencia geométrica exacta con la estructura de la molécula de sustrato. Pipetas. Saliva diluida. Reactivos.C. Principio del método.3 Especificidad de las enzimas Las enzimas se distinguen de los catalizadores inorgánicos por su especificidad excepcionalmente alta.0 6. 8. Solamente en este caso es posible la formación del complejo enzima-sustrato y el cumplimiento de la función catalítica de la enzima. disolución (10 g levadura se homogeneiza en 100 ml de agua). La etapa inicial del acto catalítico consiste en la formación del complejo enzima-sustrato. Sacarosa.5 ml de disolución B). la ligación del sustrato con el centro catalítico de la enzima. se mezcla y se incuba durante 10 min en el termostato (37°C). disolución al 1%. Reactivo de Dr. Luego. Lugol.8. Marcha de los trabajos. pH 8.0 Almidó Almidó Almidó 10 1 10 min min min 37° C 37° C 37° C 4. Soporte con tubos de ensayo. Instrumentos. Los resultados de la observación se anotan en una tabla que indica la influencia del pH sobre la actividad de la amilasa de la saliva: Número de tubo de ensayo 1 Enzima pH del medio Sustrato Incubació n Coloració n con iodo Amilasa 2 Amilasa 3 Amilasa Conclusiones: 5. como una llave a cerradura. Do tal modo. Reactivo de Lugol.0. se mezclan 972. Termos (37 °C). En todos los tubos de ensayo se añaden de 2 a 3 ml de saliva diluida (amilasa) y de 4 a 5 ml de disolución de almidón.0). es decir.5 ml de disolución B. En tres tubos de ensayo se vierten de 2 a 3 ml de disoluciones amortiguadoras de distintos pH (5. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Se investiga la influencia de enzimas amilasa y sacarasa sobre diferentes sustratos: el almidón y la sacarosa.5 mi de disolución A con 27. disolucion al 2%. Claudio Arzola Alvarez. disolución al 1%. la esencia de la especificidad de enzimas consiste en el hecho de que el sustrato le corresponde a la enzima.0. Saliva diluida. Almidón. M. Almidón.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 57 227. Infemilla. Reactivo de Fehling. Sacarasa. 6.8 8.

isomerasas y ligasas (sintetasas). Tales sustancias pueden causar efecto Determinación de la actividad de las enzimas Según la clasificación elaborada por la Comisión Internacional de Enzimas. El contenido de los tubos de ensayo mezcla y se incuba durante 10 min en el termostato (37°( Luego en los tubos de ensayo 1 y 2 se añade 1 gota de reactivo de Lugol. 2 3 Amilas Enzima desnaturalizada a Amilasa Enzima Amilas nativa Enzima a ti Conclusiones: Almid ón Almidó n Almidó 10 miB. de 2 a 3 ml de disolución de sacarasa. de 4 a 5 ml de disolución de sacarosa. En tubos de ensayo 1 y 3 se añaden de 2 a 3 ml de saliva diluída (amilasa). todas las enzimas se subdividen en seis clases principales en correspondencia con el carácter de la reacción catalizada por ellas: oxidorreductasas. mediante la fijación sobre la molécula de enzima de una serie de sustancias d bajo peso molecular. Dr. Las observación se anotan en la tabla de especificidad de las enzimas amila y sacarasa: Número Enzima del tubo de ensayo j 1 Condiciones del experimento Coloracion con yodo Sustrato Incubación. Claudio Arzola Alvarez. En los tubos de ensayo 1 y 2 vierten de 4 a 5 ml de disolución de almidón.4 Influencia de los activadores e inhibidores La regulación de la actividad de las enzimas se realiza tanto en la célula como fuera de ella. trans-ferasas. y en los tubos de ensayo 2 y 4. M. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . 37°€ la min. Oxidorreductasas Las oxidorreductasas son una clase de enzimas que catalizan las reacciones de oxidación-reducción.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 58 Marcha de los trabajos. de 1 a 2 ml de reactivo de Fehling y se calienta. en tubos ensayo 3 y 4. liasas. hidrolasas. 0°C 4. en cada una y en los tubos de ensayo 3 y 4. 37°C-10 min.C.

Aceite de vaselina o vegetal. disolución al 3% (3 g de ácido succínico se disuelven en 97 ml de agua y se neutraliza con disolución de hidróxido sódico al 10% hasta el pH 7. Hidróxido sódico. reduce el azul de metileno (AM) transformándolo en un compuesto incoloro (AMH 2). Baño de María (50 °C).5 Determinación de la actividad de la dehidrogenasa de ácido succínico La dehidrogenasa de ácido succínico (succinato dehidrogenasa) es una enzima que cataliza la oxidación del ácido succínico. añadiendo de 3 a 4 ml de disolución de ácido succínico. M. disolución al 20%.4 según el papel indicador). Arena de vidrio.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 59 4. El hidrógeno que se desprende del ácido succínico bajo la influencia de la enzima dehidro-fenasa. Reactivos. En las células la enzima está unida establemente con la membrana de mitocondrias. Termómetro. Marcha de los trabajos. Claudio Arzola Alvarez. En el mortero se tritura cuidadosamente. Instrumentos.001%. disolución acuosa al 0.C. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . La enzima redunda devuelve fácilmente el hidrógeno cuyo aceptor pueden ser los colorantes aptos para la reducción. Pipetas. Músculo fresco (desmenuzado en picadora de carne). aproximadamente 1 g de tejido de músculo desmenuzado. La masa homogeneizada obtenida se reparte en dos porciones iguales que se ponen en dos tubos de Dr. De coenzima sirve el dinucleótido de flavina-adenina (FAD). Principio del método. disolución al 10%. Mortero con machaca. Acido tricloroacético. con la arena de vidrio. Azul de metileno. Acido succínico. Soporte con tubos de ensayo.

Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 60 ensayo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . En el tubo de ensayo 2 (experimental) la enzima es activa. Claudio Arzola Alvarez.5 a 1 ml de aceite para aislar del oxígeno de aire. En ambos tubos de ensayo se añade 1 ó 2 gotas de disolución de azul de metileno. y sobre la superficie de líquido se vierte de 0. Dr.C. M. se mezcla. Ambos tubos de ensayo se incuban en el baño maría (50°C) durante 10 min. En el tubo de ensayo 1 (de control) se añade 1 ml de disolución de ácido tricloroacético para destruir la enzima. en el tubo de ensayo 2 se observa la descoloración del azul de metileno. Al pasar este tiempo.

1980. S. MANUAL MODERNO. DE C. S.R. 7a. 3a.A. INC. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 61 . HORTON et al DE.A. WORTH PUBLISHERS. REIMPRESION 1983 PRINCIPLES OF BIOCHEMISTRY ALBERT LEHNINGER AD. REVERTE. Claudio Arzola Alvarez. M.BIBLIOGRAFIA BIOQUIMICA H. 1994 BIOQUIMICA: LAS BASES MOLECULARES DE LA ESTRUCTURA Y FUNCION CELULAR. DAVID RAWN AD. GRAW . INTERAMERICANA Mc. PRENTICE HALL HISPANOAMERICANA. S.A.HILL 1989 BIOQUIMICA LUBERT STRYER AD. S.A. 1993 BIOQUIMICA. Dr. J. DE. ALBERT LEHNINGER EDICIONES OMEGA.V.C. EN ESPAÑOL 1993 BIOQUIMICA DE HARPER ROBERT K MURRAY AD.

9. En estos casos es recomendable el uso de gafas graduadas o de gafas de seguridad cerradas. Claudio Arzola Alvarez. Actúa siempre con urgencia. ya que en caso de accidente las salpicaduras de productos químicos o sus vapores pueden pasar detrás de las lentes y provocar lesiones en los ojos antes de poder retirar las lentes. El uso de bata es obligatorio. 4. las salpicaduras de productos químicos son inevitables. Sí un producto químico te salpica los ojos. utiliza inmediatamente una ducha de ojos y lava completamente el ojo afectado durante 15 minutos sin interrupción. No comer ni beber en el laboratorio. 8. Informa al encargado del laboratorio de lo que ha sucedido y si es necesario pide asistencia médica. 7. M.ANEXOS NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD E HIGIENE 1. Es necesario localizar las salidas principales y de emergencia por si se diese el caso de una evacuación por fuego o por cualquier otro incidente. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 62 . Dr. No dirijas una corriente de alta presión de agua de un grifo directamente al ojo porque podrías lesionarlo. 2. 5.C. ya que por mucho cuidado que se tenga al trabajar. ya que hay la posibilidad de que los alimentos o bebidas se hayan contaminado con productos químicos. 6. en menos de 10 segundos. Antes de empezar el trabajo en el laboratorio tienes que familiarizarte con los elementos de seguridad disponibles. Así mismo se recomienda llevar zapatos cerrados y no sandalias. duchas de seguridad y duchas de ojos. No usar lentes de contacto en el laboratorio. 3. así como conocer la localización exacta de extintores. El uso de bata (preferentemente de algodón) es obligatorio. Es obligatorio usar gafas de seguridad siempre que se esté en el laboratorio.

Cerrar herméticamente los frascos de productos químicos después de utilizarlos. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . no absorber directamente con la boca. No inhales. 19. etc. tampoco las neveras u otras instalaciones destinadas al empleo en los laboratorios. 20. 12. No se puede hacer ningún experimento no autorizado. Para pipetear los líquidos utilice siempre una bombilla pipeteadora. Está prohibido fumar en el laboratorio por razones higiénicas y de seguridad. El material y los aparatos utilizados tienen que dejarse siempre limpios y en perfecto estado de uso. Procure quitarse la bata hasta que salga del laboratorio. Cuando caliente tubos de ensaye hágalo siempre en la parte superior del líquido y con agitación suave. No deben transportarse innecesariamente los reactivos de un sitio para otro del laboratorio. Todos los productos químicos tienen que ser manejados con mucho cuidado de acuerdo con las Hojas de Seguridad de cada una de las sustancias. 14. Claudio Arzola Alvarez. Los recipientes del laboratorio nunca deben utilizarse para el consumo y conservación de alimentos y bebidas. abrigos. 21. gritar. y debe estar inclinado y no apuntar hacia ninguna persona. 18. empujar. productos químicos vertidos. pruebes o huelas productos químicos si no estás debidamente informado. M. 11. bolsas. La conducta en el laboratorio debe ser seria. las cuales deben ser siempre transportadas cogiéndolas por el fondo.Manual del laboratorio de Bioquimica Seguridad… Pagina 63 10. 24. No utilices material de cristal en mal estado ya que aumenta el riesgo de accidentes. jugar. 23. tenga cuidado con las botellas. Lavarse siempre las manos después de hacer cualquier análisis y antes de salir del laboratorio. nunca por la boca de la botella. 16. 22. Sí tuviese que hacerlo. nunca por el fondo del tubo. sin correr. El área de trabajo tiene que mantenerse siempre limpia y ordenada.C. 17. 25. Dr. No utilices nunca un equipo o aparato sin conocer perfectamente su funcionamiento. sin bromas. sin libros. 15. 13.

• Avisar a ambulancias. • Evacuación del edificio en caso necesario. No inhales los vapores de productos químicos y trabaja siempre en vitrinas extractoras. bomberos. • Luchar contra el fuego. irritantes. FUEGO EN EL LABORATORIO: Dr. M. • Ponerse a salvo. Claudio Arzola Alvarez. corrosivos o lacrimógenos. MEDIDAS GENERALES EN CASO DE ACCIDENTE PLAN GENERAL DE EMERGENCIA: • Dar la alarma. • Avisar al responsable del departamento.C.Manual del laboratorio de Bioquimica Seguridad… Pagina 64 26. especialmente cuando manipules productos tóxicos. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . • Ayudar a las personas.

C. • Es tu responsabilidad ayudar a alguien que se está quemando. baños. procurando que no coja frío y proporciónale asistencia médica. avisar al servicio de extinción de incendios y evacuar el edificio.. por la salida principal o por la salida de emergencia. hazle rodar por el suelo. • Estírate en el suelo y rueda sobre ti mismo para apagar las llamas. pide inmediatamente ayuda. • Las quemaduras más graves requieren atención médica inmediata.Manual del laboratorio de Bioquimica Seguridad… Pagina 65 • Evacuar el laboratorio. M. si está cerca. no utilices nunca un extintor sobre una persona. No utilices nunca agua para extinguir un fuego provocado por la inflamación de un disolvente. • Retirar los productos químicos inflamables que estén cerca del fuego. QUEMADURAS: • Las pequeñas quemaduras producidas por material caliente. condúcele hasta la ducha de seguridad. Dr. • No utilices cremas y pomadas grasas en las quemaduras graves. se tratarán lavando la zona afectada con agua fría durante 10-15 minutos. etc. mantén a la persona tendida. • No corras ni intentes llegar a la ducha de seguridad si no es que está muy cerca de ti. placas. arena o cubriendo el fuego con un recipiente de tamaño adecuado que lo ahogue. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . sí la principal está bloqueada. por pequeño que sea el fuego. apagarlo utilizando un extintor adecuado. • Una vez apagado el fuego. Claudio Arzola Alvarez. sí el fuego no se puede controlar rápidamente accionar la alarma de fuego. • Para fuegos grandes aislar el fuego. FUEGO EN EL CUERPO: • Sí se te incendia la ropa. • Avisar a todos los compañeros de trabajo sin que se extienda el pánico y conservando siempre la calma. • Sí el fuego es pequeño y localizado. cúbrele con una manta antifuego. utilizar los extintores adecuados.

requiere de asistencia médica inmediata. neutralice la acidez con bicarbonato de sodio durante 15-20 minutos. • Las cortadas se tienen que lavar bien. sacar el exceso de pasta formada. durante 10 minutos como mínimo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . lave con agua abundantemente la zona afectada. corta lo más rápidamente posible la ropa.Manual del laboratorio de Bioquimica CORTES: Seguridad… Pagina 66 • Los cortes producidos por la rotura de material de cristal son un riesgo común en el laboratorio. Dr. Claudio Arzola Alvarez. DERRAME DE PRODUCTOS QUÍMICOS SOBRE LA PIEL: • Los productos químicos que se hayan vertido sobre la piel han de ser lavados inmediatamente con agua corriente abundantemente. • Proporcionar asistencia médica a la persona afectada.C. lávala con agua y jabón y tápala con una venda. CORROSIONES EN LA PIEL POR ÁCIDOS Y ÁLCALIS: • Cuando ocurre una corrosión por ácidos. M. • Las duchas de seguridad instaladas en los laboratorios serán utilizadas en aquellos casos en que la zona afectada del cuerpo sea grande y no sea suficiente el lavado en una pila. seca y cubra la parte afectada con linimento óleo-calcáreo o parecido. con abundante agua corriente. • Sí la cortada es grande y no deja de sangrar. como mínimo durante 15 minutos. • Es necesario sacar toda la ropa contaminada de la persona afectada lo antes posible mientras esté bajo la ducha. • Recuerda que la rapidez en el lavado es muy importante para reducir la gravedad y la extensión de la herida. • Sí la cortada es pequeña y deja de sangrar en poco tiempo.

lave la zona afectada abundantemente con agua corriente y aclárala con una disolución de ácido acético al 1%. • Sí el paciente está inconsciente. y. cuanto antes se lave el ojo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . • Es necesario mantener los ojos abiertos con la ayuda de los dedos para facilitar el lavado debajo de los párpados. si no hay. • Es necesario recibir asistencia médica. con un frasco de lavar los ojos. seca y cubre la zona afectada con una pomada de ácido tánico. M. ponerlo en posición lateral de seguridad. • Lava los dos ojos con agua corriente abundantemente durante 15 minutos como mínimo en una ducha de ojos. CORROSIONES EN LOS OJOS: • En este caso el tiempo es esencial (menos de 10 segundos). con la cabeza de lado. por pequeña que parezca la lesión. menos grave será el daño producido. Claudio Arzola Alvarez.C. INGESTIÓN DE PRODUCTOS QUÍMICOS: • Antes de cualquier actuación pide asistencia médica. Dr.Manual del laboratorio de Bioquimica Seguridad… Pagina 67 • Cuando se produce una corrosión por álcalis. y estirarle la lengua hacia fuera.

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