Manual de Prácticas de Bioquímica

Dr. Claudio Arzola M.C. Celia Holguín Licón Responsables de la elaboración Del manual de Bioquímica

Mauricio Ramírez Ruano, D.I. Coordinador de la elaboración de Manuales de Prácticas

MC. Javier Martínez Nevarez Presidente del H. Consejo Técnico

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Directorio
C.P. Raúl Chávez Espinoza.
Rector de la Universidad Autónoma de Chihuahua

Ing. Heriberto Altes Médina
Secretario General de la Universidad Autónoma de Chihuahua

Dr. Alfredo de la Torre Hernández.
Director Secretario Académico de la Universidad Autónoma de Chihuahua

M.C. Javier Martínez Nevarez
Director de la Facultad de Zootecnia

M.C. Josefina Domínguez Holguín
Secretaria Académica de la Facultad de Zootecnia

Ph.D. Claudio Arzola, M.C. Celia Holguín Licón
Catedraticos de la Materia de Bioquímica

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Tabla de contenido
INTRODUCCIÓN ....................................................................................1 ENCUADRE DEL SISTEMA DE PRÁCTICAS .............................................2 Introducción ..................................................................................... 2 Competencias a las que contribuye, y su ubicación dentro del mapa curricular vigente. ................................................................................4 Niveles de Desempeño ...................................................................... 4 Programa del sistema de prácticas ......................................................6 Tema ....................................................................................................6 Práctica o prácticas programadas ........................................................6 Contenido de cada Práctica en particular ............................................9 1.1. Difusión ...................................................................................... 9 1.2. Ósmosis y presión osmótica ...................................................... 13 1.3. Disociación electrolítica ........................................................... 15 1.4 Determinación de la acidez general de las disoluciones .......... 17 1.5 Determinación del pH ............................................................... 18 1.6 Preparación de las disoluciones amortiguadoras ..................... 21 2. Carbohidratos ........................................................................... 24 2.1. Reacciones de reconocimiento de los hidratos de carbono .... 26 2.2. Prueba con naftorresorcina...................................................... 26 2.3. Monosacáridos ......................................................................... 27 Aldohexosas .................................................................................... 28 2.4. Reacciones de reconocimiento le los hidratos de carbono reductores....................................................................................... 28 Prueba con el hidróxido cúprico (II), reacción de Trommer........ 28 2.5. Reacción con el licor de Fehling .............................................. 29 2.6. Reacción con las sales de bismuto.......................................... 30 2.7. Reacción con fenilhidrazina ..................................................... 31 2.8. Reacción de reconocimiento de la sacarosa .......................... 32 2.9. Reacciones de fermentación de los hidratos de carbono ..... 33 2.10. Reacciones coloreadas del almidón ....................................... 34 2.11 Hidrólisis acida escalonada del almidón ................................ 35

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.....2.....................................5 Determinación de la actividad de la dehidrogenasa de ácido succínico ........................7................ 49 4.......................................... 42 Glicéridos (grasas) ................ 44 3........................................................3 Especificidad de las enzimas...... 37 2.......................................4............13 Reacción del glicógeno con el iodo.................2. Solubilidad de las grasas ........ 48 3..................... Determinación del número (índice) de saponificación .................................. Enzimas.. Determinación de la temperatura de fusión .............. 61 ANEXOS ....1 La labilidad térmica de las enzimas ... Determinación del número acídico ...................... 43 3................................................................. 42 Reacciones de reconocimiento de las grasas......................4 Influencia de los activadores e inhibidores ...................... Determinación del índice de iodo .... 44 3................ Hidrólisis enzimática del almidón ................12.. 55 4....................... 62 NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD E HIGIENE... Determinación de la glicerina en las grasas............................ 41 Los lípidos y sus metabolitos ...................................................................9....... 57 4................................... Determinación cuantitativa de la grasa en el hígado . Reacción de la grasa y el aceite con el Sudán III ................................ 43 3.............................................. 56 4...... 62 iv ............. 46 3..... 59 BIBLIOGRAFIA .................. 45 3..................1..... Los lípidos y su metabolismo.................. 38 3.................................... 52 4.. 38 Reconocimiento del glicógeno en los tejidos animales ...................................................2 Influencia del pH sobre la actividad de las enzimas.......................................................6...... 47 3...........5......................................................................8................................ 58 4.....

ser usado en cualquier carrera afín. pero podrá. M. mediante adaptaciones y modificaciones leves.C.INTRODUCCIÓN Este manual esta diseñado para estudiantes de zootecnia y veterinaria. Esta destinado a servir de complemento a la materia de bioquímica de la carrera de Ingeniero Zootecnista en Sistemas de Producción de la Facultad de Zootecnia de la Universidad de Chihuahua. pudiendo también ser usado por otros técnicos. Claudio Arzola Alvarez. Dr. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 1 .

uso de mayor mecanización y sobre todo. los cuales tienen en su curricula la materia de bioquímica. aislamiento y separación de proteínas. Generalmente esto solo puede ser logrado mediante el incremento del número de cabezas. es necesario que adquieras una proeficiencia en el uso de los conceptos bioquímicos que soportan los trabajos teórico-prácticos de esta disciplina. y el uso de PCR en el campo forense. mejor genética o selección. Lo anterior seguramente propiciará una educación de profesionistas que puedan resolver problemas. con miras a lograr una mayor productividad por cabeza con aplicación económica de insumos. ensayo de reacciones enzimáticas. pero por lo general están dirigidos a profesionales de la química.C. Por lo general. se enfatiza en la enseñanza y práctica de mediciones cuantitativas. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 2 . Dado que en lo general el conocimiento de la bioquímica prepara al estudiante para tener competencias en el área de la alimentación animal. manipulación de ADN recombinante. es necesario que los zootecnistas tengan una mayor especialización en relación a otras carreras que usan la bioquímica. seguramente debes de tener en cuenta que la producción pecuaria en México tiene que ser competitiva y sustentable. por las competencias que ésta promueva en los estudiantes. Junto con otras cosas. Dr. la introducción de tecnología moderna. Es sabido que el incremento de la producción pecuaria solo puede ser basado en prácticas de producción intensiva. También es necesario tener en cuenta que las unidades de producción cuentan con laboratorios cada vez mas equipados. M. Claudio Arzola Alvarez.ENCUADRE DEL SISTEMA DE PRÁCTICAS Introducción Como estudiante de zootecnia. Existen numerosos manuales de laboratorio para esta materia. Por lo tanto. La experiencia de muchos años en la docencia de la bioquímica en la Facultad de Zootecnia de la Universidad Autónoma de Chihuahua me ha demostrado que dicho enfoque no es el óptimo para un profesional de la zootecnia. este manual se dirige a estudiantes de zootecnia y veterinaria.

C. y te da herramientas docentes. Dr. Pagina 3 Sin embargo. existe una tendencia a enmarcar dichos conocimientos solamente en aspectos solamente en aspectos tales como el análisis de alimentos. Claudio Arzola Alvarez. con el ánimo de que el estudiante tenga un margen amplio de independencia. El plan general del manual contempla la referencia a los fundamentos teóricos de la química y metabolismo de las sustancias en estudio. y facilitar el desarrollo de competencias en el mismo. determinación de tóxicos y conocimientos afines. Es por eso que el presente manual se ha diseñado con el propósito de fomentar no solo el conocimiento inherente al quehacer de la bioquímica. Otra de las variantes es que contiene materiales relativos a físico-química y química coloidal. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .Manual del laboratorio de Bioquimica Encuadre…. sino que también puede usarse en labores de investigación en asignaturas diferentes a la bioquímica. amen de prepararte para eventuales empleos en laboratorios comerciales o de certificación o trazabilidad de productos pecuarios. Dado que el estudiante deberá presentar un protocolo y un informe para cada práctica. lo cual esta ausente en este tipo de publicaciones. dejando vacíos en campos emergentes de la bioquímica como lo es la biotecnología. Se da un enfoque acerca de la finalidad del análisis. M. con lo que se pretende reforzar la enseñanza de la materia. se describe el análisis en una manera lo más completa posible.

lo que requiere de la participación armónica de los elementos.C. Claudio Arzola Alvarez. Niveles de Desempeño El conjunto de prácticas del presente manual te permitirá llegar a un desempeño de nivel 4 de acuerdo la clasificación de CONOCER. Las razones por las que asumimos que obtendrás un nivel de desempeño tan alto son: 1. M. Las prácticas deberán ser realizadas en equipo. La capacidad de liderazgo deberá ser usada en forma óptima para realizar los diversos pasos de la práctica. en las que se tiene que mostrar creatividad y recursos para conciliar intereses. así como la utilización de herramientas computacionales. 2.Competencias a las que contribuye. 3. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 4 .. a saber “Nivel 4. La elaboración de un protocolo y un informe por práctica requiere de disciplina y laboriosidad. Se debe tener habilidad para motivar y dirigir grupos de trabajo”. y su ubicación dentro del mapa curricular vigente.Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa. Dr. La realización de las prácticas en forma y tiempo presupone el dominio de diferentes habilidades y conocimientos.

SOCIEDAD Y CULTURA 3-2-0 5 CREDITOS 203 UNIVERSIDAD Y CONOCIMIENTO 3-2-0 5 CREDITOS 210 SOCIOLOGIA Y DESARROLLO 2-2-0 4 CREDITOS SEMINARIO DE INVESTIGACION 3-2-0 5 CREDITOS 457 FORMACION DE EMPRENDEDORES 3-2-0 5 CREDITOS 303 FORMULACION Y EVALUACION DE PROYECTOS 2-2-0 4 CREDITOS 856 PRACTICAS PROFESIONALES 10 CREDITOS SERVICIO SOCIAL 30 CREDITOS ECONOMIA AGROPECUARIA 4-0-0 4CREDITOS 266 MATEMATICAS 3-2-0 5 CREDITOS 101 LENGUAJE Y COMUNICACIÓN 3-2-0 5 CREDITOS 209 CONTABILIDAD AGROPECUARIA 3-1-0 4 CREDITOS 332 TECNICAS DE MUESTREO 4-1-0 5 CREDITOS 502 ADMINISTRACIÓN DE EMPRESAS AGROPECUARIAS 3-2-0 5 CREDITOS 433 ADMINISTRACION ESTRATEGICA 3-1-0 4 CREDITOS 503 MERCADEO DE PRODUCTOS PECUARIOS 3-2-0 5 CREDITOS 633 DIRECCION DE AGRONEGOCIOS 3-3-0 6 CREDITOS 802 ESTADISTICA 3-0-1 4 CREDITOS 201 TECNOLOGIAS Y MANEJO DE LA INFORMACION 3-2-0 5 CREDITOS 136 ANATOMIA FUNCIONAL 4-0-2 6 CREDITOS 106 MANEJO DE BASE DE DATOS 0-4-0 4 CREDITOS 206 CONTROL DE CALIDAD 2-2-0 4 CREDITOS 607 REPRODUCCION ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 501 GENETICA GENERAL 3-1-0 4 CREDITOS 556 ADMINISTRACION DE RECURSOS HUMANOS 3-1-0 4 CREDITOS 702 MEJORAMIENTO ANIMAL 3-2-0 5 CREDITOS 431 SISTEMAS DE PRODUCCION OVI-CAPRINO 3-3-0 6 CREDITOS 614 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE CARNE I 3-3-0 6 CREDITOS 603 SISTEMAS DE PRODUCCION DE ESPECIES MENORES 3-3-0 6 CREDITOS 605 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE LECHE I 3-3-0 6 CREDITOS 631 SISTEMA DE PRODUCCION AVICOLA 3-3-0 6 CREDITOS 801 FISIOGIA DE LOS PROCESOS PRODUCTIVOS 4-0-2 6 CREDITOS 235 FISIOLOGIA DE LA REPRODUCCION 3-3-0 6 CREDITOS 356 INGENIERIA EN SISTEMAS DE PRODUCCION 3-3-0 6 CREDITOS 507 SISTEMA DE PRODUCCION DE PORCINOS 3-3-0 6 CREDITOS 805 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE CARNE II 3-3-0 6 CREDITOS 733 SISTEMAS DE PRODUCCION DE BOVINOS DE LECHE II 3-3-0 6 CREDITOS 701 INTRODUCCION A LOS SISTEMAS DE PRODUCCION 2-3-0 5 CREDITOS 104 MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA 4-2-0 6 CREDITOS 335 SANIDAD ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 465 SISTEMAS DE PRODUCCION EQUINA 3-1-0 4 CREDITOS 735 QUIMICA ORGANICA 4-0-2 6 CREDITOS 234 BIOQUIMICA 4-0-2 6 CREDITOS 334 ECOLOGIA VEGETAL 3-3-0 4 CREDITOS 225 NUTRICION ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 506 ALIMENTACION DE NO RUMIANTES 3-2-0 5 CREDITOS 544 ALIMENTACION DE RUMIANTES 3-2-0 5 CREDITOS 634 ECOLOGIA BASICA 3-1-0 4 CREDITOS 105 ECOLOGIA ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 305 TOPOGRAFIA 3-3-0 6 CREDITOS 461 MANEJO DE PASTIZALES 3-3-0 6 CREDITOS 434 HIDRAULICA APLICADA A LA PRODUCCION 3-2-0 5 CREDITOS 661 MANEJO DE FAUNA SILVESTRE 3-3-0 6 CREDITOS 834 CLIMA Y AMBIENTE 4-2-0 6 CREDITOS 223 BOTANICA SISTEMATICA 3-3-0 6 CREEDITOS 126 AGROSTOLOGIA 3-3-0 6 CREDITOS 302 CONSERVACION DE SUELO Y AGUA 3-3-0 6 CREDITOS 452 PERCEPCION REMOTA Y CARTOGRAFIA 3-3-0 6 CREDITOS 325 MANEJO DE RECURSOS FORRAJEROS 3-3-0 6 CREDITOS 652 TECNOLOGIA Y PROCESADO DE LA CARNE 3-3-0 6 CREDITOS 753 ANALISIS SENSORIAL 3-3-0 6 CREDITOS 709 VALORES DEL EJERCICIO PROFECIONAL 4-0-0 4 CREDITOS 806 ORIGEN Y CRECIMIENTO DE ANIMALES DOMESTICOS 3-3-0 6 CREDITOS 208 BIOQUIMICA DE LOS ALIMENTOS DE ORIGEN ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 308 MICROBIOLOGIA Y DETERIORO DE PRODUC. DE ORIGEN ANIMAL 3-3-0 SEGURIDAD E HIGIENE INDUSTRIAL 3-3-0 6 CREDITOS 726 TECNOLOGIA DE SUBPRODUCTOS DE ORIGEN ANIMAL 3-3-0 6 CREDITOS 437 IMPACTO AMBIENTAL Y RESIDUOS 3-3-0 6 CREDITOS 627 6 CREDITOS 508 TECNOLOGÍA Y PROCESADO DE LA LECHE 3-3-0 6 CREDITOS 831 ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES I 3 CREDITOS ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES II 4 CREDITOS ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES III 4 CREDITOS ACREDITACION DEL IDIOMA INGLES IV 4 CREDITOS SISTEMAS DE CONTROL SANITARIO 3-2-0 5 CREDITOS 512 DISEÑO HIGIENICO Y NORMATIVIDAD DE PLANTAS 2-3-0 5 CREDITOS 710 ANALISIS DE RIESGO 3-3-0 6 CREDITOS 725 .

4. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Página 6 .4. Carbohidratos 2. Reconocimiento de la sacarosa 2. Preparación de soluciones amortiguadoras 2.C.6.5. Reconocimiento de carbohidratos 2. Disociación electrolítica 1. y semana del semestre en que se realizará 1. reconocimiento de glucógeno en tejidos Laboratorio Laboratorio 6 horas 1-3 semana 6 horas 4-6 semana Dr.1.2.Programa del sistema de prácticas Tema Práctica o prácticas programadas Ámbitos de desarrollo Duración en horas para cada práctica. Fermentación 2. Carbohidratos reductores 2.5.3.3. Introducción y agua 1. Determinación de la acidez general 1. Claudio Arzola Alvarez. Determinación del pH 1. Resistividad osmótica de eritrocitos 1.1.6. Ósmosis y presión osmótica 1.2. Hidrólisis del almidón 2. M.5. Difusión 1.

Reconocimiento de grasas 3.2 Influencia del pH sobre la actividad de las enzimas 4. Lípidos 3.C.5. Cuantificación de las grasas 3. M. Enzimas 4.4 Influencia de los activadores e inhibidores Determinación de la actividad de las enzimas Oxidorreductasas 4.1.5 Determinación de la actividad de la dehidrogenasa de ácido succínico Prácticas Pagina 7 6 horas 7-9 semana 6 horas 10-11 semana Dr. Constantes de las grasas 3.3 Especificidad de las enzimas 4. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Claudio Arzola Alvarez.1 La labilidad térmica de las enzimas 4.4.3. Determinación de glicerina 3.Manual del laboratorio de Bioquimica 3.2. Reacciones del colesterol 4.

8 Serie de Prácticas 1 Química Física C. C. Holguín Facultad de Zootecnia. UACh 8 Febrero 2006 . Arzola.

el cual deberá ser individual.Contenido de cada Práctica en particular 1. Claudio Arzola Alvarez.1. tendrás la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemático de un fenómeno complejo. Al mismo tiempo. con miras a que tu posterior desempeño profesional sea de alto nivel. puesto que la práctica se llevará a cabo en grupo. Sin embargo. Dr. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 9 . además de ser un instrumento de comunicación adecuada con colaboradores y colegas. La pulcritud y el orden será un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades. el protocolo deberá ser entregado en forma individual para su evaluación. deberás de observar una conducta adecuada durante la misma. obtendrás menor calificación. lo que te capacitará para planear adecuadamente dicho tipo de acciones. Difusión Facultad de Zootecnia. Claudio Arzola Álvarez Número de alumnos por práctica: Tres Propósito de la práctica: Al terminar esta práctica.C. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos. con actitudes de respeto a tus compañeros y maestros. serás capaz de entender el concepto de difusión química. M. lo que te permitirá tener una visión integradora y real de las características funcionales de las mezclas. y relacionarlo con los diversos aspectos de la práctica profesional de la zootecnia. deberás entregar un informe del desarrollo y resultados de la práctica. Al terminar. Universidad Autónoma de Chihuahua Responsable: Dr. Este concepto es fundamental para entender los principios del movimiento de las moléculas en disolución. Puesto que el desarrollo de esta práctica se considera una actividad integradora.

Manual del laboratorio de Bioquimica Química física Quimica Fisica… Pagina 10 Propiedades cinético-moleculares de las disoluciones diluidas Difusión1 Las disoluciones diluidas poseen capacidad de nivelar la concentración en todo su volumen. Con el crecimiento de la temperatura de la disolución. A medida que el vidrio soluble se disuelve. cristal violeta o de otras sustancias coloreadas. Marcha dé los trabajos. Editorial MIR.V. al. Moscú. se introducen los tubos de de la molécula de la Adaptado de PRACTICAS DE BIOQUÍMICA DEL GANADO Y AVES DE CORRAL. Luego ambos vasos. aumenta. Influencia de la temperatura sobre la velocidad de difusión La causa de la difusión es el movimiento térmico de las moléculas. A. 1984. Instrumentos: Cilindros de vidrio incoloro de 250 ml. Marcha de los trabajos. Este proceso se realiza a través del movimiento térmico de las moléculas de sustancia disuelta y de disolvente. bicromato potásico. Cristales de permanganato potásico u otra sustancia coloreada. Hornillo eléctrico. Soportes blancos para los vasos. que conduce a la penetración mutua de las moléculas. las partículas de la sustancia se difunden paulatinamente en el cilindro por todo el volumen del disolvente. La velocidad de difusión en este proceso es inversamente proporcional a las dimensiones sustancia disuelta. luego se traslada a un cilindro con agua. Instrumentos. coloreando uniformemente la disolución del color correspondiente. Tal fenómeno obtuvo el nombre de difusión. Soporte con sujetadores. Un cristal de sustancia coloreada se sumerge y se mantiene durante varios segundos en vidrio soluble. Reactivos: Cristales grandes de permanganato potásico. Vasos químicos de 250 ó 500 ml. Un vaso se coloca sobre hornillo eléctrico y se calienta hasta la ebullición. colocados sobre soportes blancos. CHECHETKIN et. Ella puede observarse si sumergimos cristales de sustancias coloreadas en un disolvente puro. Reactivos. Vidrio soluble. 1 . En dos vasos se vierten de 250 a 300 ml de agua en cada uno. Tubos do vidrio con diámetro de 3 a 5 mm y longitud de 30 a 40 mm. por lo común. la velocidad de difusión. Pinzas.

En el vaso con agua fría la difusión transcurre lentamente. se revisará tu desempeño mediante la revisión de los siguientes puntos: Actividad ¿Trajiste el protocolo de tu práctica en forma completa? ¿Utilizaste material de protección. Los tubos se sujetan en el soporte y a través de ellos se dejan caer simultáneamente en cada vaso (con agua caliente y fría) los cristales de KMnO4. guantes de asbesto. El experimento sirve de prueba del movimiento térmico de las moléculas en que se basa la difusión e ilustra claramente que la velocidad de movimiento de las moléculas crece considerablemente con el aumento de la temperatura de disolución. Claudio Arzola Alvarez. bata? ¿Preparaste los reactivos en forma anticipada? ¿Limpiaste el equipo y material una vez finalizada la práctica? ¿Dispusiste de los desechos de cómo indica el manual? ¿Entregaste el reporte de la práctica pasada? Evaluación alumno Evaluación instructor Final Observaciones Dr. M. lo que hace la difusión más pronunciada. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . formando muy rápidamente una disolución uniformemente coloreada. lentes. En el vaso con agua caliente KMnO4 se disuelve.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 11 vidrio de tal modo que éstos se sitúen en centro del vaso sin llegar al fondo en unos 10 ó 12 mm.C. muy Sistema de evaluación Al final de cada práctica.

Dr.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 12 Reporte escrito. M. para el cálculo de la calificación final se tomará en cuenta el total de las prácticas. el alumno deberá presentar cuando menos el 80% de las prácticas realizadas. Claudio Arzola Alvarez. el cual deberá entregarse a la fecha siguiente de la práctica. Reporte 3. En cada práctica se deberá elaborar un reporte escrito. Desempeño en el laboratorio Total 30% 30% 40% 100% Para aprobar la asignatura. Sin embargo.C. Método de asignación de calificaciones. Tu calificación será resultado de los siguientes factores: 1. El informe deberá ser elaborado en forma individual y presentado en forma impreso y digital. Protocolo 2. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .

se empeora considerablemente el suministro de agua a las plantas y éstas se secan rápidamente y perecen. Al crecer la presión osmótica en las aguas del suelo. los líquidos intertisulares y las células pueden verificarse normalmente los procesos bioquímicos y fisiológicos. junto con otras sustancias. el Dr. las moléculas del disolvente al encontrar un tabique semipermeable. La magnitud de la presión osmótica se expresa en pascales (Pa) *). Claudio Arzola Alvarez. si entre el disolvente puro y la disolución está puesto el así llamado tabique semipermeable. Sólo en las condiciones de isotonía en la sangre. La difusión unilateral del disolvente a través del tabique semipermeable se denomina osmosis. Muchas enfermedades de los órganos internos (los riñones.C. En su movimiento. entonces a través de este último pueden penetrar sólo las moléculas del disolvente. la disminución de la presión osmótica en la sangre trae como resultado la hemólisis de los eritrocitos. creando así cierta presión. La presión osmótica se combina como la suma de los choques que le tocan a una superficie determinada del tabique semipermeable en la unidad de tiempo. Es conocido que en la formación de la envoltura de los eritrocitos participan. M. los pulmones) están acompañadas por el aumento de la presión osmótica en la sangre. lo atraviesan libremente. Ósmosis y presión osmótica La difusión en las disoluciones puede ser directa o indirecta. La elevación de la presión osmótica en los tejidos conduce a los edemas. Sin embargo. La presión osmótica juega un papel importante en los procesos fisiológicos de los organismos vegetales y animales. Determinación de la resistividad osmótica de eritrocitos (ROE) Por resistividad osmótica de los eritrocitos so entiende la estabilidad de los eritrocitos contra la hemólisis bajo la acción de disoluciones hipotónicas de cloruro sódico. Tal presión se denomina osmótica. de colodión) y lo atraviesan libremente. dan contra el tabique semipermeable.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 13 1. En el caso de la difusión indirecta las partículas de soluto y del disolvente encuentran un tabique orgánico permeable (por ejemplo. mientras que en la envoltura de los eritrocitos viejos. el corazón.2. chocan contra él. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . mientras que las moléculas del soluto encontrándose en estado de movimiento térmico. la lecitina y el colesterol. En la envoltura de los eritrocitos jóvenes prevalece la lecitina.

numeradas de antemano se mezcla una disolución de cloruro sódico al 1% con agua según el esquema siguiente: (de Luego en cada probeta se agrega 0. Pipeta graduada de 1 ml. Pipeta de 5 ml. Probetas de centrífuga. Marcha de los trabajos. De indicador del inicio de la hemólisis sirve la coloración roja del líquido sobre el precipitado en presencia de un sedimento de eritrocitos no hemolizados. Instrumentos. luego se centrifugan durante un tiempo de 5 a 10 min a 15 mil r. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Al terminar la centrifugación. entonces la hemólisis de tal sangre empieza con concentraciones de las disoluciones de cloruro sódico relativamente bajas. Si los procesos de formación de la sangre transcurren en el organismo normalmente y los eritrocitos no se destruyen prematuramente. Se preparan previamente disoluciones de cloruro sódico de distintas concentraciones. M. entonces en la determinación de la ROE de la sangre de tal organismo el inicio y el final de la hemólisis son muy extendidos. Si los eritrocitos en el organismo por alguna razón se destruyen rápidamente. Sangro tratada con citrato. Las probetas se agitan y se dejan durante 10 min en el soporte. Cuando la formación de la sangre está perturbada y los eritrocitos jóvenes no se suministran a la sangre. Disolución de cloruro sódico al 1%.6%). la hemólisis de tal sangre empieza y termina a concentraciones relativamente altas de cloruro sódico en la disolución 0.C. la sangre contiene solamente eritrocitos jóvenes.2 ml de sangre.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 14 colesterol.m. Por lo tanto los eritrocitos jóvenes son más propensos a la hemólisis que los viejos. Reactivos. es decir. se detectan las probetas en las cuales la hemólisis acaba de iniciarse. En probetas de centrífuga. y aquellas donde ésta se realizó hasta el final.p. La hemólisis completa se Dr.7 a 0. Claudio Arzola Alvarez. Centrífuga.

es decir. Claudio Arzola Alvarez. es decir.3. Por grado de disociación electrolítica se entiende la proporción entre las moléculas disociadas y no disociadas. de la concentración de la disolución. las disoluciones de los Dr. Además. en partículas con cargas eléctricas (iones). temperatura. El grado de disociación depende de la naturaleza del disolvente y del soluto. los iones comunican a las disoluciones una actividad química más alta y las dotan de una actividad biológica. en el agua la disociación electrolítica se verifica en el mayor grado. M. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . el disolvente puede disminuir con la mayor fuerza la interacción entre las partículas de cargas opuestas (iones). Disociación electrolítica La disociación electrolítica es la descomposición espontánea del electrolito en la disolución. Los iones que se forman en el proceso de disociación electrolítica aumentan la concentración general de las partículas del soluto y con esto elevan el efecto osmótico de las disoluciones.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 15 detecta en las probetas donde el líquido está coloreado de un color rojo en ausencia del sedimento de eritrocitos. La disociación electrolítica se expresa de una manera más pronunciada en aquella disolución en que el disolvente posee la mayor constante dieléctrica. El agua es tal disolvente. 1.C. En consecuencia. presencia en la disolución de otros electrólitos con ion análogo.

pueden elevar o disminuir su actividad fisiológica. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Como ejemplo de tales disoluciones puede servir la disolución de Ringer. Disoluciones isotónicas que contienen sales de metales mono y bivalentes tomadas en una proporción determinada y que no poseen acción tóxica sobre el organismo obtuvieron el nombre de disoluciones equilibradas o fisiológicas. Dr. La acción aislada de ciertos iones sobre los organismos unicelulares tiene comúnmente como resultado la muerte rápida de los últimos debido a su hiperexcitación o depresión excesiva.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 16 electrólitos al actuar sobre las células. Claudio Arzola Alvarez. En tal mezcla tiene lugar la supresión mutua de la acción tóxica de los iones debido al antagonismo iónico.C. como también para la preparación de los medios nutritivos en la práctica bacteriológica y para las inyecciones intravenosas. M. los iones formados durante la disociación de las sales potásicas y sódicas causan una fuerte excitación de las células y su muerte posterior a consecuencia de la hiperexcitación. de Ringer—Lokk o de Ringer— Tirrode (tabla 2). órganos y organismos enteros. causan su muerte. Las disoluciones fisiológicas se utilizan en los experimentos con los cultivos de órganos y tejidos para el estudio de los procesos bioquímicos y fisiológicos en estos cultivos. La mezcla de iones monovalentes y bivalentes tomados en una proporción estrictamente determinada no provoca desviaciones en el estado fisiológico de la célula. Así. los iones surgidos en la disociación de las sales de calcio y magnesio opresan las funciones de las células y en el caso de acción prolongada.

se toma el valor promedio Dr. se añaden 2 ó 3 gotas de fenolftaleína y la disolución se valora de una bureta graduada. La valoración se repite y. equivalentes en concentración.1 N. Marcha de los trabajos. Instrumentos. se vierten en un matraz. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 17 1. Bureta Reactivos. 0.4 Determinación de la acidez general de las disoluciones La acidez general de una disolución se expresa por el número de equivalentes gramo de álcali consumidos para la valoración de un litro de disolución a investigar. con una disolución de álcali hasta la aparición de una coloración rosa. Fenolftaleina. M. Se miden exactamente 5 ó 10 ml de ácido clorhídrico. Hidróxido sódico. tienen la misma acidez general. para el cálculo.1 N. 0. Acido acético. y no depende del grado de su disociación. Pipetas de 5 y 10 ml. Matraces de 50 ó 100 ml. Las disoluciones de cualesquiera ácidos.C. 0. Claudio Arzola Alvarez. Ella indica la cantidad sumaria de sustancias que reaccionan como ácidos presentes en la disolución.1 N. Acido clorhídrico.

5 Determinación del pH Por acidez activa se entiende la acidez condicionada por la concentración de iones hidrógeno libre en la disolución. en primer término. el medio ambiente que los rodea. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . para los organismos protozoarios. una de ácido fuerte y otra de ácido débil. es decir. del líquido tisular. De la misma manera se determina la acidez general de la disolución del ácido acético. contenido del protoplasma celular y. M. En el curso de determinación de la acidez general de dos disoluciones con concentraciones equivalentes. el colorimétrico y potenciométrico. de la sangre. Na es la cantidad de ácido 1. en equivalentes gramo. Valc es el volumen del álcali. preparadas a partir de las disoluciones Dr. Las diferencias entre los resultados de la valoración no deben sobrepasar 0.C. donde Nalc es el número de equivalentes gramo de álcali.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 18 aritmético. El cálculo de la acidez general se realiza según la fórmula x = Nalc*Valc/Va partiendo de la ecuación Nalc*Valc = Na*Va. Determinación potenciométrica del pH de las disoluciones El método potenciométrico de determinación del pH se basa en la medición de las fuerzas electromotrices de las pilas voltaicas. Claudio Arzola Alvarez. La acidez general se determina corrientemente junto con la determinación de la acidez activa de una disolución. Para los procesos fisiológicos tiene importancia.1 ml. la acidez activa del medio en que se verifican unos u otros procesos bioquímicos. La acidez activa se determina por dos métodos (que pueden tener variaciones). se cercioran de que la acidez general no depende de la naturaleza del ácido sino de su concentración en la disolución. Va es el volumen del ácido. La acidez activa depende del grado de disociación de los ácidos presentes en la disolución u otras sustancias que reaccionan como ácidos y se caracteriza por la magnitud del pH.

M. Electrodo de hidrógeno. ejemplo.e. En este sistema el platino desempeña el papel de conductor de electrones y de portador del hidrógeno. Una parte de las moléculas de hidrógeno que se encuentran en la placa de platino.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 19 a investigar y de electrodos especiales.m. se denominan disoluciones amortiguadoras. Para la determinación de los potenciales de electrodo o la concentración de iones en la disolución se emplean los electrodos estándar con una magnitud conocida del potencial de electrodo. entonces tal electrodo de hidrógeno se denomina normal. En función de tales electrodos de referencia se usan los electrodos de hidrógeno. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua el acetato es ácido acético/ acetato sódico. El potencial de un electrodo normal de hidrógeno es igual a cero.101 MPa.C. Si la concentración de iones hidrógeno en la disolución es igual a 1 ión-g/1 y la presión del hidrógeno molecular es igual 0. cuyo papel puede ser desempeñado por las mezclas que constan de: 1) ácidos débiles y sales muy disociables de estos ácidos. de calomelano y de quinhidrona. Claudio Arzola Alvarez. El electrodo de hidrógeno consta de una placa de platino saturada de hidrógeno molecular y sumergida en una disolución que contiene iones de hidrogeno: (Pt) H2/h+. Esta capacidad las disoluciones la adquieren gracias a la presencia en su composición de sustancias amortiguadoras. Se denomina fuerza electromotriz (f. Disoluciones amortiguadoras Las disoluciones capaces de mantener firmemente la estabilidad de la concentración de los iones hidrógeno (pH) cuando sobre ellas actúan cantidades relativamente pequeñas de ácido o álcali fuertes.) la máxima diferencia de potenciales entre los electrodos de una pila voltaica en las condiciones reversibles de su trabajo. El método se caracteriza por una gran precisión en la determinación del pH de cualesquiera líquidos. se disocia en la disolución suministrándola cationes hidrógeno. Se denomina pila voltaica el aparato en que la energía química se convierte en eléctrica. amortiguador de Dr. como también durante la dilución. el amortiguador de . Una condición necesaria para los electrodos de la pila voltaica es la posibilidad de verificarse en su superficie el proceso de oxido-reducción.

Csal es la concentración de la sal. CbasP es la concentración de la base. por ejemplo. los aminoácidos. La dilución do las disoluciones amortiguadoras no trae consigo la variación de su pH. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Claudio Arzola Alvarez. La capacidad amortiguadora la poseen también los electrolitos anfóteros. deben ser agregados a 1 l de disolución amortiguadora para desplazar su pH en una unidad. ejemplo. El pH de las disoluciones amortiguadoras depende de la proporción en éstas entre ácido y sal. y a una proporción dada siempre invariable.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 20 bicarbonato es ácido careo/bicarbonato sódico. el amortiguador de borato es ácido bórico/borato sódico. 3) sales mono y bisustituidas de ácidos polibásicos. 2) bases débiles y sales muy disociables de estas bases. grado de la Dr. M. cuando se preparan las disoluciones amortiguadoras se puede calcular teóricamente según fórmula ¡e (-'ácido es la concentración del ácido.C. por ejemplo el amortiguador de fosfato es NaH2PO4/Na2HPO4. proteínas y algunas otras sustancias. es posible preparar disoluciones con diferentes pH dentro de los límites determinados por la constante de disociación de los ácidos (bases). La calidad amortiguadora de las disoluciones depende de su concentración absoluta y con la dilución disminuye de una manera directamente proporcional al dilución. ya que la proporción do los componentes que constituyen la mezcla amortiguadora se queda en este caso invariable. K K es la constante de disociación electrolítica del ácido (base). De aquí que. Cada disolución amortiguadora se caracteriza por una capacidad amortiguadora determinada. Esta capacidad es la medida de la acción amortiguadora de la disolución y se esa por el número de equivalentes gramo de ácido o de base que. De la fórmula citada se deduce que cambiando la proporción entre las concentraciones de los componentes de la mezcla amortiguadora. el amortiguador amónico es hidróxido amóni-oriiro amónico.

Reactivos. Se numeran ocho tubos de ensayo y se vierten en caí uno de ellos disoluciones 0.15 M. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . fosfato sódico disustituido. se determina el pH de las mezclas preparadas por el método potenciometrico.6 Preparación de las disoluciones amortiguadoras Anteriormente fue indicado que el pll de las disolución amortiguadoras depende de la naturaleza de las sustanci químicas que constituyen la mezcla amortiguadora y de proporción entre estas sustancias en la disolución.1 acetato sódico.15 N.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 21 1.15 M de KH2P04 en las siguientes proporciones Dr. Pipetas graduadas 10 ml. ácido acético 0. Partiendo de estos hechos. Claudio Arzola Alvarez. 1. cuentagotas.1 N. puede ser preparada una serie de disolución amortiguadoras con diferentes. Soporte con tubos de ensayo. Marcha de los trabajos. Instrumentos. disolución 0. En caso de disponer de un potenciómetro. Fosfato potásico monosustituido.C. 2. disolución 0. Indicador universal. M. En seis tubos de ensayo previamente numerados se vierten las disoluciones de ácido acético y acetato sódico en las siguientes proporciones: Pipeta A las mezclas preparadas se añaden 2 gotas de indicador universal y por el carácter de la coloración se determina pH de cada mezcla. disolución 0. pero conocidos pH.

partiendo del color que se desarrolla en el líquido. utilizando para ello los patrones estándar con los mismos indicadores. M. En otros ocho tubos de ensayo numerados previamente se vierten G ml de disoluciones amortiguadoras respectivamente preparadas. Las disoluciones que se quedan en los tubos de ensayo 1 y cS se utilizan para la determinación aproximada del p 11 con ayuda de mi indicador universal y a base de esta determinación se selecciona un indicador unicolor apropiado del grupo de nitrofenoles. Claudio Arzola Alvarez.C. so determina el pH de cada disolución amortiguadora. Dr. para la determinación exacta del pH de las disoi liciones amortiguadoras preparadas. Los resultados de la determinación del pH se anotan en la tabla indicada más arriba.Manual del laboratorio de Bioquimica Quimica Fisica… Pagina 22 El contenido de cada tubo de ensayo se mezcla cuidadosamente. El contenido de los tubos de ensayo se mezcla cuidadosamente y. Se añade 1 ml de indicador en cada uno de los ocho tubos de ensayo que contienen 6 mi do mezclas amortiguadoras preparadas. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .

Holguín Facultad de Zootecnia.Serie de Prácticas 2 Carbohidratos C. UACh febrero 2006 . Arzola. C.

Al terminar.2. M. con actitudes de respeto a tus compañeros y maestros. Dr. incluyendo la determinación cualitativa y cuantitativa de algunos de los mas importantes. La pulcritud y el orden será un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades. deberás entregar un informe del desarrollo y resultados de la práctica. con miras a que tu posterior desempeño profesional sea de alto nivel. siendo dicho protocolo además un instrumento de comunicación adecuada con colaboradores y colegas. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Página 24 . deberás de observar una conducta adecuada durante la misma. Puesto que el desarrollo de esta práctica se considera una actividad integradora. Universidad Autónoma de Chihuahua Responsable: Dr.C. el protocolo deberá ser entregado en forma individual para su evaluación. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos. Claudio Arzola Alvarez. obtendrás menor calificación. Carbohidratos Facultad de Zootecnia. tendrás la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemático de un grupo de sustancias que constituyen la mayor parte de la dieta de los rumiantes. puesto que la práctica se llevará a cabo en grupo. serás capaz de entender la naturaleza de los carbohidratos y la importancia práctica del conocimiento de los mismos. Claudio Arzola Alvarez Número de alumnos por práctica: Tres Propósito de la práctica: Al terminar esta práctica. Sin embargo. Al mismo tiempo. el cual deberá ser individual.

teniendo en sus moléculas átomos de carbono asimétricos. Los hidratos de carbono comprenden un grupo amplio de compuestos naturales que se dividen en monosacáridos. en el caso de disacáridos. tres. Los polisacáridos forman mediante la hidrólisis un gran número de moléculas de monosacáridos. ellos poseen simultáneamente propiedades de aldehidos o catonas y de alcoholes polihidroxílicos. Los animales. Los hidratos de carbono participan en la construcción de las estructuras del organismo vivo. La fórmula genérica de los monosacáridos es CnH2nOn. Todos los monosacáridos naturales. Ellos poseen una masa molecular muy elevada. cuatro. Los hidratos de carbono entran en la composición de los ácidos nucleicos. etc. 2 . al. sobre todo en el reino vegetal. los oligosacáridos se desintegran formando varias moléculas de monosacáridos (dos. Los monosacáridos.). Los oligosacáridos y polisacáridos son hidratos de carbono complejos y al ser calentados con ácidos diluidos o hidrolizados por enzimas. hexosas. heptosas. los glicolípidos y en algunas vitaminas y coenzimas. son insolubles en agua o forman disoluciones coloidales. Por lo tanto. para los tetrasacáridos. Los hidratos de carbono están muy difundidos en la naturaleza. en el caso de trisacáridos. 1984. Moscú. se clasifican en triosas. etc. A. tetrosas. sirven de material para la biosíntesis de los compuestos de otras clases y juegan un papel importante en la bioenergética de la célula. pentosas. Editorial MIR. según el número de átomos de carbono en la molécula. se desintegran en monosacáridos. no aptos a tal acumulación de energía solar. Ellos constituyen los productos finales de la síntesis fotoquímica en las plantas verdes. Entonces. CHECHETKIN et. oligosacáridos y polisacáridos. Adaptado de PRACTICAS DE BIOQUÍMICA DEL GANADO Y AVES DE CORRAL.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 25 Carbohidratos2 Los hidratos de carbono pertenecen a los compuestos poli-funcionales que contienen grupos carbonilo (aldehilico o cetónico) y grupos hidroxilo alcohólicos. aprovechan las sustancias acumuladas por las plantas. son ópticamente activos y giran el plano de la luz polarizada.V. las glicoproteínas.

1 ó 2 ml de ácido sulfúrico concentrado sin mezclarlo con la capa acuosa. En ambos tubos de ensayo se vierten con cuidado. M. Timol. Reacciones de reconocimiento de los hidratos de carbono Reacción con α-naftol Esta reacción es general para los hidratos de carbono y se aplica para detectar la presencia de éstos en los materiales biológicos. a partir de las Instrumentos.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 26 Como componentes integrantes de las glicoproteínas.Naftol. Así. disolución al 1% en alcohol etílico. Claudio Arzola Alvarez. Soporte con tubos de ensayo. Con tales hidratos de carbono están relacionadas las propiedades inmunoquímicas de los tejidos. Marcha de los trabajos. que desempeña un papel importante en la protección de las células contra la penetración en ellas de microorganismos y virus. En dos tubos de ensayo se vierten 2 ml de disolución de sacarosa en cada uno. Acido sulfúrico concentrado.1. Sacarosa. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . a. formando sustancias coloreadas. igual cantidad de disolución de timol. los hidratos de carbono participan en la formación de la capa exterior adyacente a la membrana.2%. Prueba con naftorresorcina La reacción se basa en la capacidad de los hidratos de carbono de condensarse con los sistemas aromáticos. el ácido Dr.C. En el contacto de las capas aparece una coloración violeta (en el caso de a-naftol) y roja (en el caso de timol). 2. 5-hidro-ximetilfurfural hexosas. por la pared. El quimismo de la reacción se reduce al hecho de que mediante la acción del ácido sulfúrico concentrado se forma furfural a partir de las pentosas. disolución al 1%. En el primer tubo de ensayo se añaden de 4 a 6 gotas de disolución de α-náftol y en otro. disolución al 0. Reactivos.2. 2.

Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . entre las cuales se establece un equilibrio dinámico: Dr. Monosacáridos Los monosacáridos en disoluciones acuosas. una coloración violeta. Marcha de los trabajos. Reactivos. 2. La capa etérica (bencénica) se tiñe de color verde azulado. Claudio Arzola Alvarez. disolución al 5%. Éter. Luego se enfría. Naftorresorcina. Soporte con tubos de ensayo. se le añade de 1 a 2 mi de éter o benceno y agita. Igual coloración dan la galactosa y la mañosa. La mezcla se calienta con cuidado y se hierve durante 1 min.3. mientras que la xilosa y la arabinosa proporcionan una coloración azul oscura y los ácidos urónicos. Benceno. Ácido clorhídrico concentrado. En un tubo de ensayo se vierten de 5 a 6 mi de disolución de glucosa. M.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 27 glucurónico al condensarse con naftorresorcina. forma derivados de dinaftil-metano o xantina: Instrumentos. Glucosa. se añade 1 mi de disolución de naftorresorcina y 1 mi de ácido clorhídrico concentrado. se encuentran en diferentes formas tautoméricas. disolución alcohólica al 1%.C.

C.4. Estos azúcares en medio alcalino tienen la capacidad de oxidarse.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 28 Aldohexosas En los organismos de los animales y del hombre la glucosa la galactosa se encuentran con mayor frecuencia. las sales de óxido de bismuto. Claudio Arzola Alvarez. Prueba con el hidróxido cúprico (II). reduciendo a su vez las sales de óxido cúprico (valencia +2) a sales de óxido cuproso (valencia +1) a sales de plata. reacción de Trommer En disolución alcalina los mono y disacáridos reductores reducen el hidróxido cúprico (II) a óxido cuproso (I): Dr. M. 2. Reacciones de reconocimiento le los hidratos de carbono reductores Los hidratos de carbono cuya molécula contiene un grupo carbonilo libre. hasta plata metálica. se denominan reductores. hasta bismuto metálico. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .

Marcha de los trabajos. disolución al 10%. en la reacción de Trommer debe evitarse el exceso de sulfato cúprico. ya que la reacción entre el hidrato de carbono reductor y el hidróxido cúprico transcurre cuantitativamente. Al calentar esta disolución. la disolución de sulfato cúprico. En otro tubo de ensayo se mezclan 2 ó 3 ml de disolución de hidróxido sódico con varias gotas de disolución de sulfato cúprico. El exceso del último durante el calentamiento pierde agua y se transforma en óxido cúprico negro. Reactivos. En su composición ion cobre en estado de oxidación « + 2» se encuentra forma de un compuesto complejo con Dr. lo que oscurece la reacción principal y constituye un defecto del método: Cu (OH)2→ CuO + H2O.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 29 Instrumentos. Hidróxido sódico. disolución al 1%. Se forma un precipitado de hidróxido cúprico de color azul claro. un volumen igual de disolución de hidróxido sódico y. el precipitado de hidroxido cúprico (II) formado se disuelve. Disolución de glucosa no se añade.C. 2. Claudio Arzola Alvarez. Soporte con tubos de ensayo. La aparición de un precipitado amarillo (hidróxido cuproso (I)) y luego rojo (óxido cuproso) indica que la reacción de Trommer es positiva. Por lo tanto.5. El licor de fehling representa un compuesto complejo de cobre con tartrato de sodio y potasio de color azul. gota a gota. disolución al 1%. coloreando el líquido de color azul claro. se forma un precipitado negro de óxido cúprico. se añade. La diferencia consiste en que en las reacciones no se emplea hidróxido cúprico libre. agitándolo. M. En un tubo de ensayo se vierten de 1 a 2 ml de disolución de glucosa. La capa superior del líquido se calienta hasta la ebullición. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Este último se encuentra en estado combinado y forma parte del reactivo de Fehling. En presencia de la glucosa. Glucosa. Sulfato cúprico. Reacción con el licor de Fehling La reacción con el licor o reactivo de Fehling se basa en mismo principio que la reacción de Trommer.

La capa superior del líquido se calienta hasta la ebullición. Este último se encuentra en estado combinado con el tartrato sodo-potásico. En un matraz de 500 ml se disuelven 34. Soporte con tubos de ensayo. análogo al de Fehling. Glucosa. en pequeña cantidad de agua destilada. Reactivos. en presencia de hidróxido sódico. incluso con exceso del reactivo dado. Claudio Arzola Alvarez. Glucosa. Aparece.65 g de cristales no aireados de vitriolo azul (CuSO4. Soporte con tubos de ensayo. Reactivos. Disolución 2.5H2O). entra nitrato dibásico de bismuto que. Reactivo de Nylander (preparación: 2 g de nitrato dibásico de bismuto y 4 g de tartrato sodo-potásico (sal de Rochelle) se disuelven en 100 ml de sosa cáustica al 10% y se hierven hasta disolverse la mayor parte de la sal de bismuto. Por eso durante el calentamiento.6. al igual que en la reacción de Trommér. Antes de utilizarse las disoluciones 1 y 2 se mezclan en proporciones iguales). En la composición del reactivo Nylander. el hidróxido de bismuto se reduce a bismuto metálico y el líquido adquiere color negro. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . 173 g sal de Rochelle (tartrato sodico-potásico). primero en una pequeña cantidad de agua destilada y al disolverse los cristales.5 g de sosa caústica disuelta en 100 ml de agua destilada. Reacción con las sales de bismuto Para detectar los azúcares reductores se emplean frecúentemente las sales de bismuto. el volumen se lleva hasta la raya de enrase. Marcha de los trabajos. M. El precipitado formado se enfría y se separa por filtración). disolución al 1%. disolución al 1%.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 30 tartratos. se añaden 62. 2. A 1 ó 2 ml de disolución de glucosa se añade igual volumen de reactivo de Fehling y se agita. Al reaccionar con la glucosa. no se forma el precipitado negro de CuO y no oscurece la reacción con pequeñas cantidades de glucosa. Instrumentos. forma hidrodróxido de bismuto.C. Dr. un precipitado amarillo de hidróxido cuproso CuOH o bien precipitado rojo de óxido cuproso Cu2O. Reactivo de Fehling (preparación: disolución 1. se mezcla bien y el volumen se lleva hasta la raya de enrase. En un matraz de 500 ml se disuelven. Instrumentos.

Por eso. En la segunda etapa.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 31 Marcha de los trabajos. de los cuales se forman las osazonas. como también para distinguir unos azúcares de otros (fig. Claudio Arzola Alvarez. punto de fusión. que producen cristales de color amarillo. El líquido oscurece debido a la formación de un precipitado negro de bismuto metálico. solubilidad y actividad óptica. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Las osazonas de diferentes monosacáridos se distinguen por la forma de los cristales. oxidándola. A 2 ml de disolución de glucosa se añade 1 ml de reactivo de Nylander y se hierve durante 2 ó 3 min. Reacción con fenilhidrazina Una particularidad importante de los monosacáridos consiste en su capacidad de entrar en reacción con la fenilhidrazina y formar fenilhidrazonas y osazonas. En la segunda etapa. transforma el grupo hidroxilo en grupo carbonilo. con la fenilhidrazonas solubles en agua (reacción de sustitución). lo que conduce a la formación de compuestos poco solubles en agua: osazonas. Dr. con la fenilhidrazona formada reacciona otra molécula de fenilhidrazina y. La forma de los cristales de osazonas es variable y depende de la estructura de los monosacáridos. 2. estas propiedades se utilizan para aislar los monosacáridos de la disolución. M.C.7. 10). Al reaccionar los monosacáridos con la fenilhidrazina. de forma característica. en la primera etapa se forman fenilhidrazonas solubles en agua (reacción de sustitución). La reacción de formación de osazonas transcurre en tres etapas. La tercera molécula de fenilhidrazina entra en reacción de sustitución con el grupo carbonilo recién formado.

Reacción de reconocimiento de la sacarosa La sacarosa es un disacárido no reductor y durante la hidrólisis (por ácido o enzimáticos) su molécula se descompone en glucosa y fructosa: Sacarosa Dr.C. M.8.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 32 2. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Claudio Arzola Alvarez.

propiónica. butírica. láctica y butírica. La fermentación alcohólica se utiliza en la industria con el fin de obtener alcohol etílico. Sulfato de cobalto. Según los tipos de microorganismos y de los productos finales se distinguen varias formas de fermentación. la fermentación láctica. disolución al 1%. M. La lactosa bajo la acción de las bacterias que la desdoblan. Instrumentos. La maltosa y la sacarosa se fermentan fácilmente con las levaduras. En las levaduras están presentes las enzimas maltasa y sacarasa. Dr. Claudio Arzola Alvarez. etc. se añaden varias gotas de disolución de sulfato de cobalto. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Esto se aprovecha para distinguir las hexosas de las pentosas. H2. ácido láctico.). La fermentación acética.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 33 La sacarosa da con el sulfato de cobalto en un medio alcalino un complejo de color violeta.La fermentación conduce. al fin y al cabo. etc. disolución al 10%. por ejemplo. disolución al 2%. Reactivos.9. Sacarosa. A la fermentación alcohólica se someten solamente las hexosas a diferencia de otros monosacáridos. 2. de las pentosas. puede someterse a la fermentación alcohólica.C. mientras que la lactosa no se fermenta. La fermentación metánica produce la timpanitis (distensión) en los rumiantes. Reacciones de fermentación de los hidratos de carbono La fermentación es un proceso complejo de descomposición de los hidratos de carbono bajo la acción de las enzimas producidas por diferentes microorganismos. a la formación de productos tales como alcohol etílico. pero no tienen la enzima lactasa. En un tubo de ensayo se vierten de 2 a 3 ml de disolución de sacarosa. Soporte con tubos de ensayo. Al añadir exceso de hidróxido sódico (1 mi) el líquido adquiere un color violeta. En la mayoría de los casos este proceso va acompañado con el desprendimiento de productos gaseosos (CO2. láctica tienen lugar en el rumen de los rumiantes. en la industria alimenticia para la obtención de diferentes productos lácteos y en la ganadería en el proceso de ensiláje. Hidróxido sódico. Marcha de los trabajos.

En el curso de la reacción se forma un complejo del polisacárido con iodo. Cada resto del monosacárido á unido con los restos vecinos por enlaces glicosídicos. Almidón El almidón es el producto final de la síntesis fotoquímica que se verifica en las hojas verdes. Claudio Arzola Alvarez. en particular del almidón. como en la amilosa. Las unidades de los inosacáridos que forman parte de la composición de la molécula del polisacárido pueden ser iguales (homopolisácárídos) ó diferentes (heteropolisacáridos). La amilosa incluye de 1000 a 6000 unidades de a-D-glocosa unidas por enlaces glucosídicos 1-4. El almidón es una sustancia heterogénea. un polisacárido de reserva. los polisacáridos pueden considerarse como glicosídicos. Ella tiene forma de molécula alargada lineal no ramificada. las cadenas de amilopectina son muy ramificadas y tienen en los puntos de ramificación enlaces glucosídicos 1-6. con iodo es un proceso complejo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Está compuesto de dos fracciones: la amilosa (de 10 a 20%) y la amilopectina (de 80 a 90%). La reacción de los polisacáridos. Reacciones coloreadas del almidón Una reacción característica para reconocer el almidón es la aparición de una coloración azul al combinarse con la disolución de iodo en ioduro potásico. el almidón y el glicógeno son homopolisacáridos típicos. Este proceso Dr. por enlaces glucosídicos 1-4. Sin embargo. M.C. La coloración que aparece depende de la estructura de polisacárido.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 34 Polisacáridos Éstos son hidratos de carbono de elevado peso molecular e mediante la hidrólisis se desdoblan en gran número restos de monosacáridos. Por lo tanto. Las cadenas poliglicosídicas que forman las moléculas de los polisacáridos pueden ser no ramificadas celulosa) o ramificadas (glicógeno). 2.10. es soluble en agua. La amilopectina también está compuesta de un gran número de unidades de a-Dglucosa unidas. Para el organismo de los animales el almidón constituye una sustancia nutritiva importante. En el agua la amilopectina se hincha y produce un engrudo. La celulosa.

Marcha de los trabajos. 2. por ejemplo. al calentamiento y a la acción de los álcalis con los cuales el iodo forma hipoioditos. junto con el proceso de formación del complejo. Almidón. El contenido del tubo de ensayó se divide en tres partes: a la primera parte se le añade 1 ó 2 ml de disolución de hidróxido sódico. Soporte con tubos de ensayo. tiene gran importancia también el proceso de adsorción de iodo sobre la superficie de las moléculas ramificadas. Se ha demostrado la relación entre la longitud de las cadenas laterales y la coloración resultante de la reacción con yodo. Claudio Arzola Alvarez. Reactivos. En la tercera muestra la coloración vuelve a aparecer después del enfriamiento.11 Hidrólisis acida escalonada del almidón En el curso del calentamiento del almidón con ácido clorhídrico diluido. la amilopectina y el glicógeno. El líquido se colorea de azul. M. Éstas se distinguen entre sí en cuanto a la masa molecular y al carácter de la coloración que surge al tratarlas con la disolución de iodo. esta reacción es sensible a la presencia de alcohol. disolución al 1 %. Para la reacción con el almidón la disolución obtenida sé diluye con agua destilada en proporción 1:5).Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 35 es bien expresado en el caso de la amilosa. Disolución de Lugol (preparación: en 100 ml de agua se disuelven 20 g de ioduro potásico y 10 g de iodo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . a la segunda.C. Hidróxido sódico. la tercera parte se calienta. Debido a la inestabilidad del complejo de adsorción entre iodo y almidón. Instrumentos. En un tubo de ensayo se vierten 2 ó 3 ml de disolución de almidón y se añade 1 gota de disolución de Lugol. Más abajo se da el esquema de la hidrólisis acida del almidón: Dr. La coloración desaparece siempre. disolución al 10% Alcohol etílico. 2 ó 3 ml de alcohol etílico. él se descompone con la formación de los fragmentos de diferente tamaño llamados dextrinas. En el caso de los polisacáridos de cadenas ramificadas. Esto indica que la prueba con iodo debe realizarse sólo con disolución de almidón fría.

Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 36 Instrumentos. M. disolución al 10%. Se mezcla cuidadosamente y se hierve a fuego abierto. Disolución de Lugol. Marcha de los trabajos. Para esto se extraen varias gotas de disolución una pipeta y se vierten en un tubo de ensayo que contenga 5 ó 6 ml de agua destilada. La coloración violeta azul aparecida indica presencia de las amilodextrinas en disolución. Reactivos. disolución al 1%. Ácido clorhídrico concentrado. Claudio Arzola Alvarez. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Almidón. Luego de 1 ó 2 min iniciada la ebullición se toma una muestra para la reacción con iodo.C. Papel de tornasol. Hidróxido sódico. aparece una coloración rojiparda condicionada Dr. Soporte con tubos de ensayo. se añaden 1 ó 2 gotas de disolución de Lugol. Pipetas. Licor de Fehling. En un tubo de ensayo se vierten de 3 a 5 ml de disolución de almidón y se añaden varias gotas de ácido clorhídrico concentrado. El tubo de ensayo con la disolución de almidón se hierve 1 ó 2 min mas y se repite la misma prueba con iodo.

Preparado de saliva (1 ó 2 ml de saliva se coloca en un vaso y se diluyen 5 veces con agua destilada. se mezclan cuidadosamente). Hidrólisis enzimática del almidón Bajo la influencia de la enzima amilasa el almidón se desdobla con la formación de un disacárido. de óxido cuproso que indica la presencia en la disolución de productos de la hidrólisis que poseen propiedades reductoras. se mezcla cuidadosamente y se pone en ei baño maría durante 10 ó 15 min a una temperatura de 37 a 40° C. Claudio Arzola Alvarez. 2. El depósito principal Dr. Marcha de los trabajos. Soporte con tubos de ensayo.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 37 por la presencia de las en dextrinas. Se hierve nuevamente la disolución y pasados 2 ó 3 min se repiten las pruebas con iodo. la maltosa. El almidón se desintegra al final hasta la glucosa. Pipetas. Los demás reactivos son los mismos que en el experimento anterior.12. Se forma un precipitado amarillo de hidróxido cuproso. Reactivos. La presencia de la glucosa se confirma por la reacción positiva con el licor de Fehling. Instrumentos. El hidrolizado de almidón se neutraliza.5 ó 1 ml de saliva. con disolución de hidróxido sódico. M. maltodextrinas y maltosa. La reacción con iodo será negativa: el líquido adquiere un color amarillo a cuenta de la coloración de la disolución de Lugol. la ausencia de coloración característica demuestra que la hidrólisis ha finalizado. termómetro.C. luego se descompone por la maltasa hasta la glucosa. se añade licor de Fehling y se calienta. Baño maría con Glicógeno El glicógeno sirve de reserva principal de hidratos de rbono en el organismo de los animales. según un papel de tornasol. o rojo. produciendo como productos intermedios acrodextrinas. En un tubo de ensayo se vierten 3 a 5 ml de disolución de almidón y se añaden 0. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Se hacen repetidamente las pruebas con iodo. Él se deposita casi en todos los órganos y tejidos.

el precipitado se disuelve en 2 ml de Dr. Al añadir iodo. por su constitución química el glicógeno se asemeja a la amilopectina. Se extrae el líquido. finalmente.5 a 2 g). Vaso con hielo. Hidróxido sódico. Hidróxido potásico. En una probeta centrífuga se ponen 1. Licor de Fehling. se enfría y se le añaden de 8 a 10 ml de etanol. Éste se separa mediante la centrifugación durante 5 ó 10 min a 3000 r. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . lo que depende de la estructura del glicógeno que difiere para distintas especies de animales y se determina según al grado de ramificación de la macromolécula. Reconocimiento del glicógeno en los tejidos animales Instrumentos. Reactivos. Claudio Arzola Alvarez.5 a 2%) en los cuales esta acumulado hasta 60% de su contenido en el organismo. Reactivos. la disolución de glicógeno adquiere una coloración rojiparda de diferentes intensidades y matices. luego el disacárido la maltosa y. Soporte con tubos de ensayo. 2. Se sedimenta el precipitado del glicógeno. disolución al 1%. Soporte con probetas de centrífuga y tubos de ensayo corrientes.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 38 de glicógeno son el hígado (de 2 a 5%) y los músculos (de 0. Centrífuga. M. Glicógeno.5 ó 2 g de hígado y se vierten 2 ml de disolución de hidróxido potásico al 60%. Ácido clorhídrico. que se encuentra encima del precipitado. Marcha de los trabajos. Igual que el almidón.C. disolución al 10%. Baño María. Luego la probeta se quita del baño. las dextrinas. Disolución de Lugol.5%. El glicógeno es un polímero de a-D-glucosa en que las unidades de glucosa están unidas entre sí por los enlaces glicosídicos 1-4 y 1-6. disoluciones al 15% y al 60%. en el curso de la hidrólisis el glicógeno da una serie de productos intermedios. el contenido de la probeta se remueve frecuentemente con una varilla de vidrio. el monosacárido la glucosa. Varillas de vidrio.13 Reacción del glicógeno con el iodo Instrumentos.m. Etanol. Muestra pesada de hígado (de 1. Hidróxido sódico. Cloruro sódico cristalino. disolución al 10%. Pipetas. La probeta se coloca en el baño maría hirviendo. disolución al 2.p. La probeta se pone en el vaso con hielo donde se mantiene durante 20 ó 30 min.

C. se le añade igual volumen de licor de Fehling y la mezcla se hierve. Para ello se añaden al precipitado 3 ó 4 ml de disolución de ácido clorhídrico y se hierve durante 15 ó 20 min en el baño de María.Manual del laboratorio de Bioquimica Carbohidratos… Pagina 39 disolución de hidróxido potásico al 15%. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . M. Luego el precipitado del glicógeno se hidroliza y se demuestra la presencia de la glucosa en su composición. Acto seguido. el contenido se enfría. se neutraliza con la disolución de hidróxido sódico. Se forma un precipitado rojo de óxido cuproso . El precipitado formado del glicógeno se separa mediante la centrifugación. Claudio Arzola Alvarez. Dr. se añaden 8 ó 10 ml de etanol y la mezcla obtenida se enfría.

Serie de Prácticas 3 Lípidos C. Arzola. Holguín Facultad de Zootecnia. C. UACh febrero 2006 .

puesto que la práctica se llevará a cabo en grupo. con actitudes de respeto a tus compañeros y maestros. Al mismo tiempo. Podras constatar algunos fenómenos de importancia en cuanto a la respuesta física de los lípidos y relacionar esta con fenómenos de producción agropecuaria. Sin embargo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 41 . el cual deberá ser individual.3. Los lípidos y su metabolismo Facultad de Zootecnia. Dr. Al terminar. La pulcritud y el orden será un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades. con miras a que tu posterior desempeño profesional sea de alto nivel.C. serás capaz de manejar con propiedad el análisis de los lípidos y sustancias afines. Claudio Arzola Alvarez. Universidad Autónoma de Chihuahua Responsable: Dr. deberás de observar una conducta adecuada durante la misma. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos. tendrás la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemático del grupo de sustancias alimenticias que contribuyen significativamente con la aportación energética de las dietas de los animales con lo que lograrás una eficiente comunicación con colaboradores y colegas. M. deberás entregar un informe del desarrollo y resultados de la práctica. Claudio Arzola Alvarez Número de alumnos por práctica: Tres Propósito de la práctica: Al terminar esta práctica. Puesto que el desarrollo de esta práctica se considera una actividad integradora. obtendrás menor calificación. el protocolo deberá ser entregado en forma individual para su evaluación.

Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 42 Los lípidos y sus metabolitos Glicéridos (grasas)3 Se denomina lípidos un grupo numeroso de sustancias constituidas como los esteres y caracterizadas por su solubilidad en disolventes orgánicos y por su insolubilidad en agua. A ellos pertenecen los glicéridos (grasas). que son elementos estructurales de las células. A los complejos se les atribuye una gran significación en el cumplimiento de una serie de funciones importantes. CHECHETKIN et. 1984. Editorial MIR. 3 . Moscú. al. los esteróles (estearinas).V. fosfolípidos y glicolípidos (cerebrosidos. Así. las ceras. Los lípidos desempeñan un papel muy importante en calidad de componentes estructurales de las membranas celulares. gangliósidos). disolvente para las sustancias orgánicas y como precursores de otros componentes de la célula (vitaminas del grupo D. Las grasas son esteres de un alcohol trivalente (la glicerina y los restos de ácidos grasos de cadena larga que tienen la estructura general siguiente: Adaptado de PRACTICAS DE BIOQUÍMICA DEL GANADO Y AVES DE CORRAL. en los cuales se verifican los procesos de oxidación libre y conjugada con la fosforilación. En el organismo de los animales casi todos los lípidos se encuentran en complejo con las proteínas. como fuente de energía. los hidratos de carbono y otras sustancias. son ricas en lipoproteínas las mitocondrias. como también una parte considerable de los procesos de metabolismo intermedio. A. ácidos biliares y hormonas de naturaleza de esteroides).

A más. Se observa la aparición de una coloración naranja de la mezcla. Aceite vegetal. ácidos grasos libres. todas las grasas naturales (el sebo de res. proteínas. El colorante Sudan III se aplica en las investigaciones histológicas para localizar las grasas en los tejidos. Reacciones de reconocimiento de las grasas. corrientemente.Manual del laboratorio de Bioquimica En la composición de la molécula Lípidos… de una grasa Pagina 43 natural entran. protegen los órganos. vitaminas. D. favorecen la asimilación de vitaminas liposolubles A. En el organismo de los animales los glicéridos son en su mayoría mixtos. son necesarios parí regulación de los procesos de oxidación-redución en las células. etc. Claudio Arzola Alvarez. carotinoides y pigmentos. se mezcla y se deja en reposo durante 24 h por lo menos). M. como también para la biosíntesis de las prostaglandinas que constituyen un gran grupo de hormonas de gran actividad biológica. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . la manteca de cerdo. araquidónico. oleico. Vidrio de reloj o placas de vidrio. esteárico. E y K. Marcha de los trabajos. y de otras sustancias biológicamente activas. Los ácidos grasos no saturados presentes en las grasas linoleico. participan en la termorregulación del organismo. Dr. ellas sirven de componentes estructurales del protoplasma celular (grasa estructural). Reacción de la grasa y el aceite con el Sudán III Instrumentos. Las grasas tienen gran importancia para el organismo como una de las fuentes de energía (grasa de reserva).2% (preparación: en 200 mg de Sudán III se añaden 100 ml de alcohol etílico al 70% calentado en un baño maría. los restos de ácidos grasos saturados y no saturados (palmítico. linoleico. y sólo un 2 ó 3% de ellos son glicéridos simples (tripalmitato.C.1. etc. se añade una gota de Sudán III y se mezcla. Sudán III. linolénico. Como regla. trioleato). nervios y vasos los deterioros mecánicos. Reactivos. los aceites. disolución al 0. 3.) constituyen una mezcla compleja de varios glicéridos. triestearato. Sobre el vidrio de reloj se aplica una gota de aceite.

inositolfosfolípidos y esfingolípidos) dan reacción de acroleína negativa. 3. de hidrosulfatos de potasio o sodio se desprenden fácilmente de la glicerina dos moléculas de agua. M. Determinación de la glicerina en las grasas En el curso del calentamiento de una grasa en presencia de agentes deshidratantes. en el tercero 2 ml de benceno y en el cuarto 2 ml de cloroformo. acre intenso. mezcla en los tubos de ensayo se agita enérgicamente. esterinas. Se observan los siguientes cambios: en el primer tubo se forma una emulsión inestable que se separa rápidamente. en particular. Alcohol etílico. en el segundo 2 ml de alcohol.4. Claudio Arzola Alvarez. El experimento debe realísarze en la campana de humos. Énel otro tubo de sayo no se forma acroleína. Marcha de los trabajos. Hidrosulfato potásico (sódico). Reactivos. Los lípidos que no contienen glicerina (ceras.3 a 0. Cloroformo Marcha de tos trabajos. Ractivos.Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 44 3. La formación de la acroleina en el tubo de ensayo con la grasa se reconoce por la aparición de un olor característico.2. Cera. La reacción de formación de la acroleína se hace con el propósito de reconocer la glicerina libre o ligada en la molécula de grasa. cristalino. Grasa o aceite vegetal. y ella se convierte en acroleína. En cuatro tubos de ensayo se vierten de 5 a 7 gotas de aceite dé girasol. Mechero de gas o infer-nilla. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Aceito de girasol. Solubilidad de las grasas El trabajo se realiza con el aceite vegetal y diferentes solventes.5 g de aceite. en el Dr. En ambos tubos se añade aproximadamente 1 g de hidrosulfato potásico. La mezcla en los tubos de ensayo se calienta con cuidado pero fuertemente. En un tubo de ensayo se vierte ó 10 gotas de aceite. que es un aldehido no saturado. Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. En el primer tubo añaden 2 ml de agua. Instrumentos. en el otro se pone de 0. Benceno.C. Soporte con tubos de ensayo.

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segundo una disolución turbia, que indica la mala solubilidad del aceite en alcohol; en el tercero y el cuarto tubos de ensayo se forman disoluciones transparentes debido a una buena solubilidad del aceite en benceno y cloroformo.

3.5. Determinación de la temperatura de fusión
La temperatura de fusión de una grasa es uno de los indicadores que permite, en cierta medida, juzgar sobre su asimilación. Las grasas que funden a baja temperatura se emulsifican más fácilmente y, en consecuencia, se asimilan con mayor facilidad. La temperatura de fusión de los glicéridos es condicionada por sus ácidos grasos constituyentes. Como regla, el punto de fusión de la grasa es tanto más bajo cuanto más alto es el contenido de los ácidos de cadena corta o no saturados. A la temperatura ambiente las grasas de origen vegetal son líquidos, puesto que en su composición la cantidad de ácidos grasos no saturados alcanza un 95 ó 97%. En la composición de las grasas sólidas poco fusibles de origen animal prevalecen los ácidos grasos de cadenas de carbono largas. Las grasas naturales no poseen un punto de fusión determinado, ya que no son sustancias químicas individuales, sino mezcla de diferentes glicéridos, ácidos grasos libres, pigmentos, vitaminas y otras sustancias. La temperatura de fusión de las grasas depende de la especie del animal y oscila dentro de límites siguientes en °C: ovejas 49—54, venados 48—52, ganado vacuno 48—50, cabras 46—48, camellos 36-48, cerdos37— 45, caballos28—32,perros23—27, conejos 22- 25. Instrumentos. Capilar de vidrio de 1.5 ó 2 mm en diámetro. Termómetro. Tubo de ensayo. Vaso químico. Lupa. Reactivos. Grasa de origen animal (fundida y filtrada). Marcha de los trabajos. El capilar limpio y seco se llena de grasa a una altura de unos 2 cm y se mantiene durante 1 h sobre hielo o en agua corriente fría. Terminado el enfriamiento, la parte del capilar llenada de grasa se corta, dejando la columna de grasa de 0.5 cm de altura. El capilar se ajusta mediante un anillo de goma en la parte inferior del termómetro de tal manera que su punta llena de grasa Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua

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sea dirigida hacia arriba y su otro extremo libre de grasa, hacia abajo. El termómetro con capilar se mete en el tubo de ensayo donde se ajusta con ayuda de un tapón. El tubo de ensayo se sumerge en el vaso con agua y se sujeta en la patilla del soporte en posición vertical. El nivel de agua en el vaso debe ser más alto que el término superior del capilar. El agua se calienta poco a poco, removiéndola frecuentemente, y a través de la lupa. Se observa el aumento de la temperatura y el estado columna de grasa en los capilares. La indicación del termómetro en el momento cuando la grasa empiece a fluir por el capilar y en la parte superior de este último se forme un espació libre, se anota como la temperatura de fusión. Entre el inicio y el final de la transición de la grasa desde el estado sólido al líquido transcurre cierto tiempo. Por lo tanto, para evitar errores, la temperatura de fusión grasa se determina por lo menos dos veces, y el resultado se calcula como promedio.

3.6. Determinación del número acídico
El número acídico caracteriza la presencia de ácidos grasos libres en la grasa. El número acídico se expresa en cantidad de miligramos de hidróxido potásico necesarios para neutralizar los ácidos grasos libres en 1 g de grasa. Este índice es uno de los indicadores más importantes la calidad de la grasa. El número acídico de la grasa fresca de distintos tipos no sobrepasa, comúnmente, una magnitud de 1.2 a 3.5. En el curso de almacenaje de la grasa tiene lugar la hidrólisis de los glicéridos y acumulación de los ácidos grasos libres. Una elevada acidez de una grasa indica la pérdida de su calidad. Instrumentos. Matraz Erlenmeyer. Bureta. Pipetas de 1 y 10 ml. Reactivos. Aceite de girasol. Mezcla neutralizada de alcohol con éter (mezcla de alcohol con éter 1:2 que se neutraliza con disolución 0.1 N de hidróxido potásico según la fenolftaleina). Hidróxido potásico, disolución 0.1 N. Fenolftaleina, disolución 0.1%. Marcha de los trabajos. En el matraz Erlenmeyer se vierte 1 g de aceite de girasol, se añaden 10 ml de mezcla de alcohol con éter, el contenido se agita cuidadosamente. Se agregan 2 ó 3 gotas de Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua

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fenolftaleína, y la disolución se valora rápidamente con la disolución de hidróxido potásico 0,1 N, con agitación, hasta la aparición de una coloración rosa que persista más de 1 min. El número acídico se calcula según la fórmula

donde x es el número acídico, en mg; a es el volumen de disolución de hidróxido potásico de 0.1 N consumido para la valoración de la prueba a investigar, en ml; 5.6 es la cantidad de hidróxido potásico (mg) que se contiene en 1 ml de disolución dé hidróxido potásico 0.1 N; K es el coeficiente de corrección dé la disolución de 0.1 N de hidróxido potásico; c es la muestra pesada de aceite, en g.

3.7. Determinación del índice de iodo
Se denomina índice de iodo la cantidad de gramos de iodo que pueden combinarse con 100 g de grasa. Este número permite evaluar el grado de insaturación de la grasa provocado por la presencia de glicéridos con ácidos grasos de dobles enlaces, la capacidad de la grasa para la oxidación, para la reducción y otras reacciones. Cuanto mayor es el contenido de ácidos grasos no saturados en la grasa, tanto mayor es su índice de iodo. El índice de iodo dé algunas grasas y aceites oscila dentro de los siguientes límites: de res, 27—47;de carnero,31—46; de cerdo, 46—66;de perro, 56—67; aceite de girasol, 129—136; aceite de cáñamo, 145—162; aceite de linaza, 175—201. El principio del método. La determinación del índice de iodo se basa en la reacción de adición del iodo al lugar de ruptura de los dobles enlaces en las moléculas de ácidos grasos, que se verifica cuantitativamente según el esquema:

El iodo que no ha reaccionado se valora con tiosulfato. Dr. Claudio Arzola Alvarez, M.C. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua

Determinación del número (índice) de saponificación Número de saponificación se denomina el núnero de miligramos de hidróxido potásico que se necesitan para neutralizar todos los ácidos grasos (libres y ligados en forma de glicéridos) que se contienen en 1 g de grasa. disolución al 1%. 212—247. Cuando la muestra de aceite sea disuelta. Matraces Erlenmeyer de 50 ml con tapones. agitando permanentemente. a es el volumen de la disolución de tiosulfato sódico 0. y luego al añadir 1 ml de disolución de almidón al 1% desaparición de la coloración azul. Claudio Arzola Alvarez. disolución 0.g) se calcula según la fórmula: donde b es el volumen de disolución de tiosulfato sódico 0.1 g de aceite de girasol (se pesa en una balanza analítica). con disolución de tiosulfato sódico 0. grasa de carnero. manteca de cerdo. 0. primero hasta que la coloración se ponga amarilla clara. 100 es el coeficiente de recuento para los 100 g de grasa. M. el contenido se remueve agitándolo. Al cabo de 5 min las pruebas se evalúan. c es la muestra pesada de grasa.1 N de tiosulfato sódico. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua .1 N. Aceite de girasol.1 N de iodo en alcohol. Reactivos. Almidón. g. Iodo. Tiosulfato sódico.8.C. en los matraces se añaden con la pipeta 10 ml (¡exactamente!) de disolución 0. 190—200.1 N consumido en la valoración de la prueba experimental.1 N. Marcha de los trabajos. y los se dejan en la oscuridad. Cloroformo. aceite de linaza. 3. Pipeta de 10 ml. 200.Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 48 Instrumentos. disolución 0. 187-195. manteca de vaca. El índice de iodo (x. Dr. consumido en la valoración de lá prueba de control en ml. en el otro (prueba de control) 0. en ml.1 N.1 mi de agua.691 g de iodo recién sublimado se disuelven en 1 l de alcohol etílico al 96%). 192—198.1 N. En un matraz (prueba experimental) se pone 0. El número de saponificación de algunos aceite de buena calidad tiene los valores siguientes: grasa de res.1 N en alcohol (la preparación: 12. K es el coeficiente de corrección del título de la disolución 0. Bureta. los matraces se cierran con tapones.01269 es la cantidad de iodo (g) equivalente a 1 ml de disolución de tiosulfato sódico 0. y se añaden de la bureta 5 ml de cloroformo en cada uno.

Tijeras curvas. M. A través de la boca superior del refrigerante el extractor y el matraz se llenan de éter en una cantidad igual a dos volúmenes del extractor.5 N (la preparación: 30 g de hidróxido de potasio quimicamente puro se disuelven en 30 ml de agua destilada. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Pipetas graduadas de 1 ml. 11). Baño maría.5 N.C. Cartuchitos para extracción hechos d papel de filtro denso desgrasado (los cartuchitos se secan. Pesafiltros. Hígado y músculos frescos.1%. Baño de maría. Determinación cuantitativa de la grasa en el hígado y los músculos El contenido de la grasa se determina mediante la extracción de una muestra pesada de los tejidos a investigar en el aparato Soxhlet. Las muestras secadas se trituran en el mortero y se trasladan en cartuchitos de papel de filtro. Claudio Arzola Alvarez. 3. Aceite de girasol. Ácido clorhídrico. Marcha de los trabajos.Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 49 Instrumentos. Balanza analítica. éste se coloca en el baño maría. extractor (2) y refrigerante de reflujo (3) unidos ajuste damente mediante conexiones esmeriladas (fig. Hidróxido potásico alcohólica 0. Matraces Erlenmeyer refrigerantes de reflujo. Instrumentos. se desmenuzan con tijeras sobre un vidrio de reloj. Los cartuchitos con el material a investigar se pesan y se meten en el extractor del aparato Soxhlet. Mortero de porcelans Vidrios de reloj. Fenolftaleína. Reactivos. Estufa. y el matraz se calienta en el baño de María. disolución al 0. se ponen en los pesafiltros se secan en el armario secador a una temperatura de 102 106 °C hasta una masa constante. Se deja pasar el agua por el refrigerante. El método se basa en la determinación de la masa de los tejidos antes y después de la extracción de las grasas con disolvente. a 106 °C. Todas las partes del aparato se unen herméticamente. Se toman muestras pesadas de hígado y músculos (hasta 3 g de cada tejido). se pesa y se guardan en el desecador).9. y el volumen se lleva a 1l con alcohol etílico al 96%. Reactivos. Bureta. al cabo de 24 h se filtra). Aparato Soxhlet. Dr. disolución 0. Éter dietílico. Principio del método. El aparato consiste de tres partes: matra (7).

Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 50 Durante la extracción se observa que la cantidad del disolvente en el matraz no sobrepase 2/3 de su capacidad y que Aparato Soxhlet el disolvente que se condensa no suba demasiado en el refrigerante. Los cartuchitos se pesan en la balanza analítica y a partir de la diferencia entre la masa del cartuchito antes y después de la extracción se determina la cantidad de la grasa en las muestras pesadas. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . M.C. La extracción se prolonga durante 5 ó 6 h. La plenitud de la extracción de la grasa desde los tejidos se establece por la ausencia de manchas grasosas sobré papel de filtro tras la evaporación de varias gotas de éter tomado del extractor. en el armario secador a una tempetarura de 102 a 106° C durante 4 ó 5 h hasta la masa constante. Después de la extracción los cartuchitos con el material se quitan del aparto Soxhlet y se secan primero en la campana de humos y. Claudio Arzola Alvarez. al vaporizarse el éter. La cantidad de la grasa x (en se calcula según la fórmula %) Dr.

M. Claudio Arzola Alvarez. 100 es el coeficiente porcentual de recuento.C. en g. c es la muestra pesada del material a investigar.Manual del laboratorio de Bioquimica Lípidos… Pagina 51 donde a es la masa del cartuchito con la muestra antes de la extracción. b es la masa del cartuchito con la muestra después de la extracción. en g. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . en g. Dr.

Arzola. UACh febrero 2006 .Serie de Prácticas 5 Enzimas C. C. Holguín Facultad de Zootecnia.

Claudio Arzola Alvarez Número de alumnos por práctica: Tres Propósito de la práctica: Al terminar esta práctica. CHECHETKIN et. serás capaz de manejar con propiedad las enzimas. al.V. deberás de observar una conducta adecuada durante la misma. Sin embargo. Podrás constatar algunos fenómenos de importancia en cuanto a la respuesta física de las enzimas y relacionar esta con fenómenos de producción agropecuaria. Enzimas4 Facultad de Zootecnia.4. puesto que la práctica se llevará a cabo en grupo. obtendrás menor calificación. tendrás la habilidad de elaborar un protocolo para emprender el estudio sistemático del grupo de moléculas mas represenativas de la bioquímica. el cual deberá ser individual. con lo que lograrás una eficiente comunicación con colaboradores y colegas. Editorial MIR. En caso de presentarse duplicidad del informe con otros del grupo o de otros grupos. Puesto que el desarrollo de esta práctica se considera una actividad integradora. 1984. 4 . La pulcritud y el orden será un factor que te permita desarrollar la habilidad requerida para el desarrollo de este tipo de actividades. Universidad Autónoma de Chihuahua Responsable: Dr. Al terminar. Adaptado de PRACTICAS DE BIOQUÍMICA DEL GANADO Y AVES DE CORRAL. Moscú. el protocolo deberá ser entregado en forma individual para su evaluación. deberás entregar un informe del desarrollo y resultados de la práctica. A. con actitudes de respeto a tus compañeros y maestros. Al mismo tiempo. con miras a que tu posterior desempeño profesional sea de alto nivel.

Semejantemente a los catalizadores inorgánicos. Claudio Arzola Alvarez. Influyendo en la velocidad de las reacciones metabólicas. Sin embargo. presión baja y unos valores de pH cercanos al neutro. desempeñan su función a una temperatura moderada. M. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . los catalizadores biológicos poseen una eficiencia mayor en la disminución de la energía de activación y. Al mismo tiempo. Dr. el conjunto de los cuales constituye la esencia del metabolismo. como regla general. su especificidad. las enzimas son sensibles a las variaciones de las condiciones del medio en que están funcionando y tienen una serie de particularidades relacionadas a su naturaleza proteínica. Ellos consisten en una combinación única do los restos de aminoácidos situados en la cadena polipéptida a larga distancia uno del otro.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 54 Se llaman enzimas las proteínas específicas que poseen función catalítica. las enzimas aumentan la velocidad de las reacciones químicas a cuenta de la disminución de la energía de activación. las enzimas son capaces de regular efectivamente los procesos de vitalidad. Con participación de las enzimas se verifican numerosos procesos químicos. sensibilidad al cambio de la temperatura y el pH del medio así como también a la presencia de los activadores e inhibidores. La actividad catalítica de la enzima está relacionada con a presencia en su molécula de unas regiones especiales responsables de la fijación y la activación del sustrato: el centro de sustrato y el centro activo. son condicionadas por la naturaleza proteínica de los catalizadores biológicos.C. Propiedades generales de las enzimas Las particularidades características de las enzimas.

Termostato (37 °C). La temperatura óptima para la acción de enzimas es Ja temperatura de cuerpo de los animales que oscila en el intervalo de 36 a 41 °C. Vaso do 50 ml. El mecanismo de este proceso no está claro. Reactivo do Lugol.C. La saliva en el tubo de ensayo 1 se hierve durante 1 min. Instrumentos. Sin embargo. disolución al 1% en disolución do cloruro sódico al 0. la desnaturalización de la enzima que se acelera bruscamente a la temperatura que sobrepase 50°C.1 La labilidad térmica de las enzimas La temperatura del medio influye mucho en la actividad de las enzimas. Se investiga la influencia del camino de Ja temperatura del medio exterior sobre la actividad de la enzima amilasa de la saliva. al tomar en la boca de 20 a 25 ml de agua. gradualmente. 4. incluso un aumento pequeño de la temperatura conduce al debilitamiento de los enlaces que mantienen la conformación de la molécula de enzima. Con cierto aumento de la temperatura del medio ocurre aceleración de la reacción a consecuencia de la activación de las moléculas de sustrato. el enfriamiento no causa desnaturalización de la enzima y por lo tanto su inactivación puede ser reversible. Luego en todos los tubos de ensayo se añaden 4 ml de disolución Dr.3%. que son proteínas conjugadas. en la formación del centro catalítico participan también los componentes no proteínicos directamente afines a la región activa del glóbulo.3%. al formarse una estructura terciaria de la molécula. En tres tubos de ensayo se vierten de 2 a 3 ml de saliva diluida (amilasa) en cada uno. En cuanto a las enzimas.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 55 Acercándose. Principio del método. Empieza. M. Claudio Arzola Alvarez. Soporte con tubos de ensayo. Cualquier influencia exterior que altera la conformación nativa de la molécula proteínica conduce a la inactivación de la enzima. Al bajar la temperatura la enzima disminuye su actividad también. necesaria para la manifestación de su actividad catalítica. ellos dan lugar a un centro catalítico. Cloruro sódico. Almidón. A la vez. Infernilla. la colectan en un vasito). Saliva diluida (se enjuaga la boca con agua destilada y luego. disolución al 0. Marcha de los trabajos. Vaso con hielo. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . La inactivación de la enzima con aumento de la temperatura del medio es irreversible. Reactivos.

Los resultados del experimento se anotan en la tabla de lab] térmica de las enzimas y se sacan conclusiones: Número Enzima del tubo de ensayo j 1 Condiciones del experimento Coloracion con iodo Sustrato Incubación.5 ml de disolución A con Dr. disolución 0. Instrumentos. y como resultado sse rompen los enlaces que aseguran la formación de los centro catalíticos. A los valores de pH muy altos o muy bajos las enzimas se desnaturalizan. Forsfato sódico disustituido. 37°C-10 min. Los grupos amino y carboxilo de los restos de aminoácidos ionizados a una magnitud de pH determinada. M. donde se mantienen 10 mín. 37°€ la min.C. El tubo de ensayo 3 se sumerge en hielo y se tiene durante 10 min.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 56 de almidón. Soporte con tubos de ensayo.8: se mezclan 772. Acido cítrico (CeH8O7H2O).0. Termostato (37 °C). Pipetas. se mezclan 515 ml de disolución A con 485 ml de disolución B. en el tubo de ensayo se añade 1 gota de reactivo de Lugo. A una magnitud de pH distinta se altera la ionización de los grupos correspondientes.2 Influencia del pH sobre la actividad de las enzimas Para cada enzima existe un óptimo del pH a que crean las condiciones más favorables para el mantenimienato de la conformación funcionalmente activa de la molécula. Reactivos. Se investiga la actividad diferentes magnitudes de pH del medio. Disoluciones amortiguadoras (pH 5. Los tubos de ensayo 1 y 2 si colocan en el termostato (37 DC). Claudio Arzola Alvarez. pH 6. Principio del método. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua de la amilasa de la saliva a . disolución 0. Al transcurrir este tiempo. 0°C 4.1 M (B).2 M (A). participan en el mantenimiento de la conformación de la molécula proteínica necesaria para la formación de los centros catalíticos de enzima y favorecen también a su ligación con el sustrato. 2 3 Amilas Enzima desnaturalizada a Amilasa Enzima Amilas nativa Enzima a ti Conclusiones: Almid ón Almidó n Almidó 10 miB. y la enzima se inactiva.

5 ml de disolución B). Sacarosa. Almidón. como una llave a cerradura.5 ml de disolución B.0).3 Especificidad de las enzimas Las enzimas se distinguen de los catalizadores inorgánicos por su especificidad excepcionalmente alta. Claudio Arzola Alvarez.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 57 227. Do tal modo. Saliva diluida. disolucion al 2%. 8. En todos los tubos de ensayo se añaden de 2 a 3 ml de saliva diluida (amilasa) y de 4 a 5 ml de disolución de almidón. Reactivos. en cada tubo de ensayo se añade 1 gota de reactivo de Lugol. es decir.0. la esencia de la especificidad de enzimas consiste en el hecho de que el sustrato le corresponde a la enzima. Solamente en este caso es posible la formación del complejo enzima-sustrato y el cumplimiento de la función catalítica de la enzima. Reactivo de Fehling. Saliva diluida. Termos (37 °C). disolución al 1%. Pipetas. M. La etapa inicial del acto catalítico consiste en la formación del complejo enzima-sustrato. Infemilla. Reactivo de Lugol. disolución al 1%. Lugol. Luego. se mezclan 972. pH 8.0 Almidó Almidó Almidó 10 1 10 min min min 37° C 37° C 37° C 4.0.8 8. En tres tubos de ensayo se vierten de 2 a 3 ml de disoluciones amortiguadoras de distintos pH (5. Reactivo de Dr. se mezcla y se incuba durante 10 min en el termostato (37°C).8. Soporte con tubos de ensayo. Sacarasa. la ligación del sustrato con el centro catalítico de la enzima.C. 6. Marcha de los trabajos. Se investiga la influencia de enzimas amilasa y sacarasa sobre diferentes sustratos: el almidón y la sacarosa. La conformación espacial del centro de sustrato debe estar en la correspondencia geométrica exacta con la estructura de la molécula de sustrato. Almidón.5 mi de disolución A con 27.0 6. Instrumentos. disolución (10 g levadura se homogeneiza en 100 ml de agua). Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Los resultados de la observación se anotan en una tabla que indica la influencia del pH sobre la actividad de la amilasa de la saliva: Número de tubo de ensayo 1 Enzima pH del medio Sustrato Incubació n Coloració n con iodo Amilasa 2 Amilasa 3 Amilasa Conclusiones: 5. Principio del método.

mediante la fijación sobre la molécula de enzima de una serie de sustancias d bajo peso molecular. todas las enzimas se subdividen en seis clases principales en correspondencia con el carácter de la reacción catalizada por ellas: oxidorreductasas. Las observación se anotan en la tabla de especificidad de las enzimas amila y sacarasa: Número Enzima del tubo de ensayo j 1 Condiciones del experimento Coloracion con yodo Sustrato Incubación. liasas. 0°C 4. Dr. hidrolasas. 2 3 Amilas Enzima desnaturalizada a Amilasa Enzima Amilas nativa Enzima a ti Conclusiones: Almid ón Almidó n Almidó 10 miB. En tubos de ensayo 1 y 3 se añaden de 2 a 3 ml de saliva diluída (amilasa). 37°C-10 min. y en los tubos de ensayo 2 y 4.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 58 Marcha de los trabajos. de 1 a 2 ml de reactivo de Fehling y se calienta. en cada una y en los tubos de ensayo 3 y 4. de 4 a 5 ml de disolución de sacarosa. trans-ferasas. isomerasas y ligasas (sintetasas). En los tubos de ensayo 1 y 2 vierten de 4 a 5 ml de disolución de almidón. M. Oxidorreductasas Las oxidorreductasas son una clase de enzimas que catalizan las reacciones de oxidación-reducción. en tubos ensayo 3 y 4. Tales sustancias pueden causar efecto Determinación de la actividad de las enzimas Según la clasificación elaborada por la Comisión Internacional de Enzimas. Claudio Arzola Alvarez.4 Influencia de los activadores e inhibidores La regulación de la actividad de las enzimas se realiza tanto en la célula como fuera de ella. El contenido de los tubos de ensayo mezcla y se incuba durante 10 min en el termostato (37°( Luego en los tubos de ensayo 1 y 2 se añade 1 gota de reactivo de Lugol. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . de 2 a 3 ml de disolución de sacarasa.C. 37°€ la min.

Mortero con machaca. De coenzima sirve el dinucleótido de flavina-adenina (FAD). Acido succínico. Baño de María (50 °C). En las células la enzima está unida establemente con la membrana de mitocondrias. Músculo fresco (desmenuzado en picadora de carne). El hidrógeno que se desprende del ácido succínico bajo la influencia de la enzima dehidro-fenasa. Pipetas. La masa homogeneizada obtenida se reparte en dos porciones iguales que se ponen en dos tubos de Dr. Hidróxido sódico. M.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 59 4. Acido tricloroacético. Marcha de los trabajos. Principio del método. disolución acuosa al 0. La enzima redunda devuelve fácilmente el hidrógeno cuyo aceptor pueden ser los colorantes aptos para la reducción.C. En el mortero se tritura cuidadosamente.4 según el papel indicador). añadiendo de 3 a 4 ml de disolución de ácido succínico. Arena de vidrio. Reactivos. Claudio Arzola Alvarez. Aceite de vaselina o vegetal. Azul de metileno. Termómetro. Instrumentos. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . reduce el azul de metileno (AM) transformándolo en un compuesto incoloro (AMH 2). disolución al 3% (3 g de ácido succínico se disuelven en 97 ml de agua y se neutraliza con disolución de hidróxido sódico al 10% hasta el pH 7. Soporte con tubos de ensayo. aproximadamente 1 g de tejido de músculo desmenuzado. disolución al 10%. disolución al 20%.5 Determinación de la actividad de la dehidrogenasa de ácido succínico La dehidrogenasa de ácido succínico (succinato dehidrogenasa) es una enzima que cataliza la oxidación del ácido succínico. con la arena de vidrio.001%.

En el tubo de ensayo 1 (de control) se añade 1 ml de disolución de ácido tricloroacético para destruir la enzima. En el tubo de ensayo 2 (experimental) la enzima es activa. M. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . Al pasar este tiempo. En ambos tubos de ensayo se añade 1 ó 2 gotas de disolución de azul de metileno. en el tubo de ensayo 2 se observa la descoloración del azul de metileno. Claudio Arzola Alvarez.5 a 1 ml de aceite para aislar del oxígeno de aire. se mezcla.Manual del laboratorio de Bioquimica Enzimas… Pagina 60 ensayo. Dr. Ambos tubos de ensayo se incuban en el baño maría (50°C) durante 10 min. y sobre la superficie de líquido se vierte de 0.C.

C. 3a. ALBERT LEHNINGER EDICIONES OMEGA. REIMPRESION 1983 PRINCIPLES OF BIOCHEMISTRY ALBERT LEHNINGER AD. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 61 . 7a. S. DE. DAVID RAWN AD. Claudio Arzola Alvarez. 1993 BIOQUIMICA. MANUAL MODERNO. J.BIBLIOGRAFIA BIOQUIMICA H. INTERAMERICANA Mc. M. GRAW . REVERTE. Dr. HORTON et al DE.V. EN ESPAÑOL 1993 BIOQUIMICA DE HARPER ROBERT K MURRAY AD.A. 1994 BIOQUIMICA: LAS BASES MOLECULARES DE LA ESTRUCTURA Y FUNCION CELULAR.R. 1980. INC.HILL 1989 BIOQUIMICA LUBERT STRYER AD.A. DE C. S. PRENTICE HALL HISPANOAMERICANA. S. WORTH PUBLISHERS. S.A.A.

ya que hay la posibilidad de que los alimentos o bebidas se hayan contaminado con productos químicos. Informa al encargado del laboratorio de lo que ha sucedido y si es necesario pide asistencia médica. 6. Dr.C. 4. Es necesario localizar las salidas principales y de emergencia por si se diese el caso de una evacuación por fuego o por cualquier otro incidente. Es obligatorio usar gafas de seguridad siempre que se esté en el laboratorio. en menos de 10 segundos. El uso de bata es obligatorio. duchas de seguridad y duchas de ojos. 8. 7.ANEXOS NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD E HIGIENE 1. No dirijas una corriente de alta presión de agua de un grifo directamente al ojo porque podrías lesionarlo. ya que por mucho cuidado que se tenga al trabajar. Sí un producto químico te salpica los ojos. En estos casos es recomendable el uso de gafas graduadas o de gafas de seguridad cerradas. El uso de bata (preferentemente de algodón) es obligatorio. Así mismo se recomienda llevar zapatos cerrados y no sandalias. 2. 5. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua Pagina 62 . Actúa siempre con urgencia. 3. ya que en caso de accidente las salpicaduras de productos químicos o sus vapores pueden pasar detrás de las lentes y provocar lesiones en los ojos antes de poder retirar las lentes. utiliza inmediatamente una ducha de ojos y lava completamente el ojo afectado durante 15 minutos sin interrupción. 9. M. No usar lentes de contacto en el laboratorio. No comer ni beber en el laboratorio. así como conocer la localización exacta de extintores. las salpicaduras de productos químicos son inevitables. Antes de empezar el trabajo en el laboratorio tienes que familiarizarte con los elementos de seguridad disponibles. Claudio Arzola Alvarez.

El material y los aparatos utilizados tienen que dejarse siempre limpios y en perfecto estado de uso. 23. 21. 18. 11. No inhales. Procure quitarse la bata hasta que salga del laboratorio.C. productos químicos vertidos. tampoco las neveras u otras instalaciones destinadas al empleo en los laboratorios. 17. 13. nunca por el fondo del tubo. M. Cuando caliente tubos de ensaye hágalo siempre en la parte superior del líquido y con agitación suave. abrigos. Lavarse siempre las manos después de hacer cualquier análisis y antes de salir del laboratorio. 12. El área de trabajo tiene que mantenerse siempre limpia y ordenada. empujar. No utilices nunca un equipo o aparato sin conocer perfectamente su funcionamiento. No se puede hacer ningún experimento no autorizado. etc. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . sin libros. Todos los productos químicos tienen que ser manejados con mucho cuidado de acuerdo con las Hojas de Seguridad de cada una de las sustancias. sin correr. gritar. Está prohibido fumar en el laboratorio por razones higiénicas y de seguridad. 15. Para pipetear los líquidos utilice siempre una bombilla pipeteadora. Sí tuviese que hacerlo. 20. 24. pruebes o huelas productos químicos si no estás debidamente informado.Manual del laboratorio de Bioquimica Seguridad… Pagina 63 10. No deben transportarse innecesariamente los reactivos de un sitio para otro del laboratorio. Claudio Arzola Alvarez. tenga cuidado con las botellas. no absorber directamente con la boca. nunca por la boca de la botella. Cerrar herméticamente los frascos de productos químicos después de utilizarlos. y debe estar inclinado y no apuntar hacia ninguna persona. sin bromas. 16. Los recipientes del laboratorio nunca deben utilizarse para el consumo y conservación de alimentos y bebidas. La conducta en el laboratorio debe ser seria. No utilices material de cristal en mal estado ya que aumenta el riesgo de accidentes. 22. bolsas. 25. las cuales deben ser siempre transportadas cogiéndolas por el fondo. jugar. 14. Dr. 19.

MEDIDAS GENERALES EN CASO DE ACCIDENTE PLAN GENERAL DE EMERGENCIA: • Dar la alarma. • Avisar al responsable del departamento.Manual del laboratorio de Bioquimica Seguridad… Pagina 64 26. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . • Ayudar a las personas. • Avisar a ambulancias. corrosivos o lacrimógenos. • Evacuación del edificio en caso necesario. Claudio Arzola Alvarez. irritantes. especialmente cuando manipules productos tóxicos.C. bomberos. FUEGO EN EL LABORATORIO: Dr. • Luchar contra el fuego. M. • Ponerse a salvo. No inhales los vapores de productos químicos y trabaja siempre en vitrinas extractoras.

QUEMADURAS: • Las pequeñas quemaduras producidas por material caliente. utilizar los extintores adecuados. sí la principal está bloqueada. M. no utilices nunca un extintor sobre una persona. placas. pide inmediatamente ayuda. cúbrele con una manta antifuego. por pequeño que sea el fuego. • Retirar los productos químicos inflamables que estén cerca del fuego. baños. • Avisar a todos los compañeros de trabajo sin que se extienda el pánico y conservando siempre la calma. • Sí el fuego es pequeño y localizado.C. si está cerca.. hazle rodar por el suelo. No utilices nunca agua para extinguir un fuego provocado por la inflamación de un disolvente. mantén a la persona tendida. • Es tu responsabilidad ayudar a alguien que se está quemando. apagarlo utilizando un extintor adecuado. arena o cubriendo el fuego con un recipiente de tamaño adecuado que lo ahogue. procurando que no coja frío y proporciónale asistencia médica. • Una vez apagado el fuego. Dr. por la salida principal o por la salida de emergencia. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . avisar al servicio de extinción de incendios y evacuar el edificio. • Para fuegos grandes aislar el fuego. sí el fuego no se puede controlar rápidamente accionar la alarma de fuego. etc. se tratarán lavando la zona afectada con agua fría durante 10-15 minutos. • No utilices cremas y pomadas grasas en las quemaduras graves. • Las quemaduras más graves requieren atención médica inmediata. • Estírate en el suelo y rueda sobre ti mismo para apagar las llamas. condúcele hasta la ducha de seguridad. • No corras ni intentes llegar a la ducha de seguridad si no es que está muy cerca de ti. Claudio Arzola Alvarez. FUEGO EN EL CUERPO: • Sí se te incendia la ropa.Manual del laboratorio de Bioquimica Seguridad… Pagina 65 • Evacuar el laboratorio.

DERRAME DE PRODUCTOS QUÍMICOS SOBRE LA PIEL: • Los productos químicos que se hayan vertido sobre la piel han de ser lavados inmediatamente con agua corriente abundantemente. CORROSIONES EN LA PIEL POR ÁCIDOS Y ÁLCALIS: • Cuando ocurre una corrosión por ácidos. • Sí la cortada es grande y no deja de sangrar. durante 10 minutos como mínimo.Manual del laboratorio de Bioquimica CORTES: Seguridad… Pagina 66 • Los cortes producidos por la rotura de material de cristal son un riesgo común en el laboratorio. corta lo más rápidamente posible la ropa. seca y cubra la parte afectada con linimento óleo-calcáreo o parecido. neutralice la acidez con bicarbonato de sodio durante 15-20 minutos. requiere de asistencia médica inmediata. Dr. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . • Recuerda que la rapidez en el lavado es muy importante para reducir la gravedad y la extensión de la herida.C. • Proporcionar asistencia médica a la persona afectada. • Es necesario sacar toda la ropa contaminada de la persona afectada lo antes posible mientras esté bajo la ducha. como mínimo durante 15 minutos. con abundante agua corriente. lávala con agua y jabón y tápala con una venda. • Sí la cortada es pequeña y deja de sangrar en poco tiempo. lave con agua abundantemente la zona afectada. Claudio Arzola Alvarez. sacar el exceso de pasta formada. M. • Las cortadas se tienen que lavar bien. • Las duchas de seguridad instaladas en los laboratorios serán utilizadas en aquellos casos en que la zona afectada del cuerpo sea grande y no sea suficiente el lavado en una pila.

• Sí el paciente está inconsciente.C. Celia Holguín Licón Facultad de Zootecnia Universidad Autónoma de Chihuahua . • Es necesario recibir asistencia médica. con la cabeza de lado. ponerlo en posición lateral de seguridad.Manual del laboratorio de Bioquimica Seguridad… Pagina 67 • Cuando se produce una corrosión por álcalis. y. con un frasco de lavar los ojos. • Es necesario mantener los ojos abiertos con la ayuda de los dedos para facilitar el lavado debajo de los párpados. y estirarle la lengua hacia fuera. Claudio Arzola Alvarez. • Lava los dos ojos con agua corriente abundantemente durante 15 minutos como mínimo en una ducha de ojos. INGESTIÓN DE PRODUCTOS QUÍMICOS: • Antes de cualquier actuación pide asistencia médica. si no hay. Dr. cuanto antes se lave el ojo. por pequeña que parezca la lesión. menos grave será el daño producido. CORROSIONES EN LOS OJOS: • En este caso el tiempo es esencial (menos de 10 segundos). seca y cubre la zona afectada con una pomada de ácido tánico. M. lave la zona afectada abundantemente con agua corriente y aclárala con una disolución de ácido acético al 1%.

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