Cinetica de crecimiento microbiano Cultivo batch

Introduccin

El cultivo batch es un mtodo de cultivo mas simple, consta de un recipiente

cerrado en el cual se aporta nutrientes al principio del proceso, el proceso se
cierra y los productos se recogen cuando el proceso ha finalizado. Este proceso
se da por concluido cuando se agota el sustrato limitante del medio de cultivo,
o se produce la acumulacin de sustancias inhibidoras formadas por los propios
microorganismos.

La evolucin del cultivo con el tiempo sigue una curva tpica denominada curva
de crecimiento microbiano

Fig. 1: Curva de crecimiento microbiano

Fase de latencia: es la fase donde el crecimiento del microorganismo

necesita un periodo de adaptacin a las condiciones del cultivo, durante
este periodo no hay divisin celular y la duracin de esta etapa depende
de la cantidad inicial de inoculo, edad y estado fisiolgico de las clulas.
Fase exponencial: en esta fase la concentracin de biomasa comienza a
aumentar hasta llegar a una etapa donde las clulas crecen a una
velocidad especfica mxima y constante. Al final de esta fase se alcanza
la mxima concentracin microbiana.
Fase de desaceleracin: esta fase es causada por el agotamiento del
sustrato limitante o por acumulacin de inhibidores y por lo tanto la
velocidad especfica disminuye y tiende a 0.
Fase estacionaria: los componentes de las clulas no crecen a la misma
velocidad. El estrs producido por la falta de nutrientes, la existencia de
subproductos o toxinas generan un medio hostil e induce a las clulas a
adaptarse a las nuevas condiciones. En esta fase las clulas aun son
activas y pueden producir metabolitos secundarios.
 Fase de muerte: en esta ltima fase, la concentracin celular disminuye
como resultado de la escasez de reservas de energa o por autolisis.

Materiales y mtodos

1 Erlenmeyer de 2000ml
1 Erlenmeyer de 1000ml
Reactor biolgico
Autoclave
Tapones de algodn
Pipeta
Peachimetro
Probetas
Jeringas
Micropipeta
Tubos de ensayo
Mechero
Flujo laminar
Shaker

Procedimiento

El trabajo practico se llevo a cabo en dos clases:

Primera Clase

Se procedi a la preparacin de sales para el medio de cultivo, se agrego

6 gr de SO4Mg7H2O, 1gr Cl2Ca2H20, 4gr Acido ctrico y se disolvi en
1600 ml de agua destilada. Luego se ajusto el pH de la solucin a 5 con
la utilizacin del peachimetro, y se distribuyo la misma colocando 1200
ml en el Erlenmeyer de 2000 ml y 400ml de la solucin en el Erlenmeyer
de 1000 ml.

Se acondiciono el vaso del biorreactor colocando las pinzas, tapones de

algodn y papel en las entradas y salidas del mismo, luego se adiciono
485ml de agua destilada y 500 microlitros de antiespumante.

Se llevo a esterilzar el biorreactor, soluciones y dems instrumentos, que

se utilizaran posteriormente, en autoclave a 121C por 15 minutos.

Segunda Clase

El da anterior a la clase se inoculo la sepa Saccharomyces cerevisiae

en el medio de cultivo con el fin de reducir la fase de latencia.
Colocados en cuatro Elernmeyer y puestos en el shaker para generar
oxigeno y que la levadura crezca.
 El da de la clase en el flujo laminar se trasvasaron todos los Erlenmeyer
a otro Erlenmeyer y se coloco en el biorreactor junto con el medio de
cultivo restante hasta llegar a una cantidad de 3lt entre ambos.

El biorreactor se acondiciono a una temperatura de y

aproximadamente 500 rpm

Se comenzaron a tomar muestras desde el tiempo 0 a las 8:35 hs hasta

las 12:20 hs con un intervalo de media hora aproximadamente entre
cada toma de muestra. Y se realizaron los siguientes calculos

Biomasa Glucosa
Hor Tiempo pH Abs X (gr/l) Ln(X) Abs Diluci S
a (620 (505 n (gr/lt)
nm) (Y) nm)
8:35 0 5,12 0,517 0,657 -0,419 0,148 10-1 9,67
9:05 1 5,14 0,531 0,679 -0,378 0,125 10-1 8,17
9:50 2 4,89 0,647 0,858 -0,153 0,089 10-1 5,82
10:2 3 4,75 0,739 0,999 - 0,055 10-1 3,6
0 1,5x10-
4
10:5 4 4,60 0,831 1,142 0,1326 0,465 10-1 3,04
0
11:1 5 4,51 0,910 1,2637 0,2340 0,368 10-1 2,40
0
11:3 6 4,5 1,018 1,4303 0,3579 0,143 10-1 0,935
0
12:0 7 4,45 1,112 1,5754 0,4545 0,000 10-1 0
5

De la curva de calibracin brindada por la ctedra se obtuvo la siguiente

ecuacin de calibracin: y=0,6481x+0,091. De la cual despejando x y
remplazando los valores de absorbancia (Y) se obtiene la concentracin
de biomasa x(gr/lt).

Para el clculo de la concentracin de glucosa se utiliza el mtodo de

glucosa oxidasa-peroxidasa. Se llevo previamente la muestra a
centrifugar, se extrajo el sobrenadante y se efectuo la disolucin (1/10),
luego en tres tubos de ensayo se coloco reactivo de trabajo (St), muestra
(D) y el blanco. De los cuales se midi absorbancia a 505nm

La absorbancia del St dio 0.153

La concentracin de glucosa se calculo por la siguiente ecuacin:

S=Dxfx1
Donde f = 1 (gr/lt) / St = 6, 5 gr/lt

Fig. 2: Curva de crecimiento

Conclusion:

Mediante los valores obtenidos podemos decir que el microorganismo

creci durante tres horas aumentando su biomasa desde una
concentracin de 0,657(gr/lt) hasta 1,5754 (gr/lt) consumindose por
completo el sustrato limitante (glucosa) que al comienzo del proceso era
de 9,67 (gr/lt). Comparando estos valores con datos experimentales
anteriores podemos concluir que el microorganismo consumi el sustrato
en muy poco tiempo produciendo un rendimiento bajo en biomasa. Esto
se puede deber a que el cultivo estaba contaminado o a que las
condiciones del medio no eran las adecuadas.