Informe de Laboratorio

Práctica No. 4

RECUENTO DIRECTO AL MICROSCOPIO

CÁMARA DE NEUBAUER

Luis Alfonso Ararat Rodriguez 117003805. Luis.ararat@Unillanos.edu.co

Facultad de Ciencias Agropecuarias y Recursos Naturales.
Universidad de los Llanos, Villavicencio –Meta- Colombia.

RESUMEN

Durante el laboratorio se nos suministró una muestra la cual contenía levaduras,

posteriormente se realizaron diluciones hasta 10-3se procedió a realizar el respectivo
montaje en el microscopio y se llevó al objetivo de 100 x donde gracias a la cámara de
Neubauer realizamos el conteo.

Palabras clave: Dilución, Levaduras, Microscopio, Muestra, Cámara de Neubauer,

INTRODUCCIÓN cada uno de ellos con 16 cuadrados

Manejo de la cámara de recuento
celular Neubauer improved
La cuadrícula de recuento está formada
por 9 cuadrados grandes, cada uno de
ellos con una superficie de 1 mm2.
pequeños en su interior. Los cuatro
cuadrados grandes de las esquinas (no
se muestran en la figura), están
formados por 16 cuadrados medianos.
El recuento se puede realizar tanto en el
cuadrado grande central como en los de
las esquinas, dependiendo del tamaño
de las células en estudio. En este
ejemplo realizaremos el recuento en el
cuadrado central.

Cuando colocamos la muestra bajo el

cubreobjetos, la suspensión celular
alcanza una altura de 0,1 mm. Teniendo
estos datos en cuenta, y si consideramos
uno de los cuadrados grandes, el
volumen contenido en éste será de:

1 x 1 x 0,1 = 0,1 mm3 = 10-4 ml

Img # 1|. Observacion en cámara de
Neubauer.
El cuadrado grande central (que se
puede ver en su totalidad con el objetivo
10X; ver figura), está dividido en 25
cuadrados medianos (con el objetivo
40X se pueden ver los cuadrados
medianos completamente; ver figura),
Con el objetivo 10X del microscopio
hay que localizar la zona de recuento
(uno de los cuadrados grandes). Para
contar las células se cambia al objetivo
40X. Se cuentan las células contenidas
en todos los cuadrados medianos (25 si
hemos elegido como zona de recuento
el cuadrado grande central o 16 si
hemos elegido una de las esquinas) de
acuerdo con el siguiente criterio:
Hay que contar todas las células que
están dentro de cada cuadrado mediano
y aquellas que están tocando los lados
superior y derecho de dicho cuadrado
(aunque estén parcialmente fuera).
Siguiendo este criterio, en la figura se
contarían las células en color verde, y
no se contarían las células en color rojo
(4)
.
producción de vino, cerveza y pan, por
lo que es evidente, que siendo uno de
los microorganismos de mayor
importancia industrial, modelo de
estudio para enfermedades como
Alzheimer, Parkinson y cáncer, y con el
que estamos en constante contacto, es
necesario que conozcamos más
información de este microorganismo (1).

Si hemos contabilizado N células en

uno de los cuadrados grandes (o sea, en
25 cuadrados medianos), la
concentración de nuestra muestra será:

N x 104 cel/ml

Si para hacer el recuento hemos tenido

que concentrar o diluir la muestra
inicial, hemos de tener en cuenta este
factor de concentración-dilución (f): Ima # 2. Saccaromyces cerevisae

N x 104 x f cel/ml Las levaduras, efectivamente, son

hongos unicelulares, con tamaños de 3 a
40 micrómetros, por lo que no es
suspensión celular inicial = suspensión
posible verlas a simple vista, solamente
celular diluida x factor de
en conjunto formando agregados. Su
concentración-dilución .
(4)
tiempo de reproducción varía entre
especies y es de 2 a 3 horas en las
Las levaduras son microorganismos con
condiciones de crecimiento más
los que comúnmente estamos en
favorables. Se conocen alrededor de 500
contacto, encontrándolas en plantas,
especies de levaduras y fueron
animales e insectos, sin embargo, no es
identificadas por primera ocasión por su
del conocimiento de la mayoría, que
capacidad de fermentación por Louis
estos microorganismos también se
Pasteur en 1857. El término levadura
encuentran en superficies como las
proviene del latín “levare”, que significa
cáscaras de frutas y nuestra propia piel.
levantar, ya que produce dióxido de
carbono que causa la expansión de las
Las levaduras impactan diferentes
proteínas del gluten en la harina y hace
sectores comerciales que incluyen
que se expanda la masa (2,3).
alimentos, bebidas, farmacéuticos y
enzimas industriales. En general, las
La especie más conocida y utilizada es
levaduras tienen efectos benéficos en la
Saccharomyces cerevisiae, su nombre
vida humana. A pesar de esto, nuestro
significa levadura comedora de azúcar,
conocimiento de las levaduras parece
entre otros significados similares. De
estar limitado a identificarlas como una
acuerdo a diferentes autores, S.
clase de hongo, utilizado en la
cerevisiae fue seleccionada como
 Informe de Laboratorio
Práctica No. 4

modelo de estudio de laboratorio desde suministrada en la práctica. En la

1930, debido a que conserva procesos
esenciales que son llevados a cabo por
las células en humanos, por lo que las
observaciones de los efectos causados
por enfermedades como Alzheimer, se
pueden extrapolar a humanos (2,3).
cuadricula se contaron 53 levaduras y
luego se aplicó la fórmula:
¿ Particulas cont
x Dil!.
A c ont ( mm 2 ) X p r of . camara(mm)

53 levaduras
¿ x 1000=¿
1mm 2 X 0.1 mm ¿
METODOLOGÍA
= 530000 leva/mm^3
Recuento Directo al microscopio
3 0.001mL
 Cámara de Neubauer. 530000 mm x =530 lev /mL
1 mm3
 Se tomó la muestra.
 Realizamos diluciones hasta 10- Observación: como se puede apreciar
3
. en los resultados podemos decir que
 Se montó al microscopio en 1 ml de la muestra madre se
debidamente como explico el encuentran aproximadamente 530
profesor. levaduras.
 Se realizó el recuento.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Conteo en cámara de Neubauer
CONCLUSIONES
La metodología del recuento directo al
microscopio utilizando la cámara de
Neubauer es una técnica muy fácil y
rápida de realizar en la cual ahorramos
material y la utilización de agares.

Esta técnica puede llegar a ser tediosa al

momento de realizar el conteo, pero
todo depende de la concentración y la
cantidad de diluciones que empleemos
para realizar el conteo.

Ima # 3. Conteo de levaduras mediante BIBLIOGRAFÍA

cámara de Neubauer.

En la imagen 3 el conteo de levaduras 1. Biodiversity and Ecophysiology

mediante cámara de Neubauer se observó of Yeasts. Series: The Yeast
Handbook. Rosa, Carlos
en cada cuadricula de 5 x 5 la presencia
Augusto; Peter, Gabor (Eds.)
de levaduras obtenidas de la muestra 2006
2. Porro, D., Sauer, M.,
Branduardi, P., Mattanovich, D.
2005. Recombinant protein
production in yeasts. Molecular
Biotechnology. 31(3):245–260
3. Eric A. Johnson. 2013. 
Biotechnology of non-
Saccharomyces yeasts—the
ascomycetes. Appl Microbiol
Biotechnol. 97:503–517
4. Anónimo. Manejo de la cámara de
recuento celular Neubauer.
http://insilico.ehu.es/camara_con
taje/neubauer_improved.php