Universidad de Guayaquil

Facultad de Ciencias Químicas

Carrera: Química y Farmacia
Guía de Prácticas de Laboratorio
INFORME DE LABORATORIO
Número de la CONTROL DE CALIDAD DE LA CURVA DE CALIBRADO PARA EL ION
práctica # 8 CROMO (QC)
ANÁLISIS
INSTRUMENTAL Q.F. María José Morales Estupiñan
I
GRUPO DE PRÁCTICA: 1
Integrantes:
1) Moisés Borbor Intriago
2) Josyanna León Molina
3) Bertha Tituana Cabrera
4) María José Viñán
SEMESTRE: Sexto PARALELO: 4A
Objetivos de la práctica de laboratorio
1) Aprender a realizar controles de calidad en curvas de calibrado
2) Emplear de forma adecuada los controles de calidad en las curvas cuando sea necesario
Instrucciones o consideraciones previas

Parámetros de Calidad Analítica

Los métodos analíticos que se apliquen para producir datos de composición química de
alimentos, plaguicidas, materia orgánica, inorgánica, minerales, etc., deben ser apropiados,
utilizar técnicas analíticas exactas y ser realizados por analistas entrenados.
La selección de un método analítico debe ser realizada por el consejero científico del programa
de base de datos, pero esta responsabilidad debe ser compartida con el analista.
El proceso analítico se puede considerar dividido en 3 etapas: i) operaciones previas
(muestreo, acondicionamiento, disolución, separaciones, reacciones analíticas y otras); ii)
Medición y traducción de la señal analítica mediante el uso de instrumentos y; iii) toma y
tratamiento de datos. La calidad de los resultados depende de la calidad de las diferentes
etapas del proceso analítico.
En la elección de un método se debe focalizar la atención en los principios analíticos
involucrados, más bien que en el grado de sofisticación del instrumento. Muchas veces un
método con uso de instrumentos modernos puede producir valores menos confiables que el
método tradicional que pretende reemplazar y es preferible desarrollar programas que
aseguren la calidad de los datos obtenidos. (Armendáris, 2013)
 Criterios para la elección de un método
Basándose en las consideraciones de Egan, la elección de métodos debe considerar:
a. Dar preferencia a métodos cuya calidad y confianza se ha establecido en estudios
colaborativos, o similares en varios laboratorios (ISO / REMCO, 1993)
b. Preferir métodos documentados o adoptados por organizaciones internacionales
reconocidas.
c. Preferir métodos de análisis que se aplican en forma uniforme a varios tipos de
compuestos sobre todo aquellos que se aplican a compuestos específicos.
Entre los atributos a considerar en la calidad de un método se deben mencionar aquellas
características que son básicas: confiabilidad, aplicabilidad, especificad, exactitud, precisión,
detectabilidad y sensibilidad. (Brown, 2004)

Exactitud
Es la cercanía del valor analítico al "valor verdadero" de concentración del compuesto de
interés en el material bajo examen. Es la concordancia entre la mejor estimación de una
cantidad y su valor real. La inexactitud es la diferencia numérica entre el valor promedio de
un conjunto de repeticiones y el valor verdadero.
En la práctica la cercanía a un estándar de algún tipo se toma como medida de exactitud.
Matemáticamente se expresa:
Desviación:

Desviación relativa:

(Universo Formulas, 2016)

Recuperación:
X = valor promedio
◯= valor verdadero
De todas ellas, sin lugar a duda, la más utilizada es la recuperación.
Si bien el valor verdadero de la concentración no se conoce, sino que sólo puede estimarse, es
posible preparar una muestra por un procedimiento más exacto que el evaluado (por pesada,
dilución en peso, etc.) y utilizarla como referencia.
La exactitud o mejor dicho la inexactitud debe ser tan pequeña como sea posible para que el
valor medido se aproxime al de referencia, o sea, la recuperación debe acercarse al 100%.
En el análisis de macro componentes, en general se requiere que el valor medido no difiera
significativamente del aceptado como referencia. Para determinarlo, se utiliza un ensayo t de
Student, efectuando varias determinaciones de la muestra de concentración conocida y
calculando el t experimental (tob) que se compara con tablas t para n-1 grados de libertad en
el nivel de confianza escogido, generalmente p=0,05.

Si el tob es menor que el valor tabulado el método tiene la exactitud requerida para ese ámbito
de confianza. Si el tob resulta mayor que el valor tabulado, el método tiene un error
sistemático, del signo resultante, para ese ámbito de confianza. (Universo Formulas, 2016)
Precisión
En términos reales más bien se debe considerar la imprecisión que corresponde,
aproximadamente, al término dispersión y variabilidad analítica. La imprecisión se determina
haciendo ensayos repetitivos de una misma muestra analítica. o de cada. conjunto de
muestras analíticas y luego se calcula la desviación estándar, siendo muy importante en este
caso la homogeneidad del sustrato.
La precisión tiene la desventaja que requiere que los valores se distribuyan normalmente, que
enfatiza los valores extremos de una serie de mediciones y que en muchos métodos aumenta
la desviación estándar cuando aumenta la concentración.
Para evaluar datos de un amplio rango de concentración es más útil calcular la desviación
estándar relativa (RSD) o bien el coeficiente de variación por ciento (CV%).
 La precisión está relacionada con la disposición de las medidas alrededor de su valor medio
o central y corresponde al grado de concordancia entre ensayos individuales cuando el
método se aplica repetidamente a múltiples alícuotas de una muestra homogénea. (Dosal,
2016)
La precisión se expresa matemáticamente por "S" o más comúnmente por RSD o CV.

Los estimadores desviación estándar y desviación estándar relativa permiten evaluar la

incertidumbre en la estimación de la medida (error aleatorio, correspondiente a la dispersión de datos
alrededor de la Media). (Universo Formulas, 2016)

La precisión de un método analítico debe estudiarse sobre:

a. El sistema, evaluando la dispersión de al menos 6 inyecciones del estándar por ejemplo
en técnica HPLC
b. El método, evaluando la dispersión de varias preparaciones de la muestra final
homogénea. La evaluación corresponde a todo el procedimiento, desde la preparación de
la muestra hasta la medición del analito por parte del instrumento. La
imprecisión causada por las diluciones es un factor que con frecuencia se olvida.
La precisión se puede medir en condiciones repetitivas (mismo analista, mismo día, mismo
instrumento) y en condiciones reproducibles (diferente analista, diferente día, diferente
instrumento).
En muchos casos debe indicarse el límite o intervalo de confianza de la medida el cual
corresponde al rango en el cual puede definirse la probabilidad de capturar el parámetro con
la probabilidad indicada.
Cuando el número de muestras es pequeño (menos de 30), las medidas independientes y la
distribución normal se calculan de acuerdo a la distribución t de Student:
Student tabulado para n mediciones con v=n-l grados de libertad y para varios niveles a de
significancia (el más aplicado es p=0,05 correspondiente a un intervalo de confianza del 95%).
(Universo Formulas, 2016)

Detectabilidad
Es la cantidad mínima de una sustancia (definida en término de cantidad absoluta o
concentración) que proporciona una respuesta medible para un método descrito.
Sensibilidad
Es la pendiente de la curva respuesta -concentración, o el cambio de respuesta por unidad de
concentración. Si la pendiente es empinada el método tiene alta sensibilidad y si la pendiente
es poco empinada, el método posee una baja sensibilidad. En estudios de composición de
nutrientes el análisis de elementos trazas requiere alta sensibilidad, lo que en la práctica se
puede lograr mediante amplificación electrónica o por concentración química del analito.
Validación de métodos
Aún los métodos bien establecidos necesitan ser validados por los analistas usando el
personal, reactivos y equipos del laboratorio cuyo método se quiere validar.
La validación puede hacerse analizando un conjunto de muestras que han sido analizadas por
otro método o por otro laboratorio. El analista debe familiarizarse con un método y asegurarse
que ha alcanzado el grado deseado de recuperación y precisión después de haber analizado
un conjunto de blanco y muestras analíticas sintéticas o fortificadas. (Dosal, 2016)
Si un método particular sobre un compuesto, o realizado en otro laboratorio, ha dado un
cumplimiento adecuado está indicando que el método es adecuado, pero esto no significa que
se pueda asumir que si el método se ha realizado satisfactoriamente con un alimento
determinado opere exactamente igual con un alimento diferente sino muy por el contrario, se
debe asumir la posición opuesta hasta comprobarlo.
Así por ejemplo, alimentos procesados y formulados, especialmente si contienen
emulsificantes, pueden constituirse en un problema especial cuando se analiza, con un
método de análisis desarrollando para un alimento primario.
La validación consiste, en esencia, en confirmar y documentar que los resultados emanados
de la aplicación de un método de análisis son confiables.
Evidentemente todo nuevo método analítico debe validarse para demostrar su idoneidad,
pero generalmente existen metodologías antiguas aplicadas durante mucho tiempo y
entonces tiene poco sentido validar como si fuera una metodología desconocida. Se habla
entonces de una validación retrospectiva, donde se pueden combinar los nuevos criterios de
validación con toda la experiencia ya adquirida. En cambio, se conoce como validación
prospectiva a la que se realiza frente a un producto nuevo.
En muchos casos un método analítico es desarrollado y validado por un grupo de trabajo y
aplicado por otro grupo y para asegurar que este último sea a su vez capaz de entregar
resultados confiables, es conveniente realizar una transferencia de validación. Si se trata, por
ejemplo, de un método cromatográfico consiste en la comparación de resultados de las
pruebas de adecuación y análisis en paralelo, al menos dos muestras homogéneas de
concentraciones conocidas, dentro del rango de aceptación del producto o dentro del rango
de aplicación de la metodología. (Dosal, 2016)
En un ensayo de validación deben considerarse los siguientes parámetros:
- selectividad
- linealidad
- precisión
- exactitud
- sensibilidad
- robustez
La selectividad, precisión, exactitud y sensibilidad fueron descritas con anterioridad y en lo que
respecta a la linealidad de un método analítico se refiere a la proporcionalidad entre la
concentración de analito y su respuesta. Este paso de la validación es necesario si se va a trabajar
con un solo estándar en las determinaciones de rutina, aunque pueden aceptarse métodos no
lineales, si se opera con estándares múltiples cada vez. Además, conjuntamente se determina el
rango lineal, es decir, el intervalo comprendido entre la concentración mínima y máxima de
analito para el cual el método ha sido probado y dentro del cual se puede efectuar el dosaje por
interpolación en una curva estándar.
Para su determinación se prepara una serie de mínimo cinco diluciones de un estándar
comprendiendo los ámbitos estimados de trabajo con un exceso de al menos 50% sobre el
límite superior y un defecto de 50% debajo del límite inferior. Estas soluciones se inyectan, al
menos por duplicado, y se determina la curva de regresión Y = bX+a sobre los puntos
individuales sin promedios por el método de los cuadrados mínimos y se grafica para su
documentación.
En muchos casos es interesante comparar los resultados de la recta de regresión obtenida
sobre el analito puro, con la correspondiente a analito + matriz. (Dosal, 2016)

Rectas de regresión del analito y analito más matriz para HPLC

 La no correspondencia de las rectas indica problemas por efecto de la matriz y está
relacionada con la exactitud del método en cuestión. Estos efectos de matriz pueden
clasificarse de acuerdo a su naturaleza en aditivos y multiplicativos. Los aditivos se refieren
a un desplazamiento positivo del cero en presencia de la matriz y los multiplicativos a un
cambio de la pendiente.

El mejor indicador del modelo lineal, en reemplazo de r es el cálculo del valor tr con n-2
grados de libertad el cual se compara con el valor t tabulado para el nivel de confianza
requerido. La hipótesis nula es "no existe correlación entre X e Y", si el valor observado de tr es
mayor que t tabla se rechaza la hipótesis y existe correlación lineal significativa con la
probabilidad calculada.

(Universo Formulas, 2016)

Reactivos de laboratorio
 Dicromato de potasio (K2Cr2O7)
 Ácido sulfúrico (H2SO4)
Materiales de laboratorio

 Matraces volumétricos 25 ml
 Pipeta volumétrica 2 ml
 Pipeta automática 1000 µl
 Picetas
 Gotero
 Auxiliar de pipeta

Equipos de laboratorio

 Espectrofotómetro GENESYS 20
 Balanza analítica
Actividades por desarrollar/ técnica
operatoria o procedimiento

CONCENTRACION
ALICUOTA VOL. DILUCION
µg Ion Cromo/ml
0.5 25 ml 10
1.0 25 ml 20
1.5 25 ml 30
2.0 25 ml 40
2.5 25 ml 50

Calcule: ¿Cuál es la concentración en µg del ion cromato/ml de cada una de las diluciones?
Solución:
Datos:
V1= X1, X2, X3, X4, X5
C1= 500 µg/ml
V2= 25 ml
C2= 10 µg/ml, 20 µg/ml, 30 µg/ml, 40 µg/ml, 50 µg/ml
V1 C1 = V2 C2

𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 /𝐶1

25 ml ∗ 10 µg/ml
𝑉1 = = 0,5 ml 𝑹//
500 µg/ml
 25 ml ∗ 20 µg/ml
𝑉1 = = 1 ml 𝑹//
500 µg/ml

25 ml ∗ 30 µg/ml
𝑉1 = = 1,5 ml 𝑹//
500 µg/ml

25 ml ∗ 40 µg/ml
𝑉1 = = 2 ml 𝑹//
500 µg/ml

25 ml ∗ 50 µg/ml
𝑉1 = = 2,5 ml 𝑹//
500 µg/ml

Resultados obtenidos

Absorbancia (430.0 nm) Concentración

0.088 20.34

Y=0.00387x+0.0093
𝒀−𝒃 𝟎.𝟎𝟖𝟖−𝟎.𝟎𝟎𝟗𝟑
𝑿= = = 𝟐𝟎. 𝟑𝟒
𝒎 𝟎.𝟎𝟎𝟑𝟖𝟕

𝑽𝒂𝒍𝒐𝒓 𝒄𝒂𝒍𝒄𝒖𝒍𝒂𝒅𝒐 𝟐𝟎
𝒙𝟏𝟎𝟎 = 𝒙𝟏𝟎𝟎 = 𝟏𝟎𝟏. 𝟕%
𝒗𝒂𝒍𝒐𝒓 𝒕𝒆ó𝒓𝒊𝒄𝒐 𝟐𝟎. 𝟑𝟒
Conclusiones
•Logramos aplicar el control de calidad (QC) en la elaboración de la curva de calibración como
herramienta para la posterior validación de métodos de ensayo.
•Realizamos una curva estándar de calibrado para el ion cromo a partir del Dicromato de
potasio, empleando el programa Excel y con la ayuda del espectrofotómetro.

Recomendaciones
•Debemos recordar y aprender el funcionamiento básico del espectrofotómetro, así como también
la lectura y el tratamiento de la muestra.
•Utilizar guantes al momento de colocar el ácido sulfúrico.
Bibliografía
•Armendáris, G., (2013), Absorbancia, Quito, Ecuador: Maya Ediciones.
•Brown, Theodore L.; LeMay, H. Eugene, Jr.; Bursten, Bruce E. Química. La Ciencia Central, 9ª
edición; Pearson Prentice-Hall: México, 2004.
•Universo Formulas (2016), Espectro de absorción, México DF, México. Recuperado de:
http://www.universoformulas.com/estadistica/descriptiva/
•Dosal, M.; Pasos, A.; Sandoval, R. & Villanueva, M. (2016) Radiación electromagnética y ondas,
Buenos Aires, Argentina. Recuperado de:
www.depa.fquim.unam.mx/amyd/Documento_calibracion_material_volumetrico_33701.pdf