INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA

DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA

Y BIOQUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA DEL NITRÓGENO

SESIÓN (3)
“OPERON LAC”
Calderón González Alexis Isaí, Suárez Gaona André Emiliano

INTRODUCCIÓN
El operón lac constituye una piedra angular en el ámbito de la biología molecular y sirve como paradigma para
comprender la regulación y expresión de genes en organismos procarióticos. Descubierto en la década de
1960 por François Jacob y Jacques Monod en Escherichia coli (E. coli), el operón lac ofrece conocimientos
profundos sobre cómo las bacterias ajustan con precisión sus actividades metabólicas en respuesta a señales
ambientales. El operón lac, que comprende un grupo de genes bajo el control coordinado de elementos
reguladores, orquesta la utilización de la lactosa, una fuente clave de carbono, con notable precisión. A través
de intrincados mecanismos moleculares que involucran inductores, represores y cofactores, E. coli modula la
expresión de genes dentro del operón lac, asegurando una adaptación óptima a las diferentes condiciones de
nutrientes. La elucidación de este sistema no sólo revolucionó nuestra comprensión de la regulación genética
bacteriana, sino que también allanó el camino para descifrar mecanismos similares en organismos superiores.
Estructura del operón lac:

El operón lac consta de tres genes estructurales principales (lacZ, lacY y lacA) dispuestos secuencialmente en
el cromosoma bacteriano. Cada gen codifica una proteína específica implicada en el metabolismo de la lactosa:

• Gen lacZ: este gen codifica la β-galactosidasa, una enzima crucial para el metabolismo de la lactosa. La
β-galactosidasa hidroliza la lactosa en sus azúcares constituyentes, glucosa y galactosa, facilitando su
utilización por la bacteria. Además, la β-galactosidasa puede convertir la lactosa en alolactosa, una
importante molécula inductora del operón lac.
• Gen lacY: este gen codifica la lactosa permeasa, una proteína de membrana responsable del transporte
de moléculas de lactosa al interior de la célula bacteriana. La lactosa permeasa asegura la absorción
de lactosa del entorno extracelular, permitiendo su utilización como fuente de carbono.
• Gen lacA: este gen codifica la transacetilasa, una enzima cuyo papel preciso en el metabolismo de la
lactosa no se comprende completamente. Se cree que participa en la desintoxicación de ciertos β-
galactósidos o en otros procesos celulares relacionados con el metabolismo de la lactosa.

Estos tres genes se transcriben en una única molécula de ARNm bajo el control de una región promotora y una
región operadora.
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Regulación del operón lac:

El operón lac está sujeto a una estricta regulación, lo que garantiza que su expresión se adapte adecuadamente
a las condiciones ambientales predominantes, en particular a la disponibilidad de lactosa y glucosa. Los
elementos regulatorios clave involucrados en la regulación del operón lac incluyen:

• Represor Lac: En ausencia de lactosa, la proteína represora lac se une a la región operadora del operón
lac, impidiendo físicamente que la ARN polimerasa inicie la transcripción. Esta acción represiva detiene
efectivamente la expresión de los genes estructurales lac.
• Molécula inductora (alolactosa): cuando la lactosa está presente en el medio ambiente, parte de ella
se convierte en alolactosa dentro de la célula bacteriana. La alolactosa actúa como inductor uniéndose
al represor lac, provocando un cambio conformacional que debilita su afinidad por el operador. En
consecuencia, el represor lac se disocia del operador, lo que permite que la ARN polimerasa acceda al
promotor e inicie la transcripción de los genes estructurales lac.
• Represión de catabolitos: la presencia de glucosa en el medio ambiente ejerce una capa adicional de
regulación sobre el operón lac a través de un fenómeno conocido como represión de catabolitos. El
metabolismo de la glucosa conduce a una disminución de los niveles intracelulares de AMP cíclico
(AMPc), un cofactor necesario para la activación de la proteína activadora del catabolito (CAP). En
ausencia de CAP unido a AMPc, la eficacia de la unión de la ARN polimerasa al promotor lac se reduce,
lo que conduce a una transcripción disminuida del operón lac, incluso en presencia de lactosa.

Importancia del operón lac:

El operón lac tiene una inmensa importancia en biología molecular y genética por varias razones:

• Información sobre la regulación genética: el operón lac sirve como sistema modelo para comprender
los principios de la regulación genética y la interacción entre los elementos reguladores y la expresión
genética. Aclara cómo los organismos ajustan sus actividades metabólicas en respuesta a las
condiciones ambientales cambiantes, asegurando una utilización y adaptación eficiente de los
recursos.
• Aplicaciones biotecnológicas: Los componentes y mecanismos reguladores del operón lac se han
aprovechado para diversas aplicaciones biotecnológicas, incluida la expresión controlada de genes
recombinantes en sistemas de expresión bacterianos. Al manipular los elementos del operón lac, los
investigadores pueden regular la producción de proteínas deseadas en huéspedes bacterianos con
fines industriales, farmacéuticos y de investigación.
• Perspectivas evolutivas: los estudios sobre el operón lac han proporcionado información sobre los
procesos evolutivos que dan forma a la regulación genética y las vías metabólicas. Los análisis
comparativos de homólogos del operón lac en diferentes especies bacterianas arrojan luz sobre los
mecanismos de variación, adaptación y especiación genética.
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PREGUNTAS GENERADORAS
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MATERIALES Y MÉTODOS
Para esta práctica, no fue necesario acudir al laboratorio, ya que el único material requerido fue una
computadora. Al inicio, recibimos una breve explicación sobre los conceptos de sitio operador y operón,
centrándonos en el operón lac, un conjunto de genes presentes en E.coli que regula la utilización de lactosa.
Luego, accedimos a la página web llamada "PHET lac operon" y comenzamos la práctica abriendo la pestaña
de "LACTOSE REGULATION". En esta sección, encontramos un rompecabezas virtual donde debíamos colocar
cada elemento (genes, promotores y operadores) en su posición correspondiente para iniciar la simulación.
Una vez completada esta tarea, observamos cómo interactuaban los elementos durante la simulación. Luego,
mediante un comando, introdujimos lactosa al proceso para estudiar su regulación. Al alcanzar el nivel máximo
de lactosa, capturamos la pantalla para registrar esta parte de la práctica.
A continuación, procedimos a abrir la pestaña de "LACTOSE TRANSPORT" y repetimos el mismo proceso.
Colocamos todos los elementos en su lugar y observamos la simulación. Posteriormente, añadimos lactosa
hasta alcanzar su nivel máximo y capturamos la pantalla para analizar los resultados.
Una vez que tomamos las capturas de los dos procesos, concluimos la práctica. Dichas capturas se encentran
en el apartado de resultados.

RESULTADOS (EVIDENCIAS) Y DISCUSIÓN

Para esta sección de resultados, se presenta la Figura 1, la cual ilustra el proceso de regulación de la lactosa a
través del operón lac. En este proceso, la enzima Lacl desempeña un papel crucial al inhibir la acción del
operador, impidiendo así la transcripción de LacZ. Cuando la lactosa está presente, Lacl experimenta un
cambio que induce la acción del operador, permitiendo que LacZ funcione como una enzima descomponedora
de lactosa en glucosa y galactosa.

Fig 1. Simulacion de la regulacion de lactosa por el operon lac.

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En la Figura 2 se ilustra el proceso de transporte de la lactosa a través de la membrana celular. En este proceso,
la enzima LacY, una enzima de membrana, desempeña un papel crucial al facilitar el transporte de la lactosa
hacia el interior de la célula. Este mecanismo es fundamental para llevar a cabo el proceso de regulación
descrito en la imagen anterior.

Fig 2. Simulación del transporte de lactosa para su regulación

CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es el papel de Lacl? ¿Qué le sucede cuando hay lactosa?
Papel de LacI:
• LacI es una proteína reguladora que puede unirse a la región operadora del operón lac.
• Cuando LacI se une al operador, bloquea físicamente el acceso de la ARN polimerasa a la región
promotora, impidiendo así la transcripción de los genes estructurales lacZ, lacY y lacA.
• En ausencia de lactosa, LacI se une firmemente al operador, reprimiendo eficazmente el operón
lac.

Efecto de la lactosa:
• Cuando la lactosa está presente en el medio ambiente, sirve como inductor del operón lac.
• La lactosa se convierte en alolactosa dentro de la célula. La alolactosa se une a LacI, induciendo un
cambio conformacional en la proteína LacI.
• Cuando la alolactosa se une a LacI, LacI sufre una alteración estructural que reduce su afinidad por
el operador. Como resultado, el operador libera LacI.
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• Con LacI disociada del operador, la proteína represora ya no bloquea la ARN polimerasa. Esto
permite que la ARN polimerasa se una a la región promotora e inicie la transcripción de los genes
lacZ, lacY y lacA.
• La β-galactosidasa (codificada por lacZ) luego convierte la lactosa en glucosa y galactosa, lo que
permite a las bacterias utilizar la lactosa como fuente de energía.

2. ¿Cuál es el producto del gen Z? ¿Cuál es su función?

El producto del gen Z en el operón lac es la β-galactosidasa. La β-galactosidasa es una enzima que cataliza
la hidrólisis de la lactosa en sus monosacáridos constituyentes, glucosa y galactosa.
La función de la β-galactosidasa es crucial para bacterias como E. coli cuando encuentran lactosa en su
entorno. Al descomponer la lactosa en glucosa y galactosa, la β-galactosidasa permite a la bacteria utilizar
la lactosa como fuente de carbono y energía.
Además, la β-galactosidasa juega un papel esencial en la regulación del propio operón lac. Está involucrado
en el proceso de inducción: cuando hay lactosa presente, sirve como inductor uniéndose a la proteína
represora lac (LacI), lo que lleva a la disociación de LacI de la región operadora. Esto permite que la ARN
polimerasa se una al promotor e inicie la transcripción de los genes lac, incluido lacZ, lo que da como
resultado la producción de más β-galactosidasa. Así, la β-galactosidasa no sólo ayuda en el metabolismo
de la lactosa, sino que también participa en los mecanismos reguladores que controlan el operón lac.

3. ¿Qué efecto tiene aumentar el nivel de lactosa?

Inducción del operón lac:
• Cuando los niveles de lactosa aumentan, las moléculas de lactosa ingresan a la célula bacteriana.
• Dentro de la célula, una pequeña porción de lactosa se convierte en alolactosa, que sirve como
inductor.
• La alolactosa se une a la proteína represora lac (LacI), provocando un cambio conformacional en
LacI que reduce su afinidad por la región operadora del operón lac.
• Como resultado, LacI se disocia del operador, lo que permite que la ARN polimerasa se una a la
región promotora e inicie la transcripción de los genes lac, incluidos lacZ, lacY y lacA.
• El aumento de la transcripción conduce a niveles más altos de productos genéticos, incluida la β-
galactosidasa (de lacZ) y la permeasa (de lacY), que participan en el metabolismo de la lactosa.

Metabolismo mejorado de la lactosa:

• Cuanto más se produce la enzima β-galactosidasa, aumenta la tasa de hidrólisis de la lactosa en
glucosa y galactosa.
• La mayor concentración de permeasa facilita la absorción de lactosa en la célula bacteriana.

Reglamento de retroalimentación:
• A medida que se metaboliza la lactosa, la concentración de lactosa dentro de la célula disminuye.
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• En respuesta a la disminución de los niveles de lactosa, el represor lac (LacI) puede volver a unirse
a la región operadora, reduciendo una vez más la transcripción de los genes lac.
• Sin embargo, mientras la lactosa esté presente en el medio ambiente, el operón lac permanecerá
inducido hasta cierto punto, lo que permitirá un metabolismo continuo de la lactosa.

4. Explicar con tus propias palabras la respuesta celular a la presencia de lactosa. ¿Hay correlación entre la
cantidad de lactosa presente y la activación del gen?
Cuando la lactosa está presente, actúa como una señal para la célula bacteriana, desencadenando una
respuesta específica. Imagínese un pequeño mundo bacteriano donde un guardián, llamémoslo LacI,
protege una puerta que conduce a un recurso valioso, representado por la capacidad de usar lactosa para
obtener energía. Normalmente, LacI se encuentra en la puerta, asegurándose de que permanezca cerrada
e inaccesible. Sin embargo, cuando llegan las moléculas de lactosa, interactúan con LacI, lo que hace que
se haga a un lado, esencialmente abriendo la puerta. Con la puerta abierta, la maquinaria celular puede
acceder a los genes responsables de descomponer la lactosa en energía utilizable. Estos genes son como
trabajadores dentro de la célula, incluido uno llamado β-galactosidasa, que rápidamente inician su tarea
de convertir la lactosa en glucosa y galactosa. A medida que se utiliza la lactosa, la concentración disminuye
y LacI finalmente regresa a su puesto, cerrando la puerta una vez más hasta que llega más lactosa. En
esencia, la presencia de lactosa activa los genes necesarios para su metabolismo, asegurando una
utilización eficiente de esta valiosa fuente de energía por parte de la célula bacteriana.
Por su parte, cuando los niveles de lactosa son altos, ingresan más moléculas de lactosa a la célula, lo que
aumenta la producción de alolactosa. Esto da como resultado una mayor disociación de LacI de la región
operadora y niveles más altos de activación genética. Sin embargo, una vez que la lactosa se metaboliza
por completo o sus niveles disminuyen, la activación genética disminuye en consecuencia. Por tanto, existe
una relación directa entre la cantidad de lactosa presente y el grado de activación genética en el operón
lac.

5. ¿Qué ventaja tiene que varios genes se transcriban bajo un mismo promotor?
• Eficiencia: todos los genes del operón se activan o desactivan simultáneamente en respuesta a las
mismas señales. Agiliza la respuesta celular, ahorra energía y recursos al garantizar que todas las
enzimas necesarias para una ruta metabólica particular se produzcan juntas cuando sea necesario.
• Conservación de elementos reguladores: al compartir un promotor y secuencias reguladoras, el
operón evita la necesidad de elementos reguladores redundantes para cada gen. Esto simplifica la
maquinaria reguladora dentro de la célula y reduce los "gastos generales" genéticos asociados con
el control de la expresión genética.
• Respuesta rápida a los cambios ambientales: en el caso del operón lac, cuando hay lactosa
presente, todos los genes necesarios para el metabolismo de la lactosa se activan
simultáneamente, asegurando una utilización eficiente de esta fuente de nutrientes.
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• Control mejorado: las cantidades relativas de proteínas producidas a partir de diferentes genes
dentro del operón pueden ajustarse con precisión para satisfacer las necesidades metabólicas de
la célula.

CONCLUSIONES
Alexis Isaí Calderón González
La práctica de laboratorio sobre el operón lac ha sido un viaje fascinante al intrincado mundo de la regulación
genética en las bacterias. A través de la visualización y el análisis digital, he obtenido una comprensión más
profunda de cómo funciona el operón lac y responde a los cambios en su entorno, particularmente en
presencia de lactosa. Al estudiar los mecanismos reguladores que controlan la expresión génica en el operón
lac, he sido testigo de primera mano de la elegante interacción entre las proteínas reguladoras, las secuencias
promotoras y los genes estructurales. Esta experiencia no sólo ha mejorado mi conocimiento de la biología
molecular, sino que también ha subrayado la importancia de dichos mecanismos reguladores en la adaptación
y supervivencia celular. En el futuro, los conocimientos adquiridos en esta práctica de laboratorio sin duda
informarán y enriquecerán mis futuros estudios e investigaciones en el campo de la genética y la regulación
genética.

André Emiliano Suárez Gaona

La práctica virtual del operón lac proporcionó una experiencia educativa valiosa y enriquecedora sobre el
funcionamiento y la regulación de este sistema genético en E.coli. A través de la simulación interactiva,
pudimos comprender mejor cómo los genes del operón lac coordinan la utilización de lactosa como fuente de
energía en condiciones específicas. La actividad nos permitió visualizar de manera dinámica cómo los
elementos clave, como los operadores y los promotores, interactúan para controlar la expresión génica en
respuesta a la presencia de lactosa. Además, al explorar diferentes niveles de lactosa y observar sus efectos
en la regulación del operón, adquirimos una comprensión más profunda de cómo funciona este mecanismo
de control genético en un entorno simulado.

REFERENCIAS
Jacob, F. y Monod, J. (1961). Mecanismos reguladores genéticos en la síntesis de proteínas. Revista de biología
molecular, 3(3), 318-356.
Molinero, JH (1977). Experimentos en genética molecular. Prensa del laboratorio Cold Spring Harbor.
Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K. y Walter, P. (2002). Biología molecular de la célula (4ª
ed.). Ciencia de la guirnalda.
Browning, DF y Busby, SJ (2004). La regulación del inicio de la transcripción bacteriana. Nature Reviews
Microbiology, 2(1), 57-65.
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Ptashné, M. (2004). Un cambio genético: revisión del fago lambda (3ª ed.). Prensa del laboratorio Cold Spring
Harbor.

ANEXOS
Alexis Isaí Calderón González

André Emiliano Suárez Gaona